1、文件编号:SDYYJYK-SOP-MY1版序：001陕西省水电医院检验科免疫室 SOP 文件 时间：2015-01-01责任部门：检验科 页码：共 99 页陕西省水电医院检验科免疫室 SOP 文件（SOP）拟定人：批准人：批准日期：启用日期：制定人 修改人 审核人 批准人 批准日期文件编号:SDYYJYK-SOP-MY1版序：001陕西省水电医院检验科免疫室 SOP 文件 时间：2015-01-01责任部门：检验科 页码：第 1 页共 99 页目录文件名称 页码 免疫实验室的设置及人员情况3免疫实验室工作管理程序4免疫实验室规章制度6免疫实验室工作流程19免疫实验室操作步骤20免疫室内质控失控
2、分析管理制度42外部质控血清的制备和保存44仪器的使用维护45冰箱的使用、操作和维护程序47桂林优利特 URIT-660 酶标仪分析仪操作维护规程.49深圳雷杜 RT-3100 洗板机的标准操作程序62可调式移液器的标准操作程序64安徽航天 SSC-1500B2 生物安全柜的标准操作程序.66电热恒温水浴箱操作规程72制定人 修改人 审核人 批准人 批准日期文件编号:SDYYJYK-SOP-MY1版序：001陕西省水电医院检验科免疫室 SOP 文件 时间：2015-01-01责任部门：检验科 页码：第 2 页共 99 页目录文件名称 页码长沙湘智 XZ-4A 离心机操作规程 73上海三申 YM
3、-50A 高压蒸汽灭菌器操作规程75室内质量控制的标准操作程序78室间质量评价的标准操作程序87实验室意外和事故处理92免疫室保密制度程序95免疫室应急处理程序97本操作程序（SOP）的变动程序.99制定人 修改人 审核人 批准人 批准日期文件编号:SDYYJYK-SOP-MY1版序：001陕西省水电医院检验科免疫室 SOP 文件 时间：2015-01-01责任部门：检验科 页码：第 3 页共 99 页免疫实验室的设置及人员情况为了更好发挥传染病检测在传染病防治工作中的作用，根据全国传染病检测技术规范对于传染病的检测要求，我院检验科设置了免疫实验室。为了使检测工作能够正常进行，保证传染病检测结
4、果的正确性和准确性，我们不仅对工作环境条件和检测设施加以整改，而且建立了完整的实验室标准化操作规程，以确保传染病检测结果的准确有效。传染病检测实验室分为清洁区、半污染区和操作区，配备了专用的的生物安全柜、电脑、冰箱、酶标仪、洗板机、恒温培养箱、离心机、高压消毒锅等设备和安全防护用品等。根据传染病检测实验室工作的需要，我科配备从事检测工作人员 6 名，其中专职工作人员 2 名，中级卫生技术职称人员 1 名，所有人员从业年限均在 5 年以上。免疫实验室负责人： 薛军卫人 员： 魏晓丽张小玲陈丽丽景利娜倪宇芹制定人 修改人 审核人 批准人 批准日期文件编号:SDYYJYK-SOP-MY1版序：001
5、陕西省水电医院检验科免疫室 SOP 文件 时间：2015-01-01责任部门：检验科 页码：第 4 页共 99 页免疫实验室工作管理程序一、目的对传染病四项（甲肝、乙肝、丙肝、梅毒） 、肺炎支原体、风湿四项、生化标本检验前处理工作全过程进行控制，保证检验工作符合规定要求，提供可靠的检验数据和有效的检验报告。二、范围适用于本实验室开展的各类医学检验工作的各个环节。三、职责1、工作人员负责住院检验样品的接收。3、负责组织协调完成检验任务，并负责对检验工作质量的监督。4、工作人员负责执行检验任务，做好检验记录，填报检验结果。5、报告授权审核人负责检验报告的签发、发放。6、实验室负责人负责检验资料的归
6、档保管(计算机)工作。四、工作程序（一） 、检验工作分类本实验室的检验工作，根据标本的来源不同分为采样检验和送样检验，根据工作性质分为常规标本检验和检验质量抽检委托复检。（二） 、采样及样品管理采样执行陕西省水电医院检验科文件临床检验标本采集与送检手册 。样品接收、分发和保管处理，执行本科程序文件标本管理程序和标本采样管理程序 。（四） 、标本检验制定人 修改人 审核人 批准人 批准日期文件编号:SDYYJYK-SOP-MY1版序：001陕西省水电医院检验科免疫室 SOP 文件 时间：2015-01-01责任部门：检验科 页码：第 5 页共 99 页检验执行本科程序文件标本检验管理程序和检验项
7、目标准操作规程 。（五） 、检验依据1、国家标准方法；2、部颁标准方法和检验规范；3、卫生技术部门推荐使用方法；4、有关科技文献或杂志上发表的方法；5、自编规程的使用执行检验方法确认程序 。（六） 、检验实施检验人员按检验标准或试剂说明书的要求按时完成检验任务，并按程序文件记录档案管理程序做好原始记录。（七） 、检验报告的编制、复核和签发按本科程序文件检验报告管理程序执行。（八） 、检验方法控制检验必须按全国临床检验操作规程规定的方法或标准检验方法进行，也可用经本科技术负责人批准的非标准检验方法进行。其他检验方法不得采用。制定人 修改人 审核人 批准人 批准日期文件编号:SDYYJYK-SOP
8、-MY1版序：001陕西省水电医院检验科免疫室 SOP 文件 时间：2015-01-01责任部门：检验科 页码：第 6 页共 99 页免疫实验室规章制度一、实验室工作制度1、热爱党，热爱社会主义，坚持四项基本原则，全心全意为人民服务。2、努力学习政治，刻苦钻研业务，发扬救死扶伤，实行革命人道主义，对病人如亲人，态度和蔼，有问必答。3、热爱本职工作，服从分配，遵守劳动纪律，做到不迟到、不早退，不擅自离开工作岗位，不私自干私活。4、严格执行规章制度，尽职尽责，及时做好各项检验结果记录，自觉抵制不良之风。5、识大体，顾大局，关心集体，团结友爱，不背后议论，搬弄是非。6、讲究文明礼貌、积极参加爱国卫生
9、运动，美化环境，保持医院科室整洁，安静、大方。7、免疫实验室应制定严格的管理制度和标准化操作规程，工作人员必须充分了解各项规定并严格遵照执行。二、岗位责任制1、岗位责任制是保证工作质量和医疗安全，提高工作效率的重要环节。建立岗位责任制，做到人人分工职责明确，事事有人负责，立足本职，团结互助，相互协调，保证各项任务的胜利完成。2、免疫实验室由有实践经验的技术人员负责。3、牢固树立把质量放在第一位的思想，在工作中必须加强检查和复查制度，以保证血液质量及医疗安全。制定人 修改人 审核人 批准人 批准日期文件编号:SDYYJYK-SOP-MY1版序：001陕西省水电医院检验科免疫室 SOP 文件 时间
10、：2015-01-01责任部门：检验科 页码：第 7 页共 99 页4、交接工作必须认真负责，须核对实物和记录，对工作一般情况、存在问题和注意事项应进行具体交待，否则，发生问题由交班人负责。5、职工临时因故离开工作岗位，必须将工作委托给能胜任该项工作的人员，否则，发生问题由原担任该项工作者负责。6、新参加工作的职工，在未熟悉和掌握工作前不能独立工作不能顶岗位，在确能掌握经考核合格后方可。7、建立免疫实验室专用的精密仪器和重要设备专责岗位制，其他人不得任意使用。严格按照仪器操作规程操作，不可擅自乱改设置。8、凡是一物多人使用的，除共同负责外，应指定一人为该岗位责任制负责人，负责指导正确操纵，定期
11、安全检查，经常维护保养，保持正常运转，该负责人有权制止任何违章操作和有害设备安全的行为。9、人员职责分工：每日正班人员负责样品的采集，接收，执行检验任务，做好检验记录，填报检验数据，签发报告及实验室仪器设备的日常维护和保养。副班人员负责协助正班人员做好实验室的所有日常工作，并负责对检验工作质量的监督，检验报告的复核、发放，结果的解释，实验室室内消毒以及每日医疗废弃物的消毒处理。实验室负责人负责检验资料的归档保管(计算机)工作。三、标本管理制度（一） 、样品的采集和处理传染病检测最常用的样品是血液，包括血清、血浆和全血。常用的血液样品的采集和处理方法如下：制定人 修改人 审核人 批准人 批准日期
12、文件编号:SDYYJYK-SOP-MY1版序：001陕西省水电医院检验科免疫室 SOP 文件 时间：2015-01-01责任部门：检验科 页码：第 8 页共 99 页1、血清样品采集和处理（1） 、用一次性注射器（或真空采血管）抽取一定量静脉血，室温下自然放置 12h，待血液凝固、血块收缩后再用 3000r/min 离心 15min，吸出血清备用。2、抗凝血样品采集和处理（1） 、用加有抗凝剂的真空采血管（或一次性注射器抽取静脉血，转移至加有抗凝剂的试管） ，反复轻摇，分离血浆和血细胞备用。（2） 、应根据实验要求选用适当的抗凝剂(K 3EDTA、肝素、枸橼酸钠)。3、采集样品注意事项（1）
13、、采集样品原则上应按临床采血技术规范操作。（2） 、采集样品时应注意安全，建议采用真空采血管及蝶形针具，以避免直接接触血液；接触感染者病人血液/体液的操作,应戴双层手套。（3） 、所有的血液、血清均应视为有潜在传染性，都应以安全的方式进行操作。（4） 、应象操作未知传染风险样品一样，小心存放、拿取和使用所有可能有传染性的质量控制和参考物质。用后的包裹应进行消毒。（5） 、采血时一定要注意安全，采血用一次性注射器，谨慎操作，防止发生刺伤皮肤和造成外界污染。（6） 、离心机要使用密闭的罐和密封头，以防液体溢出或在超/高速离心时形成气溶胶。（二）样品的保存用于抗体检测的血清或血浆样品，应存放于-20
14、以下，短期（1 周）内进行检测的样品可存放于 2-8。制定人 修改人 审核人 批准人 批准日期文件编号:SDYYJYK-SOP-MY1版序：001陕西省水电医院检验科免疫室 SOP 文件 时间：2015-01-01责任部门：检验科 页码：第 9 页共 99 页（三）样品的接收1、含有感染性样品的包裹必须在具有处理感染源设备的实验室内由经过培训的、穿戴防护衣的工作人员打开，用后的包裹应进行消毒。2、核对样品与送检单，认真核对标本上病人姓名、年龄、性别、病区、床号、住院号是否与申请单符合。检查样品管有无破损和溢漏，如发现溢漏应立即将尚存留的样品移出，对样品管和盛器消毒，同时通知有关科室。3、检查样
15、品的状况，观察标本的量、标本类型、是否抗凝或有小凝块样品，记录有无严重溶血、微生物污染、血脂过多以及黄疸等情况，判断标本是否符合检验要求。如果污染过重或者认为样品不能被接受，则应和临床科室联系。4、打开标本容器时要小心，以防内容物泼溅。样品处理时若内容物有可能溅出，则应在生物安全柜中戴手套进行。同时应戴口罩、防护眼镜，双层手套以防皮肤或粘膜污染。7、不符要求的标本，必须第一时间通知临床，说明情况重新采集。不符要求的标本与可疑含有感染性样品用后的包裹同检验后的标本一样进行消毒或无害化处理后废弃。（四） 、标本检测1、离心机要使用密闭的罐和密封头，以防液体溢出或在超/高速离心时形成气溶胶。2、在标
16、本足够的情况下，不能浪费、随意丢弃或损坏标本。应象操作未知传染风险样品一样，小心存放、拿取和使用所有可能有传染性的质量控制和参考物质。用后的包裹应进行消毒。制定人 修改人 审核人 批准人 批准日期文件编号:SDYYJYK-SOP-MY1版序：001陕西省水电医院检验科免疫室 SOP 文件 时间：2015-01-01责任部门：检验科 页码：第 10 页共 99 页（五） 、标本处理 检验标本先用含 2-3g/L 有效氯消毒剂浸泡半小时，再用高压锅高压消毒。然后用双层专用黄色医用垃圾袋专人收集所有废弃医用垃圾。送专门存放医用垃圾处统一焚化处理。并做好登记。四、试剂管理制度（一） 、采购与审批科主任
17、根据需要定期拟定采购计划，交由院领导审批，批核后由科主任与供应商联系进货。（二） 、验收与登记仓管负责人根据供应商提供的试剂及清单对数量、品种、品牌、包装等进行验收，并将入库数据登记。（三） 、贮存冷藏试剂统一存放在免疫室实验室专用的冰箱内，冰箱保管及温度登记由专人负责。免疫室试剂一般应 28避光保存，在有效期内使用。（四） 、出库管理各室提出试剂申领，仓管人填写出库单据，认领人签名后出库。（五） 、其它1、试剂的保存应严格按照要求存放，以保证有效期内能有效地使用，杜绝浪费现象。2、仓管人应对试剂库存定期检查，不使用过期变质的试剂。3、易燃，易爆试剂应分开存放远离火源和电源。 制定人 修改人
18、审核人 批准人 批准日期文件编号:SDYYJYK-SOP-MY1版序：001陕西省水电医院检验科免疫室 SOP 文件 时间：2015-01-01责任部门：检验科 页码：第 11 页共 99 页4、剧毒试剂必须由科主任和负责科室保卫的同志负责保存，放保险箱内，使用时应有两人在场，并做好登记。五、环境消毒隔离制度1、实验室应分为清洁区和操作区，清洁区要注意保护不受污染。操作有气溶胶可能的标本应配置生物安全柜及其它防护设置，如紫外线灯，排气扇等操作区的工作台及地面每日用消毒液擦拭一次，有污染时随时消毒，每周大扫除一次。2、采血室每日操作前用清水擦拭操作台一次，采血结束用消毒液擦拭操作台、桌子和地面一
19、次，紫外线每日照射消毒二次，每月空气细菌培养一次，紫外线强度定期测定。3、各种检验标本的收集，送检必须用相应指定的容器留取，不得外溢污染。4、静脉及末稍采血，应严格执行消毒隔离措施，静脉抽血做到一人一针一筒一巾一带一消毒，所用止血带及纸垫每日消毒，末稍采血一人一片一管，杜绝交叉污染。5、一次性医用器具包括采血针，注射器、尿杯、血红蛋白微量吸血吸管，应严格做好领发登记，注射器先浸泡消毒后由供应室一对一调换，统一处理，其余一次性器具浸泡消毒后装入污物袋送焚烧炉焚烧。6、检验人员在进行静脉抽血时应严格遵守无菌操作技术，操作前必须洗手必须戴好帽子与口罩，操作台和手被污染时应用肥皂和流水认真洗手，必要时
20、用消毒液浸泡双手，酒精、碘酒瓶每周更换消毒两次。制定人 修改人 审核人 批准人 批准日期文件编号:SDYYJYK-SOP-MY1版序：001陕西省水电医院检验科免疫室 SOP 文件 时间：2015-01-01责任部门：检验科 页码：第 12 页共 99 页7、溢出试管外的血液，应立即用碘酒棉签擦拭干净，注意防止玻璃碎片刺伤手，并注意试管有无破裂。8、当针头和碎玻璃刺伤手时,用流水冲洗,挤出血水,应立即用碘酒消毒局部。9、实验室操作时应戴上手套。吸取标本，离心振荡等应严格按操作规程，防止自身和实验室受污染。10、已检查标本与容器分别浸泡于次氯酸钠(2000mg/L)中两小时后，标本倾弃，一次性容
21、器送焚烧，重复使用的经清洗消毒和灭菌后再使用，均要有记录。有毒化学试剂和放射性试剂使用后要经无害化处理，防止污染环境。11、非科室工作人员不准进入实验室，外来人员参观需经科主任同意方可进入。六、实验台消毒措施1、实验台消毒措施必须符合免疫室实验室的通用生物安全要求。由专人按特定程序和方法进行清洁和消毒。2、台面的清洁消毒，保持清洁、湿式打扫。每天开始工作前用湿布抹擦1 次，地面用湿拖把擦 1 次，禁用干抹干扫。抹布和拖把等清洁用具实验室专用，不得混用，用后洗净晾干，下班前用含氯消毒剂（次氯酸钠，含有效氯2000mg/L） 、0.20.5%过氧乙酸或 75%乙醇抹擦 1 次。也可用便捷式高强度紫
22、外线消毒器近距离照射消毒。制定人 修改人 审核人 批准人 批准日期文件编号:SDYYJYK-SOP-MY1版序：001陕西省水电医院检验科免疫室 SOP 文件 时间：2015-01-01责任部门：检验科 页码：第 13 页共 99 页3、应象操作未知传染风险样品一样进行消毒与灭菌，小心存放、拿取和使用所有可能有传染性的血液、质量控制和参考物质，若被上述物品明显污染，如具传染性的标本或培养物外溢，溅泼或器皿打破，洒落于台面，应立即用消毒液消毒，用 5000mg/L 有效氯消毒剂、过氧乙酸或乙醇洒于污染的台面，并使消毒液浸过污染表面，保持 3060 min 后再擦，拖把用后浸于上述消毒液内 1h
23、以上。4、各类在实验室实验台上操作后的废弃物品均应视作物染物分类处理，所有废弃物应视为污染物品，按照传染病防治法处理。七、废弃物处置和实验室消毒1、废弃物处置废弃物处置应符合实验室生物安全通用要求 （GB 19489-2004）和消毒技术规范（2002 年版） 。从免疫实验室出来的所有废弃物，包括不再需要的样品、培养物和其它物品，均应视为感染性废弃物，应置于专用的密封防漏容器中，安全运至消毒室，并在高压消毒后再进行处理或废弃。2、常用的物理消毒方法压力蒸汽消毒，121，保持 1520min; 干燥空气烘箱消毒（干烤消毒） ，140，保持 23h。制定人 修改人 审核人 批准人 批准日期文件编号
24、:SDYYJYK-SOP-MY1版序：001陕西省水电医院检验科免疫室 SOP 文件 时间：2015-01-01责任部门：检验科 页码：第 14 页共 99 页3、常用的化学消毒方法最常用的化学消毒剂是含氯消毒剂（次氯酸钠，含有效氯20005000mg/L） 、75%乙醇和 2%戊二醛，保持 1030 min。4、废弃物缸：5000mg/L 次氯酸钠。5、生物安全柜工作台面和仪器表面：75%乙醇。6、溢出物：5000mg/L 次氯酸钠。7、污染的台面和器具：2000mg/L 次氯酸钠,也可以用过氧化氢或过氧乙酸。器械可用 2%戊二醛浸泡消毒。八、消毒液的配制及使用措施1、实验室最常用的化学消毒
25、剂是含氯消毒剂（次氯酸钠，含有效氯 2000-5000mg/L） 、75%乙醇和 2%戊二醛，保持 1030 min。2、含氯消毒剂的配制：次氯酸钠原液使用前进行 1：201：50 稀释（2000-5000mg/L）或联昌 84 使用前进行 1：101：25（2000-5000mg/L）稀释后，用于实验室内的消毒。3、乙醇，俗称“酒精” ，能够杀灭多种细菌，对病毒有一定的杀灭作用，7075%的效果最好。因此，使用前新鲜配置足量 7075%的乙醇，用于生物安全柜、工作台面和仪器表面的消毒，可以达到最佳的消毒效果。4、过氧乙酸也是目前使用比较广泛的一种高效消毒剂，新鲜配置 13%的过氧乙酸熏蒸，用
26、于地面、墙壁、实验器材及实验室内资料、文件、书本等物品的消毒。0.04%的过氧乙酸用于实验室工作人员手浸泡 120 分钟，再用肥皂洗手。制定人 修改人 审核人 批准人 批准日期文件编号:SDYYJYK-SOP-MY1版序：001陕西省水电医院检验科免疫室 SOP 文件 时间：2015-01-01责任部门：检验科 页码：第 15 页共 99 页5、2%戊二醛用于可浸泡物品的消毒，医疗器械等。6、实验室常用化学消毒剂的配置，本着多用多配，少用少配，现用现配的原则，保证消毒剂使用时的浓度，保证消毒效果。九、消防安全制度1、根据“谁主管、谁负责”的原则，实行科室负责制。2、主管领导和保卫科对全体职工经
27、常进行消防安全教育，提高思想认识，掌握消防知识和消防器材的使用。3、严格执行安全防火管理制度各种火种与易燃易爆物品，必须严格分区，保持一定的安全距离。实验室实施单向流向制度，通道不得乱堆放易燃爆物品和杂物。4、严禁在实验室内吸烟。5、电器的安装与拆除，必须由电工进行，严禁乱接电源，乱后电线。6、各种机电设备、高温电器设备、耐高压容器和设施，使用时必须有专人负责，随时检查，消除隐患，严防事故发生。7、各防火区域设置的消防器材和设备，应定期进行检查，维修和更换，随时处于完好状态，并不得随便挪动。8、任何人发现火、水灾等隐患者，必须及时向科领导报告。科主任及时向院领导报告，及时做好善事处理工作。制定
28、人 修改人 审核人 批准人 批准日期文件编号:SDYYJYK-SOP-MY1版序：001陕西省水电医院检验科免疫室 SOP 文件 时间：2015-01-01责任部门：检验科 页码：第 16 页共 99 页十、生物安全防护制度1、上岗工作人员应是经过岗前安全与技术培训，取得合格证，具有独立工作能力的人员。2、进入实验室应穿戴手套，必要时（如对阳性标本进行复测或检测高危标本）要戴防护眼镜，防止污染暴露的皮肤和衣物。3、严格按照操作规程操作。操作过程中，不得用戴手套的手触摸暴露的皮肤、口唇、眼睛、耳朵和头发等。4、操作时可能发生的触电、失火、玻璃割伤、针头刺伤、烧伤、不慎中毒、传染性标本的污染，有应
29、急处理的方法，有关工作人员均应熟悉。5、操作中手套破损，应立即丢弃，洗手后戴上新手套继续操作，不慎发生泻漏，应立即按照发生职业暴露后的处理措施 ，进行处理。6、防止腐蚀、灼伤、中毒、火灾和爆炸等事件发生。7、实验操作完毕后，应按照实验室清理与消毒程序，进行善后处理。同时记录相关资料与数据并存档。8、工作结束后，应先洗戴手套的手，然后脱去手套丢弃，再脱去工作衣，用肥皂和流动水洗手后离开实验室。9、注意安全，随手关门，做好水，电，门的安全保卫工作，防火防盗防水。制定人 修改人 审核人 批准人 批准日期文件编号:SDYYJYK-SOP-MY1版序：001陕西省水电医院检验科免疫室 SOP 文件 时间
30、：2015-01-01责任部门：检验科 页码：第 17 页共 99 页十一、职业暴露的防护及处理措施实验室职业暴露是指检验工作人员在从事检测工作过程中意外被病毒感染者或者病人的血液、体液污染了皮肤或者粘膜，或者被含有传染病病毒的血液、体液污染了的针头及其他利器刺破皮肤,有可能被病毒感染的情况。（一） 、防护措施：1.医务人员进行有可能接触病人血液、体液的诊疗和护理操作时必须戴手套，操作完毕，脱去手套后立即洗手，必要时进行手消毒。2.在诊疗、护理操作过程中，有可能发生血液、体液飞溅到医务人员的面部时，医务人员应当戴手套、具有防渗透性能的口罩、防护眼镜；有可能发生血液、体液大面积飞溅或者有可能污染
31、医务人员的身体时，还应当穿戴具有防渗透性能的隔离衣或者围裙。3.医务人员手部皮肤发生破损，在进行有可能接触病人血液、体液的诊疗和护理操作时必须戴双层手套。4.医务人员在进行侵袭性诊疗，护理操作过程中，要保证充足的光线，并特别注意防止被针头、缝合针、刀片等锐器刺伤或者划伤。5.使用后的锐器应当直接放入耐刺、防渗漏的利器盒，也可使用具有安全性能的注射器、输液器等医用锐器，以防刺伤。6.禁止将使用后的一次性针头重新套上针头套。禁止用手直接接触使用后的针头、刀片等锐器。制定人 修改人 审核人 批准人 批准日期文件编号:SDYYJYK-SOP-MY1版序：001陕西省水电医院检验科免疫室 SOP 文件
32、时间：2015-01-01责任部门：检验科 页码：第 18 页共 99 页十二、筛查检验程序1、筛查试剂必须是经国家食品药品监督管理局注册批准、批批检合格、在有效期内的试剂。推荐使用经临床质量评估敏感性和特异性高的试剂。1）甲肝：上海科华2）乙肝：英科新创3）丙肝：英科新创4）梅毒：英科新创5）肺炎支原体：潍坊生物6）风湿四项：上海捷门2、筛查方法1） 、酶联免疫试验（ELISA）2） 、快速检测（RT）3） 、其他检测制定人 修改人 审核人 批准人 批准日期文件编号:SDYYJYK-SOP-MY1版序：001陕西省水电医院检验科免疫室 SOP 文件 时间：2015-01-01责任部门：检验科
33、 页码：第 19 页共 99 页免疫实验室工作流程按照陕西省水电医院检验科文件临床检验标本采集与送检手册 。病房标本由护士采集送检验科，门诊病人由检验科人员采集送免疫室，免疫室工作人员接到标本将标本放入水浴箱 30-60min，离心机 3000r/min 离心 10 分钟依据化验单申请项目进行操作，填写检验者复核者以及检验日期，门诊报告单做完即可发出住院报告单下午送回临床各科室。检验完之后的血液标本在第二天早上收集放冰箱冷藏室五到七天，并写明日期。几天之后无问题方可将标本仍医疗垃圾袋，按照医疗垃圾管理办法扔到指定的位置由医院统一处理。制定人 修改人 审核人 批准人 批准日期文件编号:SDYYJ
34、YK-SOP-MY1版序：001陕西省水电医院检验科免疫室 SOP 文件 时间：2015-01-01责任部门：检验科 页码：第 20 页共 99 页免疫实验室操作步骤（一）甲型肝炎病毒 IgM 抗体（HAV-IgM）1 检验目的：检测人血清或血浆中的抗 HAV-IgM。2 检测原理：本品系用抗人-IgM（u 链）包被的微孔板，配以纯甲型肝炎抗原（ HAV-Ag） 和酶标记的甲型肝炎病毒抗体（抗 HAV-HRP）及其它试剂，采用捕获法原理，检测人血清或血浆中的抗-HAV-IgM。3 试剂：上海科华生物工程股份有限公司组分名称 数量 规格 组分名称 数量 规格HAV-IgM 微孔板 1 块 48T
35、1底物 A 1 支 4.0 mLHAV-IgM 酶标记抗体 1 支 3.2mL 底物 B 1 支 4.0 mLHAV-IgM 阳性对照血清1 支 1 .0mL 终止液（2MH 2SO4）1 支 3.5 mLHAV-IgM 阴性对照血清1 支 1.0mL 封口膜 3 张甲肝抗原 1 支 2.2 mL 浓缩洗涤液 1 支 30 mL自封袋 1 个 说明书 1 份4 操作：4.1 配液：浓缩洗涤液配制前充分摇匀（如有结晶析出应充分溶解）浓缩洗涤液和蒸馏水或去离子水按 1：19 稀释后使用。4.2 编号：将微孔条固定于支架，按序编号。4.3 加样：待测样本用生理盐水作 1：1000 稀释，每个样本检测
36、孔加入稀释样本 100 uL。设阴阳对照各 1 孔，每孔加入 100 uL，并设空白对照 1 孔。4.4 温育：置 37温育 20 分钟，室温平衡 2 分钟。4.5 洗涤：用洗涤液充分洗涤 5 次，洗涤完后扣干（每次应保持 30-60 秒的浸泡时间） 。4.6 加抗原、酶：每孔加入抗原（HAV-Ag）30 uL、酶标记抗体 50uL（1 滴） ，充分混匀。4.7 温育：置 37温育 20 分钟。4.8 洗涤：用洗涤液充分洗涤 5 次，洗涤完后扣干（每次应保持 30-60 秒的浸泡时间） 。4.9 显色：每孔加底物 A、B 各 50uL，轻拍混匀，置 37暗置 15 分钟。4.10 终止：每孔加
37、终止液 50uL，混匀。4.11 测定：用酶标仪单波长 450nm/630nm 测定各孔 OD 值（用单波长测定需设定空白对照一孔，30 分钟完成测定，并记录结果） 。制定人 修改人 审核人 批准人 批准日期文件编号:SDYYJYK-SOP-MY1版序：001陕西省水电医院检验科免疫室 SOP 文件 时间：2015-01-01责任部门：检验科 页码：第 21 页共 99 页5. 结果判定：5.1 临界值（C.O.）的计算：临界值=阴性对照孔 OD 均值 N2.1阴性对照 OD 值低于 0.0500.050 计算，高于 0.050 按实际 OD 值计算。5.2 结果判定：样品 OD 值 S/C.
38、O.1 者为 HAV-IgM 阳性样品 OD 值 S/C.O.1 者为 HAV-IgM 阴性5.3 失效：如果阳性对照 OD 均值小于 0.05，则表明不正常的操作或试剂盒已变质损坏。在此情况下，应再次仔细阅读说明书，并用新的试剂盒重新测试。如果问题仍然存在，应立即停止使用此批号产品，并与当地供应商联系。6. 标本：6.1 静脉抽取空腹患者标本 3.0 mL（真空管采血） ，将血液放置水浴箱中 30 分钟后，分离血清。6.2 溶血标本不能用于检测。 6.3 用完的标本，应在样品管上注明日期，放置在 28冰箱中保存一周。6.4 样品放置一周后，逐管加入 1：50 的 84 消毒液，并放置 4 小
39、时后，装入医疗垃圾袋由医院专人按医疗垃圾处理。7. 注意事项7.1 本试剂盒仅用于体外诊断试验.进用于人血清或血浆样本,其它体液和样品可能得不到准确的结果.7.2 请勿使用溶血标本.样本加样量对本实验极为重要,建议使用精密加样器准确加样.并经常对精密加样器进行校准.7.3 每板建议设阴、阳性对照血清各两孔,设空白对照时,不加样品及酶标记抗体,其余各步相同.7.4 洗涤时各孔均需加满,防止孔内有游离酶未能洗净.7.5 加试剂前应将试剂瓶翻转数次,使液体混匀.7.6 实验环境应保持一定湿度,避风.避免在过高温度下进行实验.7.7 样品显色深浅与样品中抗体的含量没有一定正相关.任何一种测试都不能绝对
40、保证样品中没有低浓度的抗体存在.7.8 试剂各组分在正当处理和保存的情况下直至校期都保持稳定,不能使用过校期的试剂盒.不同品名、不同批号的试剂不可混用,以免产生错误结果.制定人 修改人 审核人 批准人 批准日期文件编号:SDYYJYK-SOP-MY1版序：001陕西省水电医院检验科免疫室 SOP 文件 时间：2015-01-01责任部门：检验科 页码：第 22 页共 99 页(二) 乙型肝炎病毒（HBV）1、乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）1 .检验目的：检测人血清（或血浆）中乙肝表面抗原（HBsAg） ，其阳性者为急性乙型肝炎潜伏期或急性、慢性乙肝患者，无症状 HBsAg 携带者。2. 检
41、验原理：在微孔条上预包被纯化乙肝表面抗体（HBsAb） ，配以酶标记抗体（HBsAb HRP）及 TMB 等其它试剂，采用夹心法原理检测人血清（或血浆）中乙肝表面抗原（HBsAg）3. 试剂：英科新创（厦门）科技有限公司。3.1 HBsAg 微孔板（ 96 人份） 3.2 HBsAg 酶标记抗体3.3 HBsAg 阳性对照血清 3.4 HBsAg 阴性对照血清3.5 浓缩洗涤液 25ml 3.6 底物 A3.7 底物 B 3.8 终止液（ 2M H2SO4）3.9 封口膜 3.10 自封袋 4. 试剂的贮存：直接使用，28贮存至失效期避免阳光直射。5.操作：5.1 平衡：将试剂盒各组分从盒中取
42、出，平衡至室温（1825） ，微孔板开封后，余者即时以自封袋封存。5.2 配液：浓缩洗涤液配制前充分摇匀（如有晶体应充分溶解） ，浓缩洗涤液和蒸馏水或去离子水按 1：19 稀释后使用。5.3 编号：将微孔条固定于支架，按序编号。5.4 加样：每孔中加入稀释液 20 uL，病人血清 100 uL，设阴、阳性对照各 1 孔，每孔加入 100 uL，空白对照 1 孔。 5.5 温育：置 37温育 60 分钟，室温平衡 5 分钟。5.6 洗涤：用洗涤液充分洗涤 5 次，洗涤完后扣干（每次应保持 3060 秒的浸泡时间） 。5.7 加酶：每孔加入酶 50 uL，温浴 30min 洗涤液充分洗涤 5 次，
43、洗涤完后扣干5.8 显色：每孔加底物 A、B 各 50uL，轻拍混匀，置 37暗置 15 分钟。5.9 终止：每孔加终止液 50uL，混匀。5.10 测定：用酶标仪单波长 450nm 或双波长 450nm/630nm 测定各孔 OD 值（用单波长测定时需设空白对照一孔，30 分钟内完成测定，并记录结果） 。制定人 修改人 审核人 批准人 批准日期文件编号:SDYYJYK-SOP-MY1版序：001陕西省水电医院检验科免疫室 SOP 文件 时间：2015-01-01责任部门：检验科 页码：第 23 页共 99 页6. 结果判定6.1 临界值（C.O.）的计算：临界值=阴性对照孔 OD 均值 N2
44、.1阴性对照 OD 均值大于 0.1 或阳性对照小于 0.4 时应重新试验，小于 0.05 时以 0.05计算6.2 结果判定：样品 OD 值 S/C.O.1 者为 HBsAg 阳性样品 OD 值 S/C.O.1 者为 HBsAg 阴性7.标本：7.1 静脉抽取空腹患者标本 3.0mL（真空采血管） ，将血液放置在 37水浴中 30 分钟后，分离血清。7.2 溶血标本不能用于检测。 7.3 用完的标本，应在样品管上注明日期，放置在 28冰箱中保存一周。7.4 样品放置一周后，逐管加入 1：50 的 84 消毒液，并放置 4 小时后，装入医疗垃圾袋由医院专人按医疗垃圾处理。8.注意事项8.1 每
45、板建议设阴、阳性对照血清各两孔，设空白对照时，不加样品及酶标记抗体，其余各步相同。8.2 洗涤时各孔均须加满，防止孔口内有游离酶未能洗净。8.3 加试剂前应将试剂瓶翻转数次，使液体混匀。如果滴加，滴加前应弃去 12 滴。滴加时瓶身应保持垂直，以使滴量准确。注意勿将试剂滴在孔壁上。8.4 所有样品都应按传染源处理。8.5 样品显色深浅与样品中抗原的含量没有一定正相关。任何一种测试都不能绝对保证样品中没有低浓度的抗原存在。8.6 封口膜使用说明：（1）微孔板拆封后，在取出当天所需的微孔条后，其余微孔条可以封口膜封存以避免受潮。在封存时，注意勿把封口膜粘贴到微孔条低部，以免影响其透光性。（2）微孔板
46、温育时，以封口膜覆盖孔口，可避免其它因素对实验带来的非预期的影响。8.7 不同品名、不同批号的试剂不可混用，以免产生错误结果。制定人 修改人 审核人 批准人 批准日期文件编号:SDYYJYK-SOP-MY1版序：001陕西省水电医院检验科免疫室 SOP 文件 时间：2015-01-01责任部门：检验科 页码：第 24 页共 99 页2、乙型肝炎病毒表面抗体（HBsAb ）1 .检验目的：检测人血清（或血浆）中乙肝表面抗体（HBsAb） ，其为保护性抗体，大多数急性病人恢复期后为阳性，接种乙肝疫苗后产生免疫力。2. 检验原理：在微孔条上预包被纯化乙肝表面抗原（HBsAg） ，配以酶标记抗体（HB
47、sAg HRP）及 TMB 等其它试剂，采用夹心法原理检测人血清（或血浆）中乙肝表面抗体（HBsAb）3. 试剂：英科新创（厦门）科技有限公司。3.1 HBsAb 微孔板（ 96 人份） 3.2 HBsAb 酶标记抗原3.3 HBsAb 阳性对照血清 3.4 HBsAb 阴性对照血清3.5 浓缩洗涤液 25ml 3.6 底物 A3.7 底物 B 3.8 终止液（ 2M H2SO4）3.9 封口膜 3.10 自封袋4. 试剂的贮存：直接使用，28贮存至失效期，避免阳光直射。 5.操作：5.1 平衡：将试剂盒各组分从盒中取出，平衡至室温（1825） ，微孔板开封后，余者即时以自封袋封存。5.2 配
48、液：浓缩洗涤液配制前充分摇匀（如有晶体应充分溶解） ，浓缩洗涤液和蒸馏水或去离子水按 1：19 稀释后使用。5.3 编号：将微孔条固定于支架，按序编号。5.4 加样：用加样器加入待测血清 50uL，设阴、阳性对照各 1 孔，每孔加入 50 uL，空白对照 1 孔。5.5 加酶：分别在每孔中加入酶标记抗原 50uL；轻拍混匀。5.6 温育：置 37温育 30 分钟，室温平衡 5 分钟。5.7 洗涤：用洗涤液充分洗涤 5 次，洗涤完后扣干（每次应保持 3060 秒的浸泡时间） 。5.8 显色：每孔加底物 A、B 各 50uL，轻拍混匀，置 37暗置 15 分钟。5.9 终止：每孔加终止液 50uL，混匀。5.10 测定：用酶标仪单波长 450nm 或双波长 450nm/630nm 测定各
