1、结核及耐药结核自动化检测技术2 Cepheid我国结核现状结核诊断新技术2015 WHO结核诊断指南更新2014年全球结核发病率来源： WHO 2015年工作报告2014年中国新发病例： 8261552014年中国结核发病率： 68/100 000近几年我国结核发病率逐年下降，但仍然属于结核高负担国家2014年全球耐药结核发病率来源： WHO 2015年工作报告 新发结核病例中的耐药结核比例WHO估算 2014年中国耐药结核发病数新 发病例： 43000复 发病例： 8200我国属于耐药结核 高 负担国家高负 担国家的耐药结核发现我国当前耐药结核防控的问题：不 充分 的耐药病 人发现 ，不 充
2、足的耐药病人治疗5.56%纳入治疗结核诊治出现偏差！n 过多依赖 X-光片或其他影像学检查，忽略了以痰标本为基础的微生物诊断n 过多依赖未经验证、或不能作为诊断依据的测试，比如血清学检查n 只参考传统的微生物检测结果因为这些检测的不可靠性， WHO 不得不采取 非常规 手段，特别提出 反对 这些测试的建议全球结核控制不理想的问题出在哪里？可 诊断 活动期结核感染无法区分活动期结核与潜伏期结核传统技术 现代技术影像学 涂片镜检 培养 皮肤菌素试验 IGRA 分子诊断结核诊断的常见技术n 依据抗酸染色为基础的结核初筛的不可靠性 敏感性为 50% 结核 /非结核分枝杆菌不能区分（ NTM可能占到 4
3、0%）n 以培养为基础的结核确诊和药敏对治疗的影响 2个月才获得药敏结果，导致患者脱落 2个月后调整治疗方案，导致耐药患者的漏诊和传播n 无法更早确诊耐药结核患者当前临床诊治的难点9 Cepheid我国结核诊断现状结核诊断新技术2015 WHO结核诊断指南更新结核诊断新技术 IGRA T-Spot QuantiFeron NAAT技术 等温扩增检测技术 线性探针 基因芯片 熔解曲线 巢 式 PCR 血清学检测IGRA原理：机 体感 染过结核分枝杆菌， T-淋 巴细胞会在再次接触结 核分枝杆菌时， 产生和分 泌 特异性 的 细胞因 子 IFN-操作步骤：1. 反转 10次混匀2. 37C条件下孵
4、育 16-24小时3. 2000-3000g离心 15分钟4. 用移液管取血 浆5. 每 个孔内放 50ul结合 液6. 加 入 50ul血浆，室温 孵育 120分 钟7. 洗 板至少 6次8. 每 个孔内加 100ul底物， 室温孵育30分 钟9. 加 入 50ul反应终止 液10.450nm波长下读取吸光 度11.使用专用软件计算结 果操作步骤：1. 密度梯度离心分离外周血单个核细胞（ PBMCs）2. 洗涤 PBMCs3. 将 PBMCs与特异抗原一同加入到预包被抗 -干扰素抗体的培养孔4. 37C孵育 16-20小 时5. 洗 涤培养 孔6. 加标记二 抗7. 孵育 1小 时8. 洗
5、涤培养 孔9. 加 显色 液10.用 蒸馏水终止反 应11.用肉眼判断结 果QuantiFERON-TB T-SPOT.TB采血量：132月）的儿童阳性率更高 Xpert MTB/RIF: 灵敏度 62.5% (25, 91), 特异性 99.1% (98, 99.9) 涂片 : 灵敏度 33% (8, 7)，特异性 99.5% (98, 99.9)Xpert 检 测儿童痰液，明显优于涂片；检测粪便标本性能同样优异痰 液粪 便 易于使用的样本处理器 (0.6g, 1.2g, 拭子 ) 粪便（ 0.6 g）的性能和呼吸道标本效果相当，且非侵入式样本更适合儿童快速、即时的分子诊断实现检测就治疗韩国，国立首尔大学医学院2011年 1月 -2013年 5月681例患者Xpert MTB/RIF可将从接诊到开始抗结核治疗的平均时间从 21天缩短为 6天南非全国使用 Xpert逐步替代涂片，耐药结核负担明显下降2016 CATA, 南 非 NHLS优先项目负责人 Wendy Stevens教授分享南非经验
