1、化验知识培训,粗蛋白测定,要点一、盐酸的配制、标定1.配制：0.1M(mol/L)取分析纯HCL8.5mL加蒸馏水使成1000ml,摇匀即可;（半微量发需要根据所用定滴管的量程来确定盐酸的量）2.标定:精密称取无水碳酸钠基准物(在270-300灼烧至恒重)0.1克左右,准至0.1毫克,加入蒸馏水50ml使之溶解,加混合指示剂10滴,用盐酸标准溶液滴定至暗红色,微沸2分钟,冷却至室温（一般用水冷）,继续滴定至溶液呈暗红色(需做5-6个平行，相对误差）,同时做空白试验。,3.计算: 盐酸标准溶液浓度 V1HCL液用量;V2空白试验HCL液用量;m无水Na2CO3的重量; M-无水碳酸钠的摩尔质量数
2、 ，单位是克每摩尔M（1/2NaCO3)=52.994,推荐盐酸与碳酸钠的对照表,4.能否用无水硫酸铵做标定？,无水硫酸铵,加热280分解,只能检验不能标定,作为基准物应具备哪些条件? (1)纯度高,在99.9%以上(2)组成和化学式完全相符(3)稳定性好,不易吸水,不易被空气氧化，遇热不易分解 (4)摩尔质量较大,称量多,称量误差可减小,二、滴定管的使用1、清洗：标准：管内充满水再放出时，内壁全部被均匀润湿而不挂水珠。 无明显油污的滴定管，可直接用自来水冲洗。 若有油污，则用铬酸洗液洗涤。 也可用KOH乙醇溶液洗涤,2、检漏与涂凡士林将滴定管内装满自来水，排出滴定管出口管内的气泡，关闭旋塞，
3、夹在滴定管架上，直立静置约2min，若无水滴漏下，再将旋塞旋转180静置检查。若前后两次均无水渗出，旋塞转动也灵活，即可使用。若发现漏水更换新的滴定管（推荐使用天波滴定管）,涂凡士林的方法：取下旋塞小端的橡皮圈，取出旋塞，用滤纸擦干，同时也将旋塞套内擦干，随后，用手指将油脂涂在旋塞的两头（除旋塞孔一圈不涂外，在整个曲面上涂一均匀薄层）。然后将旋塞插入旋塞套中，向同一方向不断旋转旋塞，直到旋塞全部呈透明状。最后，抵住旋塞柄，在小端套上橡皮圈。,堵了如何处理？,3、如何处理半滴微开旋塞，使液滴悬挂在管尖。关闭旋塞，用锥形瓶颈内壁接触液滴引下，再用少许蒸馏水吹洗锥形瓶内壁，使附着的溶液全部流下。,4
4、.读数（1）装入或放出溶液后，必须等12min，待附着在管壁上的溶液充分流下后再读数。 （2）读数时，滴定管可以夹在滴定管架子上；也可以取 下，用手的前三指持管子上端无刻度处进行读数，但均 应注意使滴定管保持垂直。 （3）对于无色或浅色溶液，读数时，应读取弯月面下缘实 线最低点相切处的刻度。对于深色溶液，看不清弯月面 下缘时，可读视线与液面两侧的最高点呈水平处的刻度。注：每次读数前要检查管内壁是否挂水珠，管尖是否有气 泡，管出口尖嘴处是否悬有液滴。,三、空白1、空白需要经常做2、放在样品之前做,把细节处理好是一件很困难的事情！,小结,仪器的标定,一、电子天平校准因存放时间较长，位置移动，环境变
5、化或为获得精确测量，天平在使用前，一般都应进行校准操作。,先把天平调水平，开机预热30min,轻按CAL显示器出现CAL-200，闪烁，此时，把200g校准砝码放上称盘，显示器出现“-”等待状态，经几秒名钟后显示器出现200.0000g，拿去校准砝码，显示器应出现0.0000g，如若显示不为零，则再清零，再重复以上校准操作（注意，为了得到准确的校准结果最好反复以上校准操作二次）。,二、酸度计校准 测pH值时1 开机预热30分钟，将“选择”钮拨至pH档，“斜率”旋钮顺时针旋到底；“温度”旋钮旋至溶液的温度值。 2 把用蒸馏水清洗过的电极插入pH=6.86pH(25时的值)的标准缓冲溶液中，待读数
6、稳定后调节“定位”旋钮至该溶液在当时温度下的pH值（当时温度下的pH值可查附录）。,3 用蒸馏水清洗电极然后将电极插入pH=4.00或pH=9.18的标准缓冲溶液中（根据被测溶液的酸碱性确定选择那一种缓冲溶液，如果被测溶液呈酸性则选pH=4.00缓冲溶液；如果被测溶液呈碱性则选pH=9.18的缓冲溶液），待读数稳定后调节“斜率”旋钮至该溶液在当时温度下的pH值（当时温度下的pH值可查附录）记录。 4 重复步骤2和3直到不需要再调节二旋钮为止。 5 标定结束（一般情况下，在24h内仪器不需要再标定）。,测氟离子浓度时1 将“选择”钮拨至电位档。 2 连接好参比电极和测量电极，并将电极放入旋转的蒸
7、馏水中 3 更换蒸馏水3-4次，待电位值稳定在-370（？）时开始测标准和样品,维护,化验工作是一个动手能力很强的工作，最重要的是实验结果的准确度和重复性！,小结,几个检测项目中可能出现的问题,问题一：酸度的影响?原理：用中性柠檬酸铵溶液提取枸溶磷，在酸性介质中，磷酸根与钼酸喹啉反应形成磷钼酸喹啉沉淀，用重量法测定枸溶磷含量,一、重量法测枸溶磷过程中的几个问题,中性柠檬酸铵溶液:溶解74g柠檬酸于300毫升水中,加69毫升氨水,在酸度计上用氨水调节PH值为7.0,用比重计测其比重为1.09(20).将溶液贮存于密闭的瓶中冰箱中冷藏备用(如长期使用,用前校正其酸度),问题二：用滤纸过滤？玻璃砂坩
8、埚：孔径为515微米（以G来区分） 滤纸 快速：孔径为80120微米 中速：孔径为3050微米慢速：孔径为13微米,问题三 玻璃砂坩埚的清洗？氨水或者氨水溶液,二、粗纤维测定过程中的几个问题,一、原理：用浓度准确的酸和碱，在特定条件下消煮样品，再用有机溶剂除去可溶物，经高温灼烧扣除矿物质的量，所余量为粗纤维。它不是一个确切的化学实体，只是在公认强制规定的条件下测出的概略成分，其中以纤维素为主，还有少量半纤维素和木质素。,问题一：溶液标定硫酸溶液：（0.1280.005）mol/L，用无水碳酸钠标准溶液标定。（有些地方使用的是氢氧化钠？）氢氧化钠溶液：（0.3130.005）mol/L，用邻苯二
9、甲酸氢钾法标定。,问题二:消煮器?有冷凝球的600mL高型烧杯或有冷凝管的锥形瓶,如果没有冷凝球？称取1g2g试样，放入高型烧杯，加浓度准确且已沸腾的硫酸溶液200mL和1滴正辛醇，立即加热，使其在2min内沸腾，调整加热器，使溶液保持微沸，且连续微沸30min，注意保持硫酸浓度不变 （加烧开的蒸馏水，保持硫酸溶液体积200mL）。,问题三：可否用滤纸？抽滤装置：抽真空装置，吸滤瓶和漏斗。（滤器使用200目或260目不锈钢网或尼龙滤布）,三、胃蛋白酶消化率测定过程中几个问题,一、原理脱过脂的试样，用温热的胃蛋白酶溶液，在恒温、持续不断地搅拌下消化16h，过滤分离不溶性残渣，洗涤、干燥，测定残渣
10、的粗蛋白含量。同时，测定空白和脱脂未酶解试样的粗蛋白含量。,问题一：胃蛋白酶浓度？0.2%胃蛋白酶溶液:将6.1 mL浓盐酸稀释至1000 mL水中(溶液pHl-2)，加热至42-45 ,加入2g活性为1:10000生化级胃蛋白酶若活性不是1：10000，可使用活性1:3000生化级胃蛋白酶 (不可使用非生化级胃蛋白酶)，应注意胃蛋白酶溶液中胃蛋白酶浓度应为每毫升20IU，并缓慢搅拌直至溶解，勿在加热板上加热胃蛋白酶溶液或配制时过热。临用前配制。,问题二：脱脂？含脂肪小于1%可不脱脂，含脂肪1%-10%建议脱脂，含脂肪大于10%则必须脱脂,问题三：丙酮的作用？当上层液体通过滤纸后，于瓶中加人1
11、5 mL丙酮，震荡，丙酮和残渣流到滤纸上。再用一份15ml的丙酮进行洗涤，照上法振摇和倒出。检查瓶子，并用丙酮再次洗涤。当全部液体通过滤器后，用洗瓶以少量丙酮洗涤漏斗壁上残渣两次，并抽干。,问题四：结果计算？X(%)=(W1- W2)*100/ W1 式中:X-一试样的胃蛋白酶消化率，% W1-脱脂未酶解的原样品中粗蛋白的平均含量，% W2-脱脂酶解后残渣中粗蛋白的平均含量，%,问题五：标准？鱼粉85%肉骨粉85%羽毛粉70%-85%,问题五：标准品的保存？丙二醛标准溶液易变质，需低温保存，有条件的可放在冰箱4保存，没有条件的放在阴冷的地方，避免接触阳光或者存放在高温的地方。,问题一：电位值的
12、正负问题？有些酸度计显示正电位值有些显示负电位值，不影响结果。问题二 ：标准曲线的绘制和浓度计算公式,五、氟离子检测过程中的几个问题,问题三：氟离子选择电极和参比电极使用注意事项氟离子选择电极： 1、氟离子选择电极在测定样品和标准溶液时，温度相同， 磁力搅拌器转速相同。 2、氟离子选择电极在使用时在去离子水中与饱和甘汞电极 组成电池，电动势达-320后方能正常使用。 3、在测量时，电极用蒸馏水清洗后，用滤纸擦干后再进行 测量。 4、氟电极用后建议用去离子水清洗至-320后干放，可以延长电极寿命。,参比电极：1、参比电极在使用时电极上端小孔橡皮塞拔去，以防止产生扩散电位变化影响测试结果。 2、电
13、极内氯化钾溶液不能有气泡，以防止断路，溶液内应保留少许氯化钾晶体，以保证氯化钾溶液的饱和。 3、当电极外部附有氯化钾晶体时，及时除去。,六、氯离子检测过程中的几个问题,莫尔法滴定原理,指示剂 K2CrO4 滴定剂 AgNO3,沉淀反应：,测定的对象直接法：Cl，Br 。 返滴定法：Ag+,Ag+(aq) + AgCl(s , 白色) 2 Ag+(aq) + Ag2CrO4(s , 砖红色),问题一：酸度的影响 ？,实际要求溶液的pH值6.510.5之间。,2、发扬司法也需要调节溶液酸度,成品、有些原料颜色不好判断？,七、挥发性盐基氮检测过程中的几个问题,问题一：碱液用1氧化镁混悬液 ？挥发性盐基氮是指肉蛋白质在微生物的作用下发生分解产生氨、胺类碱性含氮物质，这类物质易和有机酸形成盐，具有挥发性，在氧化镁碱性条件下蒸馏以氨的形式释效，如果用20%的氢氧化钠代替，会把溶解在水中的一些小肽和氨基酸等蒸馏出来，使结果偏高。,问题二：标准？特级鱼粉110mg/100g一级鱼粉130mg/100g二级以下鱼粉150mg/100g,总结,举一反三、融会贯通，找到问题解决问题不能为做化验而做，注重原理和标准！,谢 谢 ！,
