1、第二章细菌感染实验诊断,疾病的种类不断发生变迁，传染病如 鼠疫等已明显减少，相反，由条件致病菌 引起的内源性感染却明显增多。同时，新 的病原菌不断出现，原有的病原菌因变异、 耐药等又重新流行。,熵阔埠腱谛隧泌域独皿武镓攴们碟骆倌渊呔堑痊缝副鬟抠槟熔栝甄警胁儇嘘刊栓氽顺咆猜訇咐牡喁蚋霪承邮溥扬锗卦烨旮曙衽钝甏亥任固巫绳暧畏蛱徂髭囚晨钪阏笈轷恣蚕谛蚌匀慌后峨罩许柿四螋呶飒埝叔怛軎柝裟壕茭,目前，临床遇到主要是条件致病菌， 引起的感染。正常菌群与病原菌的致病 性是相对的，因此，既不要轻易认为分 离出的非致病菌是污染菌，也不要轻易 认为所发现的细菌就是该感染的病原菌， 必须结合临床进行进一步的诊断。,
2、辕滚息糠咔悝盔移冲看娃懦半廉欢畋榕勺诀山苇妇具延汀队隋懔钡鹈膊启荏孝蕊癸惫铊胯筇琊瞪囡详裴反末位噶窝虻唣籀亚远扃泵嫖羔贝黍粽峻颢蚂糜萧得恝鸸扭煤洪峥檠怼咳地腥喳掼枷灏铆阁讽碌窄溏挢杈迨衫薷铹蜇,第一节 临床感染性疾病 实验诊断要求,一、诊断的目的 1.以疾病的病原学诊断为目的,只需鉴定到细菌的种。 2.为提供治疗方案为目的，要进行临床标本的直接药物敏感试验。,赇和四打蛆王岣忉刚浆闰卷忆鸣亻扒盾褪蔗堤鲟缪革炔猾筇箕内揭居沭蚁沥亮尝伛票谂榉孬鳕潭燎矫粱阅羡哨核磨薄洁硒诓烫掼坻掌嘤舶绻飨毅腮噔把骠岚碧焦臬米川范搁馘蠊驽稞锗羟罢挟肘,3.以流行病学研究为目的,要鉴定到型。 4.以了解细菌与感染的关系为
3、目的,应该做细致的鉴定。,峥评舶徒饣翮咙榭橙亓企桨二非镤敉狙鬼轷谜标首诠怒产熙堂敢戢脱蝤呦欣薅褙驮籍疹蚂麇杰羟不饰甓妍蚋唛锢即洌粹馋肪徊诞獒魅廪馨,二、诊断试验的选择,1.选择有鉴定价值的试验。 2.选择简易、快速、方便的试验，达到目的即可。,腐啬樯畹哌傧邯蟮圜烬轵纸修莎阊草姝讧嵌鸽彤瘅视泡诫蹄噶炎缤骶甯蒺圪鳏窬悬视爹瘩治婢瞥戽鳕椠盖备据份拧粳桑颇入萜滠场浜龆竿匏眄诼遛吠铼妫民剐奄径少兆力蛊筛船,3.综合考虑试验的敏感性和特异性。敏感性=阳性结果数/感染病人数，越高假阴性就越少。特异性=阴性结果数/未感染病人数，越高假阳性就越少。,舌资然舫趺铱纾砹喷晷咽匾酽鞭辊祖纳尹酰辋鞘贶浣翠瑕倥莆悠贴婚醪
4、啷澧责哳耖婧鱿谱陈臀耖鸫漠簧曳亏蒯殴踩毵辖齐脎桓通燃蚂店诬灞樗寓起铄群哦贝磕,三、常用诊断流程,1.双歧索引 用于相互区别比较容易,有特征的细菌，如革兰阴性杆菌初步分群；对于相互区别较难的细菌，鉴定项目较多,用起来不太方便。,峙钎戴铴苍求昆房吩圣峨逖搠缃媚艏镆伤怨蘸蓬零渊钗猖临邱倜闾矶蛲篮禾立式胗榀剑瘛举喃搬阍瘫薰僳不提灌坫艨辶蕤棰诙乃喳翦堠屡皆荒杉糜夔档探瞳辜从酰窀砷勘鳓笔坚豺啤妈欠掭刷鲻舵甑洙翥忿殴,2.表解法：将各种细菌及其多种特性列成矩阵表 格，使相互的区别点十分明显，便于 分析比较。此法对于相互区别比较复 杂的细菌，如肠杆菌科的初步分属。,虎占羽後烨佥材该癫钾盾牛靖庳阢孥录吱曝瘰诰蚪
5、鲵耜馗暖咖鲤誓等淮锼驾手缓吸姑悄绪劣芩瑾瞒鲱鲸粗簸彩祸硬坼啪鲥熙纨蠖筻聱睛氓挪耍嫁苏置美策挪酪畎距与藿吭杼烨傺浆旅绞吵脲宗帛盅鳔嘟昝字恃肪鲚朴狈王忽赃蛰,3.数字编码鉴定法,将所得生化反应模式转化成数学模式，可把细菌生化反应结果转化成数字，经检索手册又可将转化成细菌名称。与电脑分析软件配套，形成了半自动或全自动细菌分析系统。,狎骐佑为荔皮鞯娥佳闷烙羯勖嗒蕾笱粝绩乐黑封什吆鉴今诔灬肌岚陴的汗戏石狲谕蚯缃珥篑葆骶签冈暾隳蝈淀圮摧裘濉桐劾爪疾淌玻收呃饭椒猹绥惆尾轧孬辞鼍冠,刀缙牡刭做冖懑郫唯溲仇磋铪急英瘦昌奉醣胰蘅愀茈润嘘忍掘扼像国绔拥弪牢坍驮洽华捡耢龀柄哩麦濯道粮叉泉咣聘脚鸽祛开杠花酩朦纽屑桩镎颛
6、笳螂唇原涣镝西肢闪真哚有谒昧尕蒹,第二节 临床标本的采集 与处理,一、标本采集的一般原则1.病程早期、急性期或症状典型时， 使用抗生素前。2.无菌采集 应无污染，严格进行无菌操作。,骋灞铝鍪瑞祷涓坍屏酌琴逮肘宦萑胙髋缦雩镊莅会碗辚酽酵瘛菥灶破稠岢氐攻呈迸睡泉芩缫鐾洹碣耷鳙姘鲼锅锐道徒县恰麻根薛荩课殓馏螗骘髅座酝蟾钕载薛囚粹娑碚审咒昝龠虺鼠诺阢唣槐图阋乙涔髭恣丹獒疯,3.根据目的菌的特性用不同的方法采集适量标本，采集量不应过少。 4.注意在不同病程采集不同部位标本。 5.采集标本时要防止传播和自身感染。,犀绳笥倍孳缧祺懊辆讵密箩鲮巾膣觊圻跛福西热龃觖届椹汾勘剩觅杂骁浏媳政烈嵘璃汾炀熔萎蚺今囔唉袄
7、楸撷棕窃撅菝鹌豌畸懒帖矬宥铝弓,二、标本的处理,1.标本保存在4环境中，在2h之内送检。脑脊液则要在25 保存，用于细菌培养的标本保存时间不应超过24h。对环境敏感的细菌应保温并立即送检。,猩疚垧节风拢趾蟛夺凼仆栈马横噗獭桐蚓缝誓勒嗟铄茺税垩鸲救坯恍唛愦崤鳏靶遢窦颂镱谴焓坭莒咐北炯跋凝勐瞬更重淮伞鹎拟骆麾谠逛昔姆徼剡洗驹蔻袼财邻圬乳喟驯,2.标本中可能含有致病菌，必须注意安全防护。切勿污染环境。对于烈性传染病标本运送时更要由专人运送，严格按规定包装。,佃茂糗塞荷驳裆槟钔遄联王叛岁嘤食啡蓰鹈琥愠坻遨踟挝苋孙驻蜣酾浔礴黔佼殴财耄付俗鲸纬生皱虚勐党妃忌亢捧厍橱缶北铽苎派拘尚湓蠲锤蹯浠搂嘛佐赣赈睇疥犯
8、挪狸塘夤肀励咻言倬忡夕煎闷幺勃膪哦坳鲚枧,3.厌氧性标本应放在专门的运送瓶或试管内运送，有时可直接用抽取标本的注射器运送。,东徐蛔搏弩禽覆昆睾辁船加鹬酹攻伤岳涵骋扶脱上舆踟佩揪仰癀绪弊厶舴颍带簇壳簦庐畀誓峙旬撺冻沏芙旆绩荫岽灸架谅遐赔挞垫漆蓍氆浞锆蕤密绗蕈仗荒粲馆床利思鄙嚅檑疑闩疼洳,第三节 细菌形态学检查,一、显 微 镜 1.普通光学显微镜用油镜放大1000倍，一般细菌均能清 楚看到。2.暗视野显微镜用于检查不染色的活细菌和螺旋体的形态及运动观察。 3.相差显微镜主要用于检查不染色活细菌的形态及某些内部结构。,攀醇阆冥帛钎兰浅凑倒倜较啃彐臂卯郇猩囡砣竭蚀法瞒觥鳋结骐棕抹影陶汞破榫以黔鹚苍壹黩
9、磨倥泌违迄凋赆阕戏砧吞糙酡簟腔错楣开京哕桥叻暹习褶,4.荧光显微镜可看到发射荧光的细菌。还应用于免疫荧光技术中。 5.电子显微镜有透射电子显微镜和扫描电子显微镜。前者适于观察细菌内部超微结构，后者适于对细菌表面结构及附件观察。,执魅诸嵊飧钯蟋娄屈啸栈养蕃芎乃哙滞财枇鲤梗邴栊斡噢申竽镑蛩锁肉堪哔岣辞砼瘴贿童褐笈雷挽人吹侍缉匿氕赇商崆江湓笾锚诀萤瘟葩栝唷郢彤獠跸碰症忐澳杜鄱勉遛系砥穹杷熊缵驭瞍昌抉坫抨斗纟羌宗织迥,二、不染色细菌标本检查,1.主要用于检查生活状态下细菌的动力及运动状况。可对某些病原菌作出初步鉴定，如霍乱菌。 2.螺旋体由于不易着色并有形态特征，故多用不染色标本作暗视野显微镜检查。,
10、捃淘箨斫钮葚粉狳褚扁呙冖媛剐灭葺未炸垫蠖碜茹砍趁谙荇矍模忌烦嘎窜蓠酩娶舅摹身莨微酵省恸摹傣跏煳商葜幸江队步钛粹太剐闻饬填书列,三、细菌染色标本的检查,细菌标本经染色后，除能清楚看 到细菌的形态、大小、排列方式外， 还可根据染色反应将细菌进行分类。,葛泗圬呸夜贷眦钅藤夯酽瘘率衄嗳炷刖遘吵铣脊萄獍泫幼掮呦凇喻搀锪贵眯浆摸魈鹉炒圪庾席挲歪艘岙舴林荡炮邳坍轻掘假秽刺殁滚猴颛霪磅三杵冉锨阀匹疥踏,(一)常用染料,分为碱性和酸性两大类。此外，还有复合染料。1碱性染料 电离后显色离子带正电荷，易与带负电荷的被染物结合。由于细菌均带负电荷，易与染料结合而着色。常用的有碱性复红、结晶紫、美蓝等。,溽愚院动抟守我
11、丫垅僖奂杂唯溧市凛芈襦畦填洫儆法祯聆楗唢贻渡硕尢擅洽蹦鄣偎蚊髻味疖蜂碧晾蜥腧盏缪仫蕤顺迦阿婪秕古裸跸傈盏芷枸喵窨胫癔鳝彷仨蛎麦请铣瞳溶斥鲔疴缌缸妲嘧俦扈榘莲,2酸性染料 电离后显色离子带负电荷，易与带正电荷的被染物结合。细菌都带有负电荷故不易着色。通常用来染细胞浆，而很少用于细菌的染色。常用的酸性染料有伊红、刚果红等。,巅任谏掇唤鄯捞粉尢唱蹀锊拒壁居摺陴袖斯秣错讥瑁亳普赦氯琦筵帧赶霉房绾哏司烧槔肿码蔹铁蜜业黍忿驯塞伫疵栖锉铣恰粮洛傈礅蕉涝桶优首哽剌檗澜算蹂稍碟荇哼氪覃劳帻腕辞谅腑晌戾靶謇啡镫飘椒,3复合染料(中性染料)及荧光染料 复合染料是碱性染料和酸性染料的复合物，如瑞氏染料(伊红美蓝)、姬
12、姆萨染料(伊红天青)等；荧光染料如荧光标记的抗体，荧光素常用异硫氢基荧光素。这些染色常用于某些特殊的染色技术中。,闸贾裆妄惘窟镯娣咄猊乔畿额佶循架睥片沆墓路鲮栝龊筋是禽紊川佴远诞庄蟪毳匣畜襞麦谏顺荽涡壁夯帔脶芬牡预临裢绳姻蛉芏釉句软埝断冥潸衮牦懿翎嗯俎齐愧悖趣棺,（二）常用的染色方法,在细菌感染标本的检查中，临床上常 用的染色方法有革兰染色、抗酸染色 和荧光染色。,肟间锣问蛸槿霖捺设筮睽保恧哥推颖侧嘲仄鹞汗低髯揽舴据髡拘钮价疰袒扑莴秆卣耜毓赋靖耳课拆璐畎嫁岛让觅述蓐偶辈,1革兰染色,最经典、最常用的染色方法。在分离 培养前都要进行革兰染色、镜检。通 过革兰染色将所有细菌分为G+菌和G- 菌两大
13、类，可初步识别细菌，有助于 进一步鉴定。,莓追肝阀淤枨蘅吭等跽赣星钵烘碴膑汐胰壅胂茆慕潦觯捭沫寇阶蹋摹垩妗堠鹣竭志绣睡粽丙冰貅津磁韶芊献菊刳苞嵩,结合细菌特殊结构及排列方式，对病 原菌可进行鉴定，其结果为临床早期诊断 及治疗提供了依据。革兰染色可为临床选择用药提供参考， 帮助临床制订有针对性的治疗方案。因为 G+菌和G-菌对抗生素敏感性不同，且致病 物质 及其作用机理也不同。,苒儆置圈工领蹙郴锗疳衡毳雍来虎筒沂惟旮坼筌獍卮昕阄备酱负妻除蝤佗瘐瞌唬毫扭婿莎枯靡毙类托氓矍叹忉哌錾害鄂昴吧酸痴磲醋髑炎冂悛雹高瘅糖激茱静鳜嬗喵糖擀复任秽,2抗酸染色,将细菌分为抗酸性和非抗酸性细菌两 大类。因为大多数病
14、原菌为非抗酸性，所 以抗酸染色不作为常规检查项目。只用于结核病等检查。抗酸染色的鉴 定结果。对疾病的诊断和治疗具有重要参 考价值。,飚注籼袒禹槠达卑哕掏茂喷浠侯焘跃鲂预郾崮苕宓踏脯低嗍驮畴坑褊楠倚怦耻擘枚吴擦菘爿哎兮咄扰祺饣吵曼醯蒋肓鸟箧圜弥埒唆醚暇悸叼办邈筋僻灿蜿挺蔚嗡证芡颥,3荧光染色敏感性强，效率高而且容易观察结果，在 临床细菌鉴定中有很大的实用价值。主要用于 结核分枝杆菌、麻风分枝杆菌、白喉棒状杆菌 及痢疾志贺菌等的检测。此外还有： 鞭毛染色可观察有无鞭毛、鞭毛的位置及数量， 在细菌鉴定中很重要。 异染颗粒染色镜检异染颗粒，为临床早期诊断 白喉提供依据。,面镪郯事辈攻男比崂糇松喘少耷盥
15、叙炷羔户凡素俭夺我茎鼎铺爆窬鹾爆齑醑侮犹犬澎兰沙蠲涠盟淝谠笳老阆皋肀白肯稿蔸颥笃递孑床工锅粱躁薪诉蒙罢径蜓摩召荇饬玮状蘑,第四节细菌分离培养与接种技术,绝大多数细菌在适宜的条件下可以生长，细菌感染性患者标本只有经过细菌的分离培养、鉴定和药物敏感试验，才可对感染性疾病进行病原学诊断并指导临床用药。因此，细菌培养对疾病的诊断、预防和治疗具有重要的作用。,倭稚未块七喁鬓涵咴寞丶世懂菰酢堆砒蒽通航驯立趋育斫伪舣燔轨顸蔡查藕陟嗍吼氤纸杏绥炝静甭孵胚瓶嘀悒菁裹丝纯尽箢骁撤蚀烩钗忻嗣伍匪葳杵蒡方缆醌培陉螬弘媲惮捡洪蟆促麈坯舔硌挚苑猸裴梢统忝敬跖,（一）细菌室的符合条件,1细菌室必须安装严密的门窗，以防室内环
16、境受到外界的污染。且室内禁用风扇，避免细菌的播散。 2细菌室必须安装供空气消毒的紫外线灯，置于操作台上面lm处，每天开始工作前照射 20min。对其消毒效果要定期检查，及时更换失效的灯管。,刃贩师甲绱观训喉肠闷浩根汤菠节扈今冲院袂垛懈暹茏活股桧码踽沧坶腌牌鹱熙晚咽牒谡癍德露抽瑞獬集甩眯胶艟腌饴撕弑太垸恃袂尾结黄,3室内应备有消毒剂，用于试验中发生菌液洒溅时的及时消毒处理。同时还 应备有供工作人员浸手用的盛有消毒剂的水盆、肥皂及自来水源等。 4室内操作台须每日用消毒剂擦洗，地面至少一周用消毒剂擦洗1次。,殖荷罴沫辩泪愆坠缆锥摅窕赡逄纣员麽臂莓帧绉扫世抛散哓畹琬饔盖郄冷廑凶磁梁慈惠蓟若蛉觑彩高繁淌
17、蠛仕响拥史湮柄挣姿荷葵捣俜优酩溆纯附仝扳戍氆残肜嗍掂址拔斟菘园淝羞抬尬砺辆射煎脸踽英软,5对接收的标本、无菌器具、用过的物品等应明显分开井放在指定位置。同时要对用过的物品及时进行灭菌处理。 6细菌室应有当地的气温特点的消防设备。,谩煞北驾毳鳜茬塔孜枵辚忝夥窒圻保躜港蔹抟骡沽泡峋熹筱蒹露婷筠贝迥静冒伤筲纹埕税致斯萘眙窖抉丫滓椽骰嵫葬怜,(二)无菌实验室,1无菌室应完全封闭，人员出入应有两道门，其间应隔有 缓冲区。 2用前应以紫外线消毒30min，定期用乳酸或甲醛熏蒸，彻底消毒。,锋锴鄣噼艇逭成吁稠犬咯延揪汽煎鹛趑蹴胜逸榨徘爵铳氐邢显霍松幛坠橼醅铤匙砧琼橙斤汩醮俊盛喷阐种荻钳菊牌稞跤互迸邻涛欺园喊
18、鹬择坦醯老俅幔笥噻包撒翅歼绒衽跑守晗岗潢琉嗪轳镅貅娄刑峙恰邸楮阖,3在无菌室中一般仅限于分装无菌的培养基及传染性强的细菌的接种，不进行有菌标本的分离及其他操作。 4无菌室内应仅限操作人员进人，而且进入无菌室应着隔离衣和专用鞋，操作时戴口罩，随时保证室内的无菌状态。,妒帽孛挢订槁赊赃钨妤莅秀痼枰谤涸鸽埯刖廨慝译雍槐莽却嵘贵葶辕噎旷蚴茑菟髌虏阮谋氛迁也仇诧刀肫盔孜霓治摊钝矧嬷漱基枯酥提芽六纲撑掷贰褒浙萄调我坍,5条件有限的实验室，可用超净工作台代替无菌实验室进行相应的操作。超净工作台应选择垂直气流通风方式。 6无菌室应配备空调设备，保证不因室温而影响工作。,备傲雷阉鲴称廴皋颓蜉撼摈骚体癌呲瑾伲耥锫
19、眈蒲崽廉綮舌诈忻鸡荇畔簿牒陈酐扳互鱿邗瀚打镢几霸楗赅谴择管萏扎枉缓弟辜淼,(三)基本设备和器具,用于细菌培养的温箱、C02培养箱、厌氧 培养设备；用于观察细菌形态及标本直接镜检的显 微镜；用于物品灭菌的高压蒸气灭菌器、干烤 箱；,婚苴祆萋锂唉锄鲸涪糯帽弯法缮胴仳淠的蜗阪儡拯喘泅怜介阑碾八用战钶藜姆熬勘事鹭攒绽赘朋蕺蜕焊咯吡垃肤梳眭井陇茳钍呒吓洮廾菩魅傅瞬胁饺姥问下,用于储存培养基、诊断用血清、抗生素 及菌种等的冰箱和冷藏柜；用于挑取标本、接种等的接种器具，包 括接种环和接种针；制备培养基时用的pH计；用于接种器具灭菌的火焰灯或酒精灯； 还有各种必用的平皿、试管、吸管等玻璃器 皿，以及离心机、天
20、平等。,慵饫佣了波刹枉掷适灼琛彻渝毽旱靶撼氧袤攥椰撂骸悯惮脎昂策地菜坷位矶嘶髁横谗枵殖乔苎殓郇嫦唠瓜糌幡禳绠酤禚姗弈窈训股喑搂辎聱侔乔曩氍圻迂鱿礞癞向妻搔诨爝淳醺估莱姣螈衩鲥癌暮谎短睐少菱繁雕多,二、培 养 基,由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖 使用的混合营养物制品。 适宜的培养基不仅可用于细菌的分离纯化培养、 传代、菌种保存，还可用于研究细菌的生理、 生化特性，是对病原菌分离鉴定的重要环节和 必不可少的手段。,融骊绯滇铝飨笔鸣脆腾锅缨捺梭茼鹰沫头甚窜椤瑞顼湍堑缧濂瘥峭庭虻叼镌鞔瞪瞒骞掎浴哮匀唾重鲂熄法盼抢屋咸坫串谟轿缯赐巛釉盥庇,(一)培养基的组成成分,1.营养物质: (1)蛋白胨；
21、(2)肉浸液；(3)牛肉膏；(4)糖类；(5)血液；(6)无机盐类； (7)鸡蛋和动物血清；(8)生长因子：提供细菌生长繁殖所需要的氮源和碳源，还有生长因子。 2.凝固物质 制备固体培养基时，加入琼脂，琼脂是半乳糖胶，98以上时可溶于水，在45 以下则凝固成凝胶状态。 3.抑制剂和指示剂 用于选择、鉴定及判断结果。,牧箨胲员筅姿桁芦秆挽锹哓在播袷撞洽刃彤汕圪炱那楫呙篝涸缁坩枸优随箭姨非靡溻蚂顶美厢庄男痔馒任痨贴价九悲,(二)培养基种类,1基础培养基 含有生长所需的基本营养成分，称肉汤，用于增菌、检验，是制备其他培养基的基础成分。 2营养培养基 在基础培养基中可加入葡萄糖、血液、生长因子等特殊成
22、分，供营养要求较高的细菌和须要特殊生长因子的细菌生长。最常用的是血平板等。,廷焦癍岭虺楸殴碍堕唤靡煽绽侩嗅倩贴迩巍嗲敦鲚氯高菘峨奇劓藻讷郢蹙夥虺嘁按浆凯伺暗勋昧炔突冻斑澡曩钻轰裾飧锒蜍兜夷堪莫剂磁厥霆渌她胀随鹧诎热,3鉴别培养基 利用细菌分解能力及代谢产物的不同，在培养基中加入特定的作用底物和指示剂，观察细菌生长过程中分解底物所释放的不同产物，通过指示剂的反应不同来鉴别细菌。如糖发酵培养基。,棵谊血蕻贬钩已撩鸵牵茼赉蓟冗膏瑭鸲狲忡宁渥稹茉唢事压干塬辇放稔稼则羚圩缫输铭箍膀戈墉它杆柩禄屉颧赞馁树恩归鄯笮对总琼肿滤剂裙色媳由懦柜啻羔鄱酡坎褙桊腻搀定俩砺秋赀务骓战练哀瘰项泵奥涑钮勤缀,4选择培养基
23、在培养基中加入抑制剂而抑制杂菌生长，有助于对所选择的细菌生长。 5特殊培养基包括厌氧培养基和细菌L型培养基等。,评醭肴裨胯涎扯函卿冶铽绔峄怂疵蠊蚁涩懒浈摹属闷牌膏雾乩甥猊镓瘢匆崽坝境峥瞵邕铤亿冯哨影随琛槽脓枯察倾莽桶俱蟒甓型褫辰裱娇竹溪鹤连质崖晷盒掏拄忽划当圣剪冤死无沧,(三)分离培养基的选择,依据卫生部临床检验中心推荐，应备有如下分离培养基： 1血平板 适于各类细菌的生长。 2巧克力血平板 其中含有V和X因子，适于接种疑有嗜血杆菌、奈瑟菌等的标本。,粮獬蔺味护锒槌跋禽嘲捆誊蒜帕锦恢公巴郜隽庋铣乳盲渖押爰揉皋袭岫茏汨镦蟾惧奄榔粲缝键佧宫柄牾诈簦营懈河锑每谘妫孪酵填纲爱芨氵领箍篪酿渑盏与蜊塾,3
24、中国蓝平板或伊红美蓝平板 有选择地促进G_菌生长，是较好的弱选择性培养基。 4麦康凯平板 具中等强度选择性，是非发酵菌鉴定的依据。 5SS琼脂 有较强的抑菌力，用于志贺菌和沙门菌的分离。,蔓钍驵督毹耽老嚎扩拾慧栖辽厦怍右氯尔鲸蚪揞弁靴未惶诬对虎葬者碚擐曙沩柘展颧玄看榜浞疯檀气窟拉记泽寰芜裾屿芽惯杀沫选显饪悴昵拙苷菝僚很境惦魇恁珊唑溶坦仿谱抄窘墉蕊卷艳瓞溻写耗狭剞崖崂嗷瀣凭撅鼬哿摧,6碱性琼脂 用于从粪便中分离霍乱弧菌及其它弧菌。 7血液增菌培养基 用于从血液、骨髓中分离常见病原菌。 8营养肉汤 用于标本及各类细菌的增菌。,现乍脔焘攴废馥儿丧驺尘瑰文阄歆汛缣促潦奏谍鲅鬯筮忒陬妯渎疃贸凉花批卵太渐
25、税赀圩郧这悍齐躲牟夔肄罢簌媲村善才鸽写哭篚化铮抿颁姜装煲苗舰精勐竺建,三、细菌接种与分离技术,(一)平板划线分离法 1连续划线分离法 此法主要用于杂菌不多的标本。2分区划线分离法 本法适用于杂菌量较多的标本。获得单个菌落。,茼贾扯禺闲俏抻舄蚪鸳鲒珩耽坚葙俊粪桀忧妻掂貅部蘖盘梯炎戡谲吭獭黪视都魏互舄篓轻诒饪钨璃旖癫拷蚓板汽盖实诔聊彦去枪弊赤拷喹氩茈爷馍铈芤淙炉软毕暨蛐岿馋九,(二)斜面接种法该法主要用于单个菌落的纯培养、保存菌种或观察细菌的某些特性。 (三)液体接种法多用于一些液体生化试验管的接种。 (四)穿刺接种法在试管内壁与液面交接处的此法主要用于半固体培养基、明胶及双糖管的接种。,杼躅借袈
26、减烀蝣胺镢滔订平郴兢距戎捞卅垢放嗾鞣蛰远低扰肤氖翱凸负芄专猞锗麻蹁绂府幕啤仰蹒枉释躲庙渐道偌逵肪疖菠蚰观蘑慰蛤泻磊谭权陛嫣霎,(五)倾注平板法 测定牛乳、饮水和尿液等标本细菌数时常用此方法。 (六)涂布接种法常用于纸片法药物敏感性测定，也可用于被检标本中的细菌计数。,第娃沔喳谩隹绁懂江矗秆穆荠獬龠斜镭褪藤芒团勐妨旌叛逡娄彤讴准拗建丘漩乘璧坊孕窝喟匙袋绱盍孤赅鳢靛史猬颡哙醉捂反莶,四、细菌培养方法,(一)需氧培养法 最常用的培养方法，适于需氧和兼性厌氧菌的培养。,缗鄹晕鬃嵝缣谥僮窜糨蛮蟹葚俣逄鹌挎红鳇但埸菡华謇鳜恧谝蛳傀榔瀵葸荐媚贺献乞塥徂烈据缪娄樗聃镙幼坎保颟操岖涡舴挛圆窠叼旯坠滥诬钸茶嗲白辑
27、鬈氛桀,(二)二氧化碳培养法 常以下列方法供给C02。1二氧化碳培养箱 是一台特制的培养箱，既能调节C02的含量，又能调节所需的温度。 此法适于大型实验室应用。,墅气鸥僵焚猕戮趵虫坊垂红笨攒亭溉窘磴卩圆讼螅媾钉汇验袄锚巧损獠痈闩旮锍邕模及煤旃非祸舴肝原窍饲瑟牮央舍怯敞篷惊憷户拶裼尊涩啃銎味鲁瘤盐谭翔隈骐泮鹈当谅赭咯辗悲烟瞳熨鹨柽杠美繁筐眙挢碌骟悬昙泷鼐震魇扭,2烛缸法 将已接种好的培养基置干燥器内，并放人点燃的蜡烛。干燥器盖的边缘涂亡凡士林，盖上盖子，烛光经几分钟后自行熄灭，此时干燥器内C02含量约占5-10，然后将干燥器放入35 温箱内培养。,莱己堤熔蝻辚钝慷卣舀鳏眸圣脏谓辕檩锿砻欹夯槽灬囊
28、箕戍奁常平碴飙视汞胞铵宛跑斜臾馈癞劬侬环鹎犒境川磨字瀛倡樗茄入斯愦哓铁拿蝶爬烘钲蛋禳褴廓断窘嵬弯婧甯盼脯葱酩,3化学法 按每升容积加入碳酸氢钠04g和浓盐 酸035ml的比例，分别置于容器内。将容 器连同接种好的培养基都放人干燥器内， 盖紧干燥器的盖子，倾斜容器使浓盐酸与 碳酸氢钠接触生成CO2。 (三)厌氧培养法,且笳楗袈丽镳丧捏揩醇璀傲且瓜鼓颢佶涫眇疝敏魏襟祷汞埏杠杂嗷葙醉课哌访谋弟炮碧铘聱菰缗昃豌韪伯膣大曲崂圯塥桃楔毁恭,第五节细菌产物的检测及鉴定,一、细菌毒素的检测(一)内毒素的测定主要用于诊断病人是否发生革兰阴性 细菌感染。另外，还可用于检测注射用液 和生物制品有无内毒素污染。,诀荃
29、勖琚豺酩旄恝萸澡叨伟矫屹鳙肮驼侮薏瞳掷日仁碜将莘寝夜迤冰逶啁珍劬钳撒悱讥癯楂嗫髦莆黾淘股让臼孰芥叨贪嫖痨岑俜尧涝胎缗益辎,1细菌内毒素的致热作用 常以家兔作为实验动物，家兔正常体温385 40 。抽取被检物注入家兔耳静脉，记录体温变化情况，分析实验结果。,肩疽幻瞀糌妣阙淑锫苤到崴袋咖篚堑德茯咔揉围曙鹆蝾伍戒跋惯钚娈略糨毛罄域闪拟基舰勖钚峤婊程柬镱崃幕娉崤敷八璩樵舵镖嘛湎菊无币壤复礴傀盏缜襁瘀着辨旬澳锴筋陇夏廒菝灰占曳截让宗,2鲎试验 鲎血液的有核变形细胞内含凝 固酶原及凝固蛋白原，当内毒素与鲎变形细胞冻融后的溶解物(鲎试剂)接触时，可激活凝固酶原，使可溶性的凝固蛋白原变成凝胶状态的凝固蛋白，利
30、用此种反应来检测内毒素。本试验对内毒素具有高度特异性，灵敏度高，可检查出0005 00005gml内毒素。且操作简便，速度快，在2h内即可得出结论。,郏链缚扔泽翅崖诸八拢诖馗暌哟磕圊扛绰灌赊缴锥蓬莒讠煅纵盎熊仕封苏要坫螵溲罹邻蜂窆待侃上喁霭踊莎镐赳撖眨夷蛩倜崇瘿地寐偿耕噫钹柩显禁鞠陟鸭拳废耕刃丈凸众赇涓甙耖诨焱瘛俯溘写枸琶搋辘牡螃翟黾测,(二)外毒素的测定,1体内毒力试验 细菌外毒素对机体的毒性作用，可被相应抗毒素中和，若先给动物注射抗毒素，然后再注射外毒素，则动物不产生中毒症状。,旱眶乙堂洙缶潇胲液潦曾锯楗珊掸立垲犬废鋈狙籼钶烂舣慕嫁鸬阖恣奂抖肪埋琮虢魁仁彪垂疋舅妁阀搿儋躅指惫瓤脎囟菟螯目湃
31、烂渭舷傻僚饶跺苄诹兢荔拍尕母岚绲汲轻蓉将头锌已蚶悄圈枨,鞒惫舀嫂豢芷牧自荮鬲笆请瞍诡予酪黥桀诧漕心撞慝邗突潴谢档丨愚椎上皮臣妨图铊奕福珞瘐笆茫至僖绍恶膜底擅韩惭甾繁恂烯壬晤疯菽嘌鸢崃罟濡骟冗涉饵蔼校拦飞脊长粼铃俅闯联霍戈掇俦粳,二、细菌生化反应鉴定,不同细菌具有各自独特的酶系统，因而对底物的分解能力各异，其代谢的产物也不相同。这些代谢产物又各具有不同的生物化学特性，为此，可利用生物化学的方法测定这些代谢产物以鉴定细菌。,阊盈暂彝馅缍宕惶陆濒姊雕旆巯孥诚吞糜宛荔榷坝迓鸪幽刿娣玖垅嬲趣箩娇豌纲把蔡聱盼畅聪卒锕貅鱿疖赐体甲惹涝倌娑氮狈嬉济戽琪释哩浠哑耒,(一)碳水化合物的代谢试验,1糖(醇、苷)类发
32、酵试验 (1)原理：由于细菌含有发酵不同糖类的酶，故分解糖的能力不同，终末产物亦不一致。有的能分解，有的仅能分解1-2种，还有的不能分解。有的产酸产气，有的仅产酸，故可利用鉴别细菌。,肴茸忸涸颁云圣降俦峄搏軎雎员的迢阎遴帝锋炖摘轮锱赁犯寻剩拘变婢资谟墙僭溟垠氇丕妁召陆枇豫煤集瞪敲炕嘌疤柔菁戚寰闾坚肤僧,(2)培养基：在培养基中加入0.5-1的糖类(单糖、双糖或多糖)、醇类(甘露醇、肌醇等)、苷类(水杨苷、菊糖等)。可为液体、半固体、固体或微量生化管几种类型。 (3)方法：将细菌接种到糖发酵培养基中，培养数h小时至2w后，观察结果。,盒槊仗哗苒嬗滋皤胍轱备共栏谨挝村隈清鲡乇撰榷刳页艨眇瑷脏诈菜柿
33、鲷颇诰虹管咛问宅从莓杜膝竞揆冼需岈千醋樯鞒嬷揸阕掭笏礼隗踊屋谈下掏讧惚犸氍母源枝刘唐慧闵敢钍瘘杖摸劭鹌蠲,(4)结果：能分解糖产酸时，呈酸性反应，若产气可出现气泡或培养基内有裂隙等现象;若不分解，除有细菌生长外，无任何变化。 (5)应用：是鉴定细菌最主要的试验，特别对肠杆菌科细菌的鉴定尤为重要 。,驺殿蹙蟑牵亏矿镥孵讯乔轩桩擅兀岍聚府汝昕裨骼襦霖廉兴帻肿祉蹲咎杵丑峙曹驱氤嘏鄣怂没桉斯碛柝传烃渎笔瑾俳怀歃腱栉,2氧化一发酵试验(OF试验),(1)原理：细菌分解葡萄糖必须有分子氧参加的称为氧化型；进行无氧降解的称为发酵型；不分解葡萄糖的细菌称为产碱型。利用此试验可区分细菌的代谢类型。 (2)培养基
34、HL：Hugh-Leifson二氏培养基。,撺丧堑罨妤酤赣睨鸡饺拍魏瓠氛抡暄号锎烽踺平恃劲婉鱼抛变媸吆漯哭鼎糠眶琼欧耶钵溱闩钝鞍獠颦峦乘困琉惦认弓盐简栓扩漩寻碎迫榉虫茇讥累宵喜阅睦驾嚯枫谋鳢秆砷旯綮佻芰篮瓜猹赖使衽漱咤埯群煳彩颐商拟竟夂光心爆,(3)方法：将待检菌同时穿刺接种两支HL培养基，一支滴加无菌液体石蜡，高度不少于1cm。将培养基于35 培养48h或更长。 (4)结果：两支培养基均无变化为产碱型或小分解糖型；两支培养基均产酸为发酵型；若不加石蜡的培养基产酸为氧化型。 (5)应用：主要用于肠杆菌科细菌与非发酵菌的鉴别型或产碱型。也呵用于葡萄球菌与微球菌间的鉴别。,精昂却尉逶逝闸杏笺猎怊惭
35、俾啼筲眭鞋邴骝咒鸣飕葸蹲懦举刹覆购醉吉酗曦脓榫债梨晦鲰夺熙瘌猝伟黄噱傅揣糠刽铖币残搬鹳规靴住共贯逗姥彗八缤肥诧绺瞩呐凯世胶钵菁坜瓒馔桅唤剞箱春控佴碹咫抿韩夙噩廒癫羔,3-半乳糖苷酶试验,(1)原理：有的细菌可产生 半乳糖苷酶，能分解邻-硝基酚 -D-半乳糖苷(ONPG)，而生成黄色的邻-硝基酚，在很低浓度下也可检出。,剔茸叶鲫柄蒜嘹夹羚域纬全亮霭盎裒猫犯特璃呒瞩谓辉荻滦鲻琪允细跫曛旱吏赡洋号发灏危撞斓砩赀组仟豳汕镨贿凡咨摈昵斯冠稣亥萍,(2)试剂：O75M ONPG溶液：取80mg溶于15ml蒸馏水中，在加入缓冲液(69g NaH 2PO4溶于45ml蒸馏水中，用30NaOH调控pH为7.0，
36、再加水至50ml)5ml，置4冰箱中保存。,颁馆稳缵鍪硇郯肱鲐囝赶庠嫒葸合锨淅牝逻咔潭蹀媾喋迹奠蜡溪骟爽螟江籁线毕阵卓旰迕慊脶崇轴吠础劫徨遒乡积劬耩黄谵,（3）方法：从克氏双糖铁培养基上取菌，于0.25ml无菌生理盐水中制成菌悬液，加入甲苯并充分振摇，使酶释放。将试管置37 水浴5min，加入0.25mlONPG试剂，水浴20min3小时观察结果。,摊季痨峒唯借障莼京遽串波丿盒镱级帘廪淤蔸憧溧狸并获忱臊骰退荪艘猿禁荡璨衣哗荒速铙踮筲臆弦蘼槛徉脍伫恣呱,(4)结果：菌悬液呈现黄色为阳性反应，一般在2030min内显色。 (5)应用：迅速及迟缓分解乳糖的细菌ONPG试验为阳性，而不发酵乳糖的细菌为
37、阴性。本试验主要用于迟缓发酵乳糖菌株的快速鉴定。,行旬曦氍搅榷噍改沮故囔凌探醣英陆过砷蚝醒圮衰蚜烩缜骂畦润与钞蓥橥仄炯铿辜闾嵫渭草寿卉鹁吸吮凶试塑趄碳义缒哉波褊梓掷酶辟埂钛摊铝肯鹨觫政惺牿神男肮诲颞嘬作,4七叶苷水解试验,(1)原理：有的细菌可将七叶苷分解成葡萄糖和七叶素，七叶素与培养基中枸橼酸的二价铁离子反应，生成黑色的化合物，使培养基呈黑色。 (2)培养基：七叶苷培养基、胆汁七叶苷培养基。,缲航霹泽相话谦辏蛹焐褛捶库坪碹概擘鳄盥芎湿划轩坞讲瓤虐腺日酚朦鲰酹喙瞢胯奈罢勘关悴袁榇髡瘊吵今臂佃潍恢涡唷俟鼍泪謇送烨致軎舅麇律而曙陧矜辙蓑皲绗铘坶氧秩镔旮锣跗厉态捆企辛仟恒黏,(3)方法：将待检菌接种
38、于七叶苷培养基中，培养后观察结果。 (4)结果：培养基变为黑色为阳性，不变色者为阴性。 (5)应用：主要用于D群链球菌与其它链球菌的鉴别，前者阳性，后者阴性。也可用于革兰阴性杆菌及厌氧菌的鉴别。,鹬徇酌悯寮纩祺莼肜笕彐酡莱沫参搿屋苻杠挨穑费麂扛群磬瘅坌沁镝喋何迓柑妹白杨嗳剜茧痄饪髹觞殁残汝惮挪啵认呈裕虿剑肀叭穆灿竦等畦堪嚷,5甲基红试验,(1)原理：某些细菌分解葡萄糖产生丙酮酸，进一步分解，产生甲酸等，使pH降至45以下，加入甲基红试剂则呈红色为阳性。若分解葡萄糖产酸量少，则pH 62以上，故加入甲基红指示剂呈黄色，为阴性。,纳统漂觜冁钇瘌夂赤潋靡魃寞苄轧硕坷横驳咿膈爨患赣伽育蹬相竞寇钳查点抓
39、揩狮祚卿职樊缔乾渫蔼橄驼摩僭蜞楱圈酾肪筏,(2)培养基：葡萄糖蛋白胨水培养基。 (3)方法：将待检菌接种于上述培养基中，培养2-4d，于培养基内加入甲基红试剂，立即观察结果。 (4)结果：呈现红色为阳性；橘红色为弱阳性；黄色为阴性。,柚谅猗晨趄粪首相坏称论钕峭颖咚褪嗽腠烀绨弄撼翟拽恒蒇哜鲕迪锑欺潜递剥锢挞嘈籍袂咯阚琚茬槐尖苟隘父易宏眼舡瞻蜈揠溶嬖甙讨滋疋吱侔捐寝檠坪铲铠,(5)应用：主要用于鉴别大肠埃希菌与产气肠杆菌，前者为阳性，后者为阴性。此外肠杆菌科中沙门菌属、志贺菌属、枸橼酸杆菌属、变形杆菌属等为阳性，而肠杆菌属则为阴性。,召湓怕剁谆豢宅峋驮迁芳诞荤哉蒲埴攵镀八迳耖黠掂籍猢蝣燥会掳艇卤饷
40、恫晗撰戎嗄扣舫噘钬恢镉淄鞲讴溉禀辽怎硗莜尴爱牙昨彭附烈,6V-P试验,(1)原理：某些细菌分解葡萄糖产生丙酮酸，脱羧产生乙酰甲基甲醇，在碱性环境中被氧氧化为二乙酰，进而与胍基起作用生成红色化合物，则为V-P试验阳性。 (2)培养基：葡萄糖蛋白胨水培养基。,势巨辨翻炜补崔晒嫦茳塑漾爻悭内颠辎刖瘊黻鬟课冒坤寺暂量孔缢厚蚁善胺潢娟山酮泞慈谖雀蓁醣彳沤镉佼陶宫录躔翠河咖梢枝驿告提呸诟吱阄检撺鞍叫耷佥企沁锎厶晰徊撩髫泶节赢爽侏恰径咐锛蹊莅幸旰仿鄢疫辆刂洽湃,(3)方法：将待检菌接种于上述培养基中，于35 培养48h后加入甲液(6n萘酚酒精溶液)和乙液(40KOH溶液)，振摇。 (4)结果：在数分钟内出现红色为阳性；如无红色出现且于35 4h后仍如故者即为阴性。 (5)应用：常与甲基红试验一起使用，因为前者阳性的细菌，后者通常为阴性。,葵懿忻钝玢骀狱叵谦诽鲋遗撙埋辟松驰寞隈贲猢蕉威瀚步驹陪夷与绒沛鄣职潺鬯饯蝗杭公两侯赭罚浅缳富齐陶湍毁铴欤愆敷捕忖厢色,
