1、细菌和病毒感染的实验室诊断与防治原则 实验室检查的目的 实验室检查的原则 标本采集与运送 实验室检查的程序与内容 细菌与病毒感染的预防 细菌与病毒性疾病的治疗2实验室检查的目的确定病原指导用药判断疗效服务患者服务社会3实验室检查的原则1.医师和检验师要密切配合：互为因果关系。2.重视标本的采集和送检：诊断成败的关键。3.安全管理好菌(毒)种：4.按病原体的危险等级分类，我国将微生物分为4类，类 ： 对人和动物可造成严重威胁的微生物，如天花病毒、埃博拉病毒。类：可引起人和动物严重疾病的病原体如HIV、脊髓灰质炎病毒、高致病性禽流感病毒、炭疽芽孢杆菌、结核分枝杆菌等。类：不会造成人和动物严重疾病，
2、传播的危险性有限的细菌、病毒。类：用于制备菌（疫）苗用的细菌、病毒减毒株。45.病原学检验对实验室的要求:、类细菌病毒检测要在生物安全水平（biosafety level, BSL） 3-4级实验室。一般细菌学和血清学检测在BSL1-2级实验室进行。病毒培养均需在安装有生物安全柜的2级实验室中进行。实验室检查的原则5BSL-2实验室生物安全柜6细菌感染的实验室检查程序标本采集标本直接检查形态、染色检查细菌成分检测抗原检测核酸检测细菌毒素检测革兰染色抗酸染色荧光染色光学显微镜电子显微镜ELISAIF凝集实验核酸杂交基因测序PCR鲎实验免疫学实验动物实验分离培养与鉴定血清学实验（双份血清）增菌、分
3、离与纯培养特异性抗体检测形态学培养特性生化试验血清学鉴定药敏试验动物实验凝集试验ELISA琼脂扩散中和试验补体结合试验7细菌标本采集和运送Collection and transportation of specimen1、早期采集：疾病早期、急性期、症状典型时采集2、无菌取材：无菌操作，无菌器皿/无菌培养基3、区别取材：不同疾病、不同时期采集。如伤寒早期采集血液、晚期采集粪便。4、妥善送检：快速，保温/低温，安全。如奈瑟菌和厌氧菌5、双份血清：恢复期 IgG 4 X 急性期 IgG81. 形态学检查：光镜法2. 病原学检查：细菌分离、培养和鉴定方法3. 特异性抗原：免疫学试验方法4. 细菌核
4、酸检测：分子生物学方法5. 生物芯片技术6. 其他检测方法细菌的实验室检查内容9细菌的形态学检查检查用仪器普通光学显微镜 light microscope暗视野显微镜 dark-field microscope荧光显微镜 fluorescence microscope10细菌的形态学检查方法不染色方法：检查细菌动力（压滴法、悬滴法、穿刺线法、暗视野显微镜法）染色方法：革兰染色法（ Grams stain）抗酸染色法（ Acid-fast stain）特殊染色法（ special stain）荧光染色法（ fluorescence stain）11结晶紫染液 卢戈氏碘液 95%酒精 石炭酸复红液
5、革兰染色法（ Grams stain）121314关于革兰氏染色性差别的三种说法15抗酸染色法初染：石碳酸复红，加热染色5min脱色：盐酸乙醇，无色为止复染：美兰，1min擦干、滴油、镜检、记录结核分枝杆菌细胞壁结构特殊：没有磷壁酸，也没有脂多糖。除肽聚糖之外，主要是脂质，占60%以上。16细菌的分离培养与鉴定临床标本分离培养接种纯培养挑取单菌落鉴定17生化实验检测肠道杆菌分离鉴定程序标本采集初步鉴定脓血便直接涂片镜检显色培养基接种选择培养基增菌进一步鉴定药敏试验接种双糖和尿素培养基18生化试验检测双糖试验项目大肠埃希氏菌伤寒沙门氏菌甲型副伤寒沙门氏菌乙型副伤寒沙门氏菌痢疾志贺氏菌变形杆菌乳糖
6、利用- - -葡萄糖利用+动力+ +-+H2S产生- +/- +/- + - +尿素利用- -+19血清学鉴定利用已知的特异性抗体检查未知的纯培养细菌，不仅可对分离培养的细菌进行种的鉴定，还可以对细菌进行血清型的鉴别。肠道杆菌血清学鉴定：细菌作为颗粒性抗原在相应抗体作用下可形成肉眼可见的凝集颗粒。-阴性+阳性可疑菌落可疑菌落阴性阳性阴性阳性阴性阳性20动物试验* LD50* ID50小鼠豚鼠家兔21药物敏感试验用直尺量取抑菌环的直径，对照药物敏感性参照表，即可判断该细菌对某抗生素的敏感性。自动化微生物鉴定和药敏分析系统（快速、微量、自动化）药物参考菌株耐药中介敏感AM E.coli 13 14
7、-16 17S.a 28 - 29SE.coli11 12-14 15SMX S.a 3 14-22 2322 PCR 定量PCR 核酸杂交技术 16S rRNA基因序列分析 生物芯片技术细菌核酸检测试验聚合酶链式反应是一种体外DNA扩增技术，在 DNA扩增仪上进行。适用于难以培养的细菌引起的疾病如结核、慢性淋病、梅毒等。23细菌感染的血清学检查用已知细菌或其抗原成分，检测病人体内特异性抗体（ IgG/IgM）的方法，常用于某些致病菌感染的辅助性诊断。又称为血清学诊断 （ serological diagnosis ） 。血清学诊断常用于病程长和抗原性较强的病原菌引起的感染。双份血清 IgG抗
8、体效价 4倍升高，具有诊断价值。24病毒感染的实验室检查程序标本采集分离培养鉴定（污染标本用抗生素处理）细胞培养CPE电镜检测中和试验TCID50测定Pfu测定MOI测定鸡胚接种红细胞凝集实验红细胞凝集抑制试验快速诊断动物接种观察发病情况中和试验免疫学指标检测ID50测定LD测定形态学电镜观察病毒颗粒大小形态抗体检测ELISARIAWBIF抗原检测ELISAIFRIAWB核酸检测核酸电泳核酸杂交PCR基因芯片基因测序25病毒实验室检查内容病毒的形态学检查病毒的分离培养与鉴定病毒的成分检测病毒感染的血清学检测26病毒标本采集和运送1、无菌取材：无菌操作，无菌器皿，急性期2、区别取材：感染部位，病
9、程，检测目的，抗生素3、贴好标签：4、妥善送检：快速， 保温/低温 ，安全5、双份血清：恢复期 IgG 4 X 急性期 IgG27病毒体的形态学检测1. 细胞学检查：病变组织 切片 染色 光学显微镜 细胞病变2. 电镜检查：直接电镜法免疫电镜法（ immune electron microscope）28动物接种 :利用已知或建立新动物模型鸡胚接种 :适用多种病毒接种组织培养 :器官培养、组织培养、细胞培养细胞培养 :*原代细胞系 （ 23代）*二倍体细胞 （ 4050代， vaccine preparation）*传代细胞系（ Henrietta Lacks cells - HeLa cel
10、ls）病毒分离培养与鉴定Isolation and identification of virus29绒毛尿囊膜接种痘病毒单纯疱疹病毒卵黄囊接种嗜神经病毒羊膜腔接种（流感病毒初次分离）尿囊腔接种（流感病毒、腮腺炎病毒）气室30病毒在培养细胞中增殖的指标1. 致细胞病变效应（ cytopathic effect， CPE）腺病毒 细胞团缩、团聚，成葡萄状负粘病毒、 RSV-引起细胞融合，多核巨细胞2. 红细胞吸附（ hemadsorption）有血凝素病毒感染敏感细胞后，血凝素出现在细胞膜表面，使后加入的红细胞被吸附。3. 红细胞凝集（ hemagglutination）有血凝素病毒增殖的培养液可使加入的动物红细胞凝集，作为病毒增殖的指标。黄祯祥1910-198731
