1、第一章 血液一般检验,绪 论,一、临床检验（clinical laboratory technology or science）,又称实验诊断学，就是通过实验室的各种检查方法，包括感官检查、理学检查、化学检查、显微镜检查以及自动化仪器检查等，对病人的血液、体液、分泌物和排泄物等标本进行检查、分析，以获得病原、病理变化及脏器功能状态等资料。,二、临床检验在医学中的作用,1、为准确诊断、及时治疗提供依据,临床检验的结果是支持诊断、鉴别诊断、甚至确定诊断的 主要依据。,例：anemia,依据：血中红细胞和血红蛋白量减少,leukemia,依据：血象和骨髓象,肾脏有实质性损伤的依据,尿液中出现蛋白、细
2、胞 管型,问：tumor？,2、为分析病情、观察疗效、判断预后提供依据,在疾病过程中，血液、体液、分泌物和排泄物也 会随之发生相应的变化,3、为预防疾病提供资料,如血象和肿瘤细胞学的普查等,三、临床检验的一般方法,1、目视检查,直接观察标本：颜色、透明度、性状，有无 凝块或寄生虫,2、理学检查,液体的相对密度、血液比粘度、红细胞沉降 率、红细胞比积等病理变化,3、化学检查,定性和定量检测标本化学成分的病理变化,4、显微镜检查,观察有型成分的数量和形态,5、自动化仪器检查,电子技术、程序控制的发展,四、学习临床检验的目的和要求,1、理论联系实践,2、操作要求,3、检验结果必须和临床表现结合,4、
3、检验人员的医德,血液标本采集和血涂片制备,血液学检查 ： 反应造血系统本身、机体全身或局部病变,有助于疾病的诊断及疗效、预后的观察,只能反应疾病某一方面的情况，不能认为是病程的全部反应；不同个体，对同一影响有不同的反应，或也可对不同影响产生 相同的反应,一、血液标本的采集,1、毛细血管采血法,部位：中指或无名指尖内侧，半岁以下拇指或足部，特殊人员视情况而定。,b. 所用器材：采血针、吸管,c. 采血步骤及注意事项,2、静脉采血法,部位：主要是肘静脉。还可以在：手背部手腕部等幼儿可采用颈外静脉采血。,采血器材：一次性注射器，检验用真空定量采血装置,c. 采血步骤及注意事项,两种采血方法的优缺点比
4、较,毛细血管,静脉血,缺点,限制了重复实验和追 加实验，标本量少， 局部炎症可得假结果 ，组织液可混入,不同抗凝剂的使用， 改变血液性质，影响 有形成分的形态,优点,价廉、快速、操作简 便，标本可直接测定,标本代表性大，无组 织液影响，适于临床 研究，可重复实验和 追加其他实验,常用血液标本抗凝剂 及其使用选择,1、柠檬酸钠（枸橼酸钠）,a. 抗凝原理：螯合钙离子,使用方法 配成109 mmol/L的浓度和血液1：9106 mmol/L的浓度和血液1：4,化学名：3-羟基-3-羧基戊二酸（三钠盐）,c. 适用范围：止血学检验、血沉、输血保养液（毒性小）,2. 草酸钠（乙二酸的钠盐）,a. 抗凝
5、原理：草酸钙沉淀,b. 使用方法 草酸钠0.1mol/L 和血液1：9,c. 适用范围： 止血学检验,3. 双草酸盐抗凝剂,a. 抗凝原理： 草酸钙沉淀,使用方法： 草酸钾0.8g , 草酸铵1.2g（100ml） 与血液 1：10 （80C以下烘干）,适用范围： 红细胞检验（红细胞比积、计数）不适于血小板计数和白细胞分类计数,4. 肝素 （含硫酸基团的粘多糖）,抗凝原理：低浓度时抑制因子a、和PF3之间的作用，加强抗凝血酶灭活丝氨酸蛋白酶，从而阻止凝血酶形成，还能抑制凝血酶的自我催化及抑制因子的作用；高浓度时阻断凝血酶和纤维蛋白的反应。,b. 适用方法： 1g/L浓度的肝素钠与血液 1：10
6、,优点：抗凝能力强、不影响血细胞体积、不易溶血、能耐高温。,适用范围： 红细胞检验（红细胞计数、血红蛋白测定、红细胞比积）和多种生化分析,5. 乙二胺四乙酸（EDTA）盐,a. 抗凝原理： 螯合钙离子,b. 使用方法： 15g/L浓度EDTA 和血液 1：10,适用范围： 对血细胞形态影响小-血小板计数；影响血小板聚集和白细胞吞噬功能-不易做止血学检验及血小板功能检验。,物理方法抗凝：脱纤维蛋白： 将血液注入有玻璃珠的器皿中，转动，纤维蛋白缠绕凝固于玻璃球，从而防止血成凝块。适用于免疫学检验和红斑性狼疮细胞检查。,血涂片的制备技术,血涂片的用途： 血细胞形态学检验、网织红、异常寄生虫检验。,2
7、. 血涂片制备步骤：（手工推片法）,将推玻片向1的方向稍抽回，当血液充满推玻片的宽度后，以一定均匀的速度向2的方向滑动。,3. 血涂片质量评价： 均匀、厚薄、头体尾、边缘、两侧,注意：血滴大，速度快、角度大-血膜厚,细胞染色技术,染料-生物学染色剂：将生物组织细胞和病原体染色，在显微镜下观察结构。,（一）、染料 （天然染料和人工染料） 发色基团和助色基团使生物学染色剂产生颜色和被染 组织亲合。,碱性染料：为阳离子染料，能接受质子，染细胞核的染料。如亚甲蓝、天青。,酸性染料：为阴离子染料，能释放质子。主要有荧烷-氧杂蒽染料和偶氮染料两类，能结合细胞的碱性成分并染色，如血红蛋白、嗜酸性颗粒成分等。
8、,3. 复合染料：同时具有阴、阳离子型的染料如瑞氏染料,（二）、细胞染色原理： 一般以它们的物理现象和/或化学现象为依据,1. 物理作用：毛细管现象、渗透、吸收、吸附作用等,化学作用：a. 染料的化学成分：助色基团的存在，碱性染料在溶媒中为阳离子型，易与组织和细胞内带负电荷的 酸性物质结合；而酸性染料在溶媒中为阴离子型，与 带正电荷的碱性物质结合。,b. 蛋白质的化学性质：蛋白质中的氨基酸含有不同 数量的氨基（-NH2）和羧基（-COOH），同时还有其 他活性基团。在游离状态时， -NH2获得一个H+变成带 正电的-NH3+，而-COOH失去一个H+变成带负电的-COO-。 分别与不同染料结合
9、。,c. 周围环境的酸碱度：如环境pHpI（ pI 为等电点），则蛋白质带正电，结合酸性染料；反之， pHpI，则结合碱性染料。,（三）、细胞染色法的类型1. 普通染色法： 经物理和/或化学作用的吸附、结合2. 荧光染色法：荧光染料，荧光显微镜3. 细胞活体染色法：活体染料如灿烂甲酚蓝等4. 细胞化学染色法：用化学反应显示细胞内某种成分。 细胞免疫化学染色法（应用单克隆抗体技术、酶标记技术）,瑞氏染色法,（一）、染色原理分两相进行，第一相是酸性伊红与细胞中的碱性物质如血红蛋白、嗜酸性颗粒结合；碱性染料天青B与细胞中的酸性物质如核染色质、特异中性颗粒、血小板结合。第二相是天青B和伊红结合在适宜条
10、件下形成紫色的天青B-伊红复合物，结果使白细胞核染色质成紫色（疟原虫的染色质成红色），中性粒细胞的颗粒及血小板颗粒区成紫色。,（二）、试剂1. Wright染液 瑞氏染粉0.1g,甲醇60.0ml甲醇：有强大的脱水力，可将细胞固定为一定形态，并使蛋白质沉淀为颗粒状、网状等结构，增加细胞与染料接触表面积，提高对染料的吸附作用，增强染色效果。,磷酸盐缓冲液（PBS）：磷酸二氢钾（无水）0.3g，磷酸氢二钠（无水）0.2g, 蒸馏水加到1000ml。配好后用磷酸盐溶液校正pH，塞紧瓶口备用。,染色方法：a. 用蜡笔在血膜两头划线，平放于染色架上。b. 加瑞氏染液覆盖血膜，固定1min。c. 滴加等量
11、或稍多的缓冲液，混匀，染色5-10 分钟。d. 用清水冲洗，待干后镜检。,注意事项：a. 血膜要干透后才能染色，否则染色时易脱落b. 染色时间与染液浓度、室温及细胞多少有关， 一般染液淡、染色时间长些效果好。c. 染液不能过少，以防蒸发沉淀。d. 冲洗时不能先倒掉染液，应以流水冲，防染料 沉着。冲洗时间也不能长。e. 染色过淡，可复染。f. 染色过深可用水冲洗或浸泡，还可用甲醇脱色,六、 姬姆萨染色法,（一）、染色原理： 基本成分仍然是伊红和亚甲蓝，改进了染料的质量，使细胞核着色好，结构显示更清晰，而胞浆和中性颗粒染色较差。,（二）、试剂 Giemsa 甲醇 纯甘油,（三）、染色方法1. 甲醇
12、固定干燥血膜3-5min2. 将血膜在染液中浸染10-30min3. 流水冲洗,待干后镜检,七、巴氏染色法,是脱落细胞染色法中较好的染色方法。,显微镜细胞计数法,细胞计数是临床检验最常用的技术。显微镜计数法、血细胞计数仪计数法,计数板,细胞计数注意事项,供计数的标本必须新鲜，各种体液标本做到随采随处理 混匀 加盖玻片的方式 稀释液要过虑，小试管、定量吸管、计数板均须清洁，以免杂质、微粒等误认为细胞,计数误差,1、技术误差（technical errors) 使用器材不符合要求 采血部位不当 稀释倍数不准 充液不当 血液发生凝固,固有误差,在显微镜计数法中包括计数域误差（field error)、吸管误差（pipet error)和计数室误差（chamber error)三种,
