1、重大出生缺陷无创产前筛查,内容提要,一、染色体非整倍体概述（唐氏综合征为例 ）,BRCA1,染色体非整倍体疾病临床表现,21、18、13-三体综合征是人类最常见的三种染色体疾病，患儿面容特殊，绝大多数为严重智力障碍及器官畸形，对家庭和社会造成巨大危害和负担。现代医学对胎儿染色体疾病尚无有效治疗方法，最好的方法是在孕期通过产前筛查及诊断，发现异常并及时采取相应措施,21三体核型分析图,21三体形成原因,21三体发病率与产妇年龄关系,三、现有的产前筛查与诊断手段,产前筛查母血清学筛查颈项透明膜厚度筛查 产前诊断羊水穿刺绒毛取样脐静脉穿刺,风险计算,侵入性诊断方式,传统筛查方式的缺陷,英国的统计显示
2、，1996-2002年全国因羊水穿刺导致的抬儿流失数为5619名,无创产筛技术原理的提出,胎儿DNA来源和特点,来源： 1 胎儿细胞通过胎盘渗透到母血中，被母体免疫系统破坏，胎儿DNA残留下来； 2 胎儿细胞凋亡； 3 胎盘滋养层细胞的凋亡基本特点： 1 含量有一定的变化规律。妊娠第4周开始可检出胎儿游离DNA，随着孕周增加而增加，存在个体差异，平均浓度。 2 分娩后短时间内消失，平均半衰期为16.3min (4-30min)， 2h就无法检出。再次妊娠不影响检测结果。 3 DNA片段较小，平均166bp左右。常规技术很难检测,母体和胎儿的混合物,Unique reads (单一序列读取 ）:
3、 no mismatch, one location,母血浆DNA+高通量测序,以21-三体为例：100 DNA单位 /毫升血浆。其中，95个单位来源于母亲， 5个单位来源于胎儿,母亲Chr 21： 952=190,正常胎儿Chr 21： 52=10,21-三体胎儿Chr 21： 53=15,母亲Chr 21： 952=190,母体外周血中 Chr 21=190+15=205,通过大规模并行测序，获得分布在每条染色体上的真实的核酸片段数量，经过计数与比较： 正常胎儿 或者 21-三体胎儿,无创产前基因检测流程,医 院,枫林龙鼎实验室,10-13.5周,早孕期筛查(检出率85%),中孕期筛查 (
4、检出率81%),15-20周,16-22周 羊水穿刺 （流产率0.5-1%）,24-28周脐带血取样 （流产率1-3%）,12-24周 无创产前基因检测 （准确率99%）,无创产检的优势,适应症和禁忌症,适应症：1、经B超确认的单胎、活胎孕妇2、孕周在12周至24周之间3、可同时检测18三体，13三体，45,X，47,XXY，47,XYY，47,XXX等多种染色体非整倍体疾病禁忌症：1、双胎或多胎2、孕妇本人是染色体非整倍体患者3、孕妇接受过异体输血、移植手术、干细胞或免疫细胞治疗,抽取孕妇外周血5 mL，采用 EDTA 抗凝； 采血完毕后，轻微颠倒采血管4次，并及时将采血管放置于4冰箱中，在
5、4小时内进行血浆分离工作。 【注意事项】 采血时孕妇无需空腹； 采血管为 5 mL EDTA 抗凝管。做7项检测需要用10ml抗凝管； 颠倒混匀时动作不能太剧烈，防止溶血。,样本采集,1、将采血管在4 环境下 1600转/分离心10分钟，上清（血浆）分装到置于冰盒上且已编号的2.0ml的 EP 管中。【注意事项】1）严格核对样本编号、确保编号唯一； 2）开启离心管时，不能碰到管内盖；3）吸取血浆过程中不要吸到中间层的白细胞。2、上述血浆 4 16000转/分离心10 min，冰盒上将上清转入已编号的2支2.0ml EP 管中，每个离心管转入600ul血浆。同时在每个2.0ml离心管上标记样本编
6、号、血浆体积、分离日期。【注意事项】1）严格核对样本编号、确保样本编号唯一；2）开启离心管管盖时，不能碰到离心管内盖；3）将分离好的血浆贴上对应的条码并用封口膜密封，密封结束后立即将血浆放入-20 或-80 冰箱中，避免反复冻融。【注意事项】全血须保证在4小时内进行血浆分离；分离后的血浆在-20 冰箱中可保存3天，长期保存需存放于-80 冰箱。,样本前处理,样本储存与运输,1、全血样本在冰袋(4 )条件下运输，且在4小时内送达样本接收处，样本接收后要立即完成血浆分离。 2、血浆样本在干冰（-20 ）条件下运输，并确保样本送达时有干冰剩余，到达后及时存放于-80 冰箱中，禁止将样本在室温下放置。 【注意事项】 1）泡沫箱的规格：壁厚6cm、外径长39cm、外径宽32cm、外径高35cm。 2）干冰用量：10公斤/2-3天；15公斤/4-5天；根据运送时间的长短，相应增加干冰用量。,无创产检的可信度研究,报告式样,Thank You !,
