1、试卷第 1 页，总 9 页土壤中分解尿素的细菌的分离与计数一、单选题1在做分离分解尿素的细菌实验时，A 同学从对应 106 培养基上筛选出大约 150 个菌落，而其他同学只选择出大约 50 个菌落。产生 A 同学结果的原因可能有（ ）土样不同 培养基污染 操作失误 没有设置对照A. B. C. D. 【答案】D【解析】同一稀释浓度下菌落数不同，产生 A 同学结果的可能的原因可能是土样不同、培养基污染，或者操作失误，未达到相应的稀释倍数。2农田土壤的表层，自生固氮菌的含量比较多，将用表层土制成的稀泥浆，接种到特制的培养基上培养，可将自生固氮菌与其它细菌分开，对培养的要求是（ ）加抗生素 不加抗生
2、素 加氮素 不加氮素 加葡萄糖 不加葡萄糖 37恒温箱培养 28 -30温度下培养A. B. C. D. 【答案】C【解析】试题分析：自生固氮菌是异养菌，生长繁殖需要有机碳源；自生固氮菌能利用空气中的氮气，培养基中不加氮源，固氮菌能生长繁殖，不能固氮的菌不能生长繁殖；自生固氮菌的生长繁殖的最适宜温度是 2830 ；自生固氮菌对抗生素敏感，培养基中不能加抗生素。所以如果从土壤浸出液中分离出自生固氮菌对培养基的要求是不加抗生素、不加氮素、 加葡萄糖、28 30恒温箱中培养。考点：微生物的分离和培养3在做 分离分解尿素的细菌实验时， A 同学从对应的培养基上筛选出大约 150 个菌落，而其他同学只选
3、择出大约 50 个菌落。A 同学的结果产生原因可能有由于土样不同 由于培养基污染 由于操作失误 没有设置对照实验A B C D【答案】A【解析】试题分析：A 同学获得的菌落远大于其他同学，可能的原因是采用的土样不同，导致计数偏差，正确；也可能是因为培养基污染，正确；还可能是由于操作失误，正确；没有设置对照实验不会增加菌落数目，错误。因此，A 项正确，B、C、D 项错试卷第 2 页，总 9 页误。考点：微生物的分离和培养4有关生物技术的操作过程或应用的叙述，错误的是 (双选 )A. 测定泡菜中亚硝酸盐含量时需要标准显色液B. 利用凝胶色谱柱分离蛋白质时，相对分子质量小的蛋白质早一些从层析柱中洗脱
4、出来C. 胚胎分割技术可看做是动物无性繁殖的方法D. 以尿素作为唯一碳源的培养基用于鉴别细菌【答案】BD【解析】试题分析：测定泡菜中亚硝酸盐含量时需要标准显色液，观察亚硝酸盐溶液颜色的梯度变化，故 A 正确。利用凝胶色谱柱分离蛋白质时，相对分子质量小的蛋白质容易进入凝胶内部通道，路程较长，移动速度较慢，分离较慢；相对分子质量大的蛋白质无法进入凝胶内部通道，只能在凝胶外部移动，路程较短，移动速度较快，较快分离，故 B 错。胚胎分割技术是将动物早期胚胎分割为几等份，利用细胞全能性，移植获得同卵多胎，为无性繁殖，故 C 正确。以尿素作为唯一氮源的培养基用于筛选分解尿素的细菌，故 D 错。考点：本题考
5、查生物技术相关知识，意在考查考生能独立完成“生物知识内容表” 所列的生物实验，包括理解实验目的、原理、方法和操作步骤，掌握相关的操作技能，并能将这些实验涉及的方法和技能进行综合运用能力。5在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，培养能分解尿素的细菌后，指示剂的颜色是( )A. 蓝色 B. 红色 C. 黑色 D. 棕色【答案】B【解析】试题分析：分解尿素的细菌能合成脲酶，将尿素分解形成碱性物质氨，在碱性环境下，酚红指示剂变红故选：B6从土壤中分离以尿素为氮源的细菌,下列实验操作不正确的是( )A.将土壤用无菌水稀释,制备 103105 稀释倍数的土壤稀释液B.将不同浓度的土壤稀释液涂布于不同
6、平板上C.用加入刚果红指示剂的选择培养基筛选分解尿素的细菌D.从周围出现红色环带的菌落中挑取能够分泌脲酶的菌株【答案】C试卷第 3 页，总 9 页【解析】从土壤中分离以尿素为氮源的细菌时,将土壤用无菌水稀释,制备土壤稀释液,将不同浓度的土壤稀释液涂布于不同平板上,用加入酚红指示剂的鉴别培养基可以鉴别分解尿素的细菌。从周围出现红色环带的菌落中挑取能够分泌脲酶的菌株。7在做分离分解尿素的细菌实验时，A 同学从对应 106 培养基上筛选出大约 150 个菌落，而其他同学只选择出大约 50 个菌落产生 A 同学结果的原因可能有（ ）土样不同 培养基污染 操作失误 没有设置对照A. B. C. D. 【
7、答案】A【解析】试题分析：土样不同可能导致计数偏差，正确；培养基污染，正确；操作失误可能增加微生物的数量和种类，菌落会增多，正确；没有设置对照不会增加菌落数目， 错误A、正确故选：A8培养基是微生物生长、分离、鉴别的营养基础，下列有关微生物培养及培养基的描述错误的是A. 微生物培养基的配方中必须包含的成分有碳源、氮源、水、无机盐、生长因子及琼脂B. 不论何种培养基，在各成分溶化后都要进行灭菌操作，灭菌常用的方法是高压蒸汽灭菌C. 接种微生物常用的方法有平板划线法和稀释涂布平板法D. 在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂可以鉴定分解尿素的细菌【答案】A【解析】微生物培养基的主要营养物质有碳
8、源、氮源、水和无机盐等，有的还需要生长因子等特殊的营养，固体和半固体培养基需要琼脂，液体培养基不需要琼脂，A 错误；不论何种培养基，在各成分溶化后都要进行灭菌操作， 灭菌常用的方法是高 压蒸汽灭菌，B 正确；筛选和分离微生物常用的接种方法有稀 释涂布平板法和平板划线法， C 正确；以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂可以出现红色的环带的菌落，说明其为分解尿素的细菌，D 正确。9在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂的目的是A. 筛选出能分解尿素的细菌B. 对分离的菌种做进一步的鉴定试卷第 4 页，总 9 页C. 培养基中还缺乏酚红指示剂作细菌的营养物质D. 若指示剂变蓝我们就能准确地认
9、定该菌能分解尿素【答案】B【解析】试题分析：尿素分解菌可以产生脲酶将尿素分解分解为氨，使 pH 升高，培养基中进入酚红指示剂后，氨可以使指示剂呈红色，据此可以用酚红指示剂鉴别尿素分解菌，B 正确。点睛：熟记筛选土壤中能分解尿素的细菌的分离的步骤：土壤取样样品的稀释将稀释液涂布到以尿素为唯一氮源的培养基上挑选能生长的菌落鉴定。10在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酣红指示剂，培养能分解尿素的细菌后，指示剂将变成 A红色 B蓝色 C黑色 D棕色【答案】A【解析】试题分析：以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，培养某种细菌，若指示剂变红，则 pH 升高，说明该种细菌能分解尿素；选 A。考点：鉴定分
10、解尿素的细菌的实验11在实验室里，从土壤里分离出自生固氮菌所需的培养基属于A天然培养基 B鉴别培养基C液体培养基 D选择培养基【答案】D【解析】试题分析：天然培养基也称复合培养基，是含有化学成分还不清楚或化学成分不恒定的天然有机物，A 错误；鉴别培养基是在培养基中加入某种试剂或化学药品，使培养后会发生某种变化，从而区别不同类型的微生物鉴别培养基是用于鉴别不同类型微生物的培养基，B 错误；液体培养基与固体培养基是按培养基的物理状态分类的，液体培养基不一定都具有选择作用，C 错误； 选择培养基是指通过培养混合的微生物，仅得到或筛选出所需要的微生物，其他不需要的种类在这种培养基上是不能生存的，D 正
11、确。考点：微生物培养基的分类及作用。12下列关于统计菌落数目的方法的叙述，不正确的是（ ）A采用平板计数法获得的菌落数往往多于实际的活菌数B当样品的稀释度足够高时，一个活菌会形成一个菌落试卷第 5 页，总 9 页C平板划线法和稀释涂布平板法均可分离和提纯细菌，但前者不能用来计数D在某一浓度下涂布三个平板，若三个平板统计的菌落数差别不大，则应以它们的平均值作为统计结果【答案】A【解析】试题分析：A、采用平板计数法获得的菌落有可能是由多个细菌形成的,所以往往少于实际的活菌数,A 不正确;B、当样品的稀释度足够高时,一个活菌会形成一个菌落,B 正确;C、平板划线法和稀释涂布平板法均可分离和提纯细菌，
12、但前者不能用来计数,C 正确;D、在某一浓度下涂布三个平板,若三个平板统计的菌落数差别不大,则应以它们的平均值作为统计结果以减小实验误差,D 正确考点：菌落数目的统计13下列关于微生物的分离和培养的叙述中，正确的是( )A. 进行微生物培养前，需对培养瓶进行消毒处理B. 对细菌的分离和计数可用平板划线法和稀释涂布平板法C. 获得纯净培养物的关键是防止杂菌污染D. 用含刚果红的尿素培养基筛选鉴别出能分解尿素的菌株【答案】C【解析】进行微生物培养时需要对培养基进行灭菌，A 错误；对细菌的分离可用划线法和稀释涂布平板法，但对细菌的计数只能用稀释涂布平板法，B 错误；获得纯净培养物的关键是防止杂菌感染
13、，C 正确；尿素分解菌可以将尿素分解成氨使酚红指示剂呈红色，因此用含酚红的尿素培养基筛选出能分解尿素的菌株，D 错误。14下列生物学实验操作，能够顺利达到实验目的的是A. 将果泥和果胶酶分装在不同试管中恒温处理后再混合，以探究果胶酶的最适温度B. 洗涤红细胞时，需要加入五倍体积的蒸馏水C. 土壤浸出液接种于牛肉膏蛋白胨培养基上以筛选出能分解尿素的细菌D. 根据 SDS凝胶电泳的结果可判断蛋白质的分子量大小【答案】A【解析】试题分析：红细胞在五倍体积的蒸馏水水中可能吸水胀破；要在牛肉膏蛋白胨培养基上以筛选出能分解尿素的细菌，必须加入特定的筛选试剂；SDS凝胶电泳原理是根据蛋白的极性不同，迁移的位
14、置也不同，所以不能根据结果判断蛋白质的分子量大小；综上所述，选 A。试卷第 6 页，总 9 页考点：本题考查生物实践技术实验的相关知识，意在考查学生能独立完成“生物知识内容表” 所列的生物实验，包括理解实验目的、原理、方法和操作步骤，掌握相关的操作技能，并能将这些实验涉及的方法和技能进行综合运用。15下列关于统计菌落数目的方法的叙述，不正确的是A采用平板计数法获得的菌落数往往少于实际的活菌数B当样品的稀释度足够高时，一个活菌会形成一个菌落C为了保证结果准确，一般采用密度较大的平板进行计数D在某一浓度下涂布三个平板，若三个平板统计的菌落数差别不大，则应以它们的平均值作为统计结果【答案】C【解析】
15、试题分析：计数时一般选取菌落在 30300 之间的平板，C 错误。考点：本题意在考查土壤中微生物的分离与计数的问题，意在考查考生的识记能力和理解所学知识要点的能力。二、非选择题16回答下列(一)(二)小题：(一)请回答从土壤中分离产脲酶细菌和脲酶固定化实验的有关问题：(1)LB 固体培养基：取适量的蛋白胨、酵母提取物、NaCl ，加入一定量的蒸馏水溶解，再加_，灭菌备用。(2)尿素固体培养基：先将适宜浓度的尿素溶液用_灭菌过的 G6 玻璃砂漏斗过滤，因为 G6 玻璃砂漏斗_，故用于过滤细菌。然后将尿素溶液加入到已经灭菌的含有酚红的培养基中，备用。(3)取适量含产脲酶细菌的 104、105 两种
16、土壤稀释液，分别涂布接种到 LB 固体培养基和尿素固体培养基上，培养 48 h，推测固体培养基上生长的菌落数最少的是_(A.105 稀释液尿素固体培养基 B 10 5 稀释液LB 固体培养基 C104 稀释液尿素固体培养基 D104 稀释液LB 固体培养基)。在尿素固体培养基上产脲酶细菌菌落周围出现_，其原因是细菌产生的脲酶催化尿素分解产生_所致。(4)制备固定化脲酶时，用石英砂吸附脲酶，装柱。再用蒸馏水洗涤固定化酶柱，其作用是_。试卷第 7 页，总 9 页(二)某小组欲进行烟草原生质体分离与培养的研究。请回答：(1)原生质体的分离：在无菌条件下，取烟草无菌苗的叶片，放入含有 0.5 mol/
17、L 甘露醇(维持较高渗透压 )的_ 混合液处理，经过离心纯化后获得原生质体。(2)原生质体的培养：将原生质体进行培养，重新长出细胞壁，形成胚性细胞。此时，应该_培养基中甘露醇浓度，以利于胚性细胞继续培养形成细胞团，然后经两条途径形成再生植株。途径一：细胞团经球形胚、_和胚状体，最后发育成植株。途径二：细胞团增殖为愈伤组织，然后在发芽培养基上诱导出芽，切割芽经过生根后形成完整植株。上述发芽培养基中含量相对较高的激素是_，胚性细胞的主要特点是：_(A.液泡小、细胞核小 B液泡大，细胞核大 C 液泡大，细胞核小 D液泡小、细胞核大)。(3)为了对烟草的某些性状进行改良，分离得到两种烟草的原生质体后，
18、通过_方法将它们的遗传物质组合在一起，经培养获得具有新性状的再生植株。提取再生植株的 DNA，采用 _扩增相关基因，来鉴定遗传物质是否成功重组。【答案】 琼脂(糖) 高压蒸汽 孔径小，细菌不能滤过 A 红色环 氨(或 NH3) 除去游离的脲酶 果胶酶、纤维素酶 降低 心形胚 细胞分裂素 D 原生质体融合 PCR 方法【解析】试题分析：本题考查微生物的分离、酶的固定化、原生质体的分离与培养，考查对产脲酶细菌分离、酶固定化、原生质体制备与培养原理与操作流程的理解与识记。(一) (1)制备固体培养基需入加琼脂(糖) 。 (2)玻璃容器可采用高压蒸汽法灭菌。G6 玻璃砂漏斗孔径小，细菌不能滤过，故用于
19、过滤细菌。(3)土壤稀释液的稀释倍数越大，培养基中菌落数越少；尿素固体培养基上仅产脲酶细菌可大量繁殖，其他细菌不能繁殖，故 105 稀释液尿素固体培养基上菌落数最少。在尿素固体培养基上产脲酶细菌产生的脲酶催化尿素分解产生氨(或 NH3)，使 pH 升高，酚红试剂变红，使菌落周围出现红色环。(4)用蒸馏水洗涤固定化酶柱，目的是除去游离的脲酶。(二) (1)细胞壁的成分为纤维素和果胶，利用酶的专一性，用果胶酶、纤维素酶混合液处理，可除去细胞壁，获得原生质体。(2)将原生质体培养形成胚性细胞后，应该降低培养基中甘露醇浓度，以利于胚性细胞继续培养形成细胞团。细胞团可以经球形胚、心形胚和胚状体，最后发育
20、成植株。发芽试卷第 8 页，总 9 页培养基中细胞分裂素含量相对较高；胚性细胞液泡小、细胞核大。 (3)得到两种烟草的原生质体后，可通过原生质体融合方法将它们的遗传物质组合在一起。扩增相关基因可采用 PCR 方法。 37【答案】 （1）氮源 碳源（2）恒温培养箱 无菌水（3）多 高（4）盐（或 NaCl）选择培养基【解析】 （1）不同的培养基都含有基本成分，水、无机盐，碳源、氮源。所以培养基中含有的蛋白胨、淀粉分别为细菌培养提供了氮源、碳源。（2）为了尽快观察到细菌培养的实验结果，应将接种了湖水样品的平板置于恒温培养箱中培养，培养的温度设定在 37。要使该实验所得结果可靠，还应该同时在另一平板
21、上接种无菌水 作为对照进行实验。（3）培养 20 小时后，观察到平板上有形态和颜色不同的菌落，如果其总数越多，则说明湖水样品中有多种细菌，污染程度越高。（4）如果提高培养基中 NaCl 的浓度，可以用于筛选耐盐细菌，这种培养基被称为选择培养基。【考点定位】微生物的分离和培养；培养基对微生物的选择作用18 【 生物 选修 1:生物技术实践】科学工作者按如下实验计划分离土壤中能分泌淀粉酶的枯草芽孢杆菌，请根据相关生物学原理和方法答下列问题：(1)选择培养基的成分包括:水、牛肉膏、蛋白胨、NaCl 、_ 。该培养基中，能分泌淀粉酶的枯草芽孢杆菌_,使不能分泌淀粉酶的微生物生长受到抑制。(2)取少许选
22、择培养的菌液进行梯度稀释,以_的方法接种于鉴别培养基上，37恒温培养 24 小时。(3)选择合适的平板,加入碘液，选周围出现较明显_ 的菌落纯化留种。试卷第 9 页，总 9 页(4)能大量分泌淀粉酶的枯草芽抱杆菌，通过_技术制作成商品重复使用。【答案】 淀粉 竞争中处于优势 稀释涂布平板 透明圈 固定化酶（或固定化细胞）的技术【解析】分析：微生物的营养物质主要有碳源、氮源、水和无机盐等，选择培养基要根据具体的情况添加合适的碳源或氮源。微生物接种方法主要有平板划线法（一般多用于从菌种的纯化）和稀释涂布平板法（一般多用于筛选菌株） 。选择培养基的成分包括:水、牛肉膏、蛋白胨、NaCl、淀粉。该培养基中，能分泌淀粉酶的枯草芽孢杆菌能够利用培养基中的淀粉在竞争中处于优势，不能分泌淀粉酶的微生物无法利用淀粉在竞争中处于劣势；(2) 纯化微生物时需要将微生物接种到固体培养基上，选择稀释涂布平板法比较合适；(3)若菌落周围出现较明显透明圈说明淀粉被分解掉，是能分泌淀粉酶的枯草芽孢杆菌；(4)能大量分泌淀粉酶的枯草芽抱杆菌，通过技术固定化酶（或固定化细胞）的技术制作成商品重复使用。
