1、黑 龙 江 中 医 药 大 学教 案课程名称 中药化学使用教材 中药化学主讲教师 匡海学职务职称 教授实验名称 实验一 苦参中氧化苦参碱和苦参碱的提取、分离、鉴定实验目的：1掌握用离子交换法提取生物碱的原理和方法。2掌握利用苦参总碱中各生物碱溶解性差异分离氧化苦参碱方法。3了解和熟练应用渗漉提取法及索式提取器连续回流提取。4掌握生物碱的常规定性检识方法。实验原理：苦参生物碱有一定碱性，可与酸结合成盐，因此采用酸水提取法。总生物碱呈阳离子状态而被阳离子交换树脂所交换，再用氨水碱化后生物碱游离以有机溶剂回流提取。利用总生物碱中氧化苦参碱在乙醚中难溶而与其它生物碱分离。实验难点 离子交换树脂法和生物
2、碱的定性检识方法教学方法 少量课堂讲授和实验指导教 具 渗漉、回流提取装置、薄层色谱装置实 验 进 程1.导 言（时 间）58min（1）中药化学实验课具体要求。（2）中药化学实验的成绩评定规定。（3）试验报告书写要求。板 书 设 计【实验目的】 1掌握用离子交换法提取生物碱的原理和方法。2掌握利用苦参总碱中各生物碱溶解性差异分离氧化苦参碱的方法。3了解和熟练应用渗漉提取法及索式提取器连续回流提取。4掌握生物碱的常规定性检识方法。【实验原理】 苦参生物碱有一定碱性，可与酸结合成盐，因此用酸水提取后，总生物碱呈阳离子状态而被阳离子交换树脂所交换，再用氨水碱化后生物碱游离，以有机溶剂回流提取。【提
3、取工艺】苦参粗粉 100g以 0.1%盐酸 100ml 湿润半小时装入渗漉中，以 0.1%盐酸 1100ml 渗漉，速度 12d/s。渗漉液2.讲授（时间）（2030min）讲课内容（1）离子交换树脂型号、适应类型及应用（2）离子交换树脂法提取苦参总碱的原理（3）苦参总碱的溶解性（4）生物碱的定性检识方法（5）索式提取器的使用掌握要点 （1）生物碱的定性检识方法（2）离子交换树脂法的应用举 例 离子交换树脂法的应用提 问 苦参碱与氧化苦参碱的碱性和溶解性生物碱的定性检识方法3.小结（时间）58min总结本实验的基本情况，提出注意事项和新的要求。4.布置作业（1）试验报告一周内交齐（2）预习第二
4、个试验通过装湿重 60g（60ml）树脂的阳离子交换树脂柱交换，交换速度 12d/s。注意测定不同交换时间 PH 值的变化。 （每隔 15 分钟）吸碱树脂将树脂倒入烧杯中，以蒸馏水洗至洗液无色抽滤后室温晾干。将树脂置烧杯中，加入浓氨水，拌匀（加氨水量以手握成团但不粘手为度） ，密闭放置。碱化树脂放置 20 分钟，装入滤纸袋置索氏提取器中以氯仿连续回流提取 610 小时，回收氯仿至尽，蒸去水分。残留物以丙酮回流残留物，抽滤，溶液回收部分丙酮，加盖放置，结晶，抽滤，干燥。粗品总碱结晶【精制工艺】粗品总碱以少量丙酮（粗品量的 3040 倍）回流溶解，白色总碱全部溶解后过滤。滤液回收少量丙酮后加盖放置
5、，结晶后抽滤，干燥。精品总碱（以氧化苦参碱为主）【色谱鉴定】色谱板：自制硅胶-CMC 硬板 样 品：精品总碱氯仿液对照品；氧化苦参碱的氯仿溶液 显色剂：改良碘化铋钾试剂展开剂：氯仿：甲醇：氨水（15：4：0.5）结 果：样品斑点与对照品斑点比较位置并计算 Rf 值【思考题】（1）以反应式表示出离子交换树脂提取生物碱的原理。（2）苦参碱渗漉中若氢离子浓度过高，通过树脂时对交换有何影响？课题名称 实验二 槐米中芦丁的提取、分离、鉴定及槲皮素的制备实验目的：掌握黄酮成分的主要性质、黄酮苷及苷元结构研究的一般程序和方法。通过芦丁的结构检识，了解苷类化合物结构研究的一般程序和方法。根据溶解性掌握提取、分
6、离芦丁的方法。实验原理：芦丁为黄酮苷，利用其可溶于热水、难溶于冷水的性质进行提取。又利用其在冷、热醇中的溶解度差进行重结晶法分离精制。芦丁可被稀酸水解，生成的苷元及糖可通过定性反应及色谱进行鉴别。实验重点 芦丁的结构检识和提取分离方法教学方法 少量课堂讲授和实验指导教 具 薄层色谱装置试 验 进 程1.导言（时间）35min（1）复习芦丁和槲皮素的结构和性质（2）复习芦丁的 2 种主要提取分离方法板 书 设 计【实验目的】 掌握黄酮成分的主要性质、黄酮苷及苷元结构研究的一般程序和方法。通过芦丁的结构检识，了解苷类化合物结构研究的一般程序和方法。根据溶解性掌握提取、分离芦丁的方法。【实验原理】
7、芦丁为黄酮苷，利用其可溶于热水、难溶于冷水的性质进行提取。又利用其在冷、热醇中的溶解度差进行重结晶法分离精制。芦丁可被稀酸水解，生成的苷元及糖可通过定性反应及色谱进行鉴别。【实验内容】1、提取：槐花米 20g（稍研磨）以 500ml 的烧杯直火烧 400ml 蒸馏水，沸后将槐花米投入，继续加热保持微沸 30 分钟，四层纱布过滤。药渣再加水 250ml，煮沸 20 分钟，同上过滤，合并两次滤液。 药 渣 滤 液放置 45 小时，抽滤至干滤 液 沉 淀 2.讲授（时间）2025min 讲课内容（1）芦丁的提取方法（2）芦丁的精制方法（3）芦丁的水解方法（4）芦丁、槲皮素的鉴定掌握要点 （1）芦丁的
8、提取、精制方法（2）芦丁的检识方法举 例 提 问 黄酮类化合物的主要性质100以下干燥粗品芦丁2、精制：粗品芦丁加甲醇 1520ml，水浴加热（空气冷凝）溶解， 至无黄色物，趁热过滤。 沉 淀 滤 液放置，待结晶析出，抽滤至干沉 淀干燥精品芦丁3、水解：精品芦丁 0.5g放入 150ml 圆底烧瓶中，加入 2%稀硫酸50ml, 空气冷凝直火加热（电炉上放石棉网）40 分钟，趁热过滤。沉 淀 滤 液水洗至中性 取 10ml，加氢氧化钡约抽滤、干燥。 1g 调 PH7.5，过滤。槲皮素 沉淀 滤液水浴浓缩至 12ml浓缩液（备检查糖用）4、芦丁、槲皮素的鉴定（1）试管定性反应：HCI-Mg 粉反应
9、：取样品的乙醇溶液 1ml 加少许镁粉，再加浓 HCI 12 滴，观察颜色。FeCl 3 反应：取样品的乙醇溶液 1ml 加 1%的 FeCl3 乙醇溶液 23 滴，观察颜色。中性醋酸铅反应：取样品的乙醇溶液 1ml 加 5%的中性醋酸铅溶液 12 滴，观察现象。-萘酚、浓 H2SO4 反应：取样品的乙醇溶液 1ml 加-萘酚试液 1 2 滴后振摇，然后沿管壁加适量浓 H2SO4，观察两界面处的颜色。（2）AlCl 3 纸斑反应 ;取样品的乙醇溶液，在滤纸上各滴一个点，干燥后置紫外灯下观察荧光。然后在原斑点上喷 AlCl3，干燥后重新置紫外光灯下观察荧光。3.小结（时间）58min总结本实验的
10、基本情况，提出注意事项和新的要求。4.布置作业（1）试验报告一周内交齐。（2）思考题 据黄酮类化合物的性质，再设计一种提取芦丁的方法。 苷类水解有几种方法？ 怎样证明芦丁分子中只含有一分子葡萄糖和一分子鼠李糖？ 如何确定芦丁结构中的糖连在槲皮素的 3-OH 上？5、糖的检识（径向纸色谱）展开剂：正丁醇：冰醋酸：水（4：1：5）上层显色剂：邻苯二甲酸-苯胺试剂（ 95烘干）样 品：水解浓缩液 对照品：葡萄糖、鼠李糖的水溶液展开方式：径向结 果：对照样品斑点及对照品斑点位置并计算 Rf 值。6、芦丁及槲皮素紫外光谱测定（1）芦丁溶液的配制精密称取芦丁纯品 1g，用无水甲醇溶解，并稀释至10ml，从
11、中吸取 5ml，置 50ml 容量瓶中，用甲醇稀释至刻度。（2）槲皮素溶液的配制精密称取槲皮素纯品 1g，用无水甲醇溶解，并稀释至10ml，从中吸取 5ml，置 50ml 容量瓶中，用甲醇稀释至刻度。（3）芦丁及槲皮素紫外光谱测定 甲醇光谱：取样品置石英杯中，加入甲醇钠溶液 3滴后，立即测定，放置 5 分钟后再测定一次。 甲醇钠光谱：取样品置石英杯中，200500nm 进行扫描，重复一次，观察紫外光谱。 三氯化铝光谱：在盛有样品液的石英杯中，加入三氯化铝 6 滴，放置 1 分钟后进行测定。测定后加入 3 滴盐酸溶液（盐酸：水1：1）再进行测定。 乙酸钠光谱：取样品液约 3ml，加入过量的无水乙
12、酸钠固体，摇匀（杯底剩约 2ml 的乙酸钠） ，加入乙酸钠后2 分钟内进行测定，5 分钟到 10 分钟再测定一次。 乙酸钠硼酸光谱：在测定用的盛有样品液和乙酸钠 00 溶液的石英杯中加入足够量的硼酸使成饱和溶液进行测定。课 题 第六章 黄酮类化合物第六节 结构研究教学目的 1、掌握 1H-NMR 在黄酮类化合物结构研究中的应用2、掌握 13C-NMR 在黄酮类化合物结构研究中的应用教学重点 1、 1H-NMR 光谱特征2、 13C-NMR 光谱特征教学难点 1、 1H-NMR 光谱特征2、 13C-NMR 光谱特征教学方法 讲授教 具多媒体幻灯片教学进程1.导言（时间）：35 分钟1H-NMR
13、 谱是黄酮类化合物结构研究的一种重要方法，具有简便、快速而且可获得大量信息等优点。 13C-NMR 也以广泛应用于黄酮类化合物结构研究，下面我们就这两种方法逐一进行。复习提问1、何谓诊断试剂？常用黄酮类化合物的诊断试剂有哪几种？2、如何利用 UV 光谱区别黄酮和黄酮醇类化合物？板书设计第六节 结构研究二、 1H-NMR 的应用（一）C 环质子（二）A 环质子1、5、7二 OH 黄酮类化合物2、7OH 黄酮类化合物（三）B 环质子1、4含氧取代2、3、4二氧取代2.讲授（时间）：8085 分钟课题内容 第六章 黄酮类化合物第六节 结构研究掌握要点 1、 1H-NMR 在黄酮类化合物结构研究中的应
14、用2、 13C-NMR 在黄酮类化合物结构研究中的应用举 例 各光谱数据。提 问综合解析课堂练习3.小结（时间）：35 分钟今天的内容是重点，又是难点，大家可能觉得有些吃力，不过没关系，多做一些练习题效果就会好多了。老师也尽量慢点讲，让大家慢慢理解、吸收。4.布置作业 1、习题集本章相应练习题。33、4、5三氧取代（四）糖基上质子1、单糖苷类2、双糖苷类三、 13C-NMR 的应用1、基本母核的碳信号2、取代后的模式*课堂练习课 题 第六章 黄酮类化合物第六节 结构研究第七节 天然药物实例教学目的 1、掌握黄酮类化合物 MS 的一般裂解规律2、掌握含黄酮类化合物的天然药物实例（化学成分、性质及
15、提取分离）教学重点 1、黄酮类化合物 MS 的裂解规律2、天然药物实例（槐米、黄芩）教学难点 MS 裂解规律。教学方法 讲授（讨论）教 具多媒体幻灯片 教学进程1.导言（时间）：35 分钟MS 在黄酮类化合物的结构研究中作用很大，近来随着 FD-MS 和FAB-MS 及 ESI-MS 等软电离质谱技术的应用，使得质谱在黄酮类化合物的结构研究中的应用更加广泛。复习提问1、黄酮、黄酮醇类的 C 环质子有何区别（ 1H-NMR）2、黄酮、黄酮醇类的 C 环碳原子个有何特征？（ 13C-NMR ）板书设计第六节 结构研究四、MS 在黄酮类化合物中的应用（一）游离黄酮（二）黄酮苷类五、黄酮类化合物综合光
16、谱解析练习第七节 天然药物实例2.讲授（时间）：8085 分钟课题内容 第六章 黄酮类化合物第六节 结构研究第七节 天然药物实例掌握要点 1、黄酮类化合物 MS 的裂解规律2、天然药物实例的化学成分，性质及提取分离举 例 1、提取分离工艺流程2、MS 裂解式提 问本次课不设提问，课堂练习采用讨论的方式进行3.小结（时间）：35 分钟黄酮类化合物今天就全部讲完了，大家脑海里是否已经有了比较清晰、明确的知识体系？如果还没有，说明你复习的不及时，或者课堂上没有跟上老师的思路，总之提醒大家一句，要及时复习，不要欠帐。4.布置作业 1、习题集本章相应练习题。一、槐米1、化学成分及性质2、提取分离二、黄芩1、化学成分及性质2、提取分离三、葛根1、化学成分2、提取分离四、银杏叶1、化学成分2、提取分离*课堂练习
