1、分子生物学实验佟丽 2008年9月18日,北京师范大学生命科学学院,课 程 设 计 思 路,基因克隆、筛选与表达基因组DNA的分离与Southern杂交植物总RNA的提取与RT-PCR,分子生物学实验指导（第二版） 魏群 主编 高等教育出版社 分子克隆实验指南（第三版） 黄培堂 等译 科学出版社 基因工程原理（第二版） 吴乃虎 主编 科学出版社,参 考 书,实验成绩（100分）,期末成绩（共100分，占总成绩的20%）,设计报告 70分 实验总结及体会 30分,平时成绩（共100分，占总成绩的80%）,实验技能 40分实验报告（三份） 40分实验态度和实验习惯等 20分,实 验 报 告 写 作
2、 指 南 基本要点： 标题页、摘要、引言、实验材料和方法、结果、讨论、结论、图表(附：实验记录本）。 实验报告的评分标准： 标题页（5） 摘要（中、英文，10） 引言（10） 材料和方法（10） 结果（20） 讨论（20） 结论（5） 图表（10） 实验记录本（10）,实验报告参考标准,实验报告参考标准,实验报告参考标准,实验报告参考标准,实验报告参考标准,实验报告参考标准,实验报告参考标准,实验报告参考标准,注意事项:参与：参与实验操作；参与讨论和分析数据； 参与实验报告的写作；参与绘制图表。 学术表达：实验报告对整体实验的清晰表达， 即数据真实，推理严谨， 语言流畅，思路清晰。学术道德：严
3、禁剽窃！,为保证正常的实验秩序，培养良好的实验习惯，特规定实验习惯成绩总分为二十分，全部扣除者，视该科实验成绩为不及格：实验课迟到者，扣一分；早退扣一分。无故缺席实验者，扣三分。不穿实验服做实验者，扣一分。不写实验预习报告或复制指导教师的电子教案者，扣二分。实验过程中不写实验记录者，扣二分。,关于实验习惯记分若干规定,实验结束后，不将使用的玻璃仪器冲洗干净者，扣一分。向水池扔有可能堵塞下水道的废物者，扣二分并罚款二拾元。使用仪器设备未按要求操作造成仪器损坏者，根据损坏情况扣二至五分，并按仪器损坏赔偿制度给予相应罚款。使用酒精灯、电炉等不注意造成实验台面烫伤或使用强酸、强碱等溶液腐蚀实验台面者，
4、使用仪器时，将其腐蚀或污染者扣五分并罚款一佰元。实验过程中，不按要求乱拿乱放别人准备的试剂、材料等 影响他人实验者，扣五分。,不参加实验室布置的大扫除，不整理实验所使用的仪器和实验台面者扣一分。不参加值日生工作者，扣二分。实验课堂中请关闭手机等通讯设施，若影响课堂教学，扣一分。对实验中心布置的实践教学活动，不参加者，扣一分。其它违反实验室有关规定者，根据实际情况作出相应的处理。对实验习惯表现突出者给予15分奖励。,上课时间：上午8:00-下午5:00, 提前5分钟进入实验室； 请假须医院病假条或班主任签字的假条； 上课时需穿实验服，不许在实验室内吃东西； 实验课期间不许打闹、闲聊等，保持课堂纪
5、律； 随时保持实验台的整洁； 认真作好值日工作，离开实验室须向教师声明； 必须做到课前认真预习，课间做好实验记录、课后详细总结实验结果并按时提交实验报告；,日 常 要 求,严格遵守实验室的各种规章制度；爱护实验器材；实验器材损坏必须按规定赔偿；用完仪器后必须复位；注意门窗水电的安全；在实验过程中负责并保持实验台面和柜体实验台面、地面、 实验仪器有序、整洁和卫生师生之间、同学之间、实验班之间一定要互相协作配合保持 公用房间卫生,日 常 要 求,要求：仪器在未经培训前，不得擅自使用；严格按操作规程使用仪器；有些仪器必须有教师在场时才能使用，并由教师操作。 违反规定的使用者，造成的后果由使用者承担。
6、,电 子 天 平,样品、试剂等的称量,预热 量程,天 平,pH 计 精确的pH值测定,预热 清洁,移 液 器 液体试剂的精确取量,量程 方法 回位,干燥烘箱 灭菌器,培养基、试剂、耗材等的灭菌及部分耗材的烘干,安全 适用范围,湿热 高压 程序,实 验 准 备,一、洗涤实验用的玻璃器皿 二、配试剂 1. SDS储液: 10%(w/v)，共配制 100mL,室温保存。 2. 75% 乙醇: 用95%乙醇配制，500mL，分成四份。 3. NaOH： 5 mol/L，共配制 100mL,胶塞封口。 4. HCL： 2 mol/L，共配制 200mL。,5. EDTA ： 0.5 mol/L，共配制
7、200mL。 6. Tris： 1 mol/L， 共配制 100mL。 7. 1TE： 共配制 100mL，分成四份。 8. 50TAE：共配制 400mL，分成四份。 以上试剂未特殊声明者均40C存放，试剂须做好标记并存放到指定位置，使用后放回原处！,！,SDS储液: 10%(w/v)，共配制 100mL,室温保存,75% 乙醇: 用95%乙醇配制，500mL，分成四份。,杀菌浓度：70%75 杀菌原理：裂解菌壁 配制建议：95%乙醇体积50075%95%蒸馏水定容至500 mL 注意事项：可用酒精计测定酒精密度。,NaOH： 5 mol/L，共配制 100mL,胶塞封口,NaOH，强碱，易
8、吸潮 配制建议：迅速称量溶解热较大，注意搅拌 注意事项：腐蚀性强，注意防护。 胶塞封口。,HCL： 2 mol/L，共配制 200mL,HCL，强酸，易挥发 相关参数：37% 的浓HCL， 摩尔浓度为 11.6 mol/L 配制建议：通风厨内进行；沿壁向水中加酸，最后定容 注意事项：腐蚀性强，注意防护。 不要用移液枪取/量浓HCL。,EDTA ： 0.5 mol/L，共配制 200mL,Tris： 1 mol/L， 共配制 100mL,1TE： 共配制 100mL，分成四份,TE,含EDTA的Tris-CL缓冲液，其中：EDTA为1mmol/L，Tris-CL为10mmol/L。 配制建议：用已经配好的EDTA和Tris缓冲液 调配，MilliQ水定容至100mL， 高压灭菌，超净台内分装至四份，4保存。 注意事项：配制时，注意量的计算。,50TAE：共配制 400mL，分成四份。,1. 枪头1mL 1盒 200uL 2盒 10uL 1盒/实验组 2. 小指管 1.5mL 30个3. TE 4. 蒸馏水 100mL,三、高温灭菌试剂和耗材,预习：基因的克隆与表达,作 业,谢谢大家！,,
