1、漫谈高血压免疫检测技术,发展历史与现状,高血压定义与分类,定义：在未使用降压药物的情况下，非同日3次测量血压，收缩压140mmHg和/或舒张压90mmHg。分类：原发性高血压病因不明高血压 继发性高血压指由某些确定的疾病或病因引起的血压升高，血压升高仅是这些疾病的一个临床表现。,高血压五项检测,肾素-血管紧张素-醛固酮系统（RAAS）,主要应用于鉴别诊断原发性和继发性高血压，肾性高血压、内分泌型高血压，原发性和继发性醛固酮增多症等疾病。,下丘脑垂体肾上腺皮质轴,高血压五项检测,主要应用于柯兴氏综合征，柯兴氏病，席汉综合症，爱迪生氏病，纳尔逊氏综合征的诊断等。,肾素前体由406个氨基酸组成，其中
2、包含两个前片段，分别为20和46个氨基酸。成熟的肾素包含340个氨基酸，分子量为37KD。,肾素,肾素原，肾素与活性肾素的异同肾素活性与活性肾素的区别活性肾素在体内的意义,肾素检测的几个基本概念,无活性的肾素原,有活性的肾素原,肾素,肾素原,活性肾素,肾素检测技术的发展历史,第一代肾素检测试剂肾素活性检测,试剂盒组分： 抗Ang I多抗包被管 125I标记的Ang I 校准品（6个） 质控品 酶抑制剂 洗液,检测步骤,Ang I 转化 将预冷的200ul酶抑制剂加入200ul血浆样本中，混合均匀后，分为两份，分别置于冰水浴和37度中孵育1小时，孵育后将37度的样本置于冰水浴中迅速冷却备用。,第
3、二代肾素检测试剂放免平台的活性肾素检测,肾素检测技术的发展历史,F H Perschel, et al. Rapid Screening Test For Primary Hyperaldosteronism: Ratio Of Plasma Aldosterone To Renin Concentration Determined By Fully Automated Chemiluminescence Immunoassays. Clinical Chemistry. 2004 50:9 1650-5,肾素检测技术的发展历史,活性肾素检测，真的靠谱吗？靠谱！,F H Perschel, e
4、t al. Rapid Screening Test For Primary Hyperaldosteronism: Ratio Of Plasma Aldosterone To Renin Concentration Determined By Fully Automated Chemiluminescence Immunoassays. Clinical Chemistry. 2004 50:9 1650-5,第三代肾素检测试剂酶免平台的活性肾素检测,肾素检测技术的发展历史,无辐射实验室环境要求低操作简便,第四代肾素检测试剂自动化活性肾素检测,肾素检测技术的发展历史,肾素检测的现状,安图如
5、何做到活性肾素的检测？ 关键在于安图掌握了那一个关键的抗体。,肾素检测的现状,Cisbio，DRG，DiaSorin，安图等厂家掌握的关键抗体,大多数低水平厂家掌握的肾素抗体,肾素检测的现状,使用关键抗体,不使用关键抗体,安图是如何做到准确的活性肾素检测？,肾素检测的现状,特异性：关键的活性肾素特异性抗体灵敏度：夹心模式的优选重复性：高质量的包被板和底物，以及严格控制的生产过程。,肾素检测的现状,安图与DRG临床检测的相关性,ACTH即促肾上腺皮质激素的缩写，是脊椎动物脑垂体分泌的一种多肽类激素，它能促进肾上腺皮质的组织增生以及皮质激素的生成和分泌。全长为39个氨基酸残基。,ACTH,J. P
6、. Felber于1963年报道了ACTH抗体制备和构建放免检测的详细方法。 随后SA Berson和RS Yalow联合报道了ACTH放免检测方法学的建立并用此对正常人群的ACTH进行了检测,ACTH检测技术的发展历史,J. P. Felber. ACTH antibodies and their use for a radio-immunoassay for ACTH. Experientia. 1963 Volume 19, Issue 5, pp 227-229 Solomon A. Berson and Rosalyn S. Yalow. Radioimmunoassay of AC
7、TH in plasma. J Clin Invest. 1968 December; 47(12): 27252751.,但是以上的检测均为竞争法。直到1987年，A. White等人报道了采用夹心法检测ACTH的方法学，将ACTH的免疫检测提高到了一个新的高度。,ACTH检测技术的发展历史,A. Whtie, et., al. Clinical Evaluation Of A Two-site Immunoradiometric Assay For Adrenocorticotropic In Unextracted Human Plasma Using Monoclonal Antibo
8、dies. Clinical Endocrinology. 1987 Volume 26, Issue 1, pages 4152,尽管ACTH的检测技术有不少文献报道，但市面上能够见到的采用夹心法检测的ACTH试剂盒依然很少，几乎是罗氏一家独大。究其原因，主要由于ACTH本身的特性，很难建立起夹心法的检测，不是每个厂家都有这样的技术。,ACTH检测技术的现状,安图是如何实现夹心法检测ACTH的？,ACTH检测技术的现状,安图与罗氏临床相关性,ACTH检测技术的现状,血管紧张素是一种能够收缩血管升高血压的多肽。它是肾素-血管紧张素-醛固酮系统的一部分。许多降血压药物以血管紧张素为靶分子。血管紧
9、张素也能够刺激肾上腺皮质分泌醛固酮。醛固酮促进远端肾单位的钠潴留，同时也能够升高血压。血管紧张素来自于它的前体分子血管紧张素原，由肝脏产生。,ANG II,Angiotensin ,Angiotensin ,ANG II,一个很有意思的现象是，国际上所有的全自动厂家，均无ANG II试剂盒。即便是手工试剂盒，也存在着操作复杂，难以在临床实验室开展的问题。,ANG II检测技术的现状,采血,酶抑制剂,SPE柱抽提,免疫检测,结果报告,大多数厂家的ANG II试剂检测流程,采血(酶抑制剂),免疫检测,结果报告,安图ANG II试剂检测流程,难点：短肽直接进行酶标记会导致与抗体的结合效率降低，进而导
10、致信号梯度减小，灵敏度和准确度变差。,ANG II检测技术的现状,1,2,3,4,5,6,7,8,HRP,1,2,3,4,5,6,7,8,生物素,HRP,亲和素,ANG II检测技术的现状,安图与ADI的临床相关性,ALD和COR,醛固酮（ALD）,皮质醇（COR）,醛固酮与皮质醇均为类固醇类小分子，结构与大多数类固醇类小分子（P、T、E2、E3等）极为相似。,与大多数类固醇类小分子一样，ALD和COR最早是在实验室内使用GC-MS或LC-MS系统检测。 成本高，难度大，无法应用于临床。,ALD和COR检测技术的历史,1971年 M. J. St. Cyr等人首先建立了基于免疫方法学的醛固酮定
11、量检测方法，使得醛固酮的检测开始实现了简单化和快速化。1978年 P Lijnen等人对上述方法进行了改进，使得样本不再需要抽提即可进行免疫检测。1987年 S. de Lauzon等人报道了ALD鼠源单克隆抗体的制备方法。1990年 Hubl等人成功构建了基于单抗和化学发光的ALD检测方法。至此，ALD的现代化免疫检测已经构建完成。,ALD和COR检测技术的历史,M. J. St. Cyr, J. M. Sancho and J. C. Melby. Quantitation of Plasma Aldosterone by Radioimmunoassay. Clinical Chemis
12、try 1972 vol. 18 no. 11 1395-1402 Paul Lijnen, et., al. Direct radioimmunoassay of plasma aldosterone in normal subjects. Clinica Chimica Acta 1978 Volume 84, Issue 3, Pages 305314 S. de Lauzon, et., al. Murine monoclonal antibody against aldosterone: Production, characterization and use for enzymoi
13、mmunoassay. Journal of Steroid Biochemistry. 1987 Volume 28, Issue 5, Pages 459463 W. Hubl, et., a;. Enhanced chemiluminescent immunoassay for aldosterone. Journal of Bioluminescence and Chemiluminescence 1990 Volume 5, Issue 1, pages 4952,1976年 J R. Brown等研究者首先建立起了COR的放免检测，实现了COR的快速检测。1977 年 TOSHIO
14、 OGIHARA等人将COR的免疫检测移植到了酶免平台。1978年 Hidetoshi Arakawa等人将化学发光方法移植到了COR的检测中，实现了COR的现代化。,ALD和COR检测技术的历史,James R. Brown, et., al. A simple radioimmunoassay for plasma cortisol and 11-deoxycortisol (17,21-dihydroxy-4-pregnene-3,20-dione). Steroids. 1976 Volume 28, Issue 4, Pages 487498 TOSHIO OGIHARA, et.,
15、 al. Enzyme-Labelled Immunoassay for Plasma Cortisol. The Journal of Clinical Endocrinology & Metabolism. 1977 vol. 44 no. 1 91-95 Hidetoshi Arakawa, Masako Maeda and Akio Tsuji. Chemiluminescence enzyme immunoassay of cortisol using peroxidase as label. Analytical Biochemistry. 1979 Volume 97, Issu
16、e 1, Pages 248254,ALD同样是没有任何一家国际全自动厂家拥有相应试剂盒。ALD的手工试剂盒，目前也主要基于放免平台。仅有IBL，安图生物，广东虹叶等厂家拥有酶免或板式化学发光试剂盒。,ALD和COR检测技术的现状,ALD试剂盒的难点，在于ALD过低的浓度（pg/mL级），需要高灵敏度的抗体，提高了制备难度。,ALD和COR检测技术的现状,安图与IBL的临床相关性,相比ALD的冷遇，COR则更加受到IVD行业的重视。各主要厂家均有COR的试剂盒。不仅如此，各大厂家也都纷纷对COR进行了溯源。,ALD和COR检测技术的现状,安图不仅开发出了优秀的COR抗体，拥有与全自动系统高度一致的检测结果；还在开展COR的溯源工作，并将很快溯源至国际一级参考品。,ALD和COR检测技术的现状,安图与罗氏的临床相关性,谢谢！,
