1、肿瘤相关巨噬细胞与高危型人乳头状瘤 病毒感染宫颈癌的临床相关性 严瑞明 陈晓静 王薇 梁莉 周琛斐 魏文斐 易红艳 吴湘光 刘国炳 钟梅 余艳红 南方医科大学南方医院妇产科 南方医科大学南方医 院病理科 摘 要： 目的 探讨肿瘤相关巨噬细胞与高危型人乳头状瘤病毒 (hr-HPV) 相关宫颈癌的 发生发展的相关性。 方法 收集112例宫颈组织临床样本, 包含16例正常宫颈组 织, 55例宫颈上皮内瘤变和 41例宫颈鳞状细胞癌, 运用免疫组织化学法检测宫 颈组织切片中的CD163+巨噬细胞的表达水平, 并对免疫组织化学法检测结果与 临床数据进行统计学分析。 结果 免疫组化结果显示:CD163+巨噬
2、细胞的细胞密度 随着宫颈组织恶性变的程度增加而增多, 且相关性分析示两者呈正相关 (P=0.000) 。同时, CD163+巨噬细胞的细胞密度在 hr-HPV型宫颈癌中明显上调 (P50%, 01 分为低水平 表达, 23 分为高水平表达。 1.4 统计学分析 采用SPSS19.0 软件进行统计学分析。使用卡方检验分析频率表, 使用 Spearman 秩和检验来评估各分类变量之间的相关性。分布表表示为均值均标准差。所有 检验为双向检验, P0.05 认为差异有统计学意义。 2 结果 2.1 CD163 巨噬细胞增多与宫颈组织恶性转化相关 CD163主要表达于巨噬细胞的细胞膜上, 呈棕黄色颗粒状
3、。CD163巨噬细胞的表 达随着宫颈组织恶性进展 (从正常组织到SCC) 呈现上升的趋势 (图1A) , 正常 宫颈组织、 CIN I、 CIN以及SCC中CD163 巨噬细胞的计数的均值分别为 5.4、 39.1、69.4 以及132.1。同时SCC中CD163 的表达量明显高于不同时期 CIN (P0.05) , 而不同时期的 CIN 中的CD163的表达水平也高于正常宫颈组织 (P0.05) , 此外, CIN I 与CIN之间 CD163表达水平的差异也具有统计学 意义 (P0.05) , CD163 巨噬细胞的密度与宫颈癌的发生发展呈正相关 (Spearmans rho=0.700,
4、 P=0.000, 图1B) 。 2.2 CD163 巨噬细胞表达量与 hr-HPV 的感染相关 在112例患者中, hr-HPV的感染率分别为正常患者12.5% (16例中有2例感染) , CIN I患者 68.9% (29 例中有20例感染) , CIN患者92.3% (26 例中有24 例感染) , SCC 患者 100% (41例中有41例感染) 。 hr-HPV阳性患者组织切片中CD163巨噬细胞计数密度显著高于hr-HPV阴性患者 (P0.05, 图1C) 。从表 1中可以看出, CD163 巨噬细胞的表达量评分与 hrHPV 感染和宫颈组织恶变程度具有显著的相关性。其中 hr-H
5、PV阳性患者的 CD163巨噬细胞高表达量评分所占比例均比 hr-HPV阴性患者高, hr-HPV阳性患者中 CD163巨噬细胞高表达量评分所占比例为 92.0% (88 例中的81例) , 而hr-HPV 阴性患者仅为25.0% (24 例中的6例) 。在所有 hr-HPV阳性患者中, CIN I (58.6%) 、CIN (84.6%) 和SCC (97.5%) 中CD163巨噬细胞高表达量评分 所占比例较正常宫颈组织 (12.5%) 中高, 同时也比 hr-HPV阴性患者的 CINI (13.7%) 、CIN (0%) 和SCC (0%) 高。 2.3 CD163 巨噬细胞与宫颈癌的 F
6、IGO 分期和淋巴结转移相关 将112 例患者的组织切片结果与临床资料进行一一对应, 如表2所示, CD163巨 噬细胞在瘤周集聚程度与淋巴结转移与否有着显著性差异 (P=0.005) , 同时在 FIGO分期中的期与期之间有着显著性差异 (P=0.004) 。然而CD163 巨噬细 胞在瘤周集聚程度与患者年龄或病理组织学分型无明显相关性 (P=0.179, P=0.571) 。 图1 CD163+巨噬细胞在宫颈组织切片中的表达情况及分析结果 Fig.1 CD163+macrophages were upregulated with the progression of squamous ce
7、rvical cancer.A:CD163+macrophages in normal cervical tissue, cervical intraepithelial neoplasia (CIN) I, CIN II-III, and SCC;B:Upregulation of CD163+macrophages was positively correlated with the degree of malignancy of SCC (r=0.700, P=0.000 by Spearman correlation coefficient test) ;C:CD163+macroph
8、ages was significantly upregulated in SCC with high-risk human papillomavirus (hr-HPV) infection.Error bars represent the meanSD of 3 independent experiments.*P0.05 vs hr-HPV-. 3 讨论 hr-HPV 感染被认为是宫颈癌发病的重要因素。一般从 hr-HPV最初感染到癌前病 变, 最终演变为宫颈浸润癌至少需要 1015 年。这些提示hr-HPV感染只是一个 始动因素。 肿瘤生长不仅取决于恶性肿瘤细胞的遗传改变, 也取决于基
9、质、 血管、 浸润炎症细胞等TME 的改变。TAMs作为TME 的重要组成部分参与了肿瘤的发生 发展8-10。 研究发现, 病毒感染与多种肿瘤的发生发展密切相关, 可以促进炎 性细胞 (如TAMs) 及炎性介质 (如细胞因子、趋化因子等) 募集到 TME中, 参 与肿瘤恶变过程。大量研究表明 TME中TAMs 的聚集与病毒的感染密切相关 11-12, 而病毒感染导致的慢性炎症也会引起 CD163 巨噬细胞的功能活化13, 我们研究发现CD163 巨噬细胞在hr-HPV阳性患者中具有更高的表达量, 提示 TAMs可能参与 hr-HPV 感染导致宫颈恶性病变的进展过程。 我们进一步研究发现 CD1
10、63巨噬细胞与宫颈恶性转化之间有着显著的关联性 (Spearmans rho=0.700, P=0.000) , 其表达量随着宫颈恶性病变进展而增高。 该结果提示巨噬细胞浸润增多及其伴随的炎症微环境加重可能参与宫颈恶性病 变的发展。TAMs对肿瘤的影响是多方面的, 不仅能通过血管内皮生长因子 C促 进脉管生成14-15, 同时能够增强肿瘤细胞增殖、迁移和侵袭的能力16-18, 而且能与TME中肿瘤相关成纤维细胞 (CAFs) 以及细胞因子相互作用, 抑制免 疫系统对肿瘤的监视与清除能力19-21。这些结果均提示 CD163巨噬细胞在肿 瘤的发生发展中起着关键作用。可以猜测 TAMs 在宫颈癌T
11、ME中可通过一些分子 机制直接或间接地参与了宫颈癌的发生发展, 需进一步的基础研究来明确 TAMs 在宫颈癌组织中的作用。 表1 CD163 巨噬细胞表达量评分与 hr-HPV感染相关性 Tab.1 Correlation of CD163macrophages expression withhr-HPV infection 下载原表 表2 CD163 巨噬细胞细胞数量与临床资料相关性 Tab.2 Correlation of increased CD163macrophages with clinicopathologic features of the patients 下载原表 在对CD
12、163 巨噬细胞与宫颈癌患者临床病理参数相关性的研究中, 我们发现 CD163巨噬细胞与宫颈癌淋巴结转移以及FIGO 分期有显著的相关性。卵巢癌患 者晚期腹膜中的巨噬细胞浸润较卵巢癌早期病变患者明显增多22。 在其他恶性 肿瘤的研究中, 亦有类似的发现。研究表明, 肿瘤局部浸润的TAMs 可产生多种 促进肿瘤生长的细胞因子, 并释放基质降解酶促进肿瘤的侵袭转移。 宫颈癌局部 活化的巨噬细胞表达大量 VEGF-C, 与肿瘤周围癌性淋巴管形成有关, 提示TAMs 可分泌多种因子促进宫颈癌淋巴管生成从而促进淋巴结转移23。 这与我们的研 究结果相吻合。 宫颈癌分期进展和淋巴结转移是宫颈癌患者治疗失败
13、、复发与死亡的主要原因 24-25。大量文献显示, TAMs 在肿瘤组织中浸润与肿瘤患者的不良预后相关 9,26-27。但 TAMs 是否可作为宫颈癌预后的预测因素在既往的研究中是有争议 的, 有研究者报道 CD163巨噬细胞与宫颈癌治疗后的生存期有着显著相关28。 TAMs的增高可以导致淋巴管密度增高, 从而促进淋巴结转移降低患者的生存时 间29。但也有文献报道 CD68+巨噬细胞与肿瘤复发之间没有显著关联30。本 次研究因样本量有限及随访数据的不足, 无法将 CD163巨噬细胞与宫颈癌治疗 的预后和生存时间之间进行进一步分析, 需要进一步扩大样品数目及随访数据 方可验证CD163巨噬细胞是
14、否能够作为评估宫颈癌治疗预后的因素。 本次研究通过免疫组织化学法和临床数据评估 CD163巨噬细胞与hr-HPV感染宫 颈癌之间的相关性, 发现宫颈组织恶性变的程度与 CD163巨噬细胞的表达成正相关, hr-HPV感染与巨噬细胞中 CD163表达量具有显著相关性, 提示 CD163巨 噬细胞可以作为hr-HPV感染所致宫颈癌的前瞻性预测因素, 但两者在宫颈癌发 生发展之间的具体相互作用机制仍需进一步研究以明确。 参考文献 1Crow JM.HPV:The global burdenJ.Nature, 2012, 488 (7413) :52-3. 2Lu HH, Clauser KR, Ta
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