1、毒理学杂志，2010,24（1）：50-52安多霖与辐照联合处理对小鼠S180肉瘤抑制作用王慧 李卫红 范玉敏 郝玉兰 胡雷 庞得全 吴永生 王伟新 姚林华北煤炭医学院，河北 唐山【摘要】 目的：探讨安多霖与辐照联合处理对小鼠S180 肉瘤的协同抑制作用。方法：60只昆明种小鼠随机分为5组，即肿瘤组、照射组、给药组、低剂量联合组和高剂量联合组。小鼠接种S180 瘤株2 d后，用6MV-X 射线局部照射，剂量为50 cGy。安多霖于接种瘤细胞的前一天开始灌胃。接种瘤细胞12 d后检测动物的体重、瘤重，白细胞计数，肝组织内丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px
2、)和过氧化氢酶(CAT)含量。结果：照射组、给药组、低剂量联合组、高剂量联合组与肿瘤组比较肿瘤抑制率分别为47.37%、20.39%、54.61% 和59.82%，差异均有统计学意义(P 0.05)。照射组与肿瘤组比较，白细胞计数降低(P 0.05);低剂量联合组、高剂量联合组与照射组比较，白细胞计数增高(P 0.05)。高剂量联合组，给药组与肿瘤组、照射组和低剂量联合组比较，MDA值降低，SOD、GSH-Px、CAT值升高，差异均有统计学意义(P 0.05)。其中以高剂量联合组效果较好。结论：在本试验条件下，提示安多霖与辐照联合处理可以对肿瘤抑制产生协同增效作用。【关键词】 安多霖 放射治疗
3、 抑瘤作用安多霖(ADL)是由黄芪、鸡血藤加上珍稀植物配方组成的一种口服防辐射中药制剂。研究表明，安多霖具有提高机体免疫功能以及保护骨髓造血等功能。X 射线可通过直接或间接作用破坏瘤细胞，抑制瘤细胞增殖，从而使瘤体缩小或增长减缓。本实验通过建立小鼠S180肉瘤模型，探讨安多霖在保护正常组织减少辐射损伤的同时对肿瘤的影响，尤其与辐照联合处理对肿瘤是否具有协同抑制作用进行研究，为肿瘤放疗及安多霖的临床应用提供科学依据。1 材料与方法1.1 材料 昆明种小鼠60只，雌雄各半，由北京华福康生物科技有限公司提供(SCXK 京 2008-0004)，体重2224 g;S180肉瘤种液由河北医科大学实验动物
4、中心提供。安多霖胶囊由福建省阿多拉制药有限公司提供(批号070501)。1.2 方法1.2.1 动物分组:将实验动物随机分为5个组，每组12只。肿瘤组，接种S180瘤株，正常饲料和自由饮水;照射组，接种S180瘤株，局部 X 线照射，正常饲料和自由饮水;给药组，接种S180瘤株，安多霖灌胃，剂量为8 g/(kg d)，共12d;低剂量联合组，接种S180瘤株，局部 X 线照射，安多霖灌胃，剂量为4 g/(kgd)，共12d;高剂量联合组，接种S180瘤株，局部 X 线照射，安多霖灌胃，剂量为8 g/(kgd)，共12d。1.2.2 瘤细胞接种:无菌抽取腹腔接种S180肉瘤小鼠腹水，用生理盐水4
5、倍稀释，于受试动物右前肢腋窝皮下注射0.1ml。1.2.3 辐照条件:北京医疗器械研究所BJ-6B 型直线电子加速器，能量6MV X 线，单次局部照射剂毒理学杂志，2010,24（1）：50-52量为50cGy、照射距离为100 cm、剂量率为280 cGy /min。1.2.4 动物处理:给药组经口给予安多霖，于接种瘤细胞的前一天开始经口灌胃，1 次/d，连续12d。其余组动物按同样办法给予蒸馏水。各照射组动物均于接种瘤细胞后第2天进行接种部位局部照射 1 次，照射面积1.0 cm 1.0 cm。1.3 检测指标：至接种瘤细胞后12 d将全部动物脱臼处死并检测下列指标。1.3.1 动物体重、
6、瘤重与肿瘤生长抑制率:将处死动物用动物天平称体重，再分离瘤体用电子天平测量瘤重并计算肿瘤生长抑制率。公式如下:肿瘤生长抑制率=(肿瘤组瘤重 实验组瘤重)/肿瘤组瘤重100%1.3.2 外周血白细胞计数(WBC):动物处死前于尾尖部采血10l，显微镜计数。1.3.3 测定指标:制备肝匀浆，测定其丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活力、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力和过氧化氢酶(CAT)活力指标测定。1.4 统计学方法：所有数据录入 Excel，计量资料均以 s表示，应用 SPSS11.0 统计软件分析处 理。计多组之间比较用方差分析，两两比较用 q检验，P 0.05 为差异具
7、有统计学意义。2 结果2.1 各实验组体重、肿瘤抑制率和外周血白血病计数等指标的变化 由表1可见，肿瘤小鼠在进行局部照射后，体重减轻，外周血白细胞数量下降，肿瘤的抑制率为47.37%。在给入安多霖胶囊后，可以促进体重增长，单独给药有效;联合低、高剂量组更有效;表现为肿瘤的抑制率增加，外周血白细胞数量增加。表1 各组小鼠S180 肉瘤抑制效果的比较( s)组别 体重 肿瘤重量 肿瘤抑 外周血白(g) (g) 制率 细胞计数(%) (109 个/L)肿瘤组 19.840.30 1.520.09 9.630.38照射组 15.560.78 * 0.800.06* 47.37 5.150.43*给药组
8、 21.600.61 * 1.210.08* 20.39 9.540.65低剂量联合组 16.920.71 * 0.670.07* 54.61 5.740.39*高剂量联合组 20.360.43 # 0.610.06* 59.82 6.080.72*#注:与肿瘤组比较， *P 0.05;与照射组比较， P 0.05;与低剂量联合组比较， #P 0.05;与给药组比较， P 0.05;n = 12。2.2 各组实验小鼠肝组织内氧化抗氧化状态 由表2可见，肿瘤小鼠经过照射后，肝组织中MDA值毒理学杂志，2010,24（1）：50-52升高，抗氧化物酶SOD，GSH-Px 和CAT活力降低，与肿瘤组
9、比较差异有统计学意义(P 0.05)。单纯给入安多霖胶囊后，与肿瘤组比较，MDA 含量降低，抗氧化物酶的活性增加。联合给药可以缓解照射引起的脂质过氧化产物增加，提高抗氧化酶的活性，尤其是高剂量联合组。表2 各组小鼠肝组织中MDA 含量，SOD、GSH-Px、CAT 的活力( s)MDA SOD GSH-Px CAT组别 (nmol) (U/mg) (U/mg) (U/mg)肿瘤组 7.010.44 197.427.51 96.673.73 50.995.01照射组 12.320.57 * 165.6113.98* 70.294.21* 30.262.13*给药组 6.720.46 * 220.
10、9413.35* 102.414.63* 57.394.42*低剂量联合组 10.560.52 * 171.607.82* 89.943.27* 39.674.80*高剂量联合组 5.180.41 *# 233.5115.26*# 120.594.70*# 70.463.47*#注:与肿瘤组比较， *P 0.05;与照射组比较， P 0.05;与低剂量联合组比较， #P 0.05;与给药组比较， P 0.05；MDA:丙二醛；SOD:超氧化物歧化酶；GSH-Px:谷胱甘肽过氧化物酶；CAT:过氧化氢酶；n =12。3 讨论高剂量联合组的小鼠体重比低剂量联合组、照射组、给药组和肿瘤组的体重明显增
11、加，有统计学意义，说明高剂量安多霖与照射具有协同抑制肿瘤，增强小鼠体质的作用。X 射线通过直接或间接作用杀伤肿瘤细胞、破坏肿瘤组织，抑制肿瘤细胞增殖，使瘤体缩小或增长减缓。本实验发现安多霖治疗后，高剂量联合组的抑瘤率为59.82%，低剂量联合组的抑瘤率为54.61%，照射组的抑瘤率为47.37%，给药组的抑瘤率为20.39%，说明安多霖和照射均对小鼠S180肉瘤具有明显的抑制作用，析因分析表明安多霖和照射对小鼠S180肉瘤具有协同抑制作用。白细胞在机体非特异性细胞免疫系统中起重要作用。照射在杀伤肿瘤细胞、破坏肿瘤组织的同时，对机体正常组织也有损伤，造成免疫力下降。外周血白细胞降低是放疗对造血系
12、统毒副作用的重要表现之一。本实验通过对小鼠外周血白细胞的检测，结果显示照射可以导致白细胞降低，安多霖可以升高白细胞，特别是高剂量安多霖的应用，白细胞升高效果明显。正常情况下体内自由基及脂质过氧化物不断产生，又在内源性抗自由基损伤系统的作用下不断被清除，始终保持适度的低水平。少量自由基参与许多重要的生化反应，在维持生命活动中起重要作用 1 。放射治疗过程中，抗氧化酶活性的降低和O 2 等氧自由基作用的增强，是电离辐射引起机体过氧化损伤、导致组织细胞功能异常的重要原因 2 。活性氧(ROS)包括羟自由基( OH)、超毒理学杂志，2010,24（1）：50-52氧自由基(O 2 )、单线氧( 1O2
13、 )和过氧化氢(H 2O2)，广泛存在于组织器官中 3 ，细胞内的抗氧化物起清除这类代谢产物的作用，但生成和清除平衡受到破坏时就会产生氧化应激持续状态，当一些有关细胞生命的关键大分子氧化损伤到一定程度后，可导致包括信号转导和基因表达的变化，从而促进细胞有丝分裂发生突变及细胞死亡 4 。近年来细胞分子水平调节的研究显示，活性氧自由基与肿瘤的发生、发展及抗肿瘤免疫的关系十分密切。机体通过酶系统与非酶系统产生氧自由基，氧自由基能攻击生物膜中的多不饱和脂肪酸，引发脂质过氧化作用，并因此形成脂质过氧化物，MDA是脂质过氧化物的最终产物，其变化可代表体内自由基水平的变化 5 。同时，MDA值的高低间接反映
14、了机体细胞受自由基攻击的严重程度。任何原因引起的氧自由基生成过多，都可使组织细胞受到氧化损伤。氧化损伤可表现为:细胞膜完整性的破坏，细胞结构和功能异常，基因突变，癌基因被激活，进而细胞分化异常，增殖失控，从而有可能发生癌变 6 。SOD是一类重要的氧自由基清除酶，可将O 2 转变为H 2O2，能促使超氧阴离子自由基分解，在一定程度上使生物分子和细胞免受损伤，消除其对机体的损害，防止肿瘤发生、抗衰老、提高机体免疫力，其活力变化反映机体抵抗自由基的能力 7 。H 2O2是一种弱氧化剂和弱还原剂，在缺乏过度金属离子时相对稳定，但氧化还原特性在其过度金属存在时会形成高活性自由基，进而损伤机体。CAT和
15、GSH-Px的生物学作用是清除脂类过氧化物及H 2O2，减轻有机氢过氧化物对机体的损伤。GSH-Px和CAT再把H 2O2转化为水，从而使有毒性的O 2 和H 2O2均被转化为无害的水分子 8 。CAT除了可调节体内H 2O2水平，还可充当Hb和其他巯基蛋白质的保护剂;还原型谷胱甘肽GSH在GSH-Px的催化下，实现GSH与氧化型谷胱甘肽(GSSH)的转变，使氧化型物质还原，解除其毒性 9 。本次实验通过对实验小鼠肝脏组织内MDA、SOD、GSH-Px和CAT含量的测定，结果显示肿瘤和照射会使组织内MDA含量升高，而使SOD、GSH-Px、CAT含量降低，造成自由基对小鼠机体的氧化损伤。安多霖
16、可以使小鼠肝脏组织内MDA含量下降，而使SOD、GSH-Px、CAT含量升高，高剂量安多霖与照射联合应用对抗自由基损伤作用更为明显，说明安多霖与照射二者对肿瘤抑制具有协同作用。本研究提示X射线局部照射同时应用安多霖可以提高对肿瘤的抑制率，增强机体的免疫功能，降低脂质过氧化水平，为临床提高放疗疗效，减轻毒副作用和安多霖的临床应用提供了部分依据。【参考文献】1 方允中，李文杰. 自由基与酶M. 北京: 科学出版社，1987:251-254.2 Devi PU，Ganasoundari AM. Modulation of glutathione and antioxidant enzymes by
17、Ocimum sanctum and its role in protection against radiation injuryJ. Indian J Exp Bio， 1999，37(3):262-265.3 Wiseman H，Halliwell B. Inhibition of liposomal lipid peroxidation by isoflavonoid type phyto-oestrogens from soybeans of different countries of originJ. Biochem Soc 毒理学杂志，2010,24（1）：50-52Trans
18、，1996 ，313(1):17-29.4 Hunt CR，Sim JE，Sullivan SJ，et al. Genomic instability and catalase gene amplification induced by chronic exposure to oxidative stressJ . Cancer Res，1998，58(17):3986-3992.5 Chae HJ，Chae S，Kang JS，et al. Effect of ionizing radiation on the differentiation of ROS 17/2.8 osteoblast
19、s through free radicalsJ. J Radiat ResTokyo，1999，40(4):323-335.6 Yang CF，Liu J，Shen HM，et al. Inhibition of ebselen on aflatoxin B (1)-induced hepatocarcinogenesis in Fischer 344 ratsJ. Carcinogenesis，2000，21(12):2237-2243.7 孙存普，张建中，段绍瑾主编. 自由基生物学导论 M.合肥: 中国科学技术大学出版社，1999:194-210.8 Husain K，Whitworth C，Somani SM，et al. Carboplatin- induced doxidative stress in rat cochleaJ. Hear Res，2001，159(1/2):14-22.
