1、艾滋病实验室检测新技术蒋岩 中国CDC性病艾滋病预防控制中心 二十一世纪第二届全国性病暨皮肤病学术研讨会 2004年5月 中国南京,目的 方法 监测 感染检测 抗体检测(EIA/PA/RT)检测策略窗口期检测 抗原检测，核酸检测pooling RT-PCR 诊断 感染诊断 WB检测策略近期感染诊断 STARSH方法 治疗评价 CD4/CD8测定 流氏仪检测显微镜法病毒载量测定 NASBA, b-DNA，RT-PCR耐药性检测 基因型，表型,窗口期检测 抗原检测 核酸检测 Pooling RT-PCR方法,窗口期的范围 定义依据 时间长度 抗体检测 3-6个月新的EIA试剂可以缩短至14-21天
2、 抗原检测 1-2周第四代抗原抗体检测试剂可以使窗口期比第三代抗体试剂缩短4-5天 核酸检测 5-11天,抗原检测 P24试剂盒，第四代EIA试剂（1997年在欧洲正式批 准用于血液筛查） 每一个HIV粒子含有1200个p24抗原分子=0.048fg 每一个HIV粒子含有2个RNA拷贝，如果病毒载量测 定结果为400拷贝/ml，即等于有2.4X105个分子 =0.0096pg p24抗原/ml，800拷贝/ml，即等于有 4.8X105个分子=0.019pg p24抗原/ml 目前最敏感的抗原检测试剂盒的检测阈值为0.01pg/ml 抗原在血清抗体阳转前2-18天既可以检测到,样本（血清/浆）
3、中的p24抗原包括游离的抗原和病毒粒子中的抗原 EIA测定的抗原浓度(F)：病毒RNA拷贝数推算的抗原浓度(A)=0.16：2900 样本号 EIA(Cutoff) EIA(pg/ml) RNA拷贝/ml p24pg/ml F/A 1 3.1 0.1 1,400 0.03 3.1 2 4.7 0.16 3700 0.09 1.8 3 45 1.5 1100 0.03 56 4 320 11 80000 1.9 5.6 5 68 2.3 40000 0.96 2.4 6 22 0.73 190000 4.5 0.16 样本经过预处理，破碎病毒粒子后将有利于p24抗原的检测,病毒RNA检测 第一次
4、病毒学症高峰时间大约在感染后4-11天 病毒RNA检测方法：NASBA,RT-PCR,b-DNA 在高度怀疑有原发感染时，且经抗体检测之后 抗体检测阴性或不确定，有高危行为史或暴露 史，特别是伴有相应的临床表现时，用核酸检 测进行辅助诊断。 早期诊断应用： 个体检测、血液筛查、性病门诊病人筛查、PMTCT,Pooling RT-PCR由于核酸检测的成本很高，方法费时，不可能作为血液筛查的方法，目前在欧洲用pooled血液的方法进行核酸检测，其敏感性取决于pooped样本大小及检测的预值（用特殊的RT-PCR试剂盒检测，以提高敏感性）。可能低于抗原检测，但在个体献血者核酸检测可能比抗原检测更具成
5、本效益。,1473份样本处理过程,新近感染检测抗体检测EIA,PA,RTWB试验阴性抗原检测/核酸检测阳性STARSH新近感染,STARHS法1998年开始，美国Janssen RS等专家推出一种新的实验室方法用于新感染病例的监测，即敏感的酶联免疫检测法（3A11）和非敏感的酶联免疫检测法（3A11LS）:原理：利用感染早期抗体滴度低的特征，以敏感ELISA试剂（3A11）和非敏感ELISA试剂（3A11-LS）对经过一定程度稀释的同一样品进行测定，3A11检测呈阳性而3A11LS检测呈阴性反应者为新发感染，与以往感染的病例区分开来，可以确切地估测新感染人数。近几年，该方法已在一些国家得到了应
6、用，为这些国家制定艾滋病预防控制策略提供了准确和重要的技术支持。,检测新发或新近HIV感染的目的,l无须耗时并昂贵的前瞻性队列研究来识别早期感染。 l由单一的患病样本来估计人群发病率。 l以新发感染的个体为研究或干预对象。 l识别早期感染以进行早期治疗和临床关怀 l评估预防措施和目标 l监测亚型和药物抵抗株的传播 l找出适合疫苗实验的高危人群,TARHS：新发HIV血清转换的血清检测运算法则,暴露 HIV+ AIDS(1)敏感性试验 + + (2)STARHS试验 _ + 在同一时间应用两种不同试验分析血样来检测新发感染 （1） 敏感性试验（EIA）血清转换早期即可出现阳性 （2） 非敏感性试
7、验（改调的EIA：STARHS ） 血清转换晚期才可出现阳性 新发感染血清转换=EIA+& STARHS-,STARHS试验的窗口期,暴露 EIA+ Detuned EIA+ AIDS窗口期=从EIA+到detuned的EIA+之间的时间在血清转换者有所不同，依赖于HIV的亚型和试验Organo Tekniaka, 对亚型B，估计值为： 90% 3.3个月75 4.050 5.125 6.410 8.2,STARHS的应用条件,非AIDS病人AIDS病人有很低的抗体水平，象血清阳转 非HAART治疗HAART治疗病人有很低的抗体水平，象血清阳转,抗体检测策略监测：初筛-复合-确认策略EIA-E
8、IA替代策略 诊断：初筛-复合-确认策略EIA-EIA-PA/RT替代策略（VCT）,WHO和UNAIDS推荐的利用几种快速检测方法，在HIV流行率不同的地区针对不同的目的而进行的HIV诊断方法 目的 流行率 策略 血液筛查 任何情况下 1 监测 10% 110% 2 诊断 征兆/症状 30% 130% 2 诊断 症状 10% 210% 3 策略1：用一种筛选试剂。出现阳性反应时可被认为是HIV阳性。 策略2：用两种筛选试剂。如果第一次检测出现阳性反应则用第二种试剂重复，两种试剂检测结果均出现阳性反应时可被认为是HIV阳性。 策略3：用三种筛选试剂。三种试剂检测结果均为阳性时才可被认为是HIV阳性。,诊断替代策略 1、HIV感染高流行地区的高危人群 2、EIA-1+EIA-2+, 且2次检测S/CO大于等于6 3、在2检测结果的基础上+高特异性试剂检测+,衷心感谢参与本课题的研究人员和研究生 参比室工作人员：强来英，肖瑶，张桂云，裴丽健，张辉 研究生/进修生：张棋，左合拉，刘波，冯基刚,
