1、12 月 10 日 基因工程（一）高考频度： 难易程度：若要利用某目的基因(见图甲 )和 P1 噬菌体载体(见图乙) 构建重组 DNA(见图丙)，限制性核酸内切酶的酶切位点分别是 Bgl(A GATCT)、EcoR (G AATTC)和 Sau3A( GATC)。下列分析合理的是A用 EcoR切割目的基因和 P1 噬菌体载体B用 Bgl和 EcoR切割目的基因和 P1 噬菌体载体C用 Bgl和 Sau3A切割目的基因和 P1 噬菌体载体D用 EcoR和 Sau3A切割目的基因和 P1 噬菌体载体【参考答案】D确定限制酶的种类（1）根据目的基因两端的限制酶切点确定限制酶的种类应选择切点位于目的基
2、因两端的限制酶，如图甲可选择 Pst。不能选择切点位于目的基因内部的限制酶，如图甲不能选择 Sma。为避免目的基因和质粒的自身环化和随意连接，也可使用不同的限制酶切割目的基因和质粒，如图甲也可选择用 Pst和 EcoR两种限制酶 (但要确保质粒上也有这两种酶的切点)。（2）根据质粒的特点确定限制酶的种类所选限制酶要与切割目的基因的限制酶相一致，以确保具有相同的黏性末端。质粒作为载体必须具备标记基因等，所以所选择的限制酶尽量不要破坏这些结构，如图乙中限制酶 Sma会破坏标记基因；如果所选酶的切点不止一个，则切割重组后可能会丢失某些片段，若丢失的片段含复制起点区，则切割重组后的片段进入受体细胞后不
3、能自主复制。1下列关于载体的叙述中，错误的是A载体与目的基因结合后，实质上就是一个重组 DNA 分子B对某种限制酶而言，载体最好只有一个切点，但还要有其他多种酶的切点C目前常用的载体有质粒、 噬菌体的衍生物和动植物病毒D载体具有某些标记基因，便于对其进行切割2若某种限制性核酸内切酶的识别序列是 CCTAGG，它在 A 和 G 之间切断 DNA。下图表示用该酶处理某基因后产生的片段。下列有关叙述正确的是A该正常基因中有 4 个 CCTAGG 序列B产生的 DNA 片段可用 DNA 连接酶连接起来C用该酶处理得到图示基因片段要水解 3 个磷酸二酯键D若该基因某处有一个 CCTAGG 突变为 CCT
4、AGC，用该酶处理后将产生 5 个片段3根据基因工程的有关知识，回答下列问题:（1 ）限制性核酸内切酶切割 DNA 分子后产生的片段，其末端类型有_和_。（2 ）质粒运载体用 EcoR切割后产生的片段如下：为使运载体与目的基因相连，含有目的基因的 DNA 除可用 EcoR切割外，还可用另一种限制性核酸内切酶切割，该酶必须具有的特点是_。（3 ）按其来源不同，基因工程中所使用的 DNA 连接酶有两类，即_DNA 连接酶和_DNA 连接酶。（4 ）反转录作用的模板是_ ，产物是_。若要在体外获得大量反转录产物，常采用_技术。（5 ）基因工程中除质粒外，_和_也可作为运载体。1【答案】D【解析】载体
5、必须具备的条件有：对受体细胞无害，不影响受体细胞正常的生命活动；具有自我复制能力，或能整合到受体细胞的染色体 DNA 上，随染色体 DNA 的复制而同步复制；具有一个至多个限制酶切点，以便目的基因可以插入到载体中；带有特殊的标记基因，如抗生素抗性基因，以便于对外源基因是否导入进行检测；载体DNA 分子大小适合，以便于提取和进行体外操作。3 【 答案】（1）黏性末端 平末端（2 ）切割产生的 DNA 片段末端与 EcoR切割产生的相同（3 ） E.coli T4（4 ） mRNA(或 RNA) cDNA(或 DNA) PCR（5 ）噬菌体 动植物病毒【解析】（1）限制性核酸内切酶可以将 DNA 分子切成两种类型的末端，平末端和黏性末端。（2）两种不同酶切割之后便于相连，所产生的黏性末端必须相同。因此为使运载体与目的基因相连，含有目的基因的 DNA 除可用 EcoR切割外，还可用另一种限制性核酸内切酶切割，该酶必须具有的特点是切割产生的 DNA 片段末端与 EcoR切割产生的相同。（3）DNA 连接酶可分为两类：一类是 T4DNA 连接酶，另一类是 E.coliDNA连接酶。（4）反转录是以 mRNA 为模板逆转录合成 DNA。利用 PCR 技术大量扩增DNA。（5）基因工程中除质粒外，动植物病毒和 噬菌体的衍生物也可作为运载体。
