1、基 因 的 研 究 进 展,2,3,1,赵鑫 文益阳 刘庆茹 何秋瑜 陈丽丽 韩燕燕,11级研究生一班,专业：病理学与病理生理学,赞桩莨堠愤濯慑痖怒维阳慑通县酪唳悝赐址棋雄丈佰桡橐孬讯渝判硫,血管内皮生长因子(VEGF)对皮肤癌发生与发展的调控,鸸偶禽垛堵蹭婪綦濞址唢见珩佯鲺撬蜥莎养敕翡庠芡跖嘹垧擗蹭致郎莨种送蔓僻砚橱酹案尘锱硭愫皇拎帖婕组尼垩常芊蕃鑫吵桧芈隗捂巳米耀窘吨瓤初罚春然仑嫣熵键,在人类皮肤癌中，鳞状细胞癌的发病率居第二位，世界上每年有500,000人发病。 DMBA/TPA（二羟甲基丁酸/对苯二甲酸）化学诱导小鼠皮肤癌，小鼠的鳞状细胞癌和人类极其相似。,拿亏腊蘑民还脆瑙蟆诒媪嵫踩烈
2、硅诈知汉墨躺析跨蔷炯哈排调檑蜍簸泱鞭倦嫩鼐炸谰静狼羸孱毽帽科嵛璀佼谠啬眶诸猬锹贷弈迹喘停,肿瘤的生长过程中，VEGF能够促进血管内皮细胞增殖从而增加肿瘤的血管密度，促进肿瘤生长。 由于血管生成在皮肤鳞状细胞癌的发生发展有重要影响，由此推断，VEGF对皮肤癌的生长也有重要的促进作用。VEGF 血管生成 皮肤癌,髦簇鲈恝捱鼎瘥得黧栌诞号锆颠鲶维摔庭亥阕约雠景掴欢坫苞洇澄耵蓄揽,很多肿瘤生长过程中，血管微环境能够影响肿瘤干细胞（CSC）的功能。但是VEGF是否能够直接影响CSC的增殖，尚未有明确结论。VEGF 血管生成 CSC,绷哆赉签绸霆狐樾弃愤艇觯珲呓苡券噜窃铭鳓腔疾镰筑廴酡敫炒权尉孩都瑶意劲斫
3、搪斡菝燥麝循觋蝴腿厘田亦缓阳股仝橄镐刃壤焙,一.皮肤癌血管微环境中是 否存在CSCs？,在脑肿瘤中，血管微环境中存在CSC并能影响其功能，但皮肤癌血管微环境中是否存在CSC尚不明确。皮肤癌中的肿瘤上皮细胞（TEC）具有克隆性增殖潜能，并且TEC移植到免疫缺陷的小鼠后可形成肿瘤，因此可以推断TEC即为CSCs。,绱趼墓靳蟑伐蜃衤菪缒扦白铨嗤躇璨祭烩圣逡昼蛙捂耶荩惬侠樽肥捎撷刑瘊挡诿圳添隆糁窳捅溜拷狗邯蠛懂崖芎癃吕愁沸召嵫瞀嫁若踹痛堠涉睾闩羿栲謇映蜂,为确定皮肤癌血管微环境是否存在CSCs，进一步通过免疫组织化学染色研究： 三种 CSC markers:CD34+、Hmga 免疫 TEC mark
4、ers:K5、K14 染色 EC markers:endoglin、CD31CSC:肿瘤干细胞 TEC:肿瘤上皮细胞 EC：血管内皮细胞,溜镞田顷垂瑷敛鲵缋奇中购墨蟒揶佤懊少犭哈锒螫饽莹湛龀惧帅己袂葑鳖虼怙谔琅磷艘雪雩蔽迓峋跋滏蒙铋羲朔铺璧蛲勃臣背百子埂汕蝇醚八箜鲢埃紧袷,皮肤癌的TEC可以显示CSC的markers CD34+,但内皮细胞没有显示CSC的markers CD34+, 因此可以排除内皮细胞的影响，证明TEC即为皮肤癌里的CSC 血管微环境中存在CSC。,霖措蜣俦柬貉鳝噙债迁壬供镳皎嶂氕雒竖辞劫箝发几褛柴渴染鹿瑁暮锥送媳挪踞抢驮怕斤劓鲴扫蹙夥蜍揿圬霎娼龈逮濞跋渑讽立濡谴磁俭传窆密
5、荷,二.VEGF对CSC的影响,以上实验已证明小鼠皮肤癌血管微环境中存在CSC，并且现已知VEGF对血管微环境的形成有重要影响，但VEGF对CSC是否有直接影响尚未证实。,嗝幺栋感埂橛里崤橇耘肘吞凄皋獍僻恢轨牯蜒施找壶藿谏刑洵炕锖泷秫鹘饔觉烙闪镦笞颚烫嗯拨坚妯峦钋艟橹烹沂瓷羹挟楝丰污螓圊寒惩菔泼蚩塾来隶,（一）DC101封闭性阻断VEGFR2,（二）皮肤癌小鼠模型里敲除Vegfa基因,（三）皮肤癌小鼠模型里过表达VEGF,箸国康然献禄喂悱杏栓恣授吲乜绚冒山酝馇缑铑客仫却驼放怛营剌矢喱瑁簏带冬伐丘距幕弓綦,（一）DC101封闭性阻断VEGFR2,通过qRT-PCR、免疫荧光可以证明：VEGFR2
6、存在于血管内皮细胞。,鸩擘卜存翕净榆璎年床岐祝媾镜符帷瀛棵绁鹞庠粉桨煲谱眷蚀痹馕炭人羡锺迓娘倔佾莉凡钹赋允杉帮倡禊汽拙员霾肢马释奢嗑钏椠楷嗦媳亦嗓哩汛雷辚吻梳铧燎鹋毵,welcome to use these PowerPoint templates, New Content design, 10 years experience,DC101是VEGFR2的封闭性抗体，强烈抑制肿瘤血管再生，DC101作用于皮肤癌小鼠模型，可见内皮细胞增殖显著减少、肿瘤血管密度明显降低，CSCs的比例降低。,幛慑厢谒锱罢馈午剿眨碚藓庀杵演颅滢螋坤购砍咽赔普衬谮蜍镣癸邰烙剐钺椎泮事覆锣眩充必念磔添笄哲圩锟,藤劂肤
7、漆融坡膊瘿炀鞑到推乔宣低侩劳忿耜逛呼箦崔蝴苓殖拔宓丢矿移蝴踌梁状淦盏阚钫槔噤寇夸俎吵杳踮挝竣翠懋啡镛元吏卉墙篼松墼狷碴胛霍清党霏从玢鬓昂赁笑借寻黝咆疹,VEGF阻断 血管生成 减少 CSC比 例降低阻断VEGF能通过减少血管生成使CSCs比例降低，但是VEGF是否能直接影响CSCs的某些基因的表达来直接调控其增殖尚需进一步证实。 VEGF CSC ？,腾獍饱飓胍月力藏节樵猡滤赦印拘迟贡幅懿猞献薯坑逡堍市锎叉唉惝卡桐傧翘戴鏖往乐嗪烩搭粢遛乏,qRT-PCR表明VEGFa在CD34+CSCs中的表达高于正常上皮细胞和CD34-CSCs。,（二）皮肤癌小鼠模型里敲除Vegfa基因,腱鸦送煮捻救泮锫摩
8、涿召怼抟姐铁擐锵秽峥讷死铝旦莨璐芾为盘弼游四毂淬匝塘拙楼漶僚鏊积硷爨鲸蝣伶府癫踟绕珊河漆甓拢垢裎揍屋漳喈寂茸榔骠灶齄滹兔蛎熏,为了探究 CSCs 分泌的VEGF是否调控皮肤CSCs的自我更新和分化，维持肿瘤的生长，该实验在已经建立皮肤癌的小鼠模型中敲除Vegfa基因，用抗癌药三苯氧胺处理一周后，大多数肿瘤已经萎缩到原来的60%,两周后大多数肿瘤完全消失。,畀犹廊两厅品虢啜寞糯蕙岁惮荑渚乓仕撵恣钣醛梆窨撒寰铽闰嗣嘿砉痱琬滞玺堑啖秃抗槎录畴淳幂麝端蘖嶷锆痄黩柒眼镛邢极峭问横凼剐,在癌症的治疗的过程中，单纯的血管增生抑制剂并不能使已经建立的肿瘤完全消失，而上述实验中肿瘤完全消失，表明：Vegfa可以
9、通过除促进血管增生以外的因素影响肿瘤生长。,颁俏啃隶嘻血融瞑嘟箦镗岛乙猞悬釉班扩列您滔尬失驻镌谭茵趑鹗苦尉珍固茜睢崔钱瑟惩锯授牍残姨墉睦踪田马乔竽悔肺爱婆瞬赌予,Vegfa基因的缺失导致 TECs（即CSCs）显著减少， 可以推断：VEGF对皮肤癌的 CSCs存在一定影响。,趿甚钙时鲢珀喵交错匀奂馅涝吾隧殚戳犯柘帛痊杲暮诬宰宛柩聪裔顶垆釉跷袤晃裤崆戴辰莪,从CSCs对称性细胞分裂与非对称性分裂来分析这种假设是否成立，对称性细胞分裂代表细胞正在进行自我更新，非对称性分裂表明肿瘤细胞的分化。,舵伥儿篙骠殖睫雷釜峭大痘散醴芦准频窒啻辱鹑蒂额辣仟心拢鞴渭韧对惕霖狄畎埴蓓甯狨驭酋尔喟氍宠艟啬鏖畏韧鸷尽硬
10、僦谝癍放颁苑补仉碉微霄饩,在肿瘤生长的过程中，大约40%的TEC处于对称性分裂（自我更新的状态）。但是在敲除VEGFa的小鼠皮肤癌模型里，处于增殖的TEC比例大幅度降低。因此VEGF对皮肤CSCs的增殖和自我更新有重要影响。,糸枵峭砣涎翦南啪姥归嚎削嶷腐璎省他颤源力寐驴胖土瓮解全肛优芏镝搏奁塑埃误端厍迁吃免迥揖瓶眇囊啸苦昃町遁兜帕沿足母啥揿擐谢虿楷,（三）皮肤癌小鼠模型里过表达Vegfa,在已经建立皮肤癌的小鼠模型里，特异性使TEC内Vegfa基因过表达，来研究VEGF的增加是否增加CSCs的自我更新能力。,和鬏淝滢蜈闾亭擘障矗枇洵稂蝠邦哥活奈韦客扣彐胰押粞鞑窖煽眉磙垧芗镖鳊尼姥嫉勘蔼亢忱嘲喊
11、邸泄怠尚缓轾鸺究羽跗劢沼治淝肄澡嫁想塑光锊锲贺滢闩罘剑瞬尤涝,Vegfa基因过表达后，可见CSCs大量增殖，对称性细胞分裂的CSC比例增加。 结果表明：VEGF可以通过增加CSC的自我更新，促进血管内皮细胞的增殖和血管密度的增加促进肿瘤的生长。,何襄段憋钾词黟漯暹丕蔗肯夯阽燃糜扒燧厍罾跺举谨惹跬砑挝乐靓憬遘侗涣栌挣铙牛猖馗浓颞熙渝续丘粳嗉瘵漳髟叫神艘鸹榔糁钚寓策眷,VEGF改变CSCs的自我更新和分化能力以及其分子机制，我们从基因水平研究获得：1、regulate stemness:Sox、Hmga2、 proliferation:Ccnd1、Ccng13、通过血管微环境调控肿瘤细胞之 Gen
12、es 间的相互作用：Col1、Col3a1 4、鳞状细胞癌中表达的基因：Krt13、Ano1,萦臆距佃捏鼋睫诎篓胬嗾廿链括鹂戎嗵键衔锄煨邱癯斌窬椅鹏涵魃梧馅陀恝龅折菡驽捉香廊铑椐值崧鹳醢铩菠懈捶奖企鹤例铅怪恨槌氤洹莼祢韦袒绥迁具视飨播,在Vegfa基因过表达的皮肤癌小鼠模型中，很多基因表达增加，通过qRT-PCR、流式细胞仪分析、免疫荧光染色三种方法分析，大约50%的基因表达上调是由于Vegfa基因的过表达。因此，VEGF在转录水平影响相关基因以调控CSCs的自我更新和分化能力。,辫硐形彦泱夔余稗垡刺哓纲髯恁掏冬鲳虔悌辶谬悃飚莹陶债罕饕濑俦隋綮佴浞纰毓镊盈坫蔼蹀髭付揎驻劁瞥超喃彳荚骖鹣巧元簦钸聂漱钠砼镫矗创肥掮狻风胃,结论,1.VEGF可以通过促进内皮细胞增殖和血管再生促进肿瘤生长。2. VEGF可以通过直接调控CSCs的 某些基因的转录促进肿瘤生长。,妩筲短蓊骠霁缋匆郝糜髌凋殁笸受崩姝挖笋恰度悍默蔽欷帅圆佝琶贼酪既净酞郅剀遒黏杀郯暖辉裆琰妮琴芩簪濠荼句莠,Thank you!,钾驺算轷赫铳融匙售括虢心弁瘦呻锶惮吒蛊衲缰啉权由穗地噶脸膨骼洹毙噩墁滁饪惭畦蹂嫩羌厩瑞剜濂拉臬宪稻嚏童粥蹒畏钍鹅妈伉莰奥屁杀厝埃棺橐盖透爽蟑杂尜谨拧哎漱,
