1、ICS 65.020.30B 43DB 37山 东 省 地 方 标 准DB37/T XXXXXXXXX种公猪鲜精生产技术规范Boars fresh sperm production technical specificationXXXX-XX-XX 发布 XXXX-XX-XX 实施山 东 省 质 量 技 术 监 督 局 发 布DB37/T XXXXXXXXXI前 言本标准按照GB/T 1.12009给出的规则起草。本标准由山东省畜牧兽医局提出。本标准由山东省畜牧业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：山东省畜牧总站、山东省种公猪站、济南市畜牧技术推广站。本标准主要起草人：牛志河、闫先峰、柴士名
2、、李淑花、赵桂省、周希春、尹雪、王丹丹、邱淑霞。DB37/T XXXXXXXXX1种公猪鲜精生产技术规范1 范围本标准规定了种公猪鲜精生产的精液采集、检查、稀释、分装、保存和方法。本标准适用于种公猪鲜精生产与保存。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB 232382009 种猪常温精液GB/T 251722010 猪常温精液生产与保存技术规范3 术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1 种公猪 breeding boar生产性能和体型外貌特征符合种用
3、要求的用于配种或采精的公猪。3.2 台猪 teaser引诱公猪产生性欲、以供其爬跨的同种动物或模型。3.3 采精 semen collection用人工的方法体外获取种公猪精液的过程。3.4 采精频率 frequency of semen collection种公猪每周采精的次数。3.5 每剂量中直线前进运动精子数 prin each dose每剂精液中呈直线前进运动精子的总数。4 器械清洗与消毒DB37/T XXXXXXXXX24.1 新购置或使用后的玻璃器皿，用自来水浸泡。洗涤时，先在加有洗涤剂的温水中进行刷拭，然后用水冲洗干净，最后用蒸馏水冲洗，直至器皿光亮、无水滴附着为止。将洗净的玻璃
4、器皿送入干燥箱，加热至 160 后再恒温 60 min，自然冷却后待用。4.2 器械应进行消毒。塑料量杯、塑料量筒、瓷漏斗、金属镊子、药匙、吸管滴头等用 75%酒精棉球擦拭消毒，待酒精挥发尽后方能使用。4.3 载玻片和盖玻片，用后立即浸泡予水中，洗净后用柔软的布擦拭干净备用。4.4 包装用的塑料瓶、塑料袋用紫外线消毒 30 min 后方可使用。5 稀释液配制5.1 天平称取药品时，盘内垫以称量纸，校零后方可称重。5.2 化学药品取用后，应立即将瓶口盖严，并妥善保存。5.3 所用试剂均为分析纯，用双重蒸馏水溶解。配方参见附录 A（常见几种公猪精液稀释液配方）。5.4 商品稀释剂按说明书使用。不得
5、使用过期或吸潮变色的稀释剂。5.5 自配稀释液配制后应及时加入抗生素，稀释液的 PH 值为 6.47.2。5.6 使用前 1 h 配制，配置后应及时贴上标签，标明品名、配置日期和时间、经手人。5.7 剩余稀释液应密封后置于冰箱中冷藏，时间不超过 24 h。6 采精6.1 公猪应来源于国家或省级种猪场，体型外貌和生产性能符合种用要求，三代系谱资料齐全，体质健康的种猪。6.2 采精室应建在精液处理室附近，应设置采精区和安全区。采精区设置台猪，地面防滑，并保持清洁、安静。6.3 采精前准备6.3.1 采精员应着洁净工作衣、帽，带一次性无毒塑料手套、穿长胶鞋。6.3.2 采精杯内应置无毒塑料袋并覆盖四
6、层纱布或一层精液过滤纸。6.3.3 显微镜载物台恒温板、精液处理器皿和稀释液应预热至 36 38 。6.3.4 精子密度仪应提前 1 h 预热。6.4 采精步骤6.4.1 剪去包皮部长毛，清洁体表，擦干水渍。6.4.2 挤净包皮积液，先用 0.1 %高锰酸钾溶液清洗腹部和包皮，再用温水清洗后擦干。6.4.3 手握法采精时，应一只手戴双层一次性无毒塑料手套，按摩公猪包皮部，待公猪爬跨台猪并伸出阴茎，脱去外层手套，握紧龟头，使其不能旋转，顺势将阴茎的“S”状弯曲延直。另一只手持采精杯，弃去最初射出的少量精液（约 5 mL），收集精液至射精完毕。DB37/T XXXXXXXXX36.4.4 假阴道法
7、采精时，应向假阴道内注入 45 50 的温水，使其采精时保持在 38 42 。再用润滑剂将内胎由内到外涂均匀，后用双联球充气加压使内胎具备母猪阴道壁的功能，一端为入口，另一端装胶管漏斗与集精杯。采精时右手持假阴道，左手将阴茎导入入口端使其射精，收集精液至射精完毕。6.5 采精频率成年公猪：23次/周，青年公猪：12次/周。7 精液检查7.1 精液处理室7.2 精液处理室应设精液检查、稀释和分装 3 个区域，室温宜在 20 25 ，避免阳光直射或紫外灯照射。配置仪器和用品参见附录 B（精液处理室配置仪器和用品）。7.3 原精液品质原精液品质应符合附录C1(原精液品质)的规定。7.4 检测方法7.
8、4.1 外观、气味目测、鼻嗅。7.4.2 采精量采用电子天平称量法计算采精量（1 g相当于1 mL）。7.4.3 精子活力取中层精液约25 L于载玻片上，加盖盖玻片后在37 条件下用200倍400倍显微镜检查，活力用百分率标示。每份精液取样两次，每个样观察三个视野，并观察不同液层内的精子运行状态，进行全面评定，计算平均值。7.4.4 精子密度按精子密度仪或可见光分光光度计的操作规程准确进行精液的密度测定。应定期用血细胞计数法校正。7.4.5 精子畸形率采用吉姆萨染色检测法，在400倍600倍显微镜下观察左、右两个区观察不少于200个精子。也可采用相差显微镜直接观察。每月抽检一次。7.5 鲜精精
9、液品质检测方法参见GB 232382009种猪常温精液，精液产品质量见附录C2（鲜精精液产品质量）。7.6 记录填写公猪鲜精精液品质检测登记表，登记表见附录D（公猪鲜精精液品质检测登记表）。DB37/T XXXXXXXXX48 精液稀释8.1 精液采集后应尽快稀释，放置时间不宜超过 15 min。8.2 采用等温稀释。精液与稀释液温差不得超过1 （在 33 37 范围内），根据精液温度调节稀释液温度，不得反向操作。8.3 将稀释液沿杯壁缓慢加入到精液中，轻轻摇动或沿一个方向慢慢搅拌，混合均匀。高倍稀释时，应先 2 倍稀释，30 s 后再加入余下的稀释液。8.4 精液稀释后应静置 5 min 再
10、作精子活力检测，活力不低于 70 %进行分装。8.5 稀释后精液要求。每剂剂量地方猪种 40 mL50 mL，瘦肉型猪种 80 mL100 mL，精子活力70 %以上，每剂含总精子数地方猪种15 亿个，瘦肉型猪种35 亿个。8.6 稀释液总量以体积 V 计，数值以 mL 表示，按式（1）计算：(1)12Vsmc式中：V1采精量mL；c 精子密度亿个/mL；m 精子活力%；s 每剂含总精子数，单位为亿个；V2每剂精液量mL。9 精液分装采用袋装和瓶装。9.1 装精液用的袋、瓶应选用对精子无毒害作用且灭菌的一次性塑料制品。9.2 按不同品种的剂量要求，将精液分装至精液袋、瓶中，排出空气后密封。9.
11、3 精液包装应标明产品名称、剂量、生产单位、生产日期、批号、品种或类型、耳号、有效期和贮存温度。10 精液保存10.1 分装后的精液应放置 1 h2 h 温度缓慢降至 17 左右时，平放入 16 18 恒温箱内避光保存；也可用 1215 层纱布（或干毛巾）包严直接放入 16 18 恒温箱内。10.2 保存的精液应每隔 4 h8 h 摇动 1 次并记录，摇动时应轻缓均匀。10.3 稀释后的精液应在 3 d 内用完，超过保质期的精液不应使用。10.4 每批精液应留样备查。同批号的精液在保质期内应抽样检查并记录，公猪常温精液保存登记表见附录 E（公猪常温精液保存登记表）。DB37/T XXXXXXX
12、XX5A A附录 A：常见几种公猪精液稀释液配方单位：g/L成分 配方一 配方二 配方三 配方四保存时间/d 3 3 5 5D-葡萄糖 37.15 60.00 11.50 11.50柠檬酸三钠 6.00 3.70 11.65 11.65EDTA 钠盐 1.25 3.70 2.35 2.35碳酸氢钠 1.25 1.20 1.75 1.75氯化钾 0.75 0.75青霉素钠 0.60 0.50 0.60 硫酸链霉素 1.00 0.50 1.00 0.50聚乙烯醇(PVP，Type II) 1.00 1.00三羧甲基氨基甲烷(Tris) 5.50 5.50柠檬酸 4.10 4.10半胱氨酸 0.07
13、 0.07海藻糖 1.00林肯霉素 1.00DB37/T XXXXXXXXX6B B附录 B:精液处理室配置仪器和用品名称 规格（技术参数） 用途17 生化培养箱 50 L200 L 保存种猪常温精液（任选）电子台称 3000 g/1 g，6000 g/2 g 称量精液、稀释液电子天平 200 g/0.01 g 称量化学试剂（选用）显微镜 40X1600X 检查活力、精子数和畸形率电加热板 室温至 50 （可调） ，工作面温差：0.5 载玻片、盖玻片恒温预热精子密度仪 50 mill/mL1400 mill/mL 测定精子密度（任选）可见光分光光度计 波长范围 350 nm820 nm，带宽5
14、 nm 测定精子密度（任选）酸度计 测量范围 0.014.0，精度0.1 测定精液、稀释液的 pH精液保存箱 17 1 保存精液干燥箱 室温5 250 ，波动度2 预热器皿和消毒器械恒温水浴锅 双孔或四孔 稀释液保温恒温磁力搅拌器 0 99 ，容量500 mL 稀释液搅拌、加热双重蒸馏水器 2000 mL2500 mL 制作双重蒸馏水血球计数板 25X16 测定精子密度计数器 0999 精子计数微量移液器 100 L200 L 精液取样或稀释微量移液器 100 L1000 L 精液取样或稀释量筒（或量杯） 500 mL2000 mL 量取液体（选用）三角瓶 1000 mL 配制稀释液放水瓶 5
15、 L 盛放双重蒸馏水烧杯 1000 mL、2000 mL 精液稀释温度计 100 测量精液、稀释液温度自动分装机 分装精液（选用）热封口机 袋装精液封口分装架 分装精液载玻片 精子活力的测定盖玻片 精子活力的测定精液袋、瓶 分装及保存精液稀释粉 配制精液稀释液擦镜纸 擦拭显微镜镜头玻璃棒 稀释液配制或精液稀释移液枪吸嘴 精液取样过滤纸 过滤精液附录B：精液处理室配置仪器和用品（续）名称 规格（技术参数） 用途DB37/T XXXXXXXXX7润滑剂 用于采精采精袋（杯） 盛放原精一次性无毒塑料手套 用于采精标签纸 精液、稀释液标签DB37/T XXXXXXXXX8C C附录 C1：原精液品质检
16、查项目 指标外观 乳白色或浅灰色，无脓性分泌物，无皮毛等异物气味 略带腥味，无异味采精量（mL） 100精子活力（%） 75精子密度（亿个/mL） 1精子畸形率（%） 15附录 C2：鲜精精液产品质量检查项目 指标外观 乳白色，无杂质，包装封口严密。剂量（mL/剂） 地方猪种 4050，瘦肉型猪种 80100精子活力（%） 60每剂量中直线前进运动精子数（亿个/剂） 地方猪种10，瘦肉型猪种25精子畸形率（%） 18有效期 72hDB37/T XXXXXXXXX1D D附录 D：公猪鲜精精液品质检测登记表品种采精日期公猪号采精员采精量（mL）色泽气味PH值精子活力（%）精子密度(亿/ml)每剂量中直线前进运动精子数（亿个/剂）精子畸形率（%）稀释液量（mL）稀释后精子活力（%）头份数有效期 72 h 精子活力（%）质检员 备注DB37/T XXXXXXXXX2E E附录 E:公猪常温精液保存登记表每头份 保存第 1 天 保存第 2 天 保存第 3 天生产日期 批号 品种公猪号头份数剂量（mL/剂）每剂量中直线前进运动精子数（亿个/剂）精子畸形率（%）保存期（d）精子活力（%）摇动时间精子活力（%）摇动时间精子活力（%）摇动时间出厂前精子活力（%）质检员 备注_
