1、血液幹細胞研究室 暨組織庫 Stem cell research laboratory and tissue bank,實驗室簡介製表人：葉士芃 連絡分機：1513 資料更新日期：96.12.10,實驗室簡史,本科室於91年經醫院大力協助下，於同年6月正式在醫學研究部下成立血液幹細胞研究室暨組織庫，為了有效監督與管理，血液幹細胞研究室雖歸屬於輸血委員會監督，組織庫也特別成立組織庫委員會來有效監督與管理組織庫作業 本科室成立之初由病理部陳志榮主任與醫硏部部主任李正淳領籌成立，附屬於醫學研究部，組織庫由陳志榮主任負責，幹細胞部分由葉士芃醫師負責，兒科部份由巫康熙醫師負責,實驗室組織圖,實驗室組織架
2、構 I,研究室下設三組，為組織庫、臍帶血幹細胞組及週邊血幹細胞組,其組織機能如下: 組織庫組 提供外科病理標本及本院所有病人檢體有效利用與保存。 組織庫作業：包括各種組織之切割、切割組織之快速冷凍保 存、組織入庫出庫處理、組織資料庫之建立與維護、品質管制之維持、器械用物之清洗並送高溫高壓消毒。,臍帶血幹細胞組 提供婦兒科病人臍帶血幹細胞之臨床應用與幹細胞研究。 臍帶血收集:包括指定收集後在本院進行移植(親屬或兄弟姐妹間移植或委託本院臍帶血收集、分離、冷凍保存及鼓勵產婦無條件捐贈(即在本院設置cord blood bank)或無條件捐贈當為研究用。 臍帶血幹細胞processing：包括cord
3、 blood concentration and processing、RBC depletion/wash plasma reduction (nucleated cell concentrate)、MNC concentration and purification。quality assurance：cell count、viability、cryopreservation、progenitors assay (CFU assay)。 Flow cytometry (immunophenotyping)、CD34 cell counting、leukemia typing，HLA typ
4、ing:建立完整之database 包括:HLA-A、 HLA-B、HLA-DR，採用DNA分析法，CMV檢測:採用DNA分析法。 資料庫之建檔。,實驗室組織架構 II,週邊血幹細胞組 提供內、外、婦、兒科及本院各科病人週邊血幹細胞之臨床應用。 週邊血幹細胞作業:包括成人小孩週邊血幹細胞收集、分離、冷凍。 Bone marrow分離、冷凍。 Flow cytometry (immunophenotyping)、CD34 cell counting、leukemia typing，HLA typing:建立完整之database包括:HLA-A、 HLA-B、HLA-DR，採用DNA分析法，CM
5、V檢測:採用DNA分析法。 Apheresis (血液分離術) 包括plateletpheresis、granulocyte collection、lymphocyte collection、plasma collection、plasma exchange、plasmapheresis。 資料庫之建檔。,實驗室組織架構 III,實驗室遠景,近程 支援臨床單位，開發高品質之幹細胞移植治療，並利用幹細胞進行細胞治療、基因治療的基礎研究與動物試驗 。 中程 基礎研究的結果，進行幹細胞輸入人體（治療癌症或其他疾病）的臨床試驗。 長程 建立以臨床為導向的幹細胞研究、治療中心。,實驗室設置辦法,血液幹細
6、胞研究室之設置：依據輸血管理規章及AABB之規範執行。 組織庫：成立之初，依據衛生署九十一年五月一日公告研究用人體檢體採集與使用注意事項採集檢體供研究使用，除依法令規定外，依注意事項為之。九十五年九月起，依據衛生署九十五年八月十八日公告研究用人體檢體採集與使用注意採集檢體供研究使用，除依法令規定外，依注意事項為之。,實驗室空間規劃,實驗設備儀器,三洋-30冰箱 Revco -80冰箱 4冰箱 PCR-machine 電泳照相系統 電泳槽與電源供應器 微量分析天秤 離心平衡用天秤 電子秤 生物安全操作台-組織 生物安全操作台-體液 血球分離機 自動降溫冷凍系統 全自動液態氮保存系統 液態氮保存桶
7、 液態氮檢體傳送桶 高速微量離心機 離心機 水浴漕 乾浴槽 震盪器 實驗用微波爐 組織均質機 pH-meter 微量吸管 開單系統電腦與條碼列印機 純水製造機 滅菌鍋 Stir and hot plate 流式細胞儀 螢光顯微鏡 分光光度計,實驗室編制狀況,主持人：葉士芃 共同主持人：邱昌芳 巫康熙 白禮源廖裕民 林振源 成員：林嬌玲 羅文吉 賴育秀 劉雅琳 共計：研究員0位，副研究員0位,實驗室主持人簡介,姓 名 : 葉 士 芃 主 要 學 歷 1984 年 8 月至 1991 年 6 月 ： 私立台北醫學院 醫學士 現 職 及 主 要 經 歷 2004年 12 月迄 今 ：私立中國醫藥學院
8、附設醫院醫學系內科助理教授 1999 年 8 月至 2004 年 12 月 ：私立中國醫藥學院附設醫院醫學系內科講師 1998 年 12 月迄 今 ：私立中國醫藥學院附設醫院血液腫瘤科主治醫師 1998 年 7 月至 1998 年 12 月 ：高雄榮民總醫院內科部加護醫學科代主治醫師 1996 年 7 月至 1998 年 6 月 ：高雄榮民總醫院內科部總住院醫師 1993 年 7 月至 1996 年 6 月 ：高雄榮民總醫院內科部住院醫師 獎 章 1997 : 高雄榮民總醫院教學績優獎 2005 : 血液病學會青年優秀論文獎 專 科 及 次 專 科 中華民國醫師證書 ： 醫字第21153號 中
9、華民國內科專科醫師 ： 內專醫字第4327號 中華民國血液病專科醫師 ： 中血專醫字第88009號 中華民國腫瘤內科專科醫師 ： 中腫內專醫證字87002號 中華民國考試院高等考試及格 中華民國考試院醫事人員考試及格,研究主題,臨床幹細胞移植相關研究 利用血球分離術純化CD34陽性造血幹細胞之移植臨床試驗 異體造血幹細胞與骨髓間質幹細胞共同移植之先期研究 臨床免疫相關研究 異體幹細胞移植後,免疫調控與移植物對抗宿主疾病(GVHD)之關係 移植後排斥之免疫研究 癌症病患之免疫研究 間質幹細胞相關研究 血液惡性腫瘤病患骨髓間質幹細胞特性分析 骨髓間質幹細胞延展性(plasticity)研究 骨髓間
10、質幹細胞細胞治療研究,實驗專長與技術,Leukemia typing白血病分型 Stem cell analysis幹細胞計數與分析 Bone Marrow Processing骨髓移植前處理 PBSC之收集與冷凍處理 血液、骨髓抹片免疫化學染色與特殊免疫染色、鏡檢 Flow cytometry analysis流式細胞儀分析 Immunohistochemistry stain免疫組織化學染色 Molecular Biology分子生物實驗 Cell culture細胞培養 Leukophersis白血球分離術 骨髓幹細胞培養 分離、萃取、保存組織及Buffy Coat檢體及DNA.RNA
11、核酸電泳與定量,過去研究領域,“純化”造血幹細胞移植（CD34+ selection）臨床領域。（臨床領域） 幹細胞移植後GVHD的完成反應研究。（國科會計劃） 幹細胞移植後肺部纖維化的治病機轉研究。（國科會計劃） 血液惡性腫瘤病患骨髓間質幹細胞特性分析。（國科會計劃） 乳癌腫瘤專一性基因治療的基礎研究、動物試驗。（赴美進修學習） 造血幹細胞體外培養出紅血球之先期研究。（國科會計劃）,目前研究範圍,骨髓間質幹細胞相關研究 骨髓間質幹細胞與血液惡性腫瘤癌細胞的相互作用 利用骨髓間質幹細胞培養出紅血球血液細胞 利用間質幹細胞homing到腫瘤組織的特性,研究用來作為癌細胞治療載具的可行性 免疫相關
12、研究 T helper 族群(TH1,TH2,Treg)及相關細胞激素(cytokine)在幹細胞移植後移植物對抗宿主疾病(GVHD)的相關研究 T helper 族群(TH1,TH2,Treg)及相關細胞激素(cytokine)對癌症病人預後的相關研究 組織庫相關研究 不同抽取DNA，RNA方法之效率、準確率以及再現率之分析,使用實驗室之校院研究人員,姓名：廖裕民 歸屬單位：血液腫瘤科 職稱：主治醫師 執行研究(計畫)內容：接受幹細胞移植或化學治療病人之造血幹細胞竈相關接合因子之變化 使用材料：骨髓,使用實驗室之校院研究人員,姓名：白禮源 歸屬單位：血液腫瘤科 職稱：主治醫師 執行研究(計畫
13、)內容：Sonic hedgehog訊息路徑與血液惡性腫瘤的關係 使用材料：白血病細胞株,使用實驗室之校院研究人員,姓名：林振源 歸屬單位：血液腫瘤科 職稱：主治醫師 執行研究(計畫)內容：比較間質幹細胞於大腸直腸癌組織及癌旁正常組織之癌轉化特性 使用材料：大腸直腸癌組織,使用實驗室之校院研究人員,姓名：趙玲敏 歸屬單位：內科 職稱：專科護理師 執行研究(計畫)內容：藉由-catenin蛋白轉活化細胞骨架波形蛋白以調控人類骨髓間質幹細胞移動與侵犯能力 使用材料：骨髓,使用實驗室之校院研究人員,姓名：洪明奇 歸屬單位：分子醫學科 職稱：主任 執行研究(計畫)內容：Signal pathways
14、and epigenetic regulation of stem cells 使用材料：骨髓,使用實驗室之校院研究人員,姓名：巫康熙 歸屬單位：小兒科 職稱：主治醫師 執行研究(計畫)內容：從臍帶血與臍帶間質幹細胞共同培養大量人類紅血球 使用材料：臍帶血與臍帶,使用實驗室之校院研究人員,姓名：方世華 歸屬單位：基礎醫學研究所 職稱：教授 執行研究(計畫)內容： 使用材料：流式細胞儀,使用實驗室之校院研究人員,姓名：翁靖如 歸屬單位：生物科技系 職稱：助理教授 執行研究(計畫)內容： 使用材料：流式細胞儀,實驗室跨校院、跨國際合作,跨校/院/國際名：國立中興大學 主持人：鄭旭辰 歸屬單位：生命
15、科學院 職稱：副教授 執行研究內容：癌幹細胞之研究 使用材料：白血病細胞株,實驗室跨校院、跨國際合作,跨校/院/國際名：國立中興大學 主持人：陳全木 歸屬單位：生命科學院 職稱：教授 執行研究內容：Stem Cell Niche之研究 使用材料：間質幹細胞株,研究成果,幹細胞研究室暨組織庫 研究計劃執行與協助一覽表（2005-2007年）,研究成果,幹細胞研究室暨組織庫 研究計劃執行與協助一覽表（2005-2007年）,研究成果,實驗室近五年論文發表： Su-Peng Yeh; Chang-Fang Chiu; Wen-Jyi Lo; Chiao-Ling Lin; Chung-Tsen Hs
16、ueh; Yu-Mine Liao; Ying-Chun Shen; Low Infectious Morbidity in Patients of Heavily Pretreated Hematological Malignancies Receiving Autologous Peripheral Blood Stem Cell Transplantation Without Antimicrobials Prophylaxis; Annals of Hematology, 2003, 82: p24-29 S-P Yeh, J-G Chang, C-L Lin, W-J Lo, C-C
17、 Lee, C-Y Lin, C-F Chiu. Mesenchymal stem cells can be easily isolated from bone marrow of patients with hematological malignancies but the surface antigens expression may be changed after prolonged ex vivo culture. Leukemia, 2005; 19 (8), p1505-1507 S-P Yeh, J-G Chang, W-J Lo, Y-C Liaw, C-L Lin, C-
18、C Lee, C-F Chiu. Induction of CD45 expression on bone marrow-derived mesenchymal stem cells. Leukemia, advance online publication 9 March 2006. L-Y Bai, C-F Chiu, C-W Lin, N-Y Hsu, C-L Lin, W-J Lo and M-C Kao. Differential expression of Sonic hedgehog and Gli1 in hematological malignancies Leukemia,
19、 advance online publication November 2007.,研究成果,實驗室近五年研討會發表： Lo WJ, Lin CL, Yeh SP, Chiou CF, Cheng JL, Purification of Mononuclear Cells From Incompatible Allogeneic Bone Marrow by Using CS-3000 Plus Cell Seperator. 中華民國醫檢學會九十一年度年會; p.37 台北; 2002/11/3, (oral presentation) Lin CL, Yeh SP, Chiou CF,
20、Lo WJ, Cheng JL, Autologous Peripheral Blood Stem Cell Transplantation-the China Medical College Hospital Experience. 中華民國醫檢學會九十一年度年會; p.39 台北; 2002/11/3, (oral presentation) 羅文吉 葉士芃 陳鴻震 林嬌玲 廖裕民 邱昌芳 周寬基The Best Timing for PBSC Harvest After the Administration of G-CSF 中華民國血液病學會/血液及骨髓移植學會聯合學術年會; p.66
21、 高雄; 2003/3/15, (oral presentation) 葉士芃 吳蜜蘭 廖育晴 羅文吉 林嬌玲 張建國 邱昌芳 Isolation and in vitro expansion of mesenchymal stem cell from bone marrow of patients with leukemia, myeloma, and aplastic anemia. 中華民國血液病學會/血液及骨髓移植學會聯合學術年會; p.13 台北; 2004/3/14, (oral presentation) 張韶恩 羅文吉 郭仁懿 陳如娟 施木青 二種不同白血球過濾器過濾效率之評估
22、 中華民國醫檢學會九十三年度年會; PD04 台北; 2004/11/3, (Poster presentation),實驗室近五年研討會發表： Su-Peng Yeh, Chang-Fang Chiu, Yu-Min Liao, Wen-Jyi Lo, Yu-Ching Liaw, Chiao-Lin Lin, Jan-Gowth Chang, Chung-Tsen Hsueh. Serum level of IL-10 correlates well with the activity of chronic graft-versus-host disease and the respons
23、iveness to corticosteroid treatment. Blood (ASH Annual Meeting Abstracts), 2004; 104(11); 458a. (Poster presentation at 2004 Annual meeting of American Society of Hematology; San Diego, Dec. 4-7/2004) 葉士芃 廖裕民 廖育晴 羅文吉 林嬌玲 張建國 邱昌芳 Plasma Level of Interleukin-10 Correlates Well with the Activity of Gra
24、ft-Versus-Host Disease and the Responsiveness to Immunosuppressive Treatment中華民國血液病學會/血液及骨髓移植學會聯合學術年會; p.24-26 高雄; 2005/3/26, (oral presentation) 葉士芃 吳蜜蘭 廖育晴 羅文吉 林嬌玲 張建國 邱昌芳 Mesenchymal Stem Cells Can Be Easily Isolated from Bone Marrow of Patients With Various Hematological Malignancies But The Sur
25、face Antigens Expression May Be Different From Patient to Patient and Passage to Passage中華民國血液病學會/血液及骨髓移植學會聯合學術年會; p.66 高雄; 2005/3/27, (oral presentation) Su-Peng Yeh, Chang-Fang Chiu, Yu-Min Liao, Chiao-Lin Lin, Wen-Jyi Lo, Cheng-Chun Lee. Abnormal bone marrow derived mesenchymal stem cell: another
26、 clone in hematological malignancy? Blood (ASH Annual Meeting Abstracts), 2005; 106(11); 404a. (Poster presentation at 2005 Annual meeting of American Society of Hematology; Atlanta, Dec. 10-13/2005),研究成果,實驗室近五年研討會發表： 葉士芃 廖裕民 羅文吉 林嬌玲 邱昌芳 Abnormal Bone Marrow-Derived Mesenchymal Stem Cell ( Bone Marr
27、ow Stromal Cell): Another Clone in Hematological Malignancy? 中華民國血液病學會/血液及骨髓移植學會聯合學術年會; p.23-24 台中; 2006/3/18, (oral presentation) 葉士芃 廖裕民 廖育晴 羅文吉 林嬌玲 張建國 邱昌芳Post Transplant Immune Monitoring: New Insight in the Management of Graft-Versus_Host Disease. 中華民國血液病學會/血液及骨髓移植學會聯合學術年會; p.23-24 台中; 2006/3/1
28、9, (oral presentation) 廖裕民 葉士芃 林振源 黃馨慧 白禮源 羅偉忠 謝清昀 羅文吉 林嬌玲 邱昌芳Autologous Transplantation Using In Vivo-Purged Peripheral Blood Stem Cells for Relapsed AML: Clinical Limitation And Future Implication中華民國血液病學會/血液及骨髓移植學會聯合學術年會; p.23-24 台中; 2007/03/10, (oral presentation) 羅文吉 葉士芃 林嬌玲 廖裕民 黃馨慧 林振源 白禮源 羅偉忠
29、 謝清昀 邱昌芳Changing Characteristics of Bone Marrow-Derived Mesenchymal Stem Cell During Ex Vivo Culture: Important Consideration For Research And Clinical Application中華民國血液病學會/血液及骨髓移植學會聯合學術年會;台中; 2007/03/10, (oral presentation) 邱昌芳 羅文吉 林嬌玲 廖裕民 林振源 黃馨慧 白禮源 葉士芃Total Body Irradiation before Allogeneic Tra
30、nsplantation Results in Chromosomal Abnormalities of Bone Marrow-Derived Mesenchymal Stem Cells中華民國血液病學會/血液及骨髓移植學會聯合學術年會;台中; 2007/03/10, (oral presentation),研究成果,研究成果 (一),Serum IL-10 level correlates well with the activity of GVHD,Presented at 2004 annual meeting of American Society of Hematology (A
31、SH) & 2006 annual meeting of European Society of Hematology (ESH)Yeh SP. Blood 2004, 104 (11): 458a Yeh SP. Hematologica 2006, 91 (S1): 114-115,Primary culture of MSC,Adipocytic differentiation,Osteocytic differentiation,Mesenchymal Stem Cell Immunomodulation Tissue engineering Carcinogenesis in leu
32、kemia & myeloma,研究成果 (二),Mesenchymal Stem CellDifferent between normal & myeloma Pathophysiological significance? Clinical significance?,研究成果 (三),P5 Mesenchymal stem cells (MSCs) is different to P2 MSCs,P2 vimentin,P5 vimentin,Submitted to 2006 annual meeting of American Society of Hematology (ASH),
33、研究成果 (四),Cytogenetic abnormality of MSCs after irradiation,Submitted to 2006 annual meeting of American Society of Hematology (ASH),研究成果 (五),Gene Expression Profile of MSCs is different between normal and myeloma,GEP MM P2 NP2: INF-alpha inducible protein 27; Mannosidase, class IC, member 2 Serine p
34、roteinase inhibitor; spondin 2, TetranectinNP2 MMP2: angiotensinogen protinase inhibitor, ectonucleotide pyrophosphatase keratin associated protein 1-1, podocalyxin- like, putative NFkB activating protein,Pathophysiological significance? Clinical significance?,How MSCs influence the fate of hematolo
35、gical cancer cells?,Research grant from NSC 95-2745-B-039-005,Viability 33%,Viability 42%,Viability 94%,Viability 97%,研究成果 (六),發展方向,臨床發展方向1. 由成人及小兒血液腫瘤科合作開發嶄新幹細胞移植治療。2. 與其他科室(如: 神經內外科、心臟科)合作，開發造血幹細胞或間質幹細胞修復受損組織之治療。研究發展方向1. 利用骨髓間質幹細胞能為細胞治療（cell therapy）及基因治療的載具。2. 利用骨髓間質幹細胞研究基質微環境（stromal microenvironment） 對癌症行程的影響。3. 利用骨髓間質幹細胞，建構體外造血系統的微環境。,
