1、更多医学精品 尽在医学吧,http:/ 其作用机制为：竞争性抑制位于小肠的各种-葡萄糖苷酶，使淀粉类分解为葡萄糖的速度减慢，从而减缓肠道内葡萄糖的吸收，降低餐后高血糖。,同样也可以针对糖链的变化，利用小分子化合物抑制糖苷转移酶和糖苷酶的催化活性，可以控制糖链的合成和水解，从而达到治疗疾病的目的。 因此，能够阻断寡糖链生物合成的-葡萄糖苷酶抑制剂，也被用作抗病毒和抗肿瘤的药物。,目前临床使用的-葡萄糖苷酶抑制剂,具有降血糖作用的-葡萄糖苷酶抑制剂,具有抗病毒作用的-葡萄糖苷酶抑制剂,二、实验过程,酶抑制剂的高通量筛选可以通过酶标仪进行，但系统地、准确地研究抑制剂的IC50以及抑制作用的动力学必须
2、通过精密仪器进行检测。 本实验将利用紫外-可见分光光度计测试几种化合物对酵母-葡萄糖苷酶 的抑制作用以及协同抑制作用。,实验材料： 酵母-葡萄糖苷酶（Sigma公司）。 抑制剂：槲皮素、染料木素、葡萄糖、果糖、硫酸铜、氯化锌。 底物：对硝基苯酚葡萄糖苷（pNPG，Sigma公司）,实验仪器和条件,北京普析通用UV-1901 紫外可见分光光度计,实验条件： 缓冲液：0.01mol/LpH 6.8或7.0磷酸盐缓冲液。 底物：3mg/mL对硝基苯酚葡萄糖苷； 化合物溶液的配制： 槲皮素、染料木素用DMSO配成50mol/L。 葡萄糖、果糖用水配成100mol/L。 氯化锌和硫酸铜用蒸馏水配成50m
3、ol/L。,实验安排,1，酶催化条件探索由于每次实验得到的酶催化活性不同，所以每次在测试过程中，需要探索实验中所使用的酶的剂量。本实验要求测试的酶催化活性-每分钟OD值变化在0.1-0.13范围内。本实验采用调节酶液用量或增加底物用量的方式。,2，测试体系 在总计1000L的测试体系中，加入920或930L 0.01mol/LpH 6.8磷酸盐缓冲液，10L样品溶液（以10 L缓冲液或DMSO做对照），10-20L酶液，室温放置20分钟，立即加入20-50L 3mg/mL对硝基苯酚葡萄糖苷溶液， 400nm进行时间扫描，记录1分钟的OD值.,实验安排,3，抑制剂IC50的测试改变样品溶液的剂量
4、，分别测试酶催化活性。可以通过稀释的方式改变样品的浓度。以没有加入样品的酶催化活性OD/min值为100%，用抑制百分数(指被抑制而失去活力的百分数)表示不同浓度样品对酶的抑制活性，作图求出抑制50%时样品的浓度。,实验安排,4，抑制剂动力学的测试适当选择2个不同的样品浓度，以及没加样品三个系列，改变底物溶液的剂量，分别测试酶催化活性。以底物浓度（mol/L）倒数1/S对酶催化活性OD/min值的倒数1/V作图，根据三条线的交点判断抑制剂的类型。,协同抑制作用研究,酶是生物体内重要的生物大分子，有着特殊的催化功能，与许多疾病的产生和发展都有着密切联系，是药物开发设计的一个常见的靶点。而且，酶除
5、了其活性中心可以与专一的底物互相结合外，其他的部位也可以与不同的物质结合，使酶的活性发生改变。 因此，我们可以设想用不用抑制类型的抑制剂同时对酶进行抑制，产生协同抑制的效果，令酶的活性比使用单一抑制剂时更低的同时，也可以减少抑制剂的用量，产生1+12的效果。 由于-葡萄糖苷酶有多个性质不同的抑制位点，因此我们可以推测，利用不同类型的抑制剂(竞争性抑制剂、非竞争性抑制剂以及金属离子)可以起到协同抑制的效果。,实验安排,5，协同抑制作用的测试 通过稀释的方式分别改变槲皮素、果糖、锌离子样品溶液的浓度、剂量，测试两种或三种样品对酶的抑制催化活性。 将两种或三种化合物单独测出的抑制活性相加，得出加合后的抑制活性，与两种化合物或三种化合物混合测出的抑制剂活性比较，可以看出是否存在1+12的协同抑制作用。,三、实验报告,两名学生只对自己所做的实验过程和结果进行分析，按照研究论文形式写出实验报告。,实验中尽可能了解其他同学的实验过程和实验结果，如果可能结合起来一起进行分析。,采用四人一组，每两人选择两个化合物进行测试。因为每个实验由10个点构成，可以去掉几个点得到比较理想的曲线。,1,2,3,四、实验注意事项,更多医学精品 尽在医学吧,http:/
