1、 中山大学附属第一医院 刘 敏 Infections grew 8 times from 2003-2013 400,000 new Syphilis infections / year Source: Syphilis in China from 2000 to 2013 epidemiological trends and characteristics : HIV ( HIV ) (MSM) , 梅 毒诊 断 标准 （2007 ） 指 出 ， 梅毒 诊 断 须 根据 病 史、 临 床症 状 、体 格 检查 及 实 验 室 检查 等 进行 综 合分 析 ，慎 重 诊断 梅毒实验室检查对诊断
2、具有重要性意义 IgM IgG VRDL/RPR 0 2 4 6 Weeks 6 Months 1 Year Antibody titer 感染时间 Infection IgM + IgG = 7 非梅毒螺旋体抗原血清试验( 测 抗 类 脂 抗 体) NTrAT 快速血浆反应素环状卡片试验 (RPR) 甲苯胺红不加热血清试验 （TRUST） 性病研究实验室试验 (VDRL) 梅毒螺旋体抗原血清试验(测抗TP 抗体) TrAT 梅毒螺旋体颗粒凝集试验 (TPPA) 梅毒螺旋体血球凝集试验 (TPHA) 梅毒酶联免疫吸附试验 （ELISA ） 梅毒金标记免疫层析法- 梅 毒 快 速 检 测 (RT
3、) 荧光螺旋体抗体吸收试验 （FTA-ABS ） 化学发光免疫分析法 （CLIA ） 梅毒IgM抗体检测 （IgM ） 梅毒螺旋体蛋白印迹试验 （WB） 经典策略 采用任何一种非梅毒螺旋体 抗原血清试验对样品进行初 筛 新策略 采用任何一种梅毒螺旋体抗 原血清试验对样品进行初筛 VDRL RPR TRUST 暗视野显微镜检 镀银染色 核酸检测 兔感染试验 非梅毒螺旋体抗原试验 梅毒螺旋体抗原试验 FTA-ABS TPHA/TPPA ELISA/CLIA WB/TPI/金标 筛查实验 确证实验 TP-ELISA TP-CIA TPPA TP-WB 除核酸检测外，其余 方法繁琐，不适合实 验室常规
4、检测 梅毒实验室检测 抗原检测 抗体检测 - / NTrAT - , 1 2 53 83% 100% 58 85% 80 100 ( SLE ) (TrAT) - TP IgG/ IgM : . TP Nichols ( FTA-ABS) ; . Nichols ( SDS ) (TPHA TPPA) , . / TP (ELISA ) - : : WHO. 1999; CDC. 2010; Workowski et al. MMWR Recomm Rep 2010; French et al. Int J STD AIDS 2009. TRUST定性/ 定量检测 报告： TP-CLIA阴性
5、ELISA阴性 报告： TRUST阳性（及滴度） TPPA阳性 发光及ELISA阳性 免疫印迹阳性 报告： TRUST阴性 TPPA/CLIA阳性 （ELISA 、 TPPA 、 TP-CLIA ） TPPA/WB 报告： TRUST阴性 TPPA阴性 CLIA阳性 ELISA阳性 免疫印迹阴性 2014 European Guideline on the Management of Syphilis - (%) (%) 暗视野显微镜检查 76 76 - - - PCR 95 95 95 95 99 VDRL 7487 100 88 100 37 94 9699 RPR 7799 100 95
6、 100 73 9399 Western Blot 99 100 100 99 100 Chemiluminescence 98 100 100 100 99 TPHA/TPPA 86 100 100 99 96 IgG-ELISA 98 100 64 96 7099 IgM-ELISA 93 85 99 Peeling, Ye. Bull World Health Organ 2004; Sea et al. Clin Infect Dis 2010; Binnicker. Curr Opin Infect Dis 2012. / ? IgM/G VS US CDC: reverse seq
7、uence syphilis screening ARCHITECT Syphilis-1D2001-E Date: July 2005 Company Confidential 2005 Abbott- Not for Customer Distributions : 两步法，化学发光微粒免疫分析（CMIA），检测 人血清和血浆中梅毒螺旋体（Treponema Pallidum ，TP）抗体（IgG IgM ） TpN47 TpN17 TpN15 样本中存在的抗-TP 抗体将结合到TP 包被微粒子上 抗- 人吖啶酯标记结合物 重组TP 抗原（TpN15 、TpN17 和TpN47 ）包被微粒
8、子与检验稀释液混合 加入 预触发液和触发液 测定得到化学发光反应物的相对光单 位（RLUs ） ARCHITECT Syphilis TP 1 CMIA 200tests/h 2 3 TP pN15,TpN17 ,TpN47 3 Human IgM IgG , 4 TP , 29min 5 EDTA-K 6 Donor 99.80% based on 5000 specimens -upper and lower 95% Confidential Limits of 99.90% and 99.63% Clinical 99.65% based on 564specimens-upper an
9、d lower 95% Confidential Limits of 99.96% and 98.72% 7 100% observed sensitivity and Seroconversion Sensitivity 8 Total CV% 3.7 8.8 Results The ARCHITECT CLIA and the TPPA were in total agreement for all untreated infection with a sensitivity of 98.4%. This was significantly higher than the sensitiv
10、ity of: Murex ICE assay 86%, p=0.0005, IgM-EIA 86.8%, p=0.0008, and VDRL 83.7%, p= 0.0001 The difference in the sensitivity of the ARCHITECT and ICE assays was entirely due to primary stage syphilis, 97.5% versus 77.2% (p=0.0003). 10 例1 （1.24.99 ） 2 例1 （0.40.49 ） CMIA S/CO TPPA 1.00-4.99 104 38.1% 1
11、69 273 5.00-9.99 113 78.5% 31 144 10.00-14.99 92 93% 7 99 15.00-19.99 72 96% 3 75 20 355 100% 0 355 736 77.8 % 210 22.2% 946 i2000 S /CO TPPA 得出CMIA 测定梅毒抗体的S/CO最佳分界点：6.815 ， 此点的灵敏度：0.800 ，特异度：0.865. CMIA 与TPPA 结 果 不 一 致 的210例，结合临床资料分析分布: . 7例经临床确诊是梅毒患者， . 203例患者经临床确诊均非梅毒患者 （ ？ ） 其中恶性肿瘤47 例 糖尿病31例 自身
12、免疫性疾病37例 妇科相关疾病15例 心血管疾病41例 肝硬化8 例 感染13例 骨折2 例 其它疾病9 例 再统计，203例患者中50岁以上的老年人占64%-真阳？假阳？ 现有大量研究表明老年人是恶性肿瘤 糖尿病 类风湿性关节炎等疾病的 高发人群，而且这些疾病可使患者体内含有某些治疗性抗体 嗜异性抗体 自身糖尿病抗体类风湿因子 甲胎蛋白等会导致CMIA 测定梅毒抗体阳性 ， 是否这些抗体造成CMIA 测定梅毒抗体的假阳性仍需要进一步的研究 。 : 18 Roche internal data CE 认证和批间比较研究 （6 个中心） (CE) Italy (CE) Germany, 3 si
13、tes (Lot to lot) Turkey (Lot to Lot) Austria (CE) China (CE) Thailand (Lot to Lot) Germany (CE) Austria cut-off 1 0 1,537 678 63 26 23 152 116 23 8 6 2 3 2 1 1 3 0 1 2 15 19 110 40 0 0 200 400 600 800 1000 1200 1400 1600 1800 0 0.05 0.075 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.5 0.6 0.75 0.8 0.85 0.9 0.95 1 1.
14、05 1.1 1.25 2 5 10 100 500 700 样本数量f ( 频率) Cut-off index 对 2,832份样本进行筛查 Cut-off 数据: Elecsys Syphilis development files, R 颗粒凝集试验 使用天然Treponema Pellidam 抗原 用于抗梅毒抗体的检测 SERODIA-TPPA 已经在多个国家销售和使用 Lumipulse G TP-N ; , (Tp15-17, TpN47) Lumipulse G TP-N SERODIA-TPPA 总 数 阳性 阴性 Lumipulse G TP-N 阳性 459 0 459
15、阴性 0 600 600 总 数 459 600 1,059 相关性100%. 中国临 床 试验结 果 评 估 方 案 ( ) ELISA ( ) TPPA TPPA , Kappa ELISA 865 494 371 47.48 - - 总例数865例（分区间比对） - ELISA OD 值0.5以下（阴性）638 例 - ELISA OD 值0.5-1.3（灰区） 53例 - ELISA OD 值1.3以上（阳性）174 例 0 100 200 300 400 500 600 700 0 . 5 以下（阴性） 0.5-1.3（ 灰 区 ） 1 . 3 以上（阳性） OD值 例数 例数两方法
16、间一致率：96.5% Kappa=0.895 (P=0.000) 提示化学发光 法 与常规 ELISA法 有很好的一致性 TP-ELISA vs. TP-CLIA结果一致性分析（总区间） TP-ELISA 阳性 阴性 合计 TP-CLIA 阳性 174 26 200 阴性 4 661 685 合计 178 687 865 TP-CLIA 阳性 阴性 合计 TP-PA 阳性 49 4 53 阴性 2 235 237 合计 51 239 290 两方法间一致率：97.9%, Kappa=0.930 (P=0.000), 提示化学发光法与确证实验TP-PA 有 很好的一致性。 TP-CLIA vs.
17、 TP-PA 结果一致性分析 ELISA vs. TP-PA 结果一致性分析 两方法间一致率 ：90.7% Kappa=0.625 (P=0.000) 提示ELISA 与TPPA 法 具 有一 定 的 一致 性 TP-ELISA 阳性 阴性 合计 TP-PA 阳性 28 25 53 阴性 2 235 237 合计 30 260 290 TP-ELISA vs TP-PA TP-CLIA vs TP-PA Kappa 值 0.625 0.930 一致率(%) 90.7 97.9 以TPPA为标准，TP-CLIA 的Kappa值和一致率 均 优于TP-ELISA TP-CLIA /TP-ELISA
18、与 TP-PA 结果一致性分析比较 TP-ELISA 阳性 阴性 合计 TP-CLIA 阳性 174 26 200 阴性 4 661 685 合计 178 687 865 TP-PA验证后23例为阳性 TP-PA验证后3 例为阳性 这3 例均为灰区样本 ELISA / TP-CLIA结果不符标本 应用 TP-PA验证后结果 TP-ELISA 阳性 阴性 合计 TP-CLIA 阳性 3 13 16 阴性 1 36 37 合计 4 49 53 ELISA 结 果 分 层 分 析 （0.5OD 值1.3）（n=53 ） 一致率73.6% ，Kappa=0.204 ， 两 种 方 法一 致 性 较 差
19、 化 学 发 光 法检测阳 性13 例 ，其 中12 例TPPA 验证后阳性 灰区ELISA 漏检率：12/53=22.6% 灰区CLIA 漏 检率 ：1/53=1.8% CLIA 40 Tp17s IgG IgM : assay format: sandwich one step 1st result: approx 40 throughput: approx 180 results/h Sample volume: 80 mL (+ 150 mL dead volume) Index 0.9 NEGATIVE 0.9 Index 1.1 EQUIVOCAL Index 1.1 INITIA
20、LLY REACTIVE 41 LIAISON Treponema Screen 42 Roche ElecsysSyphilis 30L 50 L Lumipulse G （富士） 10L 100L Roche product insert Siemens Immulite Centaur Abbott ARCHITECT 80 L DiaSorin Liaison 35 min 29 min 40 min 18 min Roche Elecsys 0 分钟 Siemens Immmulite Abbott Architect, Siemens Advia Centaur DiaSorin Liaison 25min Lumipulse IgM IgG 2-4 HIV FTA-ABS - IgG CLIA TPPA TPPA CLIA TPPA CLIA S/CO TPPA : (1) / TP ; (2) ; (3) TrAT FTA- ABS , TPPA ELISA , / TP , ( ) : Thank you
