1、实验二 微生物的实验室培养,营养条件-培养基,人们按照微生物对营养物质的不同要求,配制出供其生长繁殖的营养基质.,培养基种类,培养基的成分,水 碳源 氮源 无机盐 生长因子,其他条件,配制培养基时还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质（生长因子）以及氧气的需求。,环境条件-无菌技术-消毒,煮沸消毒法、巴氏消毒法。 化学试剂消毒法：用酒精擦拭双手、氯气消毒水源等。 紫外线消毒法：紫外线照射接种室、接种箱或超净工作台。,无菌技术-灼烧灭菌,将微生物的接种工具，如接种环、接种针或其他金属器具，直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧，可以迅速彻底灭菌。接种过程中，试管口或瓶口等容易被污染的部位，也可以通过火
2、焰灼烧来灭菌。,无菌技术-干热灭菌,将灭菌物品放入干热灭菌箱内，在160170加热12小时可达到灭菌目的。能耐高温的、需要保持干燥的物品，如玻璃器皿（吸管、培养皿）和金属器具等。,无菌技术-高压蒸汽灭菌,将灭菌物品放置高压蒸汽灭菌锅中，一般保持压力为100KPa、温度121条件下，维持1530分钟。,思考-选择合适方法消毒或灭菌,培养基和培养皿 玻棒、试管、烧瓶、吸管 实验者的双手,环境条件-培养温度和时间,纯化技术-菌落,菌落：微生物在固体培养基表面生长可形成菌落。 单菌落：一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体。获得单菌落就达到了纯化培养微生物的目的。,实验药品及器材,大肠杆菌菌液、液体培
3、养基、固体培养基、酒精灯、70%酒精棉、高压灭菌锅、涂布器、接种环、恒温培养箱等。,配制培养基-液体培养基,计算 称量 溶化（不加琼脂） 调pH 灭菌,配制培养基-固体培养基,计算 称量 溶化（添加琼脂） 调pH 灭菌 倒平板（50）,纯化大肠杆菌-平板划线法,平板划线法是通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。在数次划线后培养，可以得到单菌落。,纯化大肠杆菌-稀释涂布法,稀释涂布平板法是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到固体培养基上进行培养。合适的稀释度菌液涂布后可在固体培养基上形成单菌落。,注意：取出涂布器时，要让多余的酒
4、精在烧杯中滴尽，然后将沾有少量酒精的涂布器再灼烧灭菌。,培养,将接种后的培养基和一个未接种的培养基都放入37恒温箱中,培养12小时和24小时后,分别观察并记录结果。,实验四 微生物数量的测定,统计菌落数目估算样品中的活菌数量,当稀释度足够高时，平板上的一个菌落来源于菌液中的一个活菌。 在实际操作中，通常选用一定稀释范围的样品液进行培养以保证获得菌落数在30300之间、适于计数的平板。,合适的稀释度,测定土壤中细菌的数量，一般选用104、 105 和106倍的稀释液进行平板培养,实验方法,稀释涂布法,实验步骤,土壤取样。 配制一系列梯度稀释土壤溶液 涂布在固体培养基上，按照不同微生物培养温度和时间进行培养。 统计菌落：每个梯度应多涂几个平板，取其平均值。并设置空白对照。 估算每克样品中的菌株数：,统计结果常常用菌落数目。所测得的菌落数目一般小于实际菌液中的活菌数。,显微镜直接计数法：血球计数板法,统计结果：一般用活菌数表示。,滤膜法：测定饮用水中大肠杆菌的数目,已知体积的水过滤后，将滤膜放在伊红美蓝培养基上培养。在该培养基上大肠杆菌的菌落呈黑色。可根据培养基上黑色菌落的数目，计算出水样中大肠杆菌的数量。,实验结果及分析,
