1、肺炎支原体与衣原体,美国美德声科学技术公司中国市场产品支持专线：800 810 6607med2med-,Ani Labsystems Ltd. Oy -芬兰的诊断产品公司,主要致力于感染疾病等酶标产品的研发和销售，产品在全球销售。,肺炎支原体 IgM / IgG / IgA,肺炎衣原体 IgM / IgG / IgA,百日咳杆菌 IgM / IgG / IgA,呼吸道疾病产品,肺炎（pneumonia）是指终末气道、肺泡和肺间质的炎症，可由病原微生物、理化因素、免疫损伤、过敏及药物所致。,肺 炎 概 述,细菌、病毒、真菌，等支原体肺炎衣原体肺炎,病原微生物：,肺炎支原体 Mycoplasma
2、 Pneumoniae,从人体分离出16种支原体， 5种对人有致病性，即肺炎支原体、解脲支原体、人型支原体、生殖支原体及发酵支原体。 肺炎支原体是呼吸道感染、肺炎的主要原因,1938年，Reimann报道了7名罹患肺炎的患者，临床表现不同于一 般的细菌性肺炎，当时称为原发性非典型肺炎。,概 述,1944年，Eaton等从一名患原发性非典型肺炎患者的痰液中，分离出一种病原体，可引起棉鼠和地鼠肺炎，因其能通过虑菌器而疑为病毒，称为Eaton因子。,1962年，Chanock和Hayflick应用无细胞人工培养基成功分离培养Eaton因子，并提议将其命名为肺炎支原体。,是一类目前所知能独立生活，自行
3、繁殖的最小微生物。基因组是环状双股 DNA 。1996 年，首次对肺炎支原体进行了全基因组测序 ，测序株全长 816,394bp ，编码 687 个基因。二分裂的生长方式。,生物学特性,MP仅寄生于人类，传染源是患者及携带者。MP由感染者的鼻、咽、喉、器官排出，借飞沫或气溶胶而传播。潜伏期和治疗期间均有传染性，病初46天传染性最强，35周后消失。,流行病学1,-传染源及传播途径,人类对MP普遍易感，总的发病率取决于人群易感性。59岁儿童为发病高峰，其次是1014岁年龄段儿童，近年来发病年龄有提前的趋势，另有新生儿支原体肺炎的报道。集中在大、中、小学生，军人和囚犯为高危人群。成人症状较轻，免疫功
4、能低下者常引起严重感染，且带菌状态可持续很长时间。,流行病学2,-易感人群,全球性分布，无地区性差异。局部流行、爆发流行。平时散发，寒冷季节发病率较高，占住院肺炎的1020%，流行期间可占30%。每45年有1次流行，被戏称为“奥林匹克病”；近年来平均每26年在全球出现流行。MP和CP占CAP混合感染的1/32/3，尤与肺炎链球菌混合感染常见。,流行病学3,-流行特征,支原体学/吴移谋等主编.-2版.-北京：人民卫生出版社，2008.1,临床表现,MP 经飞沫传播侵入机体，粘附于呼吸道细胞表面，并由上呼吸道逐渐向下呼吸道蔓延，引起气管及支气管、喉炎，重症者导致肺炎。此外，也可同时或相继引起脑炎、
5、心肌炎、肝炎等肺外症状。,呼吸道症状: 潜伏期1-11天，发热可持续1-2周，X线表现近半数两侧可被侵害，75-90%有下叶受累，X线体征可长达 3周以上。,肺外并发症: MP可进入血液，在呼吸系统以外的部位增值，引起肺外并发症，出现于呼吸道症状后330天。,皮肤损害：皮疹的发生率约25%。 神经系统：MP感染患儿约7%发生中枢神经系统损害。 心血管系统：发生率约45%。 血液系统：以溶血性贫血多见，也有血小板、WBC减少。 泌尿系统：可出现蛋白尿、血尿、肾衰竭。 运动系统：可导致关节炎等。 其他损害：可出现肝功能轻、中度损害。,支原体学/吴移谋等主编.-2版.-北京：人民卫生出版社，2008
6、.1,病理生理肺炎病理生理发生发展示意图病原体 毒素上呼吸道炎支气管炎肺 炎肺组织充血水肿渗出 支气管粘膜充血水肿渗出换气障碍 通气障碍低氧血症 高碳酸血症 毒血症 肺动脉 肺动脉反 呼吸 呼吸衰竭 高压 射性收缩 循环系统 DIC 神经 脑水肿，脑病 心力 心肌 消化 出血，肠麻痹 衰竭 受损 酸碱失衡中毒性心肌炎,实验室诊断,-支原体及血清学检查阳性，是诊断本病的主要依据。,病原学检查,典型“油煎蛋”菌落,原代菌落,没有细胞壁，基本形态有球型、双球型及丝状。在固体培养基上一般 3 7 天后方能形成集落，肉眼很难观察，必须借助低倍镜观察，典型菌落呈“油煎蛋”样。,电镜下形态,病原学检查,肉汤
7、培养基 左 阴性对照（红色） 右 MP 生长（黄色）,OXOID 变色培养基左 阴性对照（深色） 右 MP 生长（绿色）,培养基：需要丰富的胆固醇、血清蛋白和酵母浸液。,培养条件：pH 为 7.08.0 ， 温度36 37 ，环境510% CO 2 。,生化反应：利用其分解葡萄糖、甘露糖，还原亚甲蓝等生化特性与其他支原体进行鉴别 。,免疫学检查,非特异性试验：3376%的MP感染者冷凝集试验阳性，一般在第1周末或第2周出现，12个月消失。冷凝集效价在1：64或以上有诊断意义。不适用于MP感染的确认。,特异性试验：感染后79天，血清特异性抗体开始升高，34周达高峰。恢复期较急性期抗体滴度升高4倍
8、或以上有诊断意义。特异性高，对于确认MP感染有一定的诊断价值。,分子生物学检查,PCR法：扩增的靶基因包括16SrRNA基因的可变区、P1蛋白、ATP酶操纵子，敏感性和特异性从53.8100%不等。易出现假阳性和假阴性。标本类型：咽拭子、痰及支气管肺泡灌洗液。,DNA探针杂交法：目前用于MP研究的探针有特异性DNA片段探针、人工合成的核苷酸探针和全DNA探针。标本类型：痰液，对咽拭子标本检测价值不大。,辅助性检查,影像学检查：X线检查，特异性不高，不能确诊。,血象检查：CRP、血沉、LH等指标均出现异常，白细胞升高不明显，而细菌性肺炎时白细胞升高明显，可鉴别。特异性不高。,产品介绍,美德声推广
9、的MP-IgM抗体检测试剂盒用于定性检测人血清和血浆中肺炎支原体特异的IgM抗体。有助于辅助诊断记性肺炎支原体感染。,-Ani Labsystems,Mycoplasma pneumoniae EIAs(2000) ：全球首个取得CE认证,肺炎支原体试剂盒组成,加入样本,37度孵育60分钟,洗板后加入标记有HRP的二抗,37度孵育60分钟,加入底物显色液,室温孵育30分钟,加入终止液后测OD值,需时150分钟,准确、特异性强,肺炎支原体试剂盒检测原理,微孔板表面包被有一层P1片段 特异抗原,产品性能 1,批内重复性,批间重复性,产品性能 2,标本：17对提示MP感染的标本；21对确认RSV感染
10、标本；20对确认甲流感染标本；13个确认EBV感染标本；20个确认CP感染和1对确认的CP感染标本。,即用型试剂，可拆卸板条；IgG去除剂，有效消除类风湿因子的干扰；阴性对照、临界值对照、阳性对照均为人血清基质；独特的标记便于板条的识别。底物、洗液、终止液可以通用。与ANI Labsystems CP、BP等可同步操作。28储存，有效期12个月。,肺炎支原体产品特点,竞争产品,培养法,原理：通过MP生长分解Glu产酸，使指示剂的颜色由红变黄。,采样：咽后部扁桃体部位,传统培养法培养时间较长。武汉菁华：快速培养法，6小时出结果。,特点： 传承徽生物检测的“金标准”,创建了“快速培养法”。 创新世
11、界微生物培养技术。 突破传统培养时间障碍(3-7天)，首创6小时快速培养。 稳定性好可在常温下保存7天不影响到效果。,凝集法,特异性检测MP总抗体，日本富士。,原理：致敏粒子与人血清中存在的MP抗体发生凝集反应。,特点： MP（Mac株）细胞膜成分致敏明胶粒子，采用凝集法定性/半定量检测MP抗体。 致敏/未致敏粒子为冻干粉，使用前复溶，当天使用，冷藏可5天内使用，每次使用前充分混匀。 阳性对照滴度为1：320，来源为兔血清。 反应时间3小时后观察结果。 试剂有效期，28 保存12个月。 无法区分急性期感染还是急性期后期（伴有其他并发症）。,ELISA法,在血清学检测方法中应用最为广泛，方便、快
12、捷。特异性检测血清中MP特异性抗体。,试剂品牌：,EUROIMMUN,定性/半定量（与Cut-off比值）检测MP-IgM,有效期1年 反应时间：30+30+15=75min（室温）,Virion / Serion,定性/定量检测MP-IgM,GenBio / ImmunoWell,定量检测MP-IgM， A(U/mL)=（OD样本浓度cal）/ODcal 阴性：A770 U/mL阳性：A950 U/mL,厂家介绍：兰州雅华、潍坊康华,胶体金法,快速检测MP-IgM，特异性不高，易出现假阳性，不适于批量标本检测。,特点：一步法检测，简便、快速。,PCR法,厂家介绍：达安基因，试剂报价1200/
13、20tests,检测MP-DNA，需要配PCR分析仪，实验室及技术人员要求高。 对感染早期诊断有意义。,标本：痰液、肺及支气管灌洗液、咽拭子,肺炎衣原体 Chlamydia Pneumoniae,1986年Grayeton等在学生急性呼吸道感染中，发现一种衣原体，以后于成人呼吸道疾病中亦被发现，当时命名为鹦鹉热衣原体TWAR-TW株，后经研究证明该衣原体为一新种、并定名为肺炎衣原体。 衣原体是一种严格的细胞内寄生生物，已知有3种对人有致病性，即肺炎衣原体、沙眼衣原体、鹦鹉热衣原体。肺炎衣原体是呼吸道感染、肺炎的主要原因。肺炎衣原体只有一个血清型TWAR株。,概 述,具有DNA和RNA两种类型的
14、核酸，二分裂增值。没有合成ATP等高能化合物的能力。对多种抗生素敏感：四环素、红霉素等。对热敏感：56-60，只能存活5-10 min。有独特的发育周期。,生物学特性,CP仅寄生于人类和哺乳动物，人类是CP唯一储存宿主，传染源是患者及无症状携带者。传播途径：主要经飞沫或呼吸分泌物道传播，可广泛寄居于呼吸道。,流行病学1,-传染源及传播途径,CP感染表现差异较大，常可无任何症状，事实上每一个人在一生中某一个时段都会受到CP的感染CP扩散较缓慢，机体产生的免疫力极其微弱，易造成持续感染和反复感染。,流行病学2,-易感人群,：衣原体肺炎流行病学特征，张建华.实用儿科临床杂志.第24卷16期：2009
15、年8月.,具有散发和流行交替出现的特点。四季均可发生，随年龄增长，抗体阳性率呈线性上升。国外对成人肺炎研究表明243%的CAP与CP感染有关；对连续住院的CAP患者，CP抗体阳性率高达63.8%。国内报道经DNA和血清学检测亚洲地区成人CAP的流行病学研究表明CP占成人病原的5.8%。,流行病学3,-流行特征,：衣原体肺炎流行病学特征，张建华.实用儿科临床杂志.第24卷16期：2009年8月.,临床表现,CP经飞沫传播侵入机体，引起咽炎及支气管、喉炎，轻症无明显症状，成年人肺炎多较严重。此外，并可能伴随肺外表现如神经系统损害、心脑血管疾病等。,呼吸道症状: 白细胞计数正常，X线无特异性，表现多
16、为单侧下叶浸润，咳嗽症状可持续3周以上。,肺外并发症: CP感染可以有肺外多个系统损害，儿童较成人少见。,心血管系统：损伤冠状动脉，引起冠心病和ACS等。 神经系统：导致成人脑梗死，引起脑炎、脑膜炎等。 反应性关节炎：偶尔出现，肺炎症状后3周发生。 结节病：与结节病，慢性肉芽肿等相关。 自身免疫性疾病：（ANCA相关）肾炎。 其他损害：腹主动脉瘤、甲状腺炎、结节性红斑等。,1) 避免长时间在人群拥挤的地方逗留，减少空气传播机会。 2) 避免接触高热、咳嗽、胸闷等呼吸道感染症状的患者，如发现家人有明显呼吸道症状请及早就医，并做好隔离措施。 3) 保持家庭居住及工作环境的清洁和通气。,预 防,实验
17、室诊断,-分离、培养或血清学检测阳性是诊断CP感染的标准。,病原学检查,辅助性检查,血液检查 & 影像学检查,病原学检查,CP培养只能在细胞内生长繁殖，分离培养方法复杂，所需时间长，分离率低，不适宜临床快速诊断。CP能在呼吸道来源的细胞系：HEp-2和HL细胞系中稳定生长，在细胞内形成包涵体。标本置于室温会降低活性，需尽快培养。标本类型：鼻咽或喉拭子、痰和胸腔积液标本分离CP。鼻咽部拭子分离较理想。,ELISA: 常用于对CP感染者的筛查。MIF ：国际上标准且常用的方法，常用于实验研究。IHA ：通过凝集试验，检测CP总抗体。,血清学检查,包括ELISA、MIF、IHA等检测方法，针对CP特
18、异性抗体的检测。,急性感染：双份血清IgG滴度4倍以上增高，单份血清IgM滴度 1:16或IgG 1:512。 既往感染：单份血清 1:16 IgG 1:512。,分子生物学检查,最常用的引物是omp1、16SrRNA、16S和16S23SrRNA、CP特异性克隆PstI片段等测定扩增产物用琼脂糖凝胶电泳、PAGE电泳等。对CP感染早期诊断有一定价值。存在假阳性或假阴性问题。对技术人员及设备要求较高。标本类型：咽拭子、支气管肺泡灌洗液。,辅助检查,血象检查：CRP、血沉、IgG 、IgM 、血浆铜蓝蛋白等指标均出现异常，白细胞不升高。特异性不高。,影像学检查：X线检查，特异性不高，不能确诊。,
19、产品介绍,美德声推广的CP-IgM抗体检测试剂盒用于定性检测人血清和血浆中肺炎衣原体特异的IgM抗体。有助于辅助诊断记性肺炎支原体感染。,-Ani Labsystems,Chlamydia pneumoniae EIAs (1999) ：全球首个CP EIA产品,肺炎衣原体试剂盒组成,加入样本,37度孵育60分钟,洗板后加入标记有HRP的二抗,37度孵育60分钟,加入底物显色液,室温孵育30分钟,加入终止液后测OD值,需时150分钟,准确、特异性强,肺炎衣原体试剂盒检测原理,微孔板表面包被有一层CP 特异抗原,产品性能 1,批内重复性,批间重复性,产品性能 2,标本：1995年瑞典爆发肺炎衣原
20、体流行期间采集的血清标本。,肺炎衣原体产品特点,即用型试剂，可拆卸板条；IgG去除剂，有效消除类风湿因子的干扰；阴性对照、临界值对照、阳性对照均为人血清基质；独特的标记便于板条的识别。底物、洗液、终止液可以通用。与ANI Labsystems MP、BP等可同步操作。28储存，有效期12个月。,竞争产品,ELISA法,在血清学检测方法中应用最为广泛，方便、快捷。特异性检测血清中CP特异性抗体。,试剂品牌：,未注册,EUROIMMUN,CP-IgG有注册证，三点定标。,定性检测CP-IgM抗体。,Savyon / Sero,-北京荣志海达生物科技有限公司代理,定性检测CP-IgM抗体。,DRG,
21、定性检测CP-IgM抗体。,MP/CP引起的肺炎，通过X体征很难与其他区分，普通抗生素治疗无效，久治不愈可扩展至肺外并发症。,及早检测特异性MP-IgM、CP-IgM对临床衣原体、支原体肺炎早期感染的治疗有重要的指导意义。,肺炎IgM类抗体在感染后持续时间长，是感染的有效检测指标；IgG类抗体产生时间很晚，主要作为未治愈感染的指标。,小结,大环内酯类治疗有效。,IgG去除剂，有效消除类风湿因子的干扰。阴性对照、临界值对照、阳性对照均为人血清基质。独特的标记便于板条的识别。底物、洗液、终止液可以通用。ANI Labsystems MP、CP、BP等可同步操作。采用微孔板反应，可手工和自动化操作。有效期长，28储存，有效期12个月。,美德声产品总结,目标客户群,检验科 儿科医院 传染病医院 独立实验室 体检中心等,各地收费标准,Thanks a lot,
