1、专题 3 植物的组织培养技术课题 1 菊花的组织培养一、学习目标1.说明植物组织培养的基本原理。2.学习植物组织培养的基本技术。3.进行菊花或其他植物的组织培养。二、学习重点与难点重点：1.植物组织培养的相关概念和过程2.影响植物组织培养的因素3.植物组织培养过程中使用的无菌技术。难点：1.影响植物组织培养的因素。2.植物组织培养过程中使用的无菌技术。三、学法指导：小组交流合作 一对一检查通关四、自主学习一、植物组织培养的相关概念和基本过程1. 植物组织培养的相关概念（1）细胞分化：植物的个体发育过程中，细胞在_ 、_ 和_上都会出现稳定性的差异，形成这些差异的过程就叫做细胞分化。细胞分化是基
2、因_的结果。（2）细胞的全能性：_的植物细胞仍然具有发育成为 _的潜能。细胞全能性是组织培养的基本原理。（3）愈伤组织：由离体的植物器官、组织或细胞在一定的培养条件下经过_ 过程形成的组织，就叫愈伤组织，愈伤组织的细胞排列疏松而无规则，是一种_ 的呈无定形状态的_。（4）脱分化：由_的植物组织或细胞产生_的过程，称为脱分化，又叫去分化。（5）再分化：脱分化产生的愈伤组织继续进行培养，又可以重新分化成_ ，这个过程叫做再分化。（6）外植体：用于离体培养的植物器官或组织片段。2. 植物组织培养的基本过程移植试管苗完整的植物体二、影响植物组织培养的因素1.内部因素：不同的植物组织，培养的难易程度差别
3、很大。同种植物材料，_ ，_ 等也会影响实验结果。菊花的组织培养，一般选择 _的茎上部新萌生的侧枝。2.外部因素：（1 ）营养条件 常用的是_ 培养基，其主要成分包括：_，如_；_ ，如 _ ；_ 等。（2 ） 植物激素 植物激素中_ 和_ 是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键性因素。_、_ 以及_ 等，都会影响实验结果。（3 ） 环境因素 离体的植物组织、器官或细胞组织培养脱分化 愈伤组织组织培养再分化 根、芽等器官人为使用植物激素控制_ 、_ 、 _等条件也能影响植物组织培养。菊花组织培养，一般 PH 控制在 _ ；温度控制在 _ ；每天用日光灯照射_小时。【思考】(1)生长素使用的先后顺
4、序、用量比例不同分别会造成哪些影响？三、实验操作过程1.制备 MS 固体培养基实验室一般使用 4保存的配制好的培养基母液来制备（1 ）配制各种母液。配制母液时，大量元素浓缩_ ，微量元素浓缩 _ 。常温保存。激素类、维生素类以及用量比较小的有机物可以按照 1mg/ml 的质量浓度单独配制母液。用母液配制培养基时，需要根据各种母液的浓缩倍数，计算用量。（2 ）配制培养基。配制 1LMS 培养基时，将称量好的琼脂加入 800mL 蒸馏水，加热熔化，然后加入蔗糖 30g,依次加入母液，定容至 1000mL。_，然后分装到锥形瓶中，每瓶分装_。（3 ）灭菌。高压蒸汽灭菌2、外植体消毒选取菊花茎段时，要
5、取 _。无菌技术包括培养基消毒灭菌和植物材料（外植体）的消毒灭菌。对培养材料进行表面灭菌时，一方面要考虑_；另一方面还要考虑植物材料的 _。不同药剂、不同植物材料，甚至不同器官要区别对待。一般情况下，细菌污染可能是由接种人员造成的，真菌污染可能是_灭菌不当。过程：流水冲洗软刷刷洗流水冲洗过程流水冲洗软刷刷洗流水冲洗_无菌吸水纸吸干外植体表面 体积分数为_的酒精中摇动 23 次，持续_无菌水清洗无菌吸水纸吸干外植体表面质量分数为 0.1的_ 溶液中 12min无菌水中至少清洗 3 次3、接种接种前，用体积分数 70%的酒精将工作台擦拭，然后点燃酒精灯。所有的接种操作必须在酒精灯旁进行，并且每次使用器械后，都要用火焰灼烧灭菌4、培养接种后的锥形瓶最好放在_中培养。培养期间定期消毒，温度控制在 18-22，并且每天用日光灯光照 12h5、移栽6、栽培附：一般来说，容易进行_的植物，也容易进行组织培养。【思考】：（1）实验操作过程中为什么要进行一系列的消毒、灭菌，实验中是如何做到无菌操作的？（2 ） 你打算做几组重复？你打算设置对照实验吗？
