1、1广西地方标准慈姑组培苗生产技术规程（征求意见稿）编制说明广西农业科学院生物技术研究所一、任务来源和起草单位根据广西壮族自治区质量技术监督局自治区农业厅办公室关于报送 2016 年修订广西农业地方标准项目建议书的通知文件的通知要求，我单位承担的慈姑组培苗生产技术规程广西地方标准于 2016 年 7 月获得立项。本标准由广西壮族自治区农业科学院提出，广西农业科学院生物技术研究所负责起草。二、制定标准的必要性慈姑（ Sagittaria sagittifolia L.）是泽泻科( Alismataceae)慈姑属宿根性水生草本，原产中国。慈姑营养价值高，富含淀粉、蛋白质和多种维生素和钾、磷、锌等微
2、量元素，对人体机能有调节促进作用。此外，还具有很高的药用价值，中医认为慈姑性味甘平，生津润肺，补中益气，所以慈姑不但营养价值丰富，还能够败火消炎，辅助治疗痨伤咳喘。广西是全国优良慈姑品种“桂林白慈姑”主产区，已有一、两百年栽培历史。广西主要分布于桂林、柳州、贺州等地区。慈姑作为广西特色蔬菜，2015 年“平乐慈姑”通过农业部地理标志认证。相比其它慈姑品种， “桂林白慈姑”具有球茎个大、皮白、品质优、无苦涩味，商品性好等特点。目前，80的产品出口销往东南亚、美国、加拿大等国国家。近几年国内外市场销量大增，慈姑产业不断发展壮大，据不完全统计，桂东北区慈姑常年栽培面积约 6 万亩，总产量 7.2 万
3、吨。产品供不应求，价格逐年攀升，2013 年市场均价 5 元/公斤，2015 年市场均价 6 元/公斤，最高达到 8 元/公斤，亩纯收入约 6000 元, 种植慈姑已成为广西农民脱贫致富，增收经济来源有效途径之一。慈姑花为穗状花序，雌雄异花，且雄花雄蕊多数，结实后只能形成瘦果，采用种子繁殖自然条件下很难发芽，成苗困难且当年只结细小球茎。为此，长期以来，农民在种植生产上均采用球茎自留自繁自种，导致原有的慈姑品种种质退化，易受病虫侵害，球茎小，产量低，品质差，严重阻碍慈姑产业健康持续发展。组培苗以其种质纯正，生长整齐健壮、管理方便、易获优质高产、可有效和解决种源带病、品种退化，在生产上日益得到广泛
4、应用；然而由于各生产单位慈姑组培苗的生产技术不同，生产管理和生产技术及产品标准各行其是、不规范、造成产品质量良莠不齐，给种植户带2来损失的事件屡有发生。慈姑组培苗植株生长整齐健壮、管理方便，且易获优质高产，提高球茎商品性，同时可有效解决种源带病、品种退化等。通过制定慈姑组培苗生产技术规程，规范慈姑组培苗生产技术、工艺及过程，以提高效益之目的；同时使慈姑组培苗生产技术及产品质量有标准可依，以确保生产品种纯正、遗传性稳定的慈姑优良品种组培苗产品供给种植户使用，使种植户获得增产增收。本标准的制定，将从源头上为确保繁育的慈姑组培苗实现优质、安全和稳定可控提供技术支撑，对发展慈姑规范化大规模种植，以及对
5、促进广西慈姑产业的持续发展具有现实的指导意义。该标准符合国家产业政策和生态环境保护的要求，实用性、可操作性强，可为慈姑种苗组培快繁及产品优质安全提供技术依据和培训教材。三、国内外标准比对情况目前国内对慈姑的标准主要集中在栽培技术规程上，如江苏省 2014 年颁布的“茭白-慈姑套作栽培技术规程” ； 2012 江苏省“慈姑塑料大棚栽培技术规程”及广西 2014 年颁布“秋季莲藕套种慈姑生产技术” ；目前国内外未见有慈姑组培苗生产技术规程制定。四、课题研究工作和标准征求稿的起草经过1.课题研究工作广西农业科学院生物技术研究所拥有一支多年从事香蕉、荸荠、慈姑等资源收集、品种选育、组培快繁、高产栽培及
6、病虫害防控等研究领域的专业人才队伍，在品种引进、选育、组培快繁技术及组培苗推广等方面开展了大量的研究，多年来承担完成了一批国家、自治区的重大课题，选育国内知名香蕉品种“桂蕉 6 号” 、荸荠品种“ 桂蹄 2 号”等。课题组多年来致力于慈姑组培快繁、新品种选育及栽培示范推广研究。目前课题组承担农业厅和农科院共建项目“广西平乐慈姑试验站” ，选育慈姑新品种“桂慈 1 号” ，繁育慈姑组培苗种苗累计 20 万株。2.征求稿的起草经过2016 年 7 月按照广西壮族自治区质量技术监督局自治区农业厅办公室关于报送 2016 年修订广西农业地方标准项目建议书的通知文件通知精神，为做好标准的编制工作，我单位
7、成立标准起草工作小组；部署了制标工作方案和小组成员分工负责标准起草工作时间安排表，全面启动了我单位开展慈姑组培苗生产技术规程广西地方标准的编制工作。32016 年 7 月至 10 月，课题组对多年来的研究资料进行了汇合、分析和总结，并查阅了大量的国内文献资料，对原起草的企业标进行了完善、补充和进一步修订，确定了广西地方标准的基本内容和思路。并经过编制小组成员反复研讨，形成了慈姑组培苗生产技术规程标准的编制原则及纲要。2016 年 11 月至 2017 年 2 月，经编制小组成员的反复讨论和写作、修改，完成了慈姑组培苗生产技术规程广西地方标准的征求意见稿。五、标准编制原则及关键技术依据和来源1、
8、编制原则。课题编制遵循“科学、适度、可行”原则，考虑标准前瞻性又顾及生产实际，确保标准可以作为政府部门监督、指导生产的依据，在生产上切实可行。2、关键技术依据和来源。本标准按照 GB/T 1.12009 给出的规则要求编制，关键技术依据前期慈姑组培快繁生产实际研究成果及应用资料，符合国家产业可持续发展的有关规定。慈姑组培苗生产技术规程主要生产流程为：慈姑品种来源确定材料清洗取材消毒、接种初代诱导培养继代增殖培养生根培养炼苗培养，其关键技术依据和来源为慈姑组培快繁生产实际研究成果，具体数据结果如下：1.外植体的采集与处理（1）材料：慈姑新品种“桂慈 1 号” ，采集于广西桂林市平乐县桥亭乡，选择
9、健康慈姑球茎和匍匐茎，用自来水冲洗、清理干净球茎顶芽，凉干表面水，用 75%酒精擦拭球茎表面和顶芽，然后切取球茎顶芽上半部，剥取粗壮顶（单）芽，分别装入消毒瓶中。（2）消毒方法：75%酒精消毒处理时间分别为 10s、30s、60s、90s。无菌水清洗 2-3 遍后，用 0.1%氯化汞分别消毒 5min、10min，15min，后用无菌水冲洗 4-5 次。每个处理 10 瓶，消毒灭菌处理结果见表 1。表 1：取材及消毒剂对慈姑茎尖消毒效果的影响材料 0.1%氯化汞（min）75%酒精（s）污染瓶数死亡瓶数（污染+死亡）率（%）10 10 0 10030 8 0 80顶芽 560 8 0 8049
10、0 6 0 6010 8 0 8030 8 0 8060 5 2 70匍匐茎 590 1 8 9010 9 0 9030 7 0 7060 3 0 30顶芽1090 3 0 3010 3 0 3030 2 1 3060 1 5 60匍匐茎 1090 1 8 9010 5 0 5030 7 0 7060 1 2 30顶芽 1590 1 2 3010 1 2 3030 1 5 6060 0 10 100匍匐茎 1590 0 10 100从表 1 可以看出，0.1%氯化汞消毒时间 5min，不论取球茎顶芽或匍匐茎尖进行培养，污染率均高于 60%；当 0.1%氯化汞消毒时间为 10-15min 时，污
11、染率有所降低，在 75%酒精消毒 10-30s 时，匍匐茎污染率低于 30%，高于 30s 时，组培苗出现死亡现象；而球茎顶芽 5%酒精消毒小于 60s 时，组培苗未出现死亡现象。2.继代增殖培养（1）激素种类、浓度对慈姑组培增殖率的影响2.1.1 材料：取桂慈 1 号第 4 代继代材料；培养基基本成分表如下：MS+6-BA 1.0mg/l+NAA 0.5mg/l，MS+6-BA 2.0mg/l+NAA 0.5mg/l，MS+6-BA 3.0mg/l+NAA 50.5mg/l，MS+6-BA 3.5mg/l+NAA 0.5mg/l，MS+6-BA4.0l+NAA 0.5mg/，MS+6-BA
12、1.0 mg/l+ NAA1.0 mg/l，MS+6-BA 2.0l+NAA 1.0mg/l，MS+6-BA 3.0/l+ NAA 1.0mg/l，MS+6-BA 3.5g/l+NAA 1.0mg/l，MS+6-BA 4.0 mg/l+ NAA 1.0mg/l，以上培养基再附加白沙糖 30g/L 和卡拉胶 5g/L，ph5.65.8.2.1.2 方法：每个处理 10 瓶，每瓶接 3 株，每株 3-5 片叶片。培养 25 天进行统计，计算增殖系数，增殖系数=增殖株数接种株数。表 2：不同培养基增殖倍数和效果培养基编号增殖株数增殖倍数 继代组培材料长势 66 2.2 叶片生长高度一致，根较多+，叶
13、色正常 90 3.0 叶片生长高度一致，根较多+，叶色正常 96 3.2 分蘖较多，长势较好，叶色正常，根较多+，叶片生长粗 129 4.3 分蘖多，长势好，叶色正常，叶片生长粗，根较多+。 153 5.1 分蘖旺盛，长势好，叶色正常，根较多+，叶片生长粗。 75 2.5 分蘖一般，叶色正常，有少量根生长+ 96 3.2 分蘖好，叶色正常，根少，叶片生长高度一致 105 3.5 分蘖好，叶色正常，根少，叶片生长高度一致 126 4.2 分蘖多，叶色正常，根少，叶片生长高度一致 162 5.4 分蘖最多，叶色正常，无根，叶片生长细弱，高度一致在继代增殖过程中，继代材料根系长得越多越长，越不利于继
14、代材料增殖和继代材料转接，且会加大增殖材料的污染。在组培快繁过程中为保持品种的稳定性，降低变异率，采取较低浓度激素配方达到需要的增殖效果。由表 2 可以看出，选择、号培养基配方作为慈姑继代增殖培养基。结果表明：配方 6-BA2.03.5+NAA 0.1-0.5较适合慈姑的继代培养，使用该配方的慈姑组培增殖系数 3-5，而且在连续多次的继代中，均能保持繁殖材料良好的分化能力和保证种苗质量的稳定性。（2）光照强度对增殖材料的影响2.2.1 材料与方法 品种：桂慈 1 号。设计三种光强：日光灯（1500-3000LX） ；自然散射光（500-800LX） ；暗培养。培养基：MS+6-BA1.5mg/
15、L+NAA0.01mg/L；培养室温度 2730。接种后第 7 天、第 20 天、第 30 天进行观察记录。6表 3： 光照强度对慈姑组培材料生长势观察结果观 察 结 果编号 第 7 天 第 20 天 第 30 天 恢复生机，叶色正常，但培养继代材料基部褐化 分蘖正常，叶色浓绿，叶片生长较粗状，叶较硬朗。 分蘖正常，叶色浓绿，有少许黄叶，出现轻度老化现象 恢复生机，叶色正常，培养继代材料基部褐化较轻。 分蘖正常，叶色偏淡，叶片生长细小。 分蘖正常，叶色偏差较大，叶片生长细小 有少许叶片生长伸长，叶色淡绿，材料基部褐化最轻 叶色黄白色，叶片生长伸长、细弱，无生机。 分蘖较少，叶色黄白色，无生机。
16、根据表 3 观察结果，第 7 天的观察结果是，三种培养光源对材料长势影响甚微，只在叶色看出少许差异，、两种光源表现叶色正常、叶色转成淡绿色；到了第30 天，三种光源的材料长势存在明显的差异，分蘖增殖较好正常，叶色浓绿、健壮，但有少许黄叶，出现轻度老化现象；分蘖正常，叶色绿淡绿偏差较大，主要是照进培养室内的自然散射光线不均匀，分蘖增殖较少，叶色黄白色，无生机。（3） 温度对慈姑组培增殖材料的影响2.3.1.1 材料与方法 供试品种：桂慈 1 号；培养条件：培养室温度： 25-28， 31-33。光强：15002000LX。培养 15 天、30 天观察记录。表 4：温度对慈姑组培材料生长势观察结果
17、观察记录描述温度编号 第 15 天 第 30 天 叶色、分蘖增殖正常，叶片生长粗状、较硬朗，材料基部有轻微褐化。 分蘖增殖正常，叶色浓绿，出现轻度老化现象 叶色、分蘖正常，生长势较旺，叶片生长粗状，材料基部有轻微褐化。 生长势降低，叶片生长变老黄化，老化现象严重。表 4 结果显示，培养室内两种温度设计，在 15 天前对培养的慈姑组培材料的生长影响不大；但长期在高温（31-33）条件下培养，增殖分蘖较快，材料易老化变黄，增殖能力随之降低。在 25-28温度条件下培养，增殖材料分蘖正常，材料不易老化，茎较粗，生长势较好。3.慈姑组培苗生根培养3.1 材料：桂慈 1 号第 8 代继代组培苗3.2 方
18、法：取生长一致的慈姑组培材料，分切成大小均匀的单株，接入消毒后的聚丙烯生根培养袋，每袋 10 株，每个处理 5 袋。在实验室温度 282，光强 1500lx 的条件下，培养 10 天，然后，移放到炼苗大棚里，自然环境条件下（温度 1545、散射光）培养 20 天。分别在接种后第 5、第 10、第 15 天调查萌芽时间；30 天统计根长、长根数及污染率。表 5 不同处理对慈姑组培苗生根的影响处理 激素组合 萌芽时 生根 根长 污染率（%）7间（d）数 （cm）M1 0.5mg L1 BA + 0.5mg L1NAA 8.2 1.8 6.1c 22.0M2 0.5 mg L1BA + 1.0mg
19、L1NAA 5.2 1.2 9.0a 28.7M3 1.0 mg L1 BA + 0.5 mg L1 NAA 8.5 2.2 5.4d 22.3M4 0.5 mg L1 BA + 1.0 mg L1 NAA 5.4 1.4 8.6b 34.8生根阶段随着 NAA 质量浓度的增加有利于根的萌发，也增加了功能根的数量和根的长度。NAA 质量浓度的增加对发根时间影响不显著；BA 超过 0.5 mg/L 时的发根时间在 8d 左右;功能根数量随着 NAA 质量浓度的增加而增加，根长度也随着 NAA 质量浓度的增加而增加，在 BA 为 0.5 mg/L 时，NAA 为 0.5 mg/L，处理根长为 6.
20、1cm 与 1.0 mg/L 处理根长（8.6cm）差异达到显著水平。4.慈姑组培苗质量分级材料：选择慈姑继代 10 以内不同长势组培苗移栽，分成三组：方法：5-25 天，每隔 5 天观察成活苗数，25 天后统计成活率表 6： 不同质量组培苗移栽成活率成活苗数（丛）组培苗质量分级移栽苗数（株） 5 天 10 天 15 天 25 天成活率（%）不合格 100 96 91 77 52 52二级 150 135 121 119 120 80一级 150 146 142 141 139 92.7最后将移栽成活率达 80%以上的苗界定为合格组培苗，移栽成活率为 90%以上为一级组培苗，统计平均株高、茎粗、增殖倍数、单株叶片数、生根数、根长、植株叶色及变异率数据标准。六、结束语该标准按国家标准化要求，在已经实施完成研究的技术成果和应用的基础上，参考所取得的研究成果编写而成。由于目前国内慈姑组培快繁技术仍无明确的标准，慈姑组培苗良莠混杂的局面在短期内仍难以改变，慈姑种植生产及慈姑加工的企业或个人的标准化意识有待进一步提高，故建议标准发布实施后加强宣传、培训工作，该标准仍需根据实际情况及时加以修订和更新，以适应产业发展和技术进步的需要。广西地方标准慈姑组培苗生产技术规程标准制定组2017年1月8
