1、海州香薷总黄酮对离体大鼠主动脉环张力的作用及机制 徐佳1陈军津1 周育成1 王会平2 （1浙江大学医学院 2004 级临床医学专业 3 系 3A 班，浙江 杭州 310058； 2浙江大学医学院 生理教研室，浙江 杭州 310058） 摘要 目的：研究海州香薷总黄酮（ total flavones from Elsholtzia splendens ， TFES）对离体大鼠胸主动脉环收缩张力的作用及其机制。方法：采用大鼠离体胸主动脉灌流模型，累积加药，检测海州香薷总黄酮对去氧肾上腺素（ PE）和 KCL预收缩的胸主动脉环收缩张力的影响。结果：海州香薷总黄酮对内皮完整的离体主动脉环基础张力的作用
2、不明显（ p0.05）；内皮完整和去内皮时，海洲香薷总黄酮（ 5、 10、 25、 50、 100、 200ug/mL）对 PE（ 10-4mol/L）和 KCL（ 3mol/L）预收缩的血管环均产生舒张作用 （ p 0.05） ； 而用 NO 合酶 （ NOS） 抑制剂 L-NAME（ 10-4mol/L） ，鸟苷酸环化酶（ GC）抑制剂 ODQ（ 10mol/L）以及环氧酶（ COX）抑制剂 Indo（ 10-5mol/L）处理血管后，对低浓度及高浓度下海州香薷总黄酮舒张血管效应的阻断作用均不明显 (p0.05)；使用电压依赖性的 K+通道阻断剂 4-AP(1mmol/L)， Ca2+敏感
3、性的 K+通道阻断剂 TEA(1mmol/L)以及 ATP 敏感性的 K+通道阻断剂格列苯脲（ Glib） (3mol/L)处理后，对海州香薷总黄酮舒血管效应的阻断作用亦均不明显；内皮完整和去内皮时，海州香薷总黄酮对 PE（ 10-4mol/L）预收缩血管环的舒张作用均具有时间依赖性。结论：在低浓度及高浓度下，海州香薷总黄酮对大鼠离体胸主动脉环产生的舒张效应并非通过 NO-鸟苷酸环化酶途径，环氧合酶途径以及直接作用于平滑肌细胞膜上电压依赖性的 K+通道、 Ca2+敏感性的 K+通道、 ATP 敏感性的 K+通道的途径产生的，其中浓度下的舒张作用可能与鸟苷酸环化酶有关，其机制待进一步研究明确。
4、关键词 海州香薷总黄酮 ;胸主动脉环 ;血管舒张 ;内皮 Effects and Mechanism of Total Flavonoids of Elsholtzia Splendens on Rat Thoracic aortic XU jia1,CHEN jun-jin1,ZHOU yu-cheng1， WANG hui-ping2(1Clinical Medicine,2Department of Physioligy,Zhejiang University School of Medicine,Hangzhou 310058,China) Abstract Objective： To
5、 investigate the effect of total flavones from Elsholtzia splendens（ TFES）on rat thoracic aorta rings and the underlying mechanisms. Methods: The study was performed with the model of isolate rat thoracic aorta rings in organ bath, we investigate the effects of accumulated total flavones from Elshol
6、tzia splendens on the constriction of high KCL and Phenylephrine(PE) preconstricted rat thoracicaorta with endothelium. Results: There is no effect of total flavones from Elsholtzia splendens (TFES) on the basal tonus in rat isolated aortic rings with endothelium(p0.05).Total flavones from Elsholtzi
7、a splendens（ 5、 10、 25、 50、 100、 200ug/mL）concentration dependently caused relaxation in vessels with or without endothelium precontracted both with 10-4mol/L phenylephrine (PE) and 60mmol/L KCL(p0.05). Also, the relaxation to the total flavones from Elsholtzia splendens was not inhibited by 1mmol/L
8、 tetraethylammonium (TEA) 、1mmol/L 4-aminopyridine（ 4-AP） and 3mol/L Glibenclamide（ Glib） . TFES time dependently caused relaxation in vessels with or without endothelium precontracted with 10-4mol/L phenylephrine (PE).Conclusion:The results indicate that TFES can relax the rat thoracic aorta rings
9、with or without endothelium . At the same time, the relaxation by TFES of High and low concentration isnt mediated by the NO-guanylyl cyclase pathway ,COX pathway and three kinds of K+-channels on the membrane of vascular smooth muscle,yet,the relaxation by TFES of mediate concentration may be media
10、ted by GC,so the mechanisms need more research. Key words TFES; thoracic aorta rings； vascular relaxation； endothelium 香薷（ Elsholtzia Splendens）是传统中药，主要用于治疗暑湿感冒、恶寒发热、头痛无汗，也用于治疗腹痛吐泻，小便不利，风湿关节痛等疾病1。近来研究表明它还有抗氧化活性、心肌缺血保护、加强内分泌系统免疫、降血脂、抗炎症、抗病原微生物等作用。香薷化学成分复杂，包括黄酮类、香豆素类、木脂素类、萜类，以及各种脂肪酸、挥发油等2。早在 20世纪 60年代
11、，国内外就已研究并证实了银杏叶总黄酮 (FG）的扩血管活性，并已初步用于临床，获得较好的疗效2。另外据相关研究表明，生物类黄酮具有抗氧化、降低脂质过氧化反应、预防心血管疾病、抗氧、防癌等作用3。而香薷总黄酮对血管的作用及其机制方面的研究基本尚属空白。因此，本实验采用大鼠离体胸主动脉灌流模型，在内皮完整和去内皮的条件下，累积加药，检测海州香薷总黄酮对去氧肾上腺素（ PE）和 KCL预收缩的胸主动脉环收缩张力的影响，探讨其对血管平滑肌的作用及可能的机制。 1 材料与方法 1.1 设备 离体血管环灌流装置， JZJ01 型肌肉张力换能器， HSS 1B 型数字式超级恒温浴槽，RM6240B 型多道生
12、理信号采集处理系统，均为成都仪器厂产品。 1.2 药物与试剂 苯肾上腺素（ Phenylephrine， PE），乙酰胆碱（ Acetylcholine， Ach），左旋硝基精氨酸甲脂（ N（ omega） -nitro-L-methyl-ester ， L-NAME）， 吲哚美辛（ Indomethacin ， Indo ）， 1H-1,2,4oxadiazolo4,3-alphaquinoxalin-1-one(ODQ)，格列苯脲（ Glibenclamide），以上均为 Sigma公司产品，海州香薷总黄酮由王会平老师提供，用 K-H 液配制含海洲香薷总黄酮原液。 Krebs-Hensel
13、eit （ K-H） 液 （ mmol/L） ： NaCL 118、 KCL 4.7、 KH2PO4 1.2、 MgSO4 7H2O 1.2、 NaHCO325， glucose 10、 CaCL2 1.25。 1.3 血管环的制备 Sprague-Dawley（ SD）大鼠，雄性，体重 200 280 g，由浙江大学医学院动物实验中心提供。每个大鼠的胸主动脉被分成 6-8 段，并随机分入 8 个实验组进行平行研究。具体方法为：用钝器击昏大鼠后充分放血，迅速取胸主动脉，置于通以 95 O2和 5 CO2混合气体预饱和地4 C K-H液中，去除周围结缔组织后将血管剪成约 34mm的血管环，避免过
14、度牵拉，以防损伤内皮。根据实验需要，去除血管内皮时，用镊子磨擦血管环内表面以去除内皮细胞。将血管环悬挂于预置 10ml K-H液的浴槽内， 37C恒温，持续通以 95 O2和 5 CO2的混合气体。静息张力 1g稳定血管30min，每隔 15min换一次 K-H液，每隔10min调整一下张力使其稳定在1g，此后调节静息张力为 2g，稳定稳定 1h，期间每隔 15min换一次 K-H液每隔10min调整一下张力使其稳定在2g。用 3mol/L的 KCL重复刺激 3次，以诱发血管的最大收缩幅度。待血管稳定后，用 10-4mol/L PE预收缩血管环达峰值，加入 10-4mol/L Ach检验内皮的
15、完整性。加入 Ach后使 PE预收缩的血管环舒张 60 90，认为内皮完整，反之，认为内皮被破坏。实验用 RM6240B 型生物信号采集处理系统记录血管张力的变化，分别以末次 KCL（终浓度 610-2mol/L）、 PE（终浓度 10-6mol/L）刺激引起的最大收缩幅度为标准，以加入药物后的血管张力幅度与之相比所得百分比比值表示。 1.4 实验分组 1.4.1ES对主动脉环基础张力影响组。ES对内皮完整主动脉环基础张力影响组(n=3)：采用累积加药方法，每18 min加入ES，使灌流液中ES浓度分别达5、10、25、50、100、200 g/ml；ES对去内皮主动脉环基础张力影响组(n=4
16、)：使用去除内皮血管环，其余方法同上。 1.4.2ES对PE预收缩主动脉环张力影响组。ES对内皮完整PE预收缩主动脉环张力影响组(n=13)：PE(1mol/L)预收缩达稳态后，采用累积加药方法，每18 min加入ES，使灌流液中ES浓度分别达5、10、25、50、100、200 g/ml；ES对去内皮PE预收缩主动脉环张力影响组(n=6)：使用去除内皮血管环，其余方法同上。 1.4.3ES对KCl预收缩主动脉环张力影响组。 ES对内皮完整KCl预收缩主动脉环张力影响组(n=9)：KCl (6 10-2mol/L)预收缩达稳态后，采用累积加药方法，每18 min加入ES，使灌流液中ES浓度分别
17、达5、10、25、50、100、200 g/ml；ES对去内皮KCl预收缩主动脉环张力影响组(n=6)：使用去除内皮血管环，其余方法同上。 1.4.4ODQ、L-NAME、吲哚美辛对香薷总黄酮诱导的舒张反应影响组。ODQ 对香薷总黄酮诱导的舒张反应影响组(n=5)：ODQ 预处理 15min，PE（1 mol/L）预收缩达稳态后，采用累积加药方法，每 18 min 加入 ES，使灌流液中 ES 浓度分别达 5、10、25、50、100、200 g/ml；L-NAME 对香薷总黄酮诱导的舒张反应影响组(n=5)：L-NAME预处理 15min，PE（1 mol/L）预收缩达稳态后，采用累积加药方
18、法， 每 18 min加入ES， 使灌流液中 ES 浓度分别达 5、 10、 25、 50、 100、 200 g/ml；吲哚美辛对香薷总黄酮诱导的舒张反应影响组(n= 5)：吲哚美辛预处理 15min，PE（1 mol/L）预收缩达稳态后，采用累积加药方法，每 18 min 加入 ES，使灌流液中 ES 浓度分别达 5、10、25、50、100、200 g/ml。 1.4.5 格列苯脲、4-氨基吡啶、四乙胺对香薷总黄酮诱导的舒张反应影响组。格列苯脲对香薷总黄酮诱导的舒张反应影响组：格列苯脲预处理 15min，PE（1 mol/L）预收缩达稳态后，采用累积加药方法，每 18 min 加入ES，
19、使灌流液中 ES 浓度分别达 5、10、25、50、100、200 g/ml；4-氨基吡啶对香薷总黄酮诱导的舒张反应影响组：4-氨基吡啶预处理 15min，PE（1 mol/L）预收缩达稳态后，采用累积加药方法，每 18 min 加入 ES，使灌流液中 ES浓度分别达 5、10、25、50、100、200 g/ml；四乙胺对香薷总黄酮诱导的舒张反应影响组：四乙胺预处理 15min，PE（1 mol/L）预收缩达稳态后，采用累积加药方法，每 18 min 加入 ES，使灌流液中 ES 浓度分别达 5、10、25、50、100、200 g/ml。 1.4.6 香薷总黄酮诱导的舒张反应的时间依赖性变
20、化。内皮完整组：PE（1 mol/L）预收缩内皮完整主动脉环达稳态后，加入香薷总黄酮(0.05g/ml)使灌流液浓度达到 100 g/ml，每 3min 记录血管张力变化；去内皮组：PE（1 mol/L）预收缩去内皮主动脉环达稳态后方法同上。记录：Time(min)-T1/2、TmaxMaximal、relaxation(%) 1.5 统计处理 试验结果用 X s 表示，用 MicrosoftExcel 软件处理，两组间比较采用 t 检验，p0.05)。同等条件下，去内皮动脉环张力与基础张力有显著影响 (p0.05）。见图 1 Fig1. Effects of TFES on the basa
21、l tonus in rat isolated aortic rings Pooled data of mean normalized vessel tension aorta rings with or whithout endothelium.Andthere is no effect of total flavones from Elsholtzia splendens (TFES) on the basal tonus in rat isolated aortic rings with endothelium(p0.05) 图 1 ES 对离体主动脉环基础张力的影响 （p0.05 VS
22、 “有内皮未加药 ”组，p0.05 vs”有内皮加 ES ”组） 0.00%5.00%10.00%15.00%20.00%25.00%30.00%35.00%0 50 100 150 200 250ES 浓度（ug/ml）收缩幅度有内皮加 ES 组 无内皮加 ES 组 2.2ES 对 PE 预收缩主动脉环张力的影响。 TFES 浓度为 5、 10、 25、 50、 100、 200g/ml 的条件下，可使 PE 预收缩的内皮完整的主动脉环舒张，比 PE 预收缩时的张力明显降低（p0 05）见（图 1） A B Fig.2Effect of TFES on tension of phenylep
23、hrine(PE) precontracted aorta rings of rat. A: Records from experiments illustrating the effect of increasing dose of TFES the tension of PE precontracted aorta ringswith(up, E+)or without(underside, E-)endothelium. B:Pooled data of mean normalized vessel tension obtained form PE precontracted aorta
24、 rings with or whithout endothelium.p0.05 compare PE（ +E） with PE（ E） . 2.3 ES 对 KCl 预收缩主动脉环张力的影响。 TFES 浓度为 5、 10、 25、 50、 100 和 200 ug/ml 的条件下，可使 KCl 预收缩的内皮完整主动脉环舒张，比 KCl 预收缩时的张力明显降低 (P0.05)。 A 图 2 ES 对 PE 预收缩的主动脉环张力的影响0.00% 20.00% 40.00% 60.00% 80.00% 100.00% 120.00% 0 50 100 150 200 250ES 浓度（ug/m
25、l）收缩幅度E+ ES 对血管环的作 用E- ES 对血管环的作 用E+ 对照E- 对照 E- B E- Fig.3 Effect of TFES on tension of KCl A: Records from experiments illustrating the effect of increasing dose of TFES the tension of KCl precontracted aorta ringswith(up, E+)or without(underside, E-)endothelium. B:Pooled data of mean normalized ve
26、ssel tension obtained form KCl precontracted aorta rings with or whithout endothelium.p0.05 compare PE（ +E） with PE（ E） . 2.4 ODQ对香薷总黄酮诱导的舒张反应的影响。 为了探讨鸟苷酸环化酶途径是否参与 TFES的血管舒张作用，用鸟苷酸环化酶抑制剂 ODQ 处理内皮完整的血管环后， 观察 TFES对血管张力的影响。 ODQ处理后， 在 ES浓度为 25-50 g/ml时使 PE预收缩的血管产生舒张的作用被显著性减弱（P0.05)。 A B 图4 ODQ 对ES 血管作用的
27、影响-20.00%0.00% 20.00%40.00%60.00%80.00%100.00%120.00%0 50 100 150 200 250ES 浓度（ug/ml）收缩幅度ODQ 有内皮有内皮 ES 累积对PE 收缩的作用 Fig 5. Effect of TFES on tension of phenylephrine(PE) precontracted aorta rings of rat which have been pretreated by L-NAME. A: Records from experiments illustrating the effect of TFES
28、on the phenylephrine(PE) precontracted tension of aorta rings of rat which have been pretreated by L-NAME. B:Pooled data of mean normalized vessel tension obtained form PE precontracted aorta rings(pretreated by L-NAME) with endothelium.P0.05 compare PE（ E） group with L-NAMEPE（ E） group. 2.6 吲哚美辛对香薷
29、总黄酮诱导的舒张反应的影响。 为了探讨环氧合酶（ COX）途径是否参与 TFES的血管舒张作用，采用内皮完整的血管环用环氧合酶抑制剂 Indo 处理后，观察 TFES对血管张力的影响。 Indo预处理后， ES对 PE预收缩血管的舒张效应与未经 Indo处理的血管舒张效应之间无显著性差异 (P0.05)。 A B 图6 Indo对 ES 血管作用的影响-20.00%0.00% 20.00%40.00%60.00%80.00%100.00%120.00%0 50 100 150 200 250ES 浓度（ug/ml）收缩幅度Indo 有内皮 有内皮 ES 累积对PE 收缩的作用 图5 L-NAM
30、E对 ES 血管作用的影响-20.00%0.00% 20.00%40.00%60.00%80.00%100.00%120.00%0 50 100 150 200 250ES 浓度（ug/ml）收缩幅度L-NAME 有内皮 有内皮 ES 累积对PE 收缩的作用 Fig. 6 Effect of TFES on tension of phenylephrine(PE) precontracted aorta rings of rat which have been pretreated by Indo. A: Records from experiments illustrating the ef
31、fect of TFES on the phenylephrine(PE) precontracted tension of aorta rings of rat which have been pretreated by Indo . B:Pooled data of mean normalized vessel tension obtained form PE precontracted aorta rings(pretreated by indomethacin) with endothelium。P0.05 compare PE（ E） group with Indo PE（ E） g
32、roup. 2.7 格列苯脲对香薷总黄酮诱导的舒张反应的影响。 为了探讨 TFES的血管舒张作用是否通过 ATP 敏感性 K通道发挥作用，用 ATP 敏感的 K通道抑制剂格列本脲（ Glib）处理完整的血管环后，观察 TFES对血管张力的影响。 Glib预处理后，在 5、 10ug/ml浓度 ES时对 PE预收缩血管的舒张效应与未经 Glib处理的血管舒张效应之间无显著性差异 (P0.05);当 ES浓度较高时两组之间存在显著性差异 (P0.05);当 ES浓度升高后两组之间存在显著性差异 (P 0.05);当 ES浓度升高后两组之间存在显著性差异 (P 0.05)，但 ES的舒张作用加强。
33、A B -20.00%0.00%20.00%40.00%60.00%80.00%100.00%120.00%140.00%0 50 100 150 200 250ES 终浓度(ug/ml)有内皮-4-APE+ ES对血管环的作用 图 8 4-AP 对ES 血管作用的影响 收缩幅度Fig. 9 Effect of TFES on tension of phenylephrine(PE) precontracted aorta rings of rat which have been pretreated by TEA. A: Records from experiments illustrati
34、ng the effect of TFES on the phenylephrine(PE) precontracted tension of aorta rings of rat which have been pretreated by TEA.B: Pooled data of mean normalized vessel tension obtained form PE precontracted aorta rings(pretreated by TEA) with endothelium. 2.10 探讨 ES舒血管作用是否存在时间依赖性，对内皮完整的血管环用 PE预处理，在保持E
35、S100g/ml浓度环境下观察血管的张力变化，得到血管内皮最大舒张程度是峰值的 37.340.15%，最大舒张时间 Tmax及舒张一半时间 T1/2分别为 20.42 1.24s和 8.7 4.19s。同理对去内皮血管进行相同操作，得到血管内皮最大舒张程度是峰值的 70.7 0.10%，与内皮完整组有显著性差异（ p0.05），最大舒张时间 Tmax及舒张一半时间 T1/2分别为 19.24 3.62s和 11.3 1.29s。 A B 图9 TEA对 ES 血管作用的影响-40.00%-20.00%0.00%20.00%40.00%60.00%80.00%100.00%120.00%140.
36、00%0 50 100 150 200 250ES 终浓度(ug/ml)有内皮-TEA E+ ES对血管环的作用 收缩幅度 Fig.10The time dependent effect of TFES on tension of phenylephrine(PE) precontracted aorta rings of rat. 3.讨论 香薷是一种传统中药，主要用于治疗暑湿感冒、恶寒发热、头痛无汗，也用于治疗腹痛吐泻，小便不利，风湿关节痛等疾病1。近来研究表明它还有抗氧化活性、心肌缺血保护、加强内分泌系统免疫、降血脂、抗炎症、抗病原微生物等作用。香薷化学成分复杂，包括黄酮类、香豆素类、木
37、脂素类、萜类，以及各种脂肪酸、挥发油等2。早在 20 世纪 60 年代，国内外就已研究并证实了银杏叶总黄酮 (FG）的扩血管活性，并已初步用于临床，获得较好的疗效2。另外据相关研究表明，生物类黄酮具有抗氧化、降低脂质过氧化反应、预防心血管疾病、抗氧、防癌等作用3。对香薷总黄酮血管方面的可能作用尚基于以上研究的推测。 本实验研究结果表明，海州香薷总黄酮可使 PE及 KCL预收缩的大鼠胸主动脉环产生舒张，而这一作用并不依赖于内皮的存在，其作用机制与血管床直接相关，同时也不排除其尚有内皮途径参与的可能，其作用有明显的浓度依赖性，且在中浓度下具有明显差异。同时试验结果显示，用 NO合酶（ NOS）抑制
38、剂 L-NAME 和鸟苷酸环化酶（ GC）抑制剂 ODQ 均不能阻断 TFES低浓度及高浓度下的舒张血管效应，用电压依赖性的 K+通道阻断剂 4-AP， Ca2+敏感性的 K+通道阻断剂 TEA以及 ATP敏感性的 K+通道阻断剂格列苯脲处理后，对海州香薷总黄酮介导的舒血管效应亦无阻断作用。这些结果提示我们： NO-GC途径和 COX途径这两条内皮途径并不参与香薷总黄酮的舒血管作用，并且直接作用于平滑肌的 3种 K+ 通道也和香薷总黄酮的舒血管作用没有密切关系。本研究还表明， TFES可以时间依赖性地抑制内皮完整及去内皮血管由 PE引起的血管收缩。 KCL是通过平滑肌细胞去极化而诱导血管收缩，
39、其机制主要是细胞外高 K+使 Ca2+通道开放，细胞外 Ca2+内流，从而增加了细胞内 Ca2+的浓度4。然而， PE 诱导的血管收缩是由 1 肾上腺素受体的激活造成的，主要通过激活磷脂酶 C（ PLC），产生甘油二酯（ diacylglycerol， DG）和三磷酸肌醇（ 1， 4， 5 triphosphate inositol， IP3），主要通过 IP3 诱导肌浆网内的 Ca2+释放5。其最终结果都是使细胞内 Ca2+浓度升高，促进血管平滑肌细胞肌凝蛋白和肌纤蛋白的相互作用，从而引起收缩。海州香薷总黄酮对两者诱导的内皮完整及去内皮的血管环都产生舒张作用，因此考虑其可能是通过某些机制来影
40、响内钙的释放和外钙内流来产生舒张血管的作用。对于 TFES如何影响内钙释放或外钙内流，本实验并未详细涉及，目前研究已知细胞内钙的释放与肌浆网上的 RyR受体和 IP3受体有关6，而细胞膜上 Ca2+通道亦有电压依赖性和受体依赖性之分7，若实验条件允许，可通过使用无钙液、 RyR受体和 IP3受体的阻断剂等多种手段，在这方面进一步深入研究。 内皮细胞通过释放血管舒张物质在在调节平滑肌的张力中起到了重要的作用8， 9。 内皮细胞中释放的最重要的一种物质是内皮源性舒张因子 （ Endithelium derived relaxing factor， EDRF） ，已被 Furchgott 等确认是
41、NO8， 10。其它舒血管物质还有前列环素（ PGI2）等。通过内皮产生血图 10 ES 舒血管作用的时间依赖性变化0.00%20.00%40.00%60.00%80.00%100.00%120.00%0 5 10 15 20 25时间（min）收缩幅度有内皮的 无内皮 管作用一般包括以下 3条途径： NO-GC途径， COX途径，细胞超极化 (DEHF)与细胞色素 P450途径11。 NO-GC途径的具体过程如下：血管内皮细胞中内皮型 NO合酶（ eNOS）催化生成 NO后，其可透过细胞膜扩散进入平滑肌细胞，并且与平滑肌细胞那的可溶性鸟苷酸环化酶（ sGC）血红素部分结合，活化 sGC，在
42、Mg2与 ATP 存在的条件下活化的 sGC催化 GTP 形成 cGMP，后者作为一种重要的信号分子可激活 cGMP 依赖的蛋白激酶（ PKG），活化的 PKG 使平滑肌细胞膜L 型 Ca2+通道（ ICa， L），肌浆网（ SR）膜的 IP3 受体和 rya-nodine 受体磷酸化，磷酸化可以使这些通道失活、关闭，前者使 Ca2+内流减少，而后者使 SR释放 Ca2+减少，两者都使平滑肌细胞内的 Ca2+减少，诱发血管平滑肌的舒张6。 COX 途径中， COX 活性增强， PGI2 合成增多，PGI2 介导了血管的舒张6。 在本实验中， NOS抑制剂 L-NAME及 GC 阻断剂 ODQ都
43、不能阻断了海州香薷总黄酮在低浓度及高浓度下引起的舒血管作用， 证明 TFES的舒血管作用可能与细胞超极化 (DEHF)与细胞色素P450途径有关，或是不通过内皮途径产生作用。中浓度下 GC 阻断剂 ODQ可以阻断 TFES的舒血管作用，可见中浓度 TFES的舒张血管作用，可能与 sGC有关。在大血管中 ,由于 NO作用的存在 , EDHF的作用难以显现11,可以通过合并使用 L - NAME 和 P450抑制剂 SKF - 525A 与单独使用L NAME比较有无显著差异 ,来证明 TFES的舒血管作用是否涉及 DEHF11。 血管平滑肌细胞上电压激活的钾通道 (voltageactivate
44、dK+-channel, KV)、钙激活的钾通道(Ca2+-activated K+-channels, KCa)、 ATP 敏感性钾通道 (ATP-sensitive K+-channel, KATP)和内向整流钾通道 (inwardly-rectifying K+-channel, KIR)均参与血管舒张反应和血管基本紧张度(vascular basal tone)的维持12。近年来不断发现有扩血管作用的钾通道开放剂，一些传统扩血管药物也相继报道有钾通道开放作用。各种钾通道激活造成的血管舒张反应与其引起血管平滑肌细胞膜复极化或超极化有关12。本实验显示，用电压依赖性的 K+通道阻断剂 4-
45、AP， Ca2+敏感性的 K+通道阻断剂 TEA以及 ATP敏感性的 K+通道阻断剂格列苯脲处理后， 对海州香薷总黄酮介导的舒血管效应均无阻断作用，提示我们直接作用于平滑肌的这 3种 K+ 通道与香薷总黄酮的舒血管作用没有密切关系。那么，这一结果就提示我们，香薷总黄酮的舒血管作用可能与内向整流钾通道 (inwardly-rectifying K+-channel, KIR)有关， 或是与直接作用于血管平滑肌上的其他途径有关。现在已经知道 NA、组织胺和 5-羟色胺分别通过激活血管平滑肌细胞上 1肾上腺素受体、H1组 织胺受体和 5-HT2受体收缩血管13，因此推测 TFES可能通过非选择性阻断
46、 1受体、 H1 受体或5-HT2受体扩张血管； 或不直接作用于上述膜受体 , 而是作用于受体激活后细胞内信号转导过程的某一或多个环节，因为 1受体、 H1 受体和 5-HT2 受体均为 G蛋白耦联的膜受体，有相似的细胞内信号转导通路。而对于内向整流钾通道，我们可以选用 BaCl2作为阻断剂进行研究，亦可考虑使用非选择性的钾通道阻断剂来研究。若有条件能进一步完成上述深入研究实验，相信会对 TFES的舒血管作用的机制有更清楚的了解。 在本实验中，使用电压依赖性的 K+通道阻断剂 4-AP， Ca2+敏感性的 K+通道阻断剂 TEA以及 ATP敏感性的 K+通道阻断剂格列苯脲处理后， TFES的舒
47、张作用没有被阻断，反而与对照相比舒张得更加厉害， Glib组是有显著性差异的 (p0.05)，对于这一现象，按照药物本身的作用未能得到明确的解释，因此更多考虑为对照组的问题，本实验对照组是由多次实验共同组成，很多实验因素有所改变，且由于取血管的操作尚不纯熟，血管的活性得不到很好的保证，因此数据处理后效果仍不满意。 本次实验尚存在一些问题，最大的不足就是对照组较少，且对照组的实验条件未能严格的控制；其次，由于同学操作中的失误，造成部分实验数据的组数太少，说服力欠佳。总之，海州香薷总黄酮对大鼠离体胸主动脉环产生的舒张效应具有浓度依赖性和时间依赖性，中浓度下其舒张作用可被 ODQ阻断，低浓度和高浓度
48、下的舒张作用并非通过 NO-鸟苷酸环化酶途径，环氧合酶途径以及直接作用于平滑肌细胞膜上电压依赖性的 K+通道、 Ca2+敏感性的 K+通道、ATP 敏感性的 K+通道的途径，具体作用机制待进一步研究明确。 致谢： 衷心感谢王会平老师对我们的耐心指导和帮助，感谢厉旭云老师为我们准备实验仪器和药剂，感谢陈军津同学协助绘制本文图表，感谢周育成同学协助处理本文数据，感谢浙江大学医学院 2004 级临床医学专业 3 系 3A 班全体同学齐心协力共同完成本次研究性实验。 References： 1 国家中医药管理局中华本草编委会 ,中华本草(下册 ),上海科学技术出版社 ,1998： 1620一 1625
49、 2 Ai-Lin Liu, Simon M.Y. Lee, Yi-Tao Wang, et al. Elsholtzia: review of traditional uses, chemistry and pharmacology.Journal of Chinese Pharmaceutical Sciences,2007,16:73-78. 3杨彩霞 ,康淑荷 ,荆黎田 ,郑尚珍 .石香薷中的黄酮体化合物 .西北民族学院学报(自然科学版 ).第24卷总第 47期 .2003年 3月 :31 33 4 曹春梅，叶松，俞虎，等 .白细胞介素 -2引起离体大鼠主动脉环舒张及其作用机制 .生理学报，2003， 55（ 1）： 19 23 5 张必祺，胡申江，单绮娴，等 .JOURNAL
