1、课题 1 微生物的实验室培养一、培养基1概念人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。2种类按照培养基的物理状态划分为液体培养基和固体培养基。3营养要素各种培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐，此外还要满足微生物生长对 pH、特殊营养物质以及氧气的要求。二、无菌技术1获得纯净培养物关键是防止外来杂菌的入侵，具体操作如下：(1)对实验操 作的空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒。(2)将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌。(3)为避免周围环境中微生物的污染， 实验操作应在酒精灯火焰附近进行。(4)实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触
2、。2消毒和灭菌(1)消毒是指使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分微生物(不包括芽孢和孢子)。常用的方法有煮沸消毒法和化学药剂消毒法。(2)灭菌是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物(包括芽孢和孢子)。常见的方法有：灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌。三、大肠杆菌的纯化培养1制备牛肉膏蛋白胨固体培养基最 常 用 的 细 菌 培 养 基 ： 牛 肉 膏 蛋 白 胨 固 体 培 养 基配 制 步 骤 ： 计 算 称 量 溶 化 灭 菌 倒 平 板 )2纯化大肠杆菌(1)纯化培养方法：在牛肉膏蛋白胨培养基上纯化大肠杆菌，最常用的方法有平板划线法和稀释涂布平板法。(2)纯化培养的
3、原理：想方设法在培养基上得到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的菌落，即获得较纯的菌种。(3)平板划线法：通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。其具体操作是：将接种环放在火焰上燃烧，直到接种环烧红。在火焰旁冷却接种环 ，并打开棉塞。将试管口通过火焰。将已冷却的接种环伸入菌液中，沾取一环菌液。将试管口通过火焰，并塞上棉塞。左手将皿盖打开一条缝隙，右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三到五条平行线，盖上皿盖。注意不要划破培养基。 灼烧接种环，待其冷却后，从第一区域划线的末端开始往第二区域内划线。重复以上操作，在三、四、五区域内划线。注意不要将最后一区的
4、划线与第一区相连。将平板倒置放入培养箱中培养。(4)稀释涂布平板法：将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。其操作步骤是：系列稀释(梯度稀释)操作：涂布平板操作：a将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中。b取少量菌液， 滴加到培养基表面。c将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃尽后，冷却 8 10 s。d用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。3菌种保藏的两种方法临 时 保 藏 法 ： 主 要 用 于 频 繁 使 用 的 菌 种 。甘 油 管 藏 法 ： 主 要 用 于 需 长 期 保 存 的 菌 种 。 )一、选择题1下列有关培养基的叙述正确的是
5、(A)A培养基是为微生物的生长繁殖提供营养的基质B培养基只有两类：液体培养基和固体培养基C固体培养基中加入少量水即可制成液体培养基D微生物在固体培养基上生长时，可以形成肉眼可见的单个细菌解析：培养基除固体、液体 培养基外，还有半固体培养基，B 错误；固体培养基中加入了凝固剂，加入少量水仍为固体培养基，C 错误；微生物在固体培养基上生长时，可以形成肉眼可见的单个菌落，D 错误。2有关培养基配制原则表述正确的是(C)A任何培养基都必须含有碳源、氮源、矿质元素、水及生长因子B碳源和氮源必须具有一定比例，碳元素的含量最多，其次为氮元素C微生物的生长除受营养因素影响外，还受到 pH、氧、渗透压的影响D营
6、养物质的浓度越高越好解析：培养自养型微生物时不需要添加碳源，培养固氮菌时可以不加氮源；一般来说，培养基中含量最多的是水；配制培养基时要合理控制营养物质的浓度，必须考虑微生物对渗透压的耐受能力。3下面对微生物培养中灭菌的理解不正确的是(B)A防止杂菌污染B灭菌就是杀死培养基中的杂菌C培养基和培养设备都必须进行灭菌 D灭菌必须在接种前解析：灭菌的目的是防止杂菌污染，但实际操作中不可能只消灭杂菌，而是消灭全部微生物。4自养型微生物与异养型微生物的培养基的主要差别在于(A)A碳源 B氮源 C无机盐 D生长因子解析：自养型微生物主要包括进行光合作用或进行化能合成作用的微生物，他们能够利用CO2来合成自身
7、所需的有机物；而异养型微生物主要是直接利用外界的有机物来合成自生所需的有机物，所以他们培养基的主要差别就在于自养型微生物主要是利用无机物中的碳，而异养型微生物主要是利用有机物中的碳。5下列制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的叙述，错误的是(A)A操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌B将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯C将培养基冷却至 50 左右时进行倒平板D将平板冷却凝固约 510 min 后将平板倒过来 放置解析：制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤是计算、称量、溶化、灭菌、倒平板，顺序不能颠倒。牛肉膏容易吸潮，所以当牛肉膏融化并与称量纸分离后，用玻璃棒取出称量纸。将培养基冷却至 50 ，用手触摸
8、锥形瓶感觉刚刚不烫手时倒平板，平板冷却后还需倒置。6平板冷却凝固后要将平板倒置，其意义是(D)A利于大肠杆菌的接种B有利于大肠杆菌培养C利于培养基的冷却D防止皿盖冷却水倒流入培养基，防止杂菌污染解析：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好的挥发，又可以防止皿盖上水珠落入培养基，造成污染。7纯化大肠杆菌的步骤正确的是(A)A样品稀释划线或涂布法分离培养成单菌落B样品稀释培养成单菌落划线或涂布法分离C样品稀释划线或涂布分离培养成单菌落D样品稀释划线涂布分离培养成单菌落解析：微生物的分离与纯化主要包括样品稀释、划线或涂布及培养三个基本
9、步骤，其中划线或涂布法是对微生物进行分离，培养是将分离后的菌种培养成单个菌落。8某研究小组从有机废水中分离微生物用于废水处理。下列叙述正确的是(B)A培养基分装到培养皿后进行灭菌B转换划线角度后需灼烧接种环再进行划线C接种后的培养皿须放在光照培养箱中培养D培养过程中每隔一周观察一次解析：在配制培养基的过程中要先灭菌后倒平板，A 错误；转换划线角度后要对接种环进行灼烧灭菌再进行划线，B 正确；接种后放置在恒温培养箱中进行培养，C 错误；培养过程中一般隔 12 h 或 24 h 观察一次，D 错误。9现有菌液 10 mL，按下图进行系列 稀释，在最后一个试管中测得细菌数为 20 个，则未稀释前的试
10、管中有细菌(C)A600 个 B1 200 个 C210 7个 D210 6个解析：从本题的图中可看出，每次都是稀释 10 倍，总共稀释 6 次，即稀释 106倍，最后一个试管为 20 个，即原来菌液中应该有细菌 2107个。10为了保持菌种的纯净需要进行菌种的保藏，下列有关叙述不正确的是(D)A对于频繁使用的菌种，可以采用临时保藏的方法B临时保藏的菌种一般是接种到试管的斜面培养基上C临时保藏菌种容易被污染或产生变异D对于需要长期保存的菌种，可以采用低温 4 保藏的方法解析：低温 4 保藏属于临时保藏的方法。二、非选择题11为了获得纯度高的大肠杆菌，需要对大肠杆菌进行培养和分离。培养大肠杆菌一
11、般用牛肉膏蛋白胨琼脂培养基。(1)培养大肠杆菌，配制固体培养基的基本步骤：计算称量_倒平板。(2)称量时，由于牛肉膏比较黏稠，可以用_挑取，放在_上称量。由于牛肉膏和蛋白胨_，称量时动作要迅速，称量后要及时盖上瓶盖。(3)在牛肉膏蛋白胨琼脂培养基上的大肠杆菌能生长，说明培养基含有_等大肠杆菌生长所需的营养要素。(4)微生物纯化培养可以通过多种接种方法如_和_等，使大肠杆菌在固体培养基上形成单个_，从而获得纯菌株。解析：配制牛肉膏蛋白胨培养基的基本步骤：计算称量溶化灭菌倒平板。称量时，可用玻璃棒挑取，放在称量纸上称量，称量时动作要迅速。牛 肉膏蛋白胨培养基中含有大肠杆菌所需要的碳源、氮源、无机盐
12、、水等营养要素，所以常用来培养大肠 杆菌。微生物纯化培养的接种方法最常用的是平板划线法和稀释涂布平板法，可使大肠杆菌在固体培养基上形成单个菌落，从而获得纯菌株。答案：(1)溶化 灭菌 (2)玻璃棒 称量纸 容易吸潮 (3)碳源、氮源、无机盐、水 (4)平板划线法 稀释涂布平板法 菌落12下表为牛肉膏、蛋白胨培养基的成分列表，据此回答：牛肉膏 蛋白胨 NaCl H2O 琼脂0.5 g 1.0 g 0.5 g 100 mL 2.0 g(1)蛋白胨在培养基中的作用 是_。(2)此培养基如要培养霉菌时需将培养基的 pH 值调至_。(3)从配制培养基直到培养完成，所采用的预防杂菌感染的方法有：_。(4)
13、在培养基凝固前要搁置斜面，其目的是_。(5)若用此培养基纯化大肠杆菌，最常用的方法是_、_，最终，使大肠杆菌在固体培养基上形成单个_，从而获得纯菌株。答案：(1)提供碳源、氮源、生长因子 (2)酸性 (3)高压蒸汽灭菌、灼烧接种环、酒精棉擦手、棉塞塞试管口、在火焰旁接种 (4)扩大接种面积 (5)平板划线法 稀释涂布平板法 菌落13下图是倒平板操作示意图，请回答下列问题：(1)正确的操作顺序是_。(2)平板冷凝后将平板倒置原因是_。(3)在倒平板过程中如果不小心将培养基溅在皿盖和皿底之间的部位，这个平板还能培养微生物吗？_，原因是_。答案：(1)ACBD (2)利于水蒸汽的散发、防止杂菌污染 (3)不能 这样容易被杂菌污染
