1、沈阳药科大学硕士学位论文蜂房化学成分研究姓名：王伟申请学位级别：硕士专业：药物化学指导教师：赵庆春20070501沈阳药科大学硕士学位论文 中文摘要中文摘要蜂房(Nidus Vespae)为胡蜂科昆虫果马蜂Polistes olivaceous fOeGeer)、日本长脚胡蜂Polistesjaponicus Saussure或异腹胡蜂Parapolybia varia Fabrieim的巢。蜂房分布广泛，价廉易得，祖国医学以蜂房用药历史悠久，历代多为外用药，较少内服。中国药典中记载蜂房具有“祛风，攻毒，杀虫，止痛”的作用。中药大辞典中记载蜂房药液具有。去腐、生肌、消炎、止痛等作用，并能促进创
2、口早期愈合”在综述了蜂房化学成分和药理学研究的基础上，本文对蜂房的化学成分进行了系统的研究，同时考察了蜂房的抗炎活性从中药蜂房的甲醇提取液中，经溶剂分步萃取，反复硅胶柱色谱，ODS中压柱色谱，Sephadex LH20凝胶柱色谱，制备液相和反复重结晶等手段得到16个化合物，通过理化常数测定和光谱数据分析鉴定了其中的13个化合物，分别为：2fl,3a-4乙酰基7【(2乙酰氨基)乙基】3羟基2(3，4-=羟基苯基)苯并嗯嗪(1)、8习圣基喹啉4酮(2)、胸腺嘧啶脱氧核苷(3)、对苯二酚(4)、对羟基苯甲酸(5)、原儿茶酸(6)、咖啡酸(7)、阿魏酸(8)、山奈酚(9)、芦丁(10)、邻苯二甲酸二异
3、丁酯(11)、正十六烷酸(12)和，一谷甾醇(13)。其中：化合物1为新化合物，化合物2为新天然产物，化合物3-6，8，10，1213为首次从蜂房中分离得到。本文对蜂房甲醇提取液的正丁醇萃取部分进行了小鼠耳肿胀的抗炎活性测试，其显示了较强的抗炎活性。本文的研究结果将为蜂房的进一步研究与开发，提供初步的理论和实验依据。关键词：蜂房；成分研究；抗炎活性沈阳药科大学硕士论文ABSTRACTMaster candidate：Wei Wang跚cdiciIlal Chemistry)Supervisor：Qing chun ZhaoNidus Vespae is the nest ofPolistes
4、olivaceous peGeer)，Polistesjaponicus Saussure orParapolybiavaria Fabrici璐which belongs to insects ofvespidaeNidus Vespae widely dist-uributed inwhich is cheap and obtained e勰ilyNidus Vespae has been used in traditi-onal medicine for a long time,as external drug commonly,and to be taken orally random
5、lyNidus Vespae has many pharmacological activity especiany on anti-turnout and anti-intlamm-ation aspectOn the basis ofthe summary oftheir chemistry and pharmacology,this thesistaken a further study on chemical consituents ofNidus Vespae and research on its anti-infla-ruination activityFrom the meth
6、anol exlract ofthe Nidua Vespae,by solvent exlraction,repeated columnchromatography and recrystallizafion,16 compounds wero isolatedOn the basis ofphysico-chemical properties and spectroscopic analysis，13 compounds widenfificd雒：硝3口4acetyl-7-(2-acetanade)ethyl-3-hydroxy-2-(3,4-dihydroxypheny 1)-2H-be
7、nzob】【1，4】oxazin(1)，8-hydroxyquinolino-4-one(2)，thymidine(3)，p-dihydroxy benzene(4)，4-hydroxybenzoicacid圆，protocatechuic acid(O，caffeic acid(7)，ferulic acid(8)，kaempferoI(9)，turin(10)，phthalic add isodibutyl ester(11)，h印tadecanO05)。但治疗组治疗后发作间歇延长，短期内症状明显改善，体征消失较快。治疗组止咳时间为467天，平喘时间为199天，肺部哕音消失时间为37天。对
8、照组止咳时间为632天，平喘时间为348天，肺部哕音消失时间为660天。两组比较有显著性差异(PO05)25治疗消化器官疾患胃肠炎症10姿里垫型查兰堡主兰竺堡奎 墨二兰堑童蜂巢15 g，鸡蛋2个，蜂蜜30 g。将蜂房剪碎后用热水洗净，去除部分蜡质，加蜂蜜、鸡蛋于锅内共蒸熟成蛋松，早晚空腹各服1次。连N7次为1个疗程。本方适用于急慢性胃炎、胃窦炎患者，一般服1个疗程即可见效。胃脘痛、胃十二指肠溃疡蜂房膏10 g，蜂蜜109，土豆(不去皮)250 g。将土豆洗净，切丁，用水煮至粥状，服用时加蜂蜜、蜂房膏，每日早晨空腹用，连服10B为1个疗程。适用于胃脘隐痛不适之症。选陈年蜂房生产的巢蜜，每次切30
9、 g左右，放入口中充分咀嚼数次后吐出蜡渣，每1了3-5次。适用于胃、十二指肠溃疡等各种胃病。肝炎据报道，蜂巢对各型肝炎(迁延性、慢性、急性、传染性等)有较好的治疗作用。匡邦郁治疗急性传染性肝炎93例，慢性肝炎60例，迁延性肝炎54例，早期肝硬化7例，有效率分别为90，76，74，71；另外治疗肝炎抗原阳性患者8例，转阴6例【311。据报道由于乙肝病毒感染者和慢性皿eAg携带者临床多呈正虚邪恋，虚实挟杂之候。加之乙肝病毒易阻滞阳气通达，易于深入营血、脏腑、经络，形成缠绵难祛之势，故非助阳解毒药，不可振奋阳气，抵御邪毒；非虫类走窜血肉之品，不能直达病所，直捣肝络，松动病根。蜂房内空质轻、轻清上浮，
10、具有清热解毒、宣肺解表之功，伍以柴胡、桂枝、干姜、黄芪、白术、丹参、三七、郁金、穿山甲、水蛭、僵蚕、升麻、茵陈等诸药【32】，能抑制病毒，改善恢复肝功能，对肌体细胞免疫，体液免疫具有调节作用。调节脂类代谢蜂房水浸提取液降胆固醇作用迅速而明显。临床得用蜂房制剂治疗高胆固醇血症50例，经1个月治疗观察，有效率达90。25皮肤浅层损伤烧、烫伤陈年蜂房1个。将蜂巢扯碎，洗净，加水1000 g，文火煎者30分钟。本方适用于烫伤，外伤感染患者。癣、痒、疹治风气客于皮肤，瘙痒不已 蜂房(炙过)、蝉蜕等分。为末，酒调1钱匕，日3服。(姚僧坦集验方)治疗银屑病【331由蜂房、白英、小红参等制成糖浆剂内服。20-
11、,-30ml次，日3次，1个月为1疗程，服药期间停服其它药物。治疗417例，痊愈338例。随访100例，其中临床治愈后3个月复沈阳药科大学硕士学位论文 第一章前言发6例，6个月内复发18例中，1年内复发21例，1年以上未见复发55例。复发者再用此糖浆仍有效。26泌尿、妇科疾患温阳益肾唐本草载蜂房“主阴痿”。新修本草云其治“遗尿失禁。”盖因蜂房直走肾经，温阳益肾乃其治本之道。朱良春先生创制的“蛛蜂丸”治疗肾亏遗尿，阳痿不举，临床用之，屡试不爽剀。朱老以仲景“温经汤”为基本方，合蜂房，治疗带下清稀如水、绵绵如注之虚性带下或虚中不夹实带下，疗效卓著ps临床治疗早泄，可用蜂房、白芷名-lOg，焙干研末
12、，醋调成面团状，临睡前敷神阙穴上，1次每天，连敷57次，可愈【36l。古医籍对蜂房治疗遗尿失禁的记载较多，且疗效肯定。凡遗尿久治不愈，症情顽缠，体质虚弱者，均可选用。方法为蜂房炙存性，研末，每服36 g(成人量)，小儿酌减，2次天，黄酒送下【3刀。或取蜂房(焙黄)、桑螵蛸各等份，研细末，每服36 g，小儿酌减，2次每天，黄酒送下，取效稳捷381。余氏用补中益气汤加蜂房治疗小儿尿频100例，515天，全部治愈，疗效满意f39J。泌尿结石蜂巢膏15 g，蜂蜜30 g，鲜葫芦500 g。将鲜葫芦捣烂绞取其汁，调以蜂巢青，蜂蜜服用2次，本方适用于尿路结石症。妇科疾患治疗富颈糜烂【柏】蜂房、自及各60
13、g，虎杖180 g，砸碎，加水2500 ml浸泡l小时后煎煮，煮沸后文火煎2小时，煎液过滤去渣，文火浓缩成250 ml，加入白糖120 g，充分搅动溶化即成。治疗时，先洗净外阴，将浸泡有药膏的大棉球敷贴与宫颈糜烂处，每晚给药，次日晨取出。lO天为一疗程，不愈者连续进行3个疗程，治疗58例，l3个疗程后，治愈42例，好转14例，无效2例。治崩中漏下，青黄赤自人无子和蜂房末，3指撮，酒服之。(千金要方)。蜂房始载于本经，历代本草皆有详载，记述着临床应用的各种经验和研究成果，得到临床医学家的认同。如同一般中药一样，不仅可以单用，也可与其他中药配伍应用；不单外用，还能内服；并且毒副反应甚微。在制剂时可
14、用多种溶媒提取，应用方便、廉价，资源丰富，属纯天然性，颇有开发空间。12沈阳药科大学硕士学位论文 第一章前言第三节立题依据蜂房为胡蜂科昆虫果马蜂Polistesoivaoeou$(DeGeer)、日本长脚胡蜂Polistesjaponicus Saussure或异腹胡蜂Parapolybia varia Fabricius的巢。祖国医学以蜂房用药历史悠久，历代多为外用药，较少内服。蜂房的药理作用多样、临床应用广泛，多篇文献报道蜂房具有显著的抗菌、抗炎、抗癌活性，但就目前本品研究进展来看，化学成分的研究多属蜜蜂蜂胶的研究，且研究范围有限，内容肤浅，对蜂房的化学成份研究基本上处于空白，因此对蜂房的
15、进一步开发利用受到极大的限制。目前主要存在一下几个方面的问题：1蜂房临床疗效显著，具有多种显著的药理活性，尤其是在抗炎方面多篇文献报道蜂房具有极为显著的抗炎活性，民间用药以其水煎液的形式为主，且疗效确切。提示我们蜂房的抗炎活性成分应该是其所包含的极性较大的成分。但由于未对其进行系统的化学成份研究，因此，蜂房活性的物质作用基础尚未探明，其药理活性的作用机制也不明确。2在2000版及2005版药典仅见对蜂房药材的基原以及药理作用的简介，未见对其化学成分鉴别和有效成分含量测定的规定，因此，蜂房在药典中是一味质量标准尚处于空白的药材。3由于尚未探明蜂房中的活性作用成分，目前对蜂房的药理活性研究主要集中
16、于整体的、宏观的层面上，而对于蜂房中所包含的单体化合物的药理活性以及量效关系等的研究却无难以开展。4由于蜂房中的化学成分尚未探明，缺乏有效地质量控制手段，当前蜂房的I缶床应用以及蜂房制剂的开发仍停留在传统民间用药的层次上，难以实现本质的突破。5文献对蜂房的化学成分报道几乎没有，虽然对蜂胶、蜂蜡的化学成分有所报道，但其是否与蜂房中的有效成分一致，还需要进一步研究确定。综上来看，对蜂房进行系统的提取分离以及结构鉴定，确定蜂房的化学成分，明确蜂房的活性作用物质基础是十分必要和迫切的。本文以二甲苯致炎小鼠耳肿胀为药理指导模型，运用现代的色谱手段对蜂房提取物进行系统的分离，并对分离得到的化合物进行结构鉴
17、定，探明蜂房的主要化学成分，揭示蜂房抗炎活性的主要作用物质基础。最终为摸索蜂房的提取分离方法、质量标准的建立以及蜂房的合理开发奠定了基础。沈阳药科大学硕士研究生论文 第二章蜂房化学成分的研究和抗炎活性研究第二章蜂房化学成分的研究与抗炎活性研究第一节 蜂房化学成分的提取分离干燥的蜂房药材15 kg，甲醇室温浸泡提取，浓缩后得浸膏180 g，经溶剂分步萃取，运用多种分离方法(硅胶柱色谱、Sephadex LH-20、ODS以及制备型HPLC)共得到化合物16个，通过谱数据分析并结合文献，鉴定了其中13个化合物的结构，分别为：2p,3a-4-乙酰基7-【(2乙酰氨基)乙基】-3-羟基-2-(3二羟基
18、苯基苯并嚼嗉)(1)，8羟基喹啉_4酮(2)，胸腺嘧啶脱氧核苷(3)，对苯二酚(4)，对羟基苯甲酸(5)，原儿茶酸(6)，咖啡酸(7)，阿魏酸(8)，山奈酚(9)，芦丁(10)，邻苯二甲酸二异丁酯(11)，正十六烷酸(12)，争谷甾醇(13)。其中化合物1为新化合物，化合物2为一新天然产物，化合物3-6、8、10-13均为首次从该蜂房中分离得到的化合物。Tab2-l列出了从蜂房中得到的化合物及结构鉴定方法。Tab2-1 These eompounds isolated from Nidus VespaeIdentificationNo Compound Structuremethods2j!,
19、3a-4-z酰 心c百NW甲足心 mD基7r(2乙酰 1H村蛐l13C-NMR氨基)乙基】3一 HSQCl羟基2-(3，4 HMBCOY人瑚二羟基苯基苯 0。p lH1H COSYNOEgY并嚼嗪) UvIR,ESI-MSO mp8羟基喹啉4_ lH奇fMR2 ”C-NMR酮 I岫CUEL ESLMSOHN八rcH3胸腺嘧啶脱氧 少N tH13C-NMRUV3OH核苷OH4 对苯二酚 6rap1HNMROH14沈阳药科大学硕士研究生论文 第二章蜂房化学成分的研究和抗炎活性研究GOOH5 对羟基苯甲酸 臼 tHIOHCOOH6 原儿茶酸 文H -HlOH7 咖啡酸 H乓r_ -高8 阿魏酸 H乓
20、r洲 lHOCH-,9 山柰酚 西H ，HUV，10 芦丁 HH13C-NIvIRUvESI-MS参昂o I tH邻苯二甲酸二 晖葺13C-NMR11 异丁酯UvES!-MS1H小iMR12 十六烷酸CH3(CHz)14COOH TLc(13 卢谷甾醇 mpTLc沈阳药科大学硕士研究生论文 第二章蜂房化学成分的研究和抗炎活性研究21化学成分的提取分离干燥的蜂房药材15 kg，用18 L甲醇室温浸泡提取，减压回收溶剂，浓缩后得到总浸膏(180 g)，将总浸膏混悬于1500 ml水中，用等体积的氯仿和正丁醇分别萃取三次，减压浓缩得到氯仿萃取物和正丁醇萃取物(437曲，其中氯仿层经由90MeOH水萃
21、取并由环己烷脱脂，浓缩得环己烷萃取物(359 g)和90MeOH水萃取物(314曲，将氯仿层中90MeOH水萃取物经过快速硅胶柱层析(氯仿：甲醇=9：1等度洗脱)后分为8个流份：其中Frl经减压硅胶柱层析(氯仿：甲醇梯度洗脱)得到化合物12(5 mg)和13(3 m曲；Fr7经过SephadexLH20柱层析(氯仿：甲醇=1：1)洗脱后，再经ODS中压柱层析(甲醇：水梯度洗脱)得到化合物4(12 nag)和14(10 mg,未鉴定)；Fr8经减压硅胶柱层析(氯仿：甲醇梯度洗脱)后，经过SephadexLH-20柱层析(氯仿：甲醇=1：1)纯化得到化合物9(13 mg)和15(8 mg，未鉴定)
22、。将正丁醇萃取物经减压硅胶柱层析(氯仿：甲醇梯度洗脱)得到13个流份：其中Frl经减压硅胶柱层析(环己烷：乙酸乙酯梯度洗脱)后经过S印hadexLH-20柱层析(氯仿：甲醇=1：1)纯化配合制备型HPLC得到化合物11(8 mg)；Fr4经减压硅胶柱层析(氯仿：甲醇梯度洗脱)配合SephadexLH20柱层析(氯仿：甲醇=1：1)纯化得到化合物1(28 mg)，5(35 mg)，6(24 mg)，7(17 mg)，9(13 mg)和16(17 mg，未鉴定)；Fr5经ODS中压柱层析(甲醇：水梯度洗脱)后，经Sephadex LH-20柱层析(氯仿：甲醇=l：1)纯化后由制备型HPLC精制得到
23、化合物2(12 mg)和3(23 m曲；Fr6经减压硅胶柱层析(甲醇：水梯度洗脱)后，再经SephadexLH20柱层析(氯仿：甲醇=l：1)纯化，最后由制备型HPLC精制得到化合物10(5 mg)。详细的分离流程图如Fig2-la和Fig2-lb所示。16沈阳药科大学硕士研究生论文 第二章蜂房化学成分的研究和抗炎活性研究蜂房(干燥药材15 kg)I菜燃温浸泡如h)总浸膏1809“环己烷层059 g)90甲醇水层014曲正丁醇层(437 g)90甲酵水层(314 g)水层(65 g)Frl FrrFr64 14(12mg) Oo幅未鉴定) S印had“LH-20氯仿：甲醇(1：1)洗脱Fig2
24、-1a Isolation Procedultofthe Contituents ofNidus Vespae17氯Sephadex LH-20氯仿：甲酵(t：I)洗脱15(8mg,未鉴定)洗度增析糊怫尉鳓僦；邑压仿1瓤舭In一一碾一伽F粤脱R埘慨詈萋，黼燃似仿弼酵1，端嚣阡，上一奄耋墓儡岳曼 埘兀疆奄窖墨窘邑一 心鞫张营量彗雪(宕卜3善圣一。臀鲁篷堂葛，Jo譬搴lIl翟日ouo鲁Jo2昌絮u2山目暑tlo葺声I-尊函暑一I)一毖更口互tgQ茸n3n-鼍_盂g暑篷楚 镳一曩U 壬垂目爨 誉萎塞萎 n箍廿誉寸儡一盘皿奄暑2一暑Io钟暑一霉璐一三一娃一$妊oql_11量；争儡长H一宙cIo)S5奄
25、牮c)o(宕譬邑萱山奄E一Il=卤f皇主=卤匐寸气o)|_卤(暑tnS哩链卜肖妖事掣蜒粼端冥铁拳g求链扑睾礁馨*搬议窄甜袄摩书巨扑K痞差匿嚣沈阳药科大学硕士研究生论文 第二章蜂房化学成分的研究和抗炎活性研究22化合物的结构解析化合物1第二节 蜂房化学成分的结构鉴定矿 HH3c常掣Ol棕黄色油状物，a富+14370(c 27 MeOH)。三氯化铁一铁氰化钾反应呈阳性，提示结构中含有酚羟基，氨性氯化锶反应呈阳性提示结构中含有相邻的酚羟基。uv斌=H谱中显示260nm(109 8 417)处有吸收峰，提示结构中含有苯环结构。mv：(eva“1)表明结构中含有：酚羟基(3423锄。1)，甲基(2925
26、 era“1)，酰胺羰基(1708 cm-1，1692 c-In“1)，苯环(1612 cln“1)，C-O伸缩振动(1209 cm-1)，取代苯环(844锄。1)。由ESI-MS(positive andnegative)谱中给出：mz 387M+H+，409M+Na+，385瞰-HI。，421M+C11。的信号，推测化合物分子量为386，与分子式C20H22N206相符。1H-NMR(300 MHz,DMSO-d6)谱中显示两个活泼氢6 892(1H，brs，At-OH)，6789(i耳N功；六个芳香氢信号6684(1H，H-5)，681(1E H-6)，679(IH，H-63，672(1
27、耳H-59，669(1Ia,H8)，667(1H，n-2)，推测应分布于两个苯环上；在化学位移为250-60区间内显示两个相连的仲碳氢信号260(2H，t，J=70 Hz,H1”)，320(2H,q，J=70 Hz,H-2“9；两个相连的叔碳氢信号6 471(1H，dJffi 77 Hz,H-2)，557(1H，t-，=77 Hz，H-3)。在高场区显示两个孤立的甲基氢信号6 178(6rI,8)。”C-NMR(75 MHz,DMSO-d6)谱中：低场区存在两个羰基碳信号6 1695(C1“)， 1691(C-4，推测可能为酰胺羰基；十二个矿杂化的碳信号：6 1458(C-4a)，1451(C
28、-39，1426(C-4b)1405(c-4)，1329(c-7)，1269(C-19,1219(c-s)，1190(C-29，1167(c-6)，11 6C,(C-5)，1153(c-59，1149(C一回，推测结构中含有两个苯环。两个连氧碳信号6767(C-3)，763(c-2)，两个伸碳信号6404(c-2“)，345(cl)和两个重叠的甲基碳信号6227(C-2)，227(c-5”)。19沈阳药科大学硕士研究生论文 第二章蜂房化学成分的研究和抗炎活性研究在1H1H COSY谱(胃喀2-3)中，8320(2H,q，H-2“)的N个氢与8260(2H，tH1-)的两个氢相关，6789(1I
29、-I,N田的氢与8320(2H，q，H-2-)的氢相关；8471(1H，d，H-2)的氢与8557(1H，t，H-3)的氢相关，88920H，0H)的氢与6557(1H，t，H-3)的氢相关，P HH3c常婪oFig2-2 The key 1IIIH COSY correlation ofcompound 13硼Z60(211,H-I- l l 1 l J_。l ，I 罾lj 孓 、 ：、 、 、 ，Fig2-3 The lHIII COSY spectrum ofcompound l在HMBC谱中，6 178(3H，s，H-5)的氢与8 1691(C-4飞8404(c-2”)的碳相关，632
30、0，(2ri，q，=70Hz,H-2”f)的氢与8345(C-11的碳相关，推测(2乙酰氨基)乙基结构片段沈阳药科大学硕士研究生论文 第二章蜂房化学成分的研究和抗炎活性研究(Fig“)的存在：F蝽2-4ThekeyHMBC correlationof2-acetamido-ethylofcompoundl6L78(3珥s，H2f)的氢与6 1695Cc-1tI)的碳相关，B 557(1H，t，=77 H弓H-3)也与61695(c-1“)的碳相关，8471(1H，H-2)的氢信号与8767(c-3)的碳相关，可以推测1，2-二羟基2乙酰氨基乙基结构片段(Fig 2-S)的存在：oV、H。HHq
31、bHFig2-5ThekeyflMBC eorrelaUonofl0Hlloxy-(2-aeetamido)-ethylofeompondl6260(2H，H-1)的氢与6 1167(D 6)，1329(c-7)，1219(C-8)，404(c-2”)的碳有相关，可以初步确定(2-乙酰氨基)乙基在苯环上的连接位置(Fi昏2-6)。6471(1H，H2)的氢与1269(c-1f)，1 1 90(C-29，1 149(c-69的碳相关，可以确定该结构片段在苯环上的连接位置(Fi昏2-6)。同时8471(1H,H-2)的氢与1426(C-4b)的碳相关，可以推测两个结构片段的连接位置(Fig2-6)
32、。通过以上相关关系将所推测得到的片断连接形成如图所示的结构。化合物结构通过HMBC谱确定为：2fl,3a-4-乙酰基-7-(2-7,酰氨基)乙基】-3掘基-2(3，4二羟基苯基)苯并嗯嗪(Fig2-6)：F唔2-6 The Key HMBC Correlation ofCompound 1在NOESY谱(Fig2-8)中，8557(I珥t，-，=77Hz，H-3)的氢与8667(1I-I,H2和8679(1H，H一6f)的氢偶合，8 892(1H3一。哟的氢与6 178(3H，S，H-2”)的氢有远程偶合，而与8679(1H，H-6f)的氢不相关，从而可以推断出3-OH是一个取向的OH，而2(
33、3，4-羟基苯基)是B取向的，因此可以判定化合物1的结构为2厉3萨4乙酰基7-(2-2l鎏里垄型查兰堡主堑塞皇堡壅 茎三皇壁垒垡兰堕坌塑婴塑塑垫丝堡丝翌墨乙酰氨基)乙基】3一羟基-2一(3，4-_-羟基苯基)苯并嚼嗪Z屈3口4 acetyl-7(2-acetamide)ethyl3-2(3,4-dihydroxypheny1)-2H-benzob1，4】oxazin，其1H-NMR和13C-NMR信号的归属依据1H-1H COSY，HSQC，HMBC和NOESY实验数据测试结果，数据见Tab2-2该化合物为一个新的苯并嗯嗪类化合物。(Fig2-7)。Fig2-7TheKeyNOESYCorre
34、lationofCompoundl667(1耳w29&79H-6) 3001，蜊L78阻B-2t 、悦。卜 _一 l l一 P量 ， i、：、 j k 夕、j- ：瓤 i 、 ： ： 、i、， ：夕 、 、 、- 、， ，_蕾 、124 NOESY ofCompound 1沈阳药科大学硕士研究生论文 第二章蜂房化学成分的研究和抗炎活性研究Tab2-2 600 MHzH and 150 MBz 14C-NMR data for compound 1 tin DMSO-d6)ajNo 6H 6C HMBC”H-HCOSY NOESY3 557(1H，Jffi77Hz) 767 2，1” 2，3-O
35、H 2，3-OH，2，F3-OH 892 2，3，F684(1田681(1田669(1田667(i11)672(1田679(1田178(3H，8)260(2l王t，；7Hz)320(2H，m，Jffi7nz)789(1珂1458142611661167132912191269119145114051153114916952273454047，4b8，4a6，4a6124tl”6，7，8，2”7l”，矿，5”护65652卅1”3”21”2”lm22，33埘I6，8，2卅61”，3”2卅4m 1691p 178(3H，s) 227 2卅，铲曲Signal assignments webased O
36、il the results of 1H-1H cosY,HSQC,HMBC and NOESY懿pel“imentsb1 Number in each column in dicate the carbons coupled with proton化合物2322黄色粉末(甲醇)，mp 357-359“C。三氯化铁一铁氰化钾反应呈阳性，提示结构中含有酚羟基。1A=，图谱显示在2255 nmoog 2 449)，261 rim(109 c 404)，2865rim(109c 376)，322009 8 3。95)处有吸收峰，提示结构中存在苯环结构。m v=(L：lil“1)表明结构中含有：羟基(
37、3417cm“1)，羰基(1573cm“1)，氧取代苯环(1634，1506，1197 cm“1)和C-N键(1573锄-1)的吸收峰。ESI-MS(positive and negative)谱中给出：砒162M+H+，184M+Na】+，32312M+H+，34512M+Na+，160M-H。的信号，推测化和物分子量为161，与CgH7N02分子式相符。在1H-NMR(300MI-Iz,CD30D)谱中，含有五个芳香氢信号：6843(1H，d，=67Hz,H-2)，695(1耳d，=67 Hz,H一3)提示存在一个AB偶合系统；6 781(1 H，d，J_-82 Sz,H5)，751(1
38、H，t，=82H舀H-6)，730(IH，d，=82H亏H一7)提示存在一个芳香的ABC偶合系统。H钿矩5678rzy掣yF=一扩r扩W3o-酝洲沈阳药科大学硕士研究生论文 第二章蜂房化学成分的研究和抗炎活性研究在13c-Nwm(150 MI-Iz,CD30D)谱中，低场区含有九个碳信号：一个羰基碳信号61745(c卸和八个矿杂化的碳信号：81489(C-8)，1434(C-2)，1322(C-9)，1284(c-6)，1245(C-10)，116s(c一7)，115o(c-5)，1073(c-3)。在HMBC谱(Figure2-9)中，8843(H-2)氢与81745(C-4)，1322(c
39、9)的碳相关，8695(I-1-3)氢与81745(C-4)，1245(C-10)的相关，结合ESI-MS谱和13C-NMR谱可推测结构中含有喹啉4酮结构。同时，6781一5)氢信号与81745(C-4)，1 168(c-7)，1322(c9)相关，结合1H-NMR谱中87sl(H5)，750(H-6)，729(H-7)的偶合常数，推测化合物8位连有一羟基，推测化合物为8羟基喹啉-4酮，经与文献对照，数据基本一致，故鉴定化合物2为8羟基一喹啉4-酮(8-hydroxyquinoline-4-one)。其1H和”C-NMR信号的归属数据见Tab2-3。德Fig2-9 The Key HMBC C
40、orrelation ofCompound 2Tab2-3 300 MIlz 1and 150 MHzl3C-NMR data forcompound 2恤CD30D)I)No 6H 5c HMBC”曲Signal assignment were based on the results ofHMBC experimentb)Numbers in each column indicate the carbons coupled with proton沈阳药科大学硕士研究生论文 第二章蜂房化学成分的研究和抗炎活性研究化合物3OH3白色针状结晶(水),nap 183-185“C。uV耀笋图谱显示在
41、2685 nm(1099536)处有吸收峰，提示结构中有共轭体系。在1H-NMR(300 MHz,D20)谱中，6762(1H,s，H-6)为一个单独的芳香氢信号。6626(1H，t，=672 Hz,H-1)，推测为糖的端基氢信号。在化学位移为350-450区间内存在三个连氧氢信号6443(1H d，=429 Hz，H-3)，398(IH，d，=372 Hz,H-4。)，379(2H，m，H5-)，此外还有一个仲碳氢信号6234(2H，t，=588Hz,H-2)和一个孤立的甲基氢信号6186(3H，s，I-I-7)。在”C-NMR(75 MUz,D20)谱中，低场区存在两个羰基信号81693(
42、c-4)、1545(C2)，符合核苷类羰基碳信号的特征；两个矿杂化的碳信号8140，2(c-6)、1142(c-5)。而6892(c-4)、四个碳信号8877(c19、732(c-3)、639(C-5的符合糖上连氧碳信号的特征，此外还有一个仲碳信号6412(C2t)和一个甲基碳信号8143(c7)。经与文献【421数据对照，数据基本一致，鉴定化合物3为胸腺嘧啶脱氧核苷(Thymidine)。化合物44白色针晶(甲酵)，mp 170-171“C。三氯化铁一铁氰化钾反应呈阳性，提示结构中含有酚羟基。1H-NMR000 MHz,CD30D)谱在低场区只有一组氢信号6660(4H，s)。13c-NMR
43、 000 MHz，CD30D)中存在两组碳信号81509(C一1，c-4)，1 169(C一2，C-3，C-5，C6)推测该化合物具有对称结构。经查阅文献【431，鉴定化合物4为对苯二酚(1，4-benzenedi01)洲蝤洲沈阳药科大学硕士研究生论文 第二章蜂房化学成分的研究和抗炎活性研究化合物55白色针晶(甲醇)，nap 213-214“C。三氯化铁一铁氰化钾反应呈阳性，提示结构中含有酚羟基；溴钾酚绿反应呈阳性，提示结构中含有羧基。在1H-NMR(300MHz,CD30D)谱中仅见芳香区存在四个氢信号8792(2I-I,d，厂=8SHz,H-2，6f)，692(21-1,d，=85H毛H-
44、3-，5，可以推断结构中含有苯环对位取代结构。综合以上解析，经与文献1的氢谱数据对照，基本一致，故鉴定化合物5为对羟基苯甲酸hydroxybenzoie acid)。化合物6OH6白色针状结晶(丙酮),nap 195-197“C；三氯化铁铁氰化钾反应呈阳性，提示化合物含有酚羟基，溴钾酚绿反应阳性，提示结构中含有羧基。在1H-NMR 000 MHz,CD3COCD3)谱中仅见芳香区存在三个氢信号6754(1H，s，H-2)，749(1H，d，=79 nz,H-61，691(1tt,d，=79 Hz,H-5)，推测结构中含有苯环1，3，4三取代结构。综合以上解析，经与文献【451数据对照，基本一致
45、，鉴定化合物6为原儿茶酸(ProtocatechIlic acid)。化合物7 5,删COOHH拶影zoH7黄色针状结晶(甲醇),nap 194-196“(2。三氯化铁铁氰化钾反应呈阳性，提示化合物含有酚羟基。澳钾酚绿反应均阳性，提示结构中含有羧基。在1H-NMR000 MH乙C D30D)谱中低场区分布五个氢信号：其中6752(1H，d，=158Hz，H-a)，621(1 H，d，=158Hz,H-2)为反式烯键；另外三个氢信号8703(1H，s，H-2)，692(H，d，J=77 Hz,H-61，676(1 H，d，=77 Hz,H5)，可以推断它们应分布于一个l，3，4三取代的苯环上。综
46、合以上解析，经与文献M氢谱数据对照，鉴定化合物7为咖啡酸(ca腩ic acid)。一妨洲磊鎏塑垫翌查兰堡主堑壅生丝苎 差三兰璧生些兰壁坌塑至塞塑垫垄垩丝翌塞中含有酚羟基)。溴钾酚绿反应均阳性，提示结构中含有羧基。在1H-NMR 000 MHzDMSO)谱中仅有五个低场的氢信号：其中6766(1H，d，=158nz,H3)、621(1Hd，=158 Xtz,H-2)提示存在反式烯键；另外三个氢信号8703(IH，s，H2、692(H，d，=77Hz,8-6)、676(1H，d，=77 Hz,H一5-)，可以推断它们应分布于一个l，3，4三取代的苯环上综合以上解析，经与文献【47】氢谱数据对照，基
47、本一致，确定化合物8为阿魏酸(Ferulic acid)。化合物99黄色粉末(甲醇)，mp273-275“C。10H2S04显褐色；三氯化铁反应呈阳性，提示有酚羟基的存在。盐酸镁粉反应阳性，uV蠼8图谱显示在366(109 8 471)，321009 2 370)，267009。407)13111处有吸收峰，三氯化铝显色后，紫外365 nm下荧光明显加强，提示该化合物可能为黄酮类化合物。1H-NMR(300MItz,DMSO-d6)谱：ff4个氢信号：其中804(2H,d，=87 Hz)与68S(2H，d，=87 Hz)，推测结构在一对位取代苯环；6635(1E d，厂=18 I-Iz)-与615(IH，d，=18Hz)，推测为苯环的间位偶合系统。经与文献【鹕1对照，确定该化合物9为山柰酚(Kaempfer01)化合物101027鎏里堑翌盔兰堡主堑塞生笙苎 兰三童坚塞些兰壁坌竺里窒塑苎壅堡丝里塞黄色粉末(申醇)，nap 176N178“C。盐酸镁粉反应阳性，Molish反应阳性。uV图谱显示在260nm(109e439)，231nm(1094ZO)
