1、实验二 植物病原真菌组织分离培养技术及植物病害症状观察,一、实验目的和要求：,1. 掌握植物病害组织分离、无菌操作及常用病原物的培养和保存方法。 2. 通过观察植物病害的典型症状，初步掌握植物病害的症状特点，并学习植物病害症状的描述方法。,二、材料及用具,（1）植物病害组织体（自备），PDA平板培养基（已做好）。 （2）超净工作台（内有75%酒精（内放脱脂棉球）、解剖刀、手术剪、镊子、酒精灯、培养皿、灭菌纱布（2块5 cm5 cm）、培养皿（9cm）120套（2个班，2皿/人），5%乳酸瓶（60ml），1%漂白粉（0.1%升汞）瓶，无菌水、火柴等。,三、实验内容,操作方法步骤： 1.植物组织体
2、的选择：选择发病植物体，发病部位病健交界处明显，新鲜的植物组织体作为实验材料。,2、分离过程： 1）实验进行前先把周围环境洒上少许水，地面洁净，把超净台面擦干净，打开超净台的紫外灯照射2030分钟，然后关闭紫外灯，打开鼓风机，点燃酒精灯。,2）培养基在微波炉融化后，在超净台上把培养基倒入灭菌的培养皿内，12 ml/皿（为防止细菌污染，倒平板前每三角瓶内加5%乳酸4-6滴），放置片刻待培养基自然冷却。注意此步操作应在酒精灯附近进行。 3）植物病害标本，用自来水冲洗干净，放入接种箱内；双手用70%酒精棉球擦拭消毒后，伸入接种箱内开始操作。,4）打开3个培养皿（无菌的），依次倒入70%酒精、1%漂白
3、粉、无菌水；取出灭菌解剖刀，蘸70%酒精并过酒精灯火焰后，待刀片冷却后切取所需植物组织体，在病健交界处剪切成3 mm2的大小（保证每人6块，3块/皿），用纱布包好，分别于70酒精中浸5秒后，再在1%漂白粉（0.1升汞溶液）中浸35分钟进行表面充分消毒，而后用灭菌水冲洗3次。,5）用消毒镊子将植物组织块（在干的无菌纱布中吸去多余的水分），移至PDA培养基平板上，3块/皿 。 6）将接种好的平板做好标记，置于25培养箱内培养48小时后观察结果。,棉花 轮纹病,要求：本次实训操作要求细心，规范，快速，准确 注意 （1） 工作环境的清洁和消毒（2） 分离用具的消毒（3） 分离材料的选择,植物病害症状观
4、察,植物病害病状类型 变色 坏死 腐烂 萎蔫 畸形,植物病害症状观察,变色,初始症状 褐色小点，有晕圈,中期症状 褐色斑点，有晕圈,后期症状 叶正面点状物散生排列（分生孢子盘 ）,坏死,同心轮纹形病斑,同心轮纹型：发病初期，正面出现黄褐色小点，逐渐扩大成圆形，暗褐色、周围黄色、外有绿色晕的病斑，病斑中出现同心轮纹状排列的黑色小点。叶背面病部为暗褐色，周围浅褐色，无明显边缘。,针芒型：病斑似针芒向外扩展，无一定边缘，病斑小，但数量多，遍布叶片，后期叶片渐黄，病斑周围及背部保持绿色。, 混合型：病斑很大，近圆形或不规则形，其上亦有小黑粒点，但不明显地排列成同心轮纹状，病斑暗褐色，后期中心为灰白色，
5、但边缘有的呈绿色。,混合型，形状不规则。病斑较大，在叶边缘及内均发生,梨黑星病,病害发生在主干和大枝上。 （1）在光皮杨树品种上，多围绕皮孔产生直径1厘米左右的水泡状斑； （2）在粗皮杨树品种上，通常并不产生水泡，而是产生小型局部坏死斑； （3）当从干部的伤口、死芽和冻伤处发病时，形成大型的长条形或不规则形坏死班。,桃穿孔病,细菌穿孔病,霉斑穿孔病,褐斑穿孔病,菠菜猝倒病,大白菜软腐病,茄子青枯病,枣疯病,症状：芽不正常萌发与生长所引起的枝叶丛生，以及嫩叶的明脉、黄化和卷成匙形等。病株花器各部分的着生部位不变。花器返祖现象表现为花梗变长，花瓣变成小叶，有时变成小枝条，有时则不发生变态；雌蕊变成小枝条，其腋芽往往萌发，生成短而细的小枝。后来除了雌蕊变成的小枝和萼片腋芽萌发生成的枝条外，其余各部分大都脱落。这样，果实就为小枝所取代，形成结果枝上的丛生症状。,番茄根结线虫病,桃树缩叶病,作业,（1）叙述植物病害组织分离技术的操作要点及操作过程中注意的事项。 （2）观察分离培养的结果，分析成败原因。 （3）植物病害症状观察表：,（五种病状类型各选一代表）,
