1、限时规范特训1(2017安徽安庆二模)尿素分解菌能在如表所示配方的培养基上生长、形成菌落。回答下列问题：(1)从物理形态上看，上述培养基属于_培养基；从用途上看，上述培养基属于_培养基。(2)当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于_，此时平板上的菌落数较能准确地反映样品中的活菌数。(3)培养过程中，常选择菌落数在_的平板统计计数，统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，原因是_。(4)尿素分解菌经 X 射线照射后不能正常生长，添加某种维生素后能正常生长，试解释其原因：_。答案 (1) 固体 选择( 性)(2)样品稀释液中的一个活菌(3)30 300 两个或多个细胞连在一起时，平板
2、上观察到的是一个菌落(4)经 X 射线照射后导致尿素分解菌发生基因突变，从而缺少合成某种维生素必需的酶解析 (1) 培养基配方中含有琼脂( 凝固剂)，所以是固体培养基；培养基中的氮源只有尿素，因此能筛选出尿素分解菌，属于选择培养基。(2)当样品稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落来源于样品稀释液中的一个活菌，此时通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中的活菌数。(3)为了保证结果准确，一般选择菌落数在 30300 的平板进行计数。即使样品稀释度足够高，但仍有可能两个或多个细菌细胞连到一起，此时平板上观察到的只是一个菌落，因此统计的菌落数往往比活菌的实际数目低。(4)用 X 射线照射尿素分解
3、菌，可能诱导其发生基因突变，若基因突变使尿素分解菌缺少合成某种维生素必需的酶，则不能在缺某种维生素的培养基中生长。2(2017甘肃兰州一模)微生物在生产中有重要应用，回答下列有关微生物的问题：(1)家庭酿制葡萄酒所用的微生物主要是_；家庭腌制泡菜的过程中，用水封坛的作用是_。(2)实验室中配置的培养基在使用前需用_法进行灭菌；在配制筛选耐盐细菌的选择培养基时，除加入基本营养物质外还需加入_。(3)某兴趣小组调查某品牌 1 g 牛奶中细菌数量时，若统计出在稀释倍数为 103 的实验组的平板上平均菌落数为 30 个，所用稀释液的体积为 0.2 ml，则每克牛奶样品中的细菌数为_。若空白对照组的一个
4、平板上出现了 7 个菌落，这种结果说明在此实验中出现了_现象；为获取可靠实验数据，需_。答案 (1) 酵母菌 制造缺氧环境，利于乳酸菌繁殖和抑制杂菌(2)高压蒸汽灭菌 高浓度食盐(3)1.5105 个 污染 再次配制培养基重新实验解析 (1) 家庭酿制葡萄酒是利用酵母菌在无氧条件下产生酒精；家庭腌制泡菜利用的微生物是厌氧型的乳酸菌，用水封坛的作用是制造缺氧环境，以利于乳酸菌繁殖，同时可以抑制杂菌生长。(2)培养基灭菌用高压蒸汽灭菌法进行；在配制筛选耐盐细菌的选择培养基时，除加入基本营养物质外还需加入高浓度食盐。(3)某兴趣小组调查某品牌 1 g 牛奶中细菌数量时，若统计出在稀释倍数为 103
5、的实验组的平板上平均菌落数为 30 个，所用稀释液的体积为 0.2 ml，则每克牛奶样品中的细菌数为 300.21031.5105(个) 。若空白对照组的一个平板上出现了 7 个菌落，说明实验中培养基被污染；为获取可靠实验数据，需再次配制培养基重新实验。3(2017河南三门峡二模)某实验小组对酸奶中乳酸菌的数量进行了测定，取 6 支灭菌的试管，分别加入 9 mL 灭菌的生理盐水，标号 A1、A 2、A 3、A 4、 A5、 A6，吸取 1 mL 酸奶样液加入试管A1 中，然后另取一支吸管从 A1 中吸取 1 mL 溶液，加入 A2 中，依此类推，最后从试管 A6 中取 0.1 mL 样液进行涂
6、布计数，涂布三个平板，其菌落数分别为 251、265、276 个。请回答下列问题：(1)培养乳酸菌除了必要的营养物质外，还需将培养基的 pH 调至_。(2)制备乳酸菌的培养基过程中，对培养皿灭菌的常用方法是_，倒平板时培养基的温度不能太低，原因是_；待平板冷凝后，要将平板倒置，其目的是_。(3)该实验小组对乳酸菌接种所采用的方法是_，根据三个平板中菌落数，可推测原酸奶中乳酸菌的浓度为_个/mL，该方法测定的乳酸菌的含量和实际值相比，一般_(填“偏大 ”或“偏小”) 。(4)为了使测量结果更加准确，该实验对照组的设置是_。答案 (1) 中性或微碱性(2)干热灭菌法 温度太低会导致培养基凝固，无法
7、铺展均匀 防止平板冷凝后，培养皿盖上凝结的水珠落入培养基中造成污染(3)稀释涂布平板法 2.6410 9 偏小(4)另增设一组培养基，接种等量灭菌的生理盐水解析 (1) 乳酸菌是一种细菌，制备细菌培养基时，需将培养基的 pH 调至中性或微碱性。(2)制备培养基过程中，对培养皿灭菌的常用方法是干热灭菌法，温度太低会导致培养基凝固，无法铺展均匀，因此倒平板时培养基的温度不能太低；待平板冷凝后，要将平板倒置，其目的是防止平板冷凝后，培养皿盖上凝结的水珠落入培养基中造成污染。(3)取 6 支灭菌的试管，分别加入 9 mL 灭菌的生理盐水，标号A1、 A2、A 3、A 4、A 5、A 6，吸取 1 mL
8、 酸奶样液加入试管 A1 中，然后另取一支吸管从 A1 中吸取 1 mL 溶液，加入 A2 中，依此类推，最后从试管 A6 中取 0.1 mL 样液进行涂布计数，这种接种方法是稀释涂布法。根据操作步骤可推知得到 101、10 2、10 3、10 4、10 5、10 6 倍的稀释液，从试管 A6 中取 0.1 mL 样液进行涂布计数，三个平板中菌落数分别为 251、265、276 个，可推测原酸奶中乳酸菌的浓度为0.11062.6410 9(个/mL) 。稀释涂布平板法测定251 265 2763活菌数目时，由于相邻的细菌可能形成一个菌落，因此测定值可能比实际值小。(4)为了使测量结果更加准确，
9、需要另增设一组培养基，接种等量灭菌的生理盐水。4为了分离和纯化高效分解石油的细菌，科研人员利用被石油污染过的土壤进行如图 1 所示的实验。请回答下列问题：(1)配制好的培养基通常使用_法灭菌。步骤与步骤中培养基成分相比，最大的区别是_。(2)同学甲进行步骤的操作，其中一个平板经培养后的菌落分布如图 2 所示。该同学的接种方法是_，出现图 2结果可能的操作失误是_。(3)步骤 需要振荡培养，原因是_。(4)步骤 后取样测定石油含量的目的是_。(5)为了筛选出高效菌株，可比较单菌落周围分解圈的大小，分解圈大说明该菌株的降解能力_。(6)通常情况下，在微生物培养过程中实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌、
10、_和_。无菌技术要求实验操作应在酒精灯_附近进行，以避免周围环境中微生物的污染。答案 (1) 高压蒸汽灭菌 步骤的培养基中石油是唯一碳源(2)稀释涂布平板法 涂布不均匀(3)使石油分布均匀，与细菌充分接触，有利于细菌的繁殖(答案合理即可)(4)筛选出分解石油能力最强的细菌(5)强 (6)干热灭菌 高压蒸汽灭菌 火焰解析 (1) 培养基的灭菌方法常采用高压蒸汽灭菌法。步骤的培养基中石油是唯一的碳源，步骤会有其他有机物作为碳源。(2)图 2 中的菌落不是呈线形分布，所以采用的接种方法应是稀释涂布平板法。图 2 中的菌落分布不均匀，应是操作中涂布不均匀引起的。(3)步骤 应进行振荡培养，其目的是使加
11、入的石油分布均匀，石油与细菌充分接触，有利于细菌的繁殖。(4)步骤 后取样测定石油的含量，可以得知被细菌分解的情况，如果含石油越少，则说明细菌分解的石油越多，这样可以筛选出分解石油能力最强的细菌。(5)降解石油能力越强的菌株，在菌落周围形成的分解圈越大。(6)实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌( 如接种环) 、干热灭菌(如培养皿) 、高压蒸汽灭菌(如培养基) 等。无菌操作要求在整个实验过程中操作都在酒精灯火焰附近进行，以避免周围微生物的污染。5(2017山东泰安一模)多氯联苯是一种对人体有很大危害的有机物质，呈油状液体，污染土壤后，很难清除。研究发现部分酵母菌具有分解多氯联苯的作用，为消除这种污染
12、，科研人员计划从受污染的土壤中筛选出高效分解多氯联苯的菌株。(1)筛选分解多氯联苯的菌株时，应将土壤样品_，接种到以_为唯一碳源的培养基上，从功能上讲，该培养基属于_。(2)对初步提取到的菌株要进行_，一般操作方法有两种，如图是_法。(3)若要测定培养液中酵母菌的菌体数，可在显微镜下直接计数，若用_法统计菌落数，在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白平板进行培养一段时间，这样做的目的是_。(4)将 1 ml 酵母菌溶液稀释 100 倍，在 3 个平板上用涂布法分别接入 0.1 ml 稀释液经适当培养后，3 个平板上的菌落数分别为56、57、58，据此可得出每升溶液中酵母菌活菌数为_。答案 (1)
13、 稀释 (溶解) 多氯联苯 选择培养基(2)纯化 平板划线(3)稀释涂布平板(或涂布平板) 检验培养基平板灭菌是否成功(倒平板是否感染杂菌或是否彻底灭菌)(4)5.7107 个/L解析 (1) 筛选分解多氯联苯的菌株时，应将土壤样品稀释，接种到以多氯联苯为唯一碳源的培养基上；只有能分解多氯联苯的菌株才能在这样的培养基中生存，因此从功能上讲，该培养基属于选择培养基。(2)对初步提取到的菌株要进行分离纯化，一般操作方法有两种，即平板划线法和稀释涂布平板法，图示是利用平板划线法进行微生物接种，把聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。(3)若要测定培养液中酵母菌的菌体数，可在显微镜下用血细胞计数板直接
14、计数。若用稀释涂布平板法统计菌落数，在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白平板进行培养一段时间，这样做的目的是检测培养基平板灭菌是否合格。(4)由题意知 1 ml 水样中的菌落数是(56 5758)30.11005.7104(个) ，每升水样中的活菌数为 5.71041035.710 7(个) 。6(2017山东济宁一模)请回答下列与微生物的分离、培养等有关的问题：(1)某培养基的配方：KH 2PO4、NaNO 3、MgSO 47H2O、KCl、葡萄糖、H 2O，如果使用该培养基来筛选土壤中分解尿素的细菌，则应去除的成分是_，同时需要添加的成分是_。(2)琼脂是从海藻中分离获得的多糖物质，在培养
15、基中常常需要加入琼脂，其作用是_。(3)如图表示的微生物接种方法称为_，图示接种需要对接种环采用_灭菌，先后灭菌_次。(4)已知稀释倍数为 106(涂布平板时所用稀释液的体积为 0.2 mL)，平板上分解尿素的细菌菌落数的平均值为 233，则每毫升样品中菌落数是_。答案 (1)NaNO 3 尿素 (2)作为凝固剂(3)平板划线法 灼烧 6 (4)1.165 109 个解析 (1) 根据培养基配方可知，题干所给的培养基配方中氮源是 NaNO3，若此培养基用于培养分解尿素的细菌，则应该使用以尿素为唯一氮源的选择培养基，即需要去除 NaNO3，同时需要添加尿素。(2)在培养基中常常需要加入琼脂，其作
16、用是作为凝固剂。(3)如图表示的微生物接种方法称为平板划线法，图示接种需要对接种环采用灼烧灭菌，由于每次划线前后均需要灼烧灭菌，因此需要先后灭菌 6 次。(4)根据题意可知，每毫升样品中的菌落数平板上菌落数的平均值 体积稀释倍数 2330.21061.165 109(个)。7(2017湖北重点中学第二次联考)我国规定每升饮用水中大肠杆菌不能超过 3 个。某兴趣小组尝试对某品牌饮用水的大肠杆菌含量进行检测，操作简图如图甲，伊红美蓝培养基配方如图乙。回答下列相关问题：(1)图甲中滤膜的孔径应_( “大于”或“小于”) 大肠杆菌。受此启发，对某些不耐高温的试剂可以怎样除菌？_。(2)配制图乙中的基础
17、培养基时，除了水分、无机盐以外，还应加入_( 一种营养成分)以及_。伊红美蓝培养基上生长的大肠杆菌菌落呈现黑色，从功能上划分，该培养基属于_培养基。(3)该小组通过统计_的数目，计算出单位体积样品中大肠杆菌数目。理论上他们的统计值要比实际_(“偏高”或“偏低”) ，理由是_。答案 (1) 小于 用滤膜过滤除菌 (2) 氮源 琼脂 鉴别 (3) 黑色菌落 偏低 两个或多个大肠杆菌连在一起时，平板上只能观察到 1 个菌落解析 (1) 图甲操作的目的是用滤膜过滤待测水样，以获得大肠杆菌，因此滤膜的孔径应小于大肠杆菌。受此启发，对某些不耐高温的试剂，可以用滤膜过滤除菌。(2)各种培养基的具体配方不同，
18、但一般都含有水、碳源、氮源和无机盐。图乙中的乳糖可为微生物的生长提供碳源，据此可知：在配制图乙中的基础培养基时，除了水分、无机盐以外，还应加入氮源。在固体培养基上大肠杆菌才能形成菌落，因此还需要加入琼脂。伊红美蓝培养基上生长的大肠杆菌菌落呈现黑色，从功能上划分，该培养基属于鉴别培养基。(3)由“ 伊红美蓝培养基上生长的大肠杆菌菌落呈现黑色”可知：该小组通过统计黑色菌落的数目，计算出单位体积样品中大肠杆菌数目。当两个或多个大肠杆菌连在一起时，平板上只能观察到 1 个菌落，所以理论上他们的统计值要比实际偏低。8(2017黑龙江大庆一中高三段考)据报道，某地空气样本中检测出 A、B 、C 3 种抗生
19、素的耐药性基因，只有存在于某种活菌中的耐药性基因才能感染人体。为研究此地空气中是否存在这些耐药性活菌，某研究小组做了以下实验，步骤如下：配制培养基并灭菌；制作无菌平板，并收集、培养空气中的活菌；对步骤得到的活菌进行分离纯化；设置若干实验组和对照组，进行相关操作；将各组平板置于适宜温度的恒温箱中培养一段时间，观察菌落的生长情况。回答下列问题：(1)步骤 中的灭菌方法是_。(2)步骤 中接种的方法是_。(3)若步骤 中得到的菌落类型有 5 种，则步骤中需要设计至少_个实验组，对实验组的操作是_。(4)若将所得菌落接种到含有_培养基中，形成的菌落呈_色，则表明可能存在大肠杆菌，从功能角度分析此培养基
20、属于_培养基。答案 (1) 高压蒸汽灭菌法(2)平板划线法(或稀释涂布平板法)(3)15 接种每种活菌的培养基中分别添加 A、B、C 抗生素(4)伊红美蓝 黑 鉴别解析 (1) 培养基灭菌方法一般是高压蒸汽灭菌。(2)微生物常见的接种的方法是平板划线法和稀释涂布平板法。(3)根据实验目的可知，要在“空气样本中检测出 A、B、C 3 种抗生素的耐药性基因” ，并且步骤中得到的菌落类型有 5 种，因此步骤中需要设计至少 3 种抗生素5 种菌落15 个实验组，对实验组的操作是接种每种活菌的培养基中分别添加 A、B、C 抗生素。(4)若将所得菌落接种到含有伊红美蓝的培养基中，形成的菌落呈黑色，则表明可能存在大肠杆菌。从功能角度分析此培养基属于鉴别培养基。
