1、 黄酮论文：玉环柚柚皮中黄酮类化合物提取、分离及指纹图谱的研究【中文摘要】玉环文旦柚(Citrus maxima (Burm.) Merr. cv. Wentan)柚果含有多种人体健康必需的营养成份和非营养性生理活性成份,具有降血脂、降胆固醇、预防动脉粥样硬化、抗氧化、促进胃肠蠕动、通便等保健作用。其果皮中更是存在种类繁多、含量丰富的黄酮类化合物,且具有多种生理功能和较大的药用价值。而在国内,加工产生的果皮除少数用于中药和制取香精油外,大部分作为垃圾处理,未加以合理利用。本文系统研究了玉环柚中黄酮类化合物的提取和分离纯化方法及不同品种柚皮中黄酮类化合物种类及量的差别,旨在建立一套科学可靠的柚皮
2、中黄酮类化合物的研究方法,为我国柑橘属中黄酮类化合物的研究工作提供更详实的信息和依据。通过柚子指纹图谱的研究,从柚子黄酮指纹图谱中可获取不同品种的柚子中黄酮类化合物基本组成成分情况的信息,为柑橘属中黄酮类化合物的研究提供科学可靠的数据。现将主要研究内容及结果报告如下:(1)将微波辅助提取技术运用到柚皮黄酮的提取中,考察料液比、乙醇浓度、提取温度、提取时间、提取功率 5 个参数对提取率的影响,应用响应面优化法,获得最优工艺条件:提取时间 35 min,提取温度 55,液料比34.74,乙醇浓度 70%,提取功率 500 W,提取 2 次。实测黄酮提取率与预测值基本一致,提取率达 0.805%。(
3、2)运用本实验室液相色谱仪分析玉环文旦柚黄酮类化合物的液相色谱洗脱条件:流动相 A 甲醇,B水+0.1%乙酸(0-80min,A 0-100%,B 100-0%)。流速 1mL/min,紫外检测器为 Waters 2487 检测器,检测波长 254 nm,进样量:5L,Waters C18 柱。并运用中药色谱指纹图谱相似度评价体系对十种不同种类的柚皮黄酮类化合物样品进行黄酮色图谱分析,建立了柚皮黄酮对照指纹图谱。11 个色谱峰为 10 批次供试品的共有指纹峰,是鉴别柚皮黄酮样品的必要条件之一,可以确定为黄酮的基本组成成分。试验结果说明,10 批次柚皮黄酮样品基本上均含有相同的主要成分,从而标定
4、了柚皮中有效部位的共有指纹峰。(3)对柚皮的正丁醇层黄酮粗提物进行分离纯化,建立逆流色谱分离条件,其色谱条件为:正己烷:丁醇:甲醇: 0.5%乙酸溶液=1:3:1:4(v/v),上相为固定相,转速850rpm/min,流动相流速为 1.5mL/min,进样量为 500mg。结合半制备型液相色谱进行再次纯化,条件为:流动相 A-乙腈 B-水(0.5%乙酸()0-5 min A 5-22%,6-21 min A 22-60%,21-30min A 60-100%)运行时间 30 min,流速 5 mL/min,紫外检测波长 254 nm,Waters C18 柱。结果获得一种未知化合物,经过高效液
5、相色谱分析得纯度为 98%。(4)对分离到的未知化合物进行化学鉴别和结构分析,通过显色反应和紫外扫描可确定该未知化合物是黄酮类化合物。通过液质联用分析此未知化合物的分子量为 377,并初步确定该化合物的质谱裂解途径;通过氢核磁共振法,初步确定该化合物是一种黄酮醇,并且对其结构作了进一步分析。【英文摘要】Citrus maxima (Burm.) Merr. cv. Wentan contains a variety of essential nutrients for human health and non-nutritional active ingredients. Its of hea
6、lth effects such as lowering blood pressure, lowering cholesterol, preventing atherosclerosis、antioxidant, promoting gastrointestinal motility, purgation and so on. There is also a wide range of content-rich flavonoids existed in the pericarp which has a large variety of physiological functions and
7、medical value. In China, a few of pericarp produced by processing is used to take essential oils and used in Chinese medicine, but most as a waste, hadnt been rational used. This text is about the study of extraction, isolation, fingerprints of flavonoids from Citrus maxima (Burm.) Merr. CV. Wentan
8、and differences among flavonoids from different kinds of Citrus maxima. It is to establish a scientific and reliable research method for Citrus flavonoids and provide more detailed information and evidence for the study of citrus flavonoids. Through the studying of fingerprints of Citrus maxima, dif
9、ferent varieties of elementary flavonoids components from Citrus maxima can be obtained from the fingerprints, provide scientific and reliable data. The main contents and results now have been concluded as follows:(1) Exert microwave assisted technology in extraction of flavonoids, study the influen
10、ce of the ratio of water to sample, ethanol concertraction, extraction temperature, extraction time, extraction power on the effect of extraction. Through response surface optimization method, obtain the most excellent conditions: extraction time 35 min, extraction temperature 55, ratio of water to
11、sample 34.74, ethanol concertraction 70%, extraction power 500 W, extraction times 2. Flavonoids extraction rate measured is consistented with the predicted rate, extraction rate acheives to 0.805%.(2) With the liquid chromatograph, obtain the HPLC elution conditions of flavonoids from Citrus maxima
12、 (Burm.) Merr. cv. Wentan: mobile phase A- methanol, B- 0.1% solution of acetic acid (0-80min, A 0-100%, B 100-0%), rate of flow 1mL/min, detection wavelength 254 nm, volumn of sample injection: 5L, Waters C18 column. The chromatograms of flavonoids from ten speices of Citrus maxima were analysed by
13、 software of analysis of similarity for traditional Chinese medicine. The contrasting fingerprint was built by that software. Eleven chromatogram peaks were mutual fingerprint peaks of ten speices of Citrus maxima, and also one of necessary condition for identification of Citrus maxima flavonoids. T
14、hey can be identified as the basic components of flavonoids.(3) Crude extraction of flavonoids from Citrus pericarp in the butanol layer was separated and purified. The condition of isolation of flavonoids by HSCCC was as follows, n-hexane: butanol: methanol: 0.5% acetic acid = 1:3:1:4 (v/v), statio
15、nary phase was upper phase, the rate of rotation 850 rpm/min, the rate of flow of mobile phase was 1.5mL/min, and the injection ,volume was 500mg. Semi-preparative liquid chromatography was used to further separation,and the condition was: mobile phase A- acetonitrile, B- 0.5% acetic acid (0-5 min A
16、 5-22% ,6-21 min A 22-60%, 21 -30min A 60-100%), running time 30 min, the rate of flow 5 mL / min, UV detected at 254 nm, Waters C18 column. An unknown compound was obtained , and its purity is 98%.(4) Unknown compound isolated was chemical identificated and structural analysed. Through the colour r
17、eaction and UV scanning, the unknown compounds could be determined as flavonoids. Through analysis by LC-MS, molecular weight of this unknown compound was 377, and determine initially the mass fragmentation pathway of the compound. By hydrogen nuclear magnetic resonance method, initially identifie t
18、he compound is a flavonol, and then further analysis of its structure was done.【关键词】黄酮 提取 指纹图谱 HSCCC 分离纯化【英文关键词】flavonoids extraction fingerprint HSCCC purification【目录】玉环柚柚皮中黄酮类化合物提取、分离及指纹图谱的研究 【备注】索购全文在线加好友 ：1.3.9.9.3.8848 同时提供论文写作一对一指导和论文发表委托服务摘要 3-5 ABSTRACT 5-7 第一章 绪论 11-35 1.1 柚皮黄酮的种类及结构特点 12-1
19、4 1.2 黄酮类化合物的提取方法 14-18 1.2.1 采用不同提取溶剂的提取方法 14-15 1.2.2 采用不同提取技术的提取方法 15-18 1.3 柚皮黄酮的分离方法 18-20 1.3.1 柱层析法 18 1.3.2 高效液相色谱法（HPLC） 18-19 1.3.3 大孔树脂吸附法 19 1.3.4 膜分离技术 19-20 1.3.5 高速逆流色谱（HSCCC） 20 1.4 逆流色谱在天然产物分离中的应用 20-22 1.5 柚皮黄酮的分析方法 22-27 1.5.1化学鉴定 22-24 1.5.2 柚皮黄酮的结构分析 24-27 1.6 柚皮黄酮指纹图谱的研究进展 27-3
20、1 1.6.1 研究进展 27-29 1.6.2 中药指纹图谱的发展趋势 29-31 1.7 柚皮的综合开发和利用 31-33 1.7.1 提取果胶 31 1.7.2 提取柚皮苷 31-32 1.7.3 提取膳食纤维 32 1.7.4 提取黄色素 32-33 1.7.5 提取香精油 33 1.8 本文研究的目的、意义及内容 33-35 1.8.1 研究目的及意义 33-34 1.8.2 研究的主要内容 34-35 第二章 柚皮黄酮类化合物提取工艺关键参数的优化 35-49 2.1 仪器与试剂 35-36 2.1.1 原料 35 2.1.2 试剂 35-36 2.1.3 主要仪器及设备 36 2
21、.2 试验方法 36-38 2.2.1 柚皮样品前处理 36 2.2.2 微波辅助提取方法 36 2.2.3 其他提取柚皮黄酮方法 36-37 2.2.4 黄酮含量的测定 37-38 2.3 结果与分析 38-48 2.3.1 单因素对总黄酮提取率的影响 38-42 2.3.2 响应面法试验 42-45 2.3.3 响应面优化与分析 45-47 2.3.4 连续性试验 47 2.3.5 对照试验 47-48 2.4 本章小结 48-49 第三章 柚皮黄酮类成分的 HPLC 指纹图谱研究 49-61 3.1 材料与仪器 50 3.1.1 原材料 50 3.1.2 试剂 50 3.1.3 主要仪器
22、及设备 50 3.2 试验方法 50-51 3.2.1 柚皮样品的前处理 50 3.2.2 HPLC 条件 50-51 3.2.3方法的稳定性 51 3.2.4 仪器的精密度 51 3.2.5 重现性试验 51 3.3 试验结果 51-60 3.3.1 液相色谱流动相条件建立 51-54 3.3.2 方法的稳定性 54-55 3.3.3 仪器的精密度 55-56 3.3.4 重现性试验 56-57 3.3.5 不同品种柚子皮中黄酮类化合物液相指纹图谱的建立 57-60 3.4 本章小结 60-61 第四章 柚皮中的黄酮类化合物的分离纯化和结构鉴定 61-76 4.1 试验材料与仪器 61-62
23、 4.1.1 原材料 61 4.1.2 试剂及材料 61 4.1.3 主要仪器及设备 61-62 4.2 实验方法 62-64 4.2.1 柚皮粗黄酮的制备 62 4.2.2 HPLC 色谱法筛选溶剂系统 62-63 4.2.3 高速逆流色谱的分离操作 63-64 4.2.4 HPLC 分析正丁醇层粗黄酮色谱条件 64 4.2.5 HPLC 制备色谱分离纯化和制备柚皮黄酮 64 4.3 结果与讨论 64-68 4.3.1 液相色谱分析正丁醇层粗黄酮 64-65 4.3.2 HSCCC 分离溶剂体系分层时间和分配系数的测定 65 4.3.3 HSCCC 制备分离结果 65-66 4.3.4 HPLC 色谱法分析组分纯度及其分离效果 66-67 4.3.5 HPLC 制备色谱分离纯化和制备柚皮黄酮 67-68 4.4 结构鉴定 68-73 4.4.1 显色反应 68 4.4.2 紫外光谱（UV）分析 68-70 4.4.3 液质联用（LC-MS）分析 70-73 4.5 本章小结 73-76 第五章 结论与展望 76-79 5.1 结论 76-77 5.2 展望 77-79 参考文献 79-87 致谢 87-88 攻读学位期间发表的学术论文 88
