1、摇摇鄢摇通信作者摇 栽藻造院渊园员园冤远苑园怨缘怨圆员曰耘 原 皂葬蚤造院憎葬灶早赠糟岳 灶蚤枣凿糟援 燥则早援 糟灶第一作者摇 栽藻造院渊园员园冤远苑园怨缘怨员愿曰耘 原 皂葬蚤造院曾怎皂扎澡藻岳 灶蚤枣凿糟援 燥则早援 糟灶分析方法验证尧转移和确认概念解析许明哲袁黄宝斌袁杨青云袁田学波袁白东亭袁王佑春渊中国食品药品检定研究院袁北京员园园园缘园冤摘要院分析方法验证尧转移和确认的目的是证明分析方法的适用性袁对保证检测结果的一致性尧可靠性和准确性具有重要作用遥方法验证尧转移和确认的概念不同袁适用范围不同袁在实际工作中存在一些模糊概念袁而且也存在使用不当的情况遥鉴于上述情况袁本文详细阐述药品方法验
2、证尧方法转移尧方法确认的联系尧区别尧适用范围袁为药品检验检验相关工作提供参考遥关键词院分析方法验证曰分析方法转移曰分析方法确认曰药典分析方法曰指导原则中图分类号院砸怨员苑文献标识码院粤文章编号院园圆缘源 原员苑怨猿渊圆园员缘冤园员 原园员远怨 原园苑耘造葬遭燥则葬贼蚤燥灶 燥灶 贼澡藻 糟燥灶糟藻责贼泽 燥枣 葬灶葬造赠贼蚤糟葬造 皂藻贼澡燥凿增葬造蚤凿葬贼蚤燥灶袁贼则葬灶泽枣藻则 葬灶凿 增藻则蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶载哉 酝蚤灶早 原 扎澡藻袁匀哉粤晕郧 月葬燥 原 遭蚤灶袁再粤晕郧 匝蚤灶早 原 赠怎灶袁栽陨粤晕 载怎藻 原 遭燥袁月粤陨 阅燥灶早 原 贼蚤灶早袁宰粤晕郧 再燥怎 原 糟澡怎灶
3、鄢渊晕葬贼蚤燥灶葬造 陨灶泽贼蚤贼怎贼藻泽 枣燥则 云燥燥凿 葬灶凿 阅则怎早 悦燥灶贼则燥造袁月藻蚤躁蚤灶早 员园园园缘园袁悦澡蚤灶葬冤粤遭泽贼则葬糟贼院栽澡藻 葬蚤皂 燥枣 葬灶葬造赠贼蚤糟葬造 皂藻贼澡燥凿 增葬造蚤凿葬贼蚤燥灶袁贼则葬灶泽枣藻则 葬灶凿 增藻则蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 蚤泽 贼燥 糟燥灶枣蚤则皂 贼澡葬贼 贼澡藻 葬灶葬造赠贼蚤糟葬造 皂藻贼澡燥凿枣蚤贼泽 枣燥则 贼澡藻 蚤灶贼藻灶凿藻凿 责怎则责燥泽藻援 酝藻贼澡燥凿 增葬造蚤凿葬贼蚤燥灶袁贼则葬灶泽枣藻则 葬灶凿 增藻则蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 葬则藻 增藻则赠 蚤皂责燥则贼葬灶贼 贼燥 藻灶泽怎则藻 贼澡藻 择怎葬造蚤贼赠袁
4、则藻鄄造蚤葬遭蚤造蚤贼赠 葬灶凿 糟燥灶泽蚤泽贼藻灶糟赠 燥枣 葬灶葬造赠贼蚤糟葬造 则藻泽怎造贼泽袁憎澡蚤糟澡 蚤泽 葬灶 蚤灶贼藻早则葬造 责葬则贼 燥枣 葬灶赠 早燥燥凿 葬灶葬造赠贼蚤糟葬造 责则葬糟贼蚤糟藻援 匀燥憎藻增藻则袁贼澡藻则藻葬则藻 造燥贼泽 燥枣 糟燥灶枣怎泽蚤燥灶 葬灶凿 皂蚤泽怎灶凿藻则泽贼葬灶凿蚤灶早 燥灶 糟燥灶糟藻责贼泽 葬灶凿 葬责责造蚤糟葬贼蚤燥灶 泽糟燥责藻泽 燥枣 皂藻贼澡燥凿 增葬造蚤凿葬贼蚤燥灶袁贼则葬灶泽枣藻则 葬灶凿增藻则蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 蚤灶 责则葬糟贼蚤糟葬造 憎燥则噪泽援 栽澡蚤泽 责葬责藻则 藻造葬遭燥则葬贼藻泽 贼澡藻 糟燥则则藻造葬
5、贼蚤燥灶袁凿蚤枣枣藻则藻灶糟藻泽 葬灶凿 葬责责造蚤糟葬贼蚤燥灶 泽糟燥责藻泽 燥枣 皂藻贼澡燥凿增葬造蚤凿葬贼蚤燥灶袁贼则葬灶泽枣藻则 葬灶凿 增藻则蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶袁泽燥 葬泽 贼燥 责则燥增蚤凿藻 葬 则藻枣藻则藻灶糟藻 枣燥则 贼澡藻 则藻造葬贼蚤增藻 憎燥则噪 燥枣 凿则怎早 择怎葬造蚤贼赠 糟燥灶贼则燥造援运藻赠憎燥则凿泽院葬灶葬造赠贼蚤糟葬造 皂藻贼澡燥凿 增葬造蚤凿葬贼蚤燥灶曰葬灶葬造赠贼蚤糟葬造 皂藻贼澡燥凿 贼则葬灶泽枣藻则曰葬灶葬造赠贼蚤糟葬造 皂藻贼澡燥凿 增藻则蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶曰糟燥皂责藻灶凿蚤葬造 皂藻贼澡鄄燥凿曰早怎蚤凿藻造蚤灶藻摇摇分析方法验证尧转移和确认的
6、目的是证明所采用的分析方法适合于相应检测要求和目的袁被测样品质量可控袁保证得到一致尧可靠和准确的测定结果袁同时也证明检验人员有能力操作分析方法遥方法学验证尧转移和确认是建立和重现一个好的分析方法不可缺少的重要组成部分袁通过方法学验证尧转移和确认袁可以对采用该方法所得到的检测结果的质量和可靠性进行判断遥员摇分析方法验证尧转移和确认相关的指导原则和法规要求目前国内外和分析方法学有关的指导原则和技术文件中袁大部分都是阐述分析方法验证的内容袁很少有专门阐述分析方法转移和确认的文件咱员 原愿袁员园 原员猿暂咱怨暂怨愿猿遥美国尧欧盟尧日本尧澳大利亚尧中国等国家和地区的药品监管机构以及野人用药品注册技术要求
7、国际协调会冶 渊 陨灶贼藻则灶葬贼蚤燥灶葬造 悦燥灶枣藻则藻灶糟藻 燥灶 匀葬则皂燥灶蚤扎葬贼蚤燥灶 燥枣栽藻糟澡灶蚤糟葬造 砸藻择怎蚤则藻皂藻灶贼泽 枣燥则 砸藻早蚤泽贼则葬贼蚤燥灶 燥枣 孕澡葬则皂葬糟藻怎鄄贼蚤糟葬造泽 枣燥则 匀怎皂葬灶 哉泽藻袁陨悦匀冤尧世界卫生组织渊宰燥则造凿匀藻葬造贼澡 韵则早葬灶蚤扎葬贼蚤燥灶袁宰匀韵冤尧国际标准化组织渊陨灶贼藻则鄄灶葬贼蚤燥灶葬造 韵则早葬灶蚤扎葬贼蚤燥灶 枣燥则 杂贼葬灶凿葬则凿蚤扎葬贼蚤燥灶袁陨杂韵冤等国际组织都有专门的关于方法学验证的指导原则咱员 原苑暂遥其中美国食品药品监督管理局渊哉援 杂援 云燥燥凿 葬灶凿 阅则怎早粤凿皂蚤灶蚤泽贼则
8、葬贼蚤燥灶袁云阅粤冤在圆园园园年和圆园园员年分别发布了野化学药品分析步骤和分析方法验证指导原则冶和野生物分析方法验证指导原则冶曰欧洲药品监督管理局渊耘怎则燥责藻葬灶 酝藻凿蚤糟蚤灶藻泽 粤早藻灶糟赠袁耘酝耘粤冤于圆园园源年发布的郧酝孕指导原则对分析方法验证有明确的要求袁并于圆园员员年苑月圆员日发布了野生物分析方法验证指南要怨远员要药物分析杂志悦澡蚤灶 允 孕澡葬则皂 粤灶葬造 圆园员缘袁猿缘渊员冤渊早怎蚤凿藻造蚤灶藻 燥灶 遭蚤燥葬灶葬造赠贼蚤糟葬造 皂藻贼澡燥凿 增葬造蚤凿葬贼蚤燥灶冤冶袁圆园员圆年圆月员日生效袁用于药代动力学和毒代动力学研究中生物样品定量测定的分析方法验证遥陨悦匀在员怨怨缘
9、年和员怨怨远年分别发布了匝圆粤野分析步骤验证原定义和术语冶和匝圆月野分析步骤验证原方法学冶曰陨杂韵 员苑园圆缘于圆园园缘年发布的野检测和校准实验室通用要求冶第野缘郾源郾缘冶章节中对分析方法验证提出了非常具体的规定和要求咱源袁苑暂遥另外袁美国药典渊 哉援 杂援 孕澡葬则皂葬糟燥责燥藻蚤葬袁 哉杂孕冤尧欧洲药典渊耘怎则燥责藻葬灶 孕澡葬则皂葬糟燥责燥藻蚤葬袁耘孕冤尧日本药局方渊允葬责葬鄄灶藻泽藻 孕澡葬则皂葬糟燥责燥藻蚤葬袁允孕冤和中国药典渊悦澡蚤灶藻泽藻 孕澡葬则鄄皂葬糟燥责燥藻蚤葬袁悦澡孕冤都有专门的附录收载分析方法验证指导原则咱愿袁员园 原员圆暂 咱怨暂怨愿猿遥关于方法学确认袁陨杂韵 员苑园
10、圆缘院圆园园缘通篇只在野缘郾源郾圆冶中有一小段描述院野噎噎在进行检测或校准之前袁实验室应确认能够正确操作这些标准方法遥如果标准方法发生了变化袁应重新进行确认冶遥最早发布相应技术文件专门阐述方法确认的是欧洲药品质量控制实验室联盟渊耘怎则燥责藻葬灶 韵枣枣蚤糟蚤葬造 酝藻凿蚤糟蚤灶藻悦燥灶贼则燥造 蕴葬遭燥则葬贼燥则蚤藻泽 晕藻贼憎燥则噪袁韵酝悦蕴冤遥其在圆园园缘年发布的质量保证技术文件野分析方法验证冶中指出咱怨暂怨愿猿院陨悦匀分析方法验证的指导原则主要是针对制药企业而制定的袁规定制药企业在制定药品分析方法时需要验证哪些参数袁用于向药品监管机构证明该方法可行袁产品质量可控遥而欧洲各国的官方药品质量
11、控制实验室从事的日常工作主要是根据药典方法或者标准方法进行药品检测分析袁药典方法或标准方法都是经过验证的方法袁药品检验实验室在操作时袁没有必要再次对方法进行验证遥但是药品检验实验室需要证明药典方法或标准方法对本次检验所测品种的适用性袁即要进行方法确认遥方法确认具体内容和方法的检测类型有关袁不同的检测类型渊鉴别尧杂质分析尧含量测定等冤方法确认的内容不同遥第员次完整提出方法确认渊皂藻贼澡燥凿 增藻则蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶冤这个概念的是哉杂孕 猿圆版遥哉杂孕猿圆版附录掖员圆圆远业咱怨暂怨愿猿中收载了一个新的指导原则野药典分析方法确认冶渊增藻则蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 燥枣 糟燥皂责藻灶凿蚤葬造 皂藻贼澡燥凿冤
12、袁对方法确认的概念尧方法确认的适用范围进行了详细阐述袁至于方法确认的具体内容袁哉杂孕没有详细说明袁只是给出了以下指导意见院员冤通过系统适用性试验证明实验室的操作能力和证明检验系统符合方法要求曰圆冤判断方法的复杂程度曰猿冤确定方法操作的关键步骤和影响检验结果的关键方法学参数曰源冤根据方法的复杂程度袁选择最为关键的几个方法学参数进行考察遥圆摇药品分析方法的分类药品质量分析根据被测物的不同袁分析方法通常可分为化学药品分析方法渊葬灶葬造赠贼蚤糟葬造 皂藻贼澡燥凿冤和生物检定方法渊遭蚤燥造燥早蚤糟葬造 葬泽泽葬赠袁燥则 遭蚤燥葬泽泽葬赠冤咱员猿暂遥化学药品分析方法是指采用分析仪器或者装置袁对化学药品渊包
13、括中药冤中的成分进行定性或者定量检测分析遥由于化学药品成分相对单一和结构相对简单袁因此袁相对应供试品溶液的制备方法和检验检测也比较简单袁易于操作袁能够影响检验结果的因素比较少袁对于同一份样品来说袁比较容易获得一致的检验结果遥生物制品渊包括疫苗尧抗体尧细胞因子尧酶等冤的分析方法通常叫做野生物检定方法冶遥根据陨悦匀的定义咱源暂袁生物检定的内容包括院测定某个特定器官对某个生物制品的生物学反应尧测定细胞水平的生化或者生理学反应尧免疫学作用下的酶反应速率或者生物学反应以及配体或者受体结合反应遥由于生物制品的复杂性袁生物检定方法的范围很广袁包括理化分析方法尧效价测定方法尧细胞活性测定尧酶活性测定尧免疫测定
14、等袁随着新技术和新生物制品的不断出现袁生物检定的范围仍在继续不断扩大遥由于方法的多样性袁长期以来国际上很难形成一个统一的生物检定方法验证指导原则遥在日常检验工作和生物检定方法建立的过程中袁也缺乏相应的参考标准和指导文件遥圆园员猿年缘月员日开始正式执行的哉杂孕猿远版袁在其附录掖员园猿圆业野生物检定方法设计和建立渊 凿藻泽蚤早灶 葬灶凿 凿藻增藻造燥责皂藻灶贼 燥枣 遭蚤燥造燥早蚤糟葬造 葬泽泽葬赠 冤冶尧掖员园猿猿业野生物检定方法验证渊遭蚤燥造燥早蚤糟葬造 葬泽泽葬赠 增葬造蚤凿葬鄄贼蚤燥灶冤冶和掖员园猿源业野生物检定数据的分析渊葬灶葬造赠泽蚤泽 燥枣遭蚤燥造燥早蚤糟葬造 葬泽泽葬赠冤冶中袁对生
15、物检定方法的建立和验证进行了比较全面的阐述袁这是目前国际上最新袁也是内容最为全面的关于生物检定方法验证的指导原则和参考文件袁非常具有借鉴意义咱怨暂源怨远袁缘员员袁缘圆员遥除以上提到的化学分析方法和生物检定方法外袁有人把专门对生物基质渊如血液尧血清尧血浆或尿液冤中的药物或者代谢产物进行定量测定的分析方法叫做生物分析方法渊 遭蚤燥葬灶葬造赠贼蚤糟葬造 皂藻贼澡鄄燥凿冤咱员源原员缘暂遥其结果用于评价药物的临床前和临床试验效果袁包括生物等效性尧生物利用度尧药代动力学和毒代动力学等袁这对于药品研发来说至关重要袁在药品注册时袁这些研究材料都要提交给药品监管当局进行审评遥单从分析方法手段和操作过程来说袁生物
16、分析方法和化学药品分析方法属于同一范畴袁都是采用要园苑员要药物分析杂志悦澡蚤灶 允 孕澡葬则皂 粤灶葬造 圆园员缘袁猿缘渊员冤分析仪器渊液相色谱尧气相色谱尧质谱等冤和手段对被测物进行定性和定量分析遥但由于样品的特殊性袁相对于化学药品分析方法来说袁生物分析方法更加复杂和困难遥这是因为生物样品中含有很多复杂的生物基质袁这些生物基质对被分析物的准确测定干扰很大袁即所谓的基质效应遥如何尽可能地消除基质效应袁进行合适的样品前处理袁是保证生物分析方法准确有效的关键因素遥另外生物样品的量一般都非常少袁给样品分析和方法验证带了很多不便曰再者袁由于生物分析方法的结果用于计算药代动力学结果袁进而评价药物在体内的行
17、为袁因此对生物分析结果的准确性和可靠性要求非常高遥正是基于以上特点袁相对于化学药品分析方法袁生物分析方法的验证尧转移和确认更加复杂和烦琐遥但由于采用的分析手段和试验操作基本上一致袁因此两者方法验证尧转移和确认的基本原则和验证项目总体上是一致的遥猿摇方法验证尧方法转移和方法确认概念解析各国药品监管机构发布的指导原则以及陨杂韵 员苑园圆缘的规范性文件中关于方法学验证的内容中袁一般都会提到以下猿个概念院方法验证渊皂藻贼澡燥凿增葬造蚤凿葬贼蚤燥灶冤尧方法转移渊皂藻贼澡燥凿 贼则葬灶泽枣藻则冤和方法确认渊皂藻贼澡燥凿 增藻则蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶冤袁三者既相互联系又有区别袁都是为了保证检验方法适合于检验尧被
18、检样品质量可控袁同时确保检验人员有能力操作方法曰但由于检验目的尧检验人员尧检验环境等因素的不同袁以上猿个概念的内涵和侧重点又有所不同遥由于国内关于方法学验证尧转移和确认的内容大部分都是由英文版本翻译而来袁不同检测领域的译者和专家在翻译过程中理解程度和术语用词都不尽相同袁另外袁除方法学验证外袁目前国内外很少有专门阐述方法转移和方法确认的公开指导原则和技术文件遥以上原因导致国内药检系统实验室质量管理人员和检验人员对方法验证尧转移和确认的概念不清袁理解混乱袁尤其是方法确认袁各地药检人员在实际工作中缺乏明确统一的指导袁具体做法不尽一致袁造成了很多不必要的重复劳动袁且浪费资源遥本文结合国际上有关的指导原
19、则对这猿个概念进行解析遥猿郾 员摇方法验证摇宰匀韵尧云阅粤尧哉杂孕和陨杂韵 员苑园圆缘对于分析方法验证的定义和解释基本一致袁其核心是实验室通过试验设计和测试袁证明被验证的方法适用于该方法拟定的检测用途遥从这个定义可以看出袁方法验证主要由方法建立者进行袁方法建立者必须要证明所建立的方法能够满足期望的检测用途遥由于大部分药品质量控制方法是由生产企业建立袁因此方法学验证的工作大部分是由企业的分析方法研发部门来进行遥制药企业在研发产品的过程中袁随着产品研发过程的不断深入袁产品的质量控制方法也在根据产品的变化而不断调整和优化袁最终形成一个终产品质量控制方法遥企业的研发部门在建立质量控制方法时袁需要对该方
20、法进行充分的验证袁以证明所建立的质量控制方法能够达到控制本产品质量的目的遥在方法验证的过程中袁为了证明方法可行袁就要对方法学涉及的相关参数进行验证袁具体验证哪些参数和方法的用途有关遥许多国家和地区的药品监管机构以及国际组织都有各自的分析方法验证指导原则袁这些指导原则中要求的验证参数也不尽相同袁而且不同指导原则对有些参数的定义也存在差异袁为了能够有一个统一的术语和定义袁来自欧盟尧美国和日本药品监管机构和制药工业的专家组成陨悦匀工作小组制定了方法学验证参数定义尧验证要求袁形成了陨悦匀相关指导原则袁该原则是目前方法学验证最具代表性的一个指导原则遥表员中列出了悦澡孕尧哉杂孕尧耘孕和陨杂韵员苑园圆缘中定
21、义和要求的方法学验证参数遥同时袁由于方法的检测目的不同袁各方指导原则对于不同检测目的方法所要求的验证的参数也有所不同袁表圆中列出了陨悦匀指导原则中规定的不同检验目的需要验证的参数遥表员摇不同国际组织和药典要求的方法学验证参数栽葬遭援 员摇 灾葬造蚤凿葬贼蚤燥灶 责葬则葬皂藻贼藻则泽 则藻择怎蚤则藻凿 遭赠 凿蚤枣枣藻则藻灶贼燥则早葬灶蚤扎葬贼蚤燥灶泽 葬灶凿 责澡葬则皂葬糟燥责燥藻蚤葬泽参数渊责葬则葬皂藻贼藻则冤机构渊燥则早葬灶蚤扎葬贼蚤燥灶冤专属性辕特异性渊泽责藻糟蚤枣蚤糟蚤贼赠冤 哉杂孕袁耘孕袁悦澡孕袁陨悦匀选择性渊泽藻造藻糟贼蚤增蚤贼赠冤 陨杂韵 员苑园圆缘精密度渊责则藻糟蚤泽蚤燥灶冤
22、哉杂孕袁耘孕袁悦澡孕袁陨悦匀重复性渊则藻责藻葬贼葬遭蚤造蚤贼赠冤 陨悦匀袁悦澡孕袁陨杂韵 员苑园圆缘中间精密度渊蚤灶贼藻则皂藻凿蚤葬贼藻 责则藻糟蚤泽蚤燥灶冤 陨悦匀袁悦澡孕重现性渊则藻责则燥凿怎糟蚤遭蚤造蚤贼赠冤 陨悦匀袁悦澡孕袁哉杂孕和陨杂韵 员苑园圆缘准确度渊葬糟糟怎则葬糟赠冤 哉杂孕袁耘孕袁悦澡孕袁陨悦匀袁陨杂韵 员苑园圆缘线性渊造蚤灶藻葬则蚤贼赠冤 哉杂孕袁耘孕袁悦澡孕袁陨悦匀袁陨杂韵 员苑园圆缘范围渊则葬灶早藻冤 哉杂孕袁悦澡孕袁陨悦匀检测限渊凿藻贼藻糟贼蚤燥灶 造蚤皂蚤贼冤 哉杂孕袁耘孕袁悦澡孕袁陨悦匀袁陨杂韵 员苑园圆缘定量限渊择怎葬灶贼蚤贼葬贼蚤燥灶 造蚤皂蚤贼冤 哉杂孕袁耘
23、孕袁悦澡孕袁陨悦匀袁陨杂韵 员苑园圆缘耐用性渊则燥遭怎泽贼灶藻泽泽冤 哉杂孕袁耘孕袁陨杂韵 员苑园圆缘粗放性渊则怎早早藻凿灶藻泽泽冤 哉杂孕袁悦澡孕袁陨悦匀要员苑员要药物分析杂志悦澡蚤灶 允 孕澡葬则皂 粤灶葬造 圆园员缘袁猿缘渊员冤表圆摇 陨悦匀指导原则中规定的不同检验目的需要验证的参数栽葬遭援 圆摇 灾葬造蚤凿葬贼蚤燥灶 责葬则葬皂藻贼藻则泽 则藻择怎蚤则藻凿 遭赠 陨悦匀 早怎蚤凿藻造蚤灶藻泽参数摇摇渊责葬则葬皂藻贼藻则冤摇 摇杂质测定渊蚤皂责怎则蚤贼赠 贼藻泽贼冤鉴别渊蚤凿藻灶贼蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶冤定量渊择怎葬灶贼蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶冤限度渊造蚤皂蚤贼葬贼蚤燥灶冤含量测定渊葬泽泽葬赠冤准
24、确度渊葬糟糟怎则葬糟赠冤 原 垣 原 垣精密度渊责则藻糟蚤泽蚤燥灶冤重复性渊则藻责藻葬贼葬遭蚤造蚤贼赠冤中间精密度渊蚤灶贼藻则皂藻凿蚤葬贼藻 责则藻糟蚤泽蚤燥灶冤重现性渊则藻责则燥凿怎糟蚤遭蚤造蚤贼赠冤原原原垣垣垣原原原垣垣垣专属性渊泽责藻糟蚤枣蚤糟蚤贼赠冤 垣 垣 垣 垣检测限渊凿藻贼藻糟贼蚤燥灶 造蚤皂蚤贼冤 原 原 垣 原定量限渊择怎葬灶贼蚤贼葬贼蚤燥灶 造蚤皂蚤贼冤 原 垣 原 原线性渊造蚤灶藻葬则蚤贼赠冤 原 垣 原 垣范围渊则葬灶早藻冤 原 垣 原 垣猿郾 圆摇方法转移摇一个实验室建立了分析方法并经过验证后袁当其他实验室渊方法接收实验室冤在使用这个方法进行检验检测时袁就牵涉到方法在
25、圆个不同实验室之间的转移问题袁接收方法的实验室需要证明其能够成功地在本实验室中运行该方法袁这就是所谓的方法转移遥常见的方法转移情况有院分析方法由公司的研发实验室转移到质控实验室曰由于生产线转移使分析方法从粤生产地点转移到月生产地点曰分析方法由某公司转移到合同公司曰由于载公司购买了再公司的产品袁方法由再公司转移到载公司遥目前袁很多大型跨国制药企业都建立了其内部的方法学转移指导文件和规程袁但没有一个官方指导原则来具体说明接收方法的实验室如何具体操作遥唯一比较有名的一个指导性文件是圆园园怨年美国药典附录专家委员会在美国药典论坛上发表了一篇题为野分析方法转移原新附录的建议冶的论述性文章咱员远暂遥方法转
26、移这个概念包含猿个要素袁即方法建立实验室尧方法接收实验室和比对性测试遥所谓的转移袁就必须至少包括圆个实验室袁即方法建立实验室和方法接收实验室遥方法建立实验室负责分析方法的建立和验证袁当其他实验室需要按照已经建立好的方法进行检验检测时袁这些实验室统称为方法接收实验室遥方法接收实验室需要证明其能够成功地在本实验室操作该方法袁最常用的方式就是比对性测试袁如果接收实验室采用该方法对样品测定的结果与方法建立实验室测定的结果两者之间比对的结果符合转移之前确定的相关接受标准袁就说明方法接收实验室能够和方法建立实验室一样有能力成功地操作此方法袁方法转移成功遥被测样品的数量与方法的重要性尧复杂性和接受实验室此前
27、是否有操作此类方法的经验有关遥在方法转移之前袁要注意确保方法接收实验室的工作人员对方法中涉及的关键参数有详细的了解遥另外很重要的是建立一份详细的转移步骤程序袁确保双方实验室有关人员之间有良好的沟通遥转移程序要说明检测内容和双方实验室的职责袁同时要确定各参数的转移可接收范围遥比对性测试中考虑的因素包括院被测样品的数量尧批次渊比如圆耀缘批冤袁被测样品的浓度级别渊比如员耀猿个浓度冤袁重复测定次数渊比如源耀远次冤袁被分析物个数渊比如员耀圆个冤袁分析时间渊比如圆耀缘凿冤袁来自员个或多个企业的分析仪器渊圆个实验室都用相同的仪器冤遥对于我国药品检验所来说袁涉及方法转移的一项日常工作就是进口药品质量标准复核遥
28、根据我国叶药品注册管理办法曳规定袁当国外药品申请在中国注册上市时袁需要报送猿批样品在中国食品药品检定研究院或各口岸药品检验所进行进口药品质量标准复核袁同时提交相应的分析方法尧方法学验证资料以及猿批样品的出厂检验结果遥复核过程通常是在对猿批样品进行分析检验的基础上判断企业的分析方法是否可行袁产品质量是否可控袁提出具体复核意见袁最终制定出药品进口注册质量标准遥对于有些处方成分较多尧分析方法复杂的品种袁在制定进口注册质量标准中的某些检验项目时渊比如含量测定或有关物质测定冤袁会按照企业质量标准起草进口注要圆苑员要药物分析杂志悦澡蚤灶 允 孕澡葬则皂 粤灶葬造 圆园员缘袁猿缘渊员冤册标准中的检验方法袁不
29、做改动遥这种情况就是方法转移过程袁涵盖了方法转移的猿个要素遥方法建立实验室是生产企业的研发实验室或质控实验室袁方法接收实验室是进口药品质量标准复核实验室遥在复核过程中有一个很重要的步骤就是复核实验室将猿批样品测定的结果与企业的测定结果进行比对袁一方面证明方法在不同实验室对产品质量的可控性袁另一方面证明方法的可行性渊即复核实验室能够成功地操作企业建立的分析方法冤遥猿郾 猿摇方法确认摇在日常检验工作中袁经常将方法确认和方法转移以及方法验证这猿个概念相混淆袁尤其是方法确认袁大家的理解参差不齐袁做法各异遥方法确认的核心有三点袁第一院方法确认必须是对药典分析方法或者法定分析方法进行确认曰第二院证明药典分
30、析方法或法定分析方法适用于被测样品袁被测样品的质量可控袁方法可行曰第三院证明方法使用人员有能力成功地操作药典分析方法或者法定分析方法遥关于方法确认袁目前袁宰匀韵尧陨杂韵 员苑园圆缘尧美国云阅粤以及哉杂孕发布的指导原则对于上述第一点是非常一致的袁只要说到方法确认袁一定是对药典分析方法或者法定分析方法进行确认遥对于第二点和第三点来说袁宰匀韵和美国哉杂孕尧云阅粤的定义在侧重点方面各有不同遥宰匀韵在药品质量控制实验室操作规范渊早燥燥凿 责则葬糟贼蚤糟藻 枣燥则 择怎葬造蚤贼赠 糟燥灶贼则燥造 造葬遭燥则葬贼燥则蚤藻泽袁郧孕悦蕴冤中明确指出院方法确认是证明一个药典分析方法或者经过验证的法定分析方法适用于
31、本次检验的过程遥宰匀韵的定义侧重于强调第二点袁即证明药典分析方法对产品的适用性遥 陨杂韵 员苑园圆缘和美国云阅粤尧哉杂孕对方法确认的定义基本上可以总结为院检验实验室和方法使用者应该证明其对药典方法有充分的了解并且有能力重现药典方法遥可见袁陨杂韵 员苑园圆缘和美国云阅粤尧哉杂孕对方法确认的定义侧重于第三点袁即强调检测实验室和检验人员操作药典方法的能力遥如果将宰匀韵和美国哉杂孕尧云阅粤的定义结合起来袁就是一个相对完整的方法学确认的定义袁即院方法确认的目的是证明药典分析方法或法定分析方法适用于被测样品袁被测样品的质量可控袁方法可行袁同时还证明方法使用人员有能力成功地操作药典分析方法或者法定分析方法遥
32、通过以上概念的解析可以看出袁药品检验实验室在采用药典分析方法或者法定分析方法进行检验时袁不需要再对方法进行验证袁但是需要进行方法确认袁以证明承检实验室能够正确地操作药典方法遥具体确认需要进行哪些内容袁则没有明确的规定袁仅根据方法本身的特点和检验人员对方法操作的熟练程度由检验实验室自己确定遥哉杂孕在其附录掖员圆圆远业野药典分析方法确认渊增藻则蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 燥枣 糟燥皂责藻灶鄄凿蚤葬造 皂藻贼澡燥凿泽冤冶中对药典分析方法确认需要确认哪些内容给出了以下指导意见院员冤通过系统适用性试验证明实验室的操作能力和证明系统符合方法要求曰圆冤判断方法的复杂程度曰猿冤确定方法操作的关键步骤和影响检验结果的关
33、键方法学参数曰源冤根据方法的复杂程度袁选择最为关键的几个方法学参数进行验证遥从哉杂孕的阐述可以看出袁系统适用性试验是一个重要的方法学确认内容袁通过系统适用性试验来证明实验室的操作能力和证明系统符合方法要求袁但是方法确认仅仅做系统适用性试验还不够袁完整的方法确认相当于对方法的适用性进行考察袁就是实验人员根据对方法的理解袁除了系统适用性试验外袁还要选择几个认为对该方法来说最为关键的方法学参数进行考察遥方法验证尧方法转移和方法确认的联系与区别见表猿遥源摇方法学验证尧转移和确认具体实例咱员苑暂圆园园猿年日本藤泽公司申请注册进口他克莫司软膏剂渊圆种规格院猿园 早颐 园郾园猿豫窑支原员和猿园 早颐 园郾
34、员豫窑支原员冤袁用于治疗过敏性皮炎遥笔者所在实验室承担了进口注册质量标准复核工作遥按照要求袁藤泽公司报送圆个规格各猿批样品尧空白软膏基质尧含量测定和有关物质测定所需标准物质袁并提交了质量标准尧方法学验证资料及猿批样品的出厂检验结果遥下面以他克莫司软膏剂的含量测定为例来说明方法验证尧方法转移和方法确认的整个过程遥源郾 员摇方法验证摇本品采用匀孕蕴悦法进行含量测定遥鉴于软膏样品的特殊性和本品含量测定方法的复杂性袁复核实验室决定在重现企业分析方法的基础之上按照企业质量标准起草进口注册质量标准遥由于含量测定方法由企业建立袁因此企业在提供质量标准的同时也提供了完整的匀孕蕴悦法含量测定的方法学验证资料和数
35、据遥复核实验室对企业的方法学验证资料和数据进行了审核袁认为企业的含量测定方法学验证结果表明该法对产品的质量可控遥要猿苑员要药物分析杂志悦澡蚤灶 允 孕澡葬则皂 粤灶葬造 圆园员缘袁猿缘渊员冤表猿摇方法验证尧方法转移和方法确认的联系与区别栽葬遭援 猿摇 栽澡藻 糟燥则则藻造葬贼蚤燥灶泽 葬灶凿 凿蚤枣枣藻则藻灶糟藻泽 燥枣 皂藻贼澡燥凿 增葬造蚤凿葬贼蚤燥灶袁贼则葬灶泽枣藻则 葬灶凿 增藻则蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶主要目的渊责怎则责燥泽藻冤主要内容渊皂葬蚤灶 糟燥灶贼藻灶贼泽冤负责方渊蚤皂责造藻皂藻灶贼藻凿 遭赠冤适用范围渊葬责责造蚤糟葬贼蚤燥灶 泽糟燥责藻冤方法验证渊皂藻贼澡燥凿 增葬造蚤凿葬贼蚤燥
36、灶冤证明方法适用于拟定用途袁被测样品质量可控渊贼燥 凿藻皂燥灶鄄泽贼则葬贼藻 贼澡葬贼 贼澡藻 皂藻贼澡燥凿 蚤泽 泽怎蚤贼鄄葬遭造藻 枣燥则 贼澡藻 蚤灶贼藻灶凿藻凿 怎泽藻冤按照方法的用途袁对方法学验证参数进行全部或部分验证渊增葬造蚤凿葬贼藻 葬造造 燥则 责葬则贼 燥枣贼澡藻 皂赠贼澡燥造燥早赠 责葬则葬皂藻贼藻则泽冤方法建立实验室渊 皂藻贼澡燥凿 凿藻增藻造鄄燥责皂藻灶贼 造葬遭燥则葬贼燥鄄则赠冤首次建立的方法曰有问题需要重新进行验证的方法渊灶藻憎 皂藻贼澡鄄燥凿袁皂藻贼澡燥凿泽 憎澡蚤糟澡 则藻择怎蚤则藻 则藻增葬造蚤鄄凿葬贼蚤燥灶冤方法转移渊皂藻贼澡燥凿 贼则葬灶泽枣藻则冤证明方法
37、接收实验室能够成功的操作方法建立实验室建立的经过验证的方法渊贼燥凿藻皂燥灶泽贼则葬贼藻 贼澡葬贼 贼澡藻 皂藻贼澡燥凿则藻糟藻蚤增蚤灶早 造葬遭燥则葬贼燥则赠 糟燥怎造凿 葬责鄄责则燥责则蚤葬贼藻造赠 燥责藻则葬贼藻 贼澡藻 皂藻贼澡燥凿凿藻增藻造燥责藻凿 遭赠 贼则葬灶泽枣藻则则蚤灶早 造葬鄄遭燥则葬贼燥则赠冤方法接收实验室选择典型批次的样品进行检测袁并与方法接收实验室检测结果进行比对渊则藻责则藻泽藻灶贼葬贼蚤增藻泽葬皂责造藻泽 葬则藻 葬灶葬造赠扎藻凿 蚤灶 贼澡藻贼则葬灶泽枣藻则则蚤灶早 葬灶凿 则藻糟藻蚤增蚤灶早造葬遭燥则葬贼燥则蚤藻泽冤方法接收实验室渊 皂藻贼澡燥凿 则藻糟藻蚤增鄄蚤
38、灶早 造葬遭燥则葬贼燥则赠冤某些进口药品质量标准复核袁企业内部分析方法由研发部门转移到质控部门曰企业位于不同地点的生产工厂之间的方法转移曰委托检验渊粤企业委托月公司检验冤 渊泽责藻糟蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 增藻则蚤枣蚤糟葬鄄贼蚤燥灶 燥枣 蚤皂责燥则贼藻凿 皂藻凿蚤糟蚤灶藻泽袁皂藻贼澡鄄燥凿 贼则葬灶泽枣藻则则藻凿 遭藻贼憎藻藻灶 砸驭阅 造葬鄄遭燥则葬贼燥则赠 葬灶凿 匝悦 造葬遭燥则葬贼燥则赠袁皂藻贼澡鄄燥凿 贼则葬灶泽枣藻则则藻凿 遭藻贼憎藻藻灶 皂葬灶怎枣葬糟鄄贼怎则蚤灶早 责造葬灶贼泽袁葬灶凿 糟燥灶贼则葬糟贼 贼藻泽贼冤方法确认渊皂藻贼澡燥凿 增藻则蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶冤证明药典方法或法
39、定方法适用于被测样品的质量控制曰证明检验人员有能力正确操作药典方法或法定方法渊贼燥 凿藻皂燥灶泽贼则葬贼藻 贼澡葬贼 糟燥皂责藻灶鄄凿蚤葬造 皂藻贼澡燥凿 蚤泽 泽怎蚤贼葬遭造藻 枣燥则 贼澡藻蚤灶贼藻灶凿藻凿 责怎则责燥泽藻袁葬灶凿 贼燥 凿藻皂鄄燥灶泽贼则葬贼藻 贼澡葬贼 贼澡藻 葬灶葬造赠泽贼 蚤泽 糟葬鄄责葬遭造藻燥枣责藻则枣燥则皂蚤灶早贼澡藻贼藻泽贼冤根据方法的用途和方法的复杂程度袁选择性地选择对检测结果影响最大的关键方法学参数进行考察渊泽藻鄄造藻糟贼 泽燥皂藻 糟则蚤贼蚤糟葬造 责葬则葬皂藻贼藻则泽贼燥 增葬造蚤凿葬贼藻 葬糟糟燥则凿蚤灶早 贼燥 贼澡藻糟燥皂责造藻曾蚤贼赠 葬灶凿
40、 蚤灶贼藻灶凿藻凿 怎泽藻燥枣 贼澡藻 皂藻贼澡燥凿冤药检所渊 燥枣枣蚤糟蚤葬造皂藻凿蚤糟蚤灶藻 糟燥灶贼则燥造造葬遭燥则葬贼燥则蚤藻泽冤按照药典方法或法定方法进行的药品质量检验渊皂藻凿蚤糟蚤灶藻 蚤泽 葬灶葬鄄造赠扎藻凿 遭赠 藻皂责造燥赠蚤灶早 糟燥皂责藻灶凿蚤葬造皂藻贼澡燥凿泽冤源郾 圆摇方法转移摇鉴于该品种处方和含量测定方法的复杂性袁复核实验室决定起草的进口注册质量标准中含量测定方法按照企业方法制定袁不做改动遥复核实验室根据企业提供的含量测定方法袁对企业提供的圆个规格远批样品进行了检验袁并将检验结果与企业提供的出厂检验结果进行了比对袁见表源遥这个过程就是一个完整的方法转移过程袁方法建立
41、实验室是日本藤泽公司研发实验室袁方法接收实验室是复核实验室袁检验结果的比对结果表明袁圆个规格共远批样品袁复核实验室的检验结果与企业出厂检验结果之间的误差均在员郾 缘豫之内袁满足了预先设定的该品种含量测定方法差异的限度渊误差不得过圆豫冤袁说明复核实验室有能力正确操作方法建立实验室建立的含量测定方法袁方法转移成功遥在此基础上袁复核实验室根据企业质量标准起草了他克莫司软膏剂含量测定进口复核质量标准袁并上报国家食品药品监督管理局批准遥表源摇复核实验室和企业出厂检验含量测定结果比对栽葬遭援 源摇 栽藻泽贼 则藻泽怎造贼糟燥皂责葬则蚤泽燥灶 遭藻贼憎藻藻灶 韵酝悦蕴 葬灶凿择怎葬造蚤贼赠 糟燥灶贼则燥造
42、造葬遭燥则葬贼燥则蚤藻泽 蚤灶 皂葬灶怎枣葬糟贼怎则藻则泽规格渊泽贼则藻灶早贼澡冤 辕豫批号渊遭葬贼糟澡 晕燥援冤复核实验室测定含量渊葬泽泽葬赠 则藻泽怎造贼燥枣 韵酝悦蕴冤 辕 豫企业含量渊葬泽泽葬赠 则藻泽怎造贼 燥枣皂葬灶怎枣葬糟贼怎则藻则冤 辕 豫园郾 园猿 员圆苑员员 员园猿郾 员 员园猿郾 员员猿园源员 员园圆郾 源 员园员郾 猿员猿员猿员 员园圆郾 员 员园圆郾 怨园郾 员 员圆苑源员 员园园郾 员 员园员郾 员员圆苑远员 员园园郾 愿 怨怨郾 猿员圆苑苑员 怨怨郾 圆 怨怨郾 苑源郾 猿摇方法确认摇该品种注册申请成功后袁由某口岸进口袁口岸药品检验所所根据国家食品药品监督管理局批
43、准的进口药品注册质量标准进行通关检验遥在检验过程中袁鉴于含量测定方法的复杂性袁该口岸要源苑员要药物分析杂志悦澡蚤灶 允 孕澡葬则皂 粤灶葬造 圆园员缘袁猿缘渊员冤药品检验所经常就检验细节和注意事项与方法起草单位渊复核单位冤进行沟通交流袁双方一致认为院由于含量测定供试品溶液制备过程中涉及到较为复杂的软膏前处理过程渊软膏称量尧有机溶剂提取尧水浴尧冰浴和离心等步骤冤袁对检验结果影响最大的一个关键方法学参数是精密度渊包括中间精密度冤袁因此袁口岸药品检验所在根据进口注册检验标准对他克莫司软膏剂进行通关检验时袁除了系统适用性之外袁还要对方法的精密度进行考察袁以充分保证口岸药品检验所能够正确地按照进口注册检
44、验标准进行通关检验遥以上过程就是一个典型的方法确认过程袁首先口岸药品检验所根据国家食品药品监督管理局批准的进口注册检验标准进行检验袁也就是说检验标准是法定标准袁进口检验时需要进行方法确认遥根据方法的特点袁确定关键的方法学参数并对其进行考察袁以保证方法的正确操作遥缘摇结语药品分析方法验证尧转移和确认的目的是证明所采用的分析方法适合于相应检测要求和目的袁被测样品质量可控袁保证得到一致的尧可靠的和准确的测定结果袁同时也证明检验人员有能力成功地操作分析方法遥一个好的分析方法袁对于获得准确可靠的检验结果至关重要遥目前国内外关于分析方法验证的指导原则和技术文件很多袁但是关于方法转移和确认的内容很少曰同时袁
45、由于国内很多技术文件都是由英文翻译过来袁而译者的工作背景尧语言用词以及在理解程度上的不同袁也造成国内对方法验证尧转移和确认概念不清袁理解不到位曰另一方面袁现有的文件和指导原则大都是阐述原则性和定义的内容袁很少有具体实例袁广大药检工作者在实际工作中形成了野指导原则每个字都认识袁但是实际工作还是不知道如何做冶的局面遥希望通过本文的介绍袁能帮助国内药品质量控制人员理清概念袁在实际工作中做到理论结合实际袁并加以具体应用遥参考文献咱员暂摇 郧怎蚤凿葬灶糟藻 枣燥则 陨灶凿怎泽贼则赠院粤灶葬造赠贼蚤糟葬造 孕则燥糟藻凿怎则藻泽 葬灶凿 酝藻贼澡燥凿泽 灾葬造蚤凿葬鄄贼蚤燥灶院悦澡藻皂蚤泽贼则赠袁酝葬灶怎枣
46、葬糟贼怎则蚤灶早袁葬灶凿 悦燥灶贼则燥造泽 葬灶凿 阅燥糟怎皂藻灶贼葬贼蚤燥灶咱耘月辕 韵蕴暂援 圆园园园 咱圆园员源 原 园愿 原 园员暂援 澡贼贼责院辕 辕 憎憎憎援 凿则怎早枣怎贼怎则藻援糟燥皂辕 造蚤遭则葬则赠辕 杂澡燥憎粤则贼蚤糟造藻援 葬泽责钥 粤则贼蚤糟造藻陨阅 越远怨咱圆暂摇 郧怎蚤凿葬灶糟藻 枣燥则 陨灶凿怎泽贼则赠院月蚤燥葬灶葬造赠贼蚤糟葬造 酝藻贼澡燥凿 灾葬造蚤凿葬贼蚤燥灶咱耘月辕 韵蕴暂援圆园园员咱圆园员源 原 园苑 原 圆员暂援 澡贼贼责院辕 辕 憎憎憎援 枣凿葬援 早燥增辕 凿燥憎灶造燥葬凿泽辕 凿则怎早泽辕早怎蚤凿葬灶糟藻糟燥皂责造蚤葬灶糟藻则藻早怎造葬贼燥则赠
47、蚤灶枣燥则皂葬贼蚤燥灶辕 早怎蚤凿葬灶糟藻泽辕 怎糟皂猿远愿员园苑援责凿枣咱猿暂摇 郧怎蚤凿葬灶糟藻 燥灶 灾葬造蚤凿葬贼蚤燥灶 燥枣 粤灶葬造赠贼蚤糟葬造 孕则燥糟藻凿怎则藻泽院栽藻曾贼 葬灶凿 酝藻贼澡鄄燥凿燥造燥早赠咱耘月辕 韵蕴暂援 圆园园猿咱圆园员源 原 园苑 原 员愿暂袁澡贼贼责院辕 辕 憎憎憎援 藻皂葬援藻怎则燥责葬援 藻怎辕 凿燥糟泽辕 藻灶赃郧月辕 凿燥糟怎皂藻灶贼赃造蚤遭则葬则赠辕 杂糟蚤藻灶贼蚤枣蚤糟赃早怎蚤凿藻造蚤灶藻辕圆园园怨辕园怨辕 宰悦缘园园园园圆远远圆援 责凿枣咱源暂摇 在匀韵哉 匀允渊周海钧冤援 栽藻糟澡灶蚤糟葬造 砸藻择怎蚤则藻皂藻灶贼泽 枣燥则 砸藻早蚤泽
48、贼则葬贼蚤燥灶泽 燥枣孕澡葬则皂葬糟藻怎贼蚤糟葬造泽 燥枣 匀怎皂葬灶 哉泽藻渊药品注册的国际技术要求冤咱酝暂援月藻蚤躁蚤灶早渊北京冤院孕藻燥责造藻蒺泽 酝藻凿蚤糟葬造 孕怎遭造蚤泽澡蚤灶早 匀燥怎泽藻渊人民卫生出版社冤袁圆园园远咱缘暂摇 悦澡孕 圆园员园援 灾燥造 域渊中国药典圆园员园年版援二部冤咱杂暂援 圆园员园院粤责鄄责藻灶凿蚤曾渊附录冤员怨源咱远暂摇 宰匀韵 栽藻糟澡灶蚤糟葬造 砸藻责燥则贼 杂藻则蚤藻泽 怨猿苑咱耘月辕 韵蕴暂援圆园园远咱圆园员源 原园愿 原园猿暂援 澡贼贼责院辕 辕 憎澡择造蚤遭凿燥糟援 憎澡燥援 蚤灶贼辕 贼则泽辕 宰匀韵赃栽砸杂赃怨猿苑赃藻灶早援 责凿枣钥怎葬
49、越员咱苑暂摇 郧藻灶藻则葬造 砸藻择怎蚤则藻皂藻灶贼泽 枣燥则 贼澡藻 悦燥皂责藻贼藻灶糟藻 燥枣 栽藻泽贼蚤灶早 葬灶凿 悦葬造蚤遭则葬鄄贼蚤燥灶 蕴葬遭燥则葬贼燥则蚤藻泽渊陨杂韵辕 陨耘悦 员苑园圆缘冤咱耘月辕 韵蕴暂援 圆园园缘咱圆园员源 原 园苑 原员圆暂援 澡贼贼责院辕 辕 憎憎憎援 蚤泽燥援 燥则早辕 蚤泽燥辕 糟葬贼葬造燥早怎藻赃凿藻贼葬蚤造援 澡贼皂钥 糟泽灶怎皂遭藻则 越猿怨愿愿猿咱愿暂摇 韵酝悦蕴 灶藻贼憎燥则噪 燥枣 贼澡藻 糟燥怎灶糟蚤造 燥枣 耘怎则燥责藻 择怎葬造蚤贼赠 葬泽泽怎则葬灶糟藻 凿燥糟怎鄄皂藻灶贼院灾葬造蚤凿葬贼蚤燥灶 燥枣 葬灶葬造赠贼蚤糟葬造 责则燥糟藻凿怎则藻泽咱耘月辕 韵蕴暂援 员怨怨怨咱圆园员源 原园苑 原 员员暂援 澡贼贼责院辕 辕 憎憎憎援 藻凿择皂援 藻怎辕 藻灶辕 择怎葬造蚤贼赠 原 皂葬灶葬早藻皂藻灶贼 原早怎蚤凿藻造蚤灶藻泽 原愿远援 澡贼皂造咱怨暂摇 哉杂孕 猿远 原 晕云 猿员咱杂暂郾 圆园员猿院怨愿猿袁源怨远袁缘员员袁缘圆员咱员园暂摇 哉杂孕 猿圆 原晕云 圆苑咱杂暂援圆园园怨院苑猿远咱员员暂摇 耘孕 苑郾 员咱杂暂郾 圆园员员院猿咱员圆暂摇 允孕 员远咱杂暂郾圆园员员院圆员缘怨咱员猿暂摇 宰粤晕郧 再悦渊王佑春冤援 砸藻泽藻葬则糟澡 葬灶凿 耘增葬造怎葬贼蚤燥灶 燥灶 粤陨阅杂 灾葬糟糟蚤灶藻渊艾滋病疫苗研究与
