1、知母皂苷对衰老大鼠脑 M，N 胆碱受体的调节作用MN知母皂苷对衰老大鼠脑 M,N 胆碱受体的调节作用徐江平(第一军医大学药理学教研室,广东广州 51055)?379?摘要 j 目的研究知母皂苷(sAaB)对衰老太鼠脑己酰胆碱受体的影响方法采用放射受体配体结合实验测定太鼠脑皮层 M,N 受体的密度及亲和力.结果与正常成年大鼠比较 t 衰老太鼠大脑皮层 M 受体的密度和岽和力无明显变化,而脑 N 受体的密度显着减少|SAaB 能剂量依赖性地增加衰老大鼠 N 受体的数日,对 M 受体无明显影响.结论 SAaB 对衰老大鼠脑 N 受体有上调怍用关键词 知母皂苷受体乙酰胆碱脑中田分类号R965e 鹉讽码
2、 A(文章编号10059202(2901)05037902RegMationofsaponinsfromAnenmrrheanAsphodeloidesBgeoncerebralM,NacetylcholinreceptorsinagedratsXUJiang-pingDeprtmcntofPharmacology,FirstMilitaryMedicalUniversity,GuangdongGutgzholz510515Abstract3ObjectiveTostudytheeffectofsaponinsfromAnemarrheanAsphodeloidese(sAaB)013,cer
3、ebralacetylcholinereceptors.MethodsCerebralmusarinicandnicotinicreceptorsweremeasuredbyradioigandreceptorbmdingassay.RatswerepoadministeredwithSAaBfor15da.ResultsComparedwithDOITflgIrats,thedecreaseddensitiesofcerebralnicotinicreceptorsinagedratswereupregulatedbySAaB(15.0,25.0and40.0mg/kg)inadosedep
4、endentfnanT 坨 r,butmusearinicreceDtotswerenotaffected.ConelutlomSAaBcanenhancethelearningandmemoryabilitybyupregulatingthecerebralnicotinicreceptors.eIceywords3SaponinsfromanernarrhenaasphodeloidesBgeAcetylcholineReceptorsCerebra知母皂苷(saponinsfromAnemarrheanaspholeloides 段 e,SAaB)是从中草药知母中提取分离的有效成分.临床
5、及基础研究表明,SAaB 对衰老和老年性痴呆有一定的治疗作用 ,认为其作用机制可能是使衰老动物脑 M 受体上调但新近的研究 0m 表明.在衰老动物和老年性痴呆动物病人脑组织中 M 受体的下降并不明显,病理学研究 0 还显示.在 Alzheimer 病(AD)人脑组织中下降的 M 受体仅限于只占全脑 M 受体约5 的 M 受体,并提出在 AD 的发病中脑 N 受体特征的变化较 M 受体可能具有更大的意义.本研究将观察衰老大鼠脑 M,N 受体的变化及 SAaB 对二者的影响.1 材料与方法1.1 实验动物雄性 Wistar 大鼠由第一军医大学实验动物中心提供,动物合格证号粤动字 96A23.成年大
6、鼠为性成熟 ,体重 220250g衰老大鼠参考文献选用正常饲养至 24 月龄以后的老年大鼠.1.2 药品与试剂知母皂苷(SAaB),由第一军医大学药理学教研室制备.批号 990621烟碱重酒石酸盐(Nie).硫酸阿托品,Sigma 公司产品.H-OANB(M 一受体配基比放射活度 1.5TBq/mmo1),H-Cytisine(N 一受体配基比放射活度 1.4TBq/mmo1),均为 NEN作者简介徐江平,男,33 岁.药理学博士,副教授,研究方向:药理学和脑血管药理学公司产品.1.3SAaB 的给药方式衰老 Wstar 大鼠,给予 15.0.25.0,40.0g/kgSAaBpo15d,每日
7、 1 次对照组只给予普通饲料 .1.4 放射配体受体结合实验1.1 大鼠脑皮层膜蛋白的制备接参考文献进行.剪颈处死大鼠,迅速取出脑.置于冰浴中解皿内.分离大脑皮层,用摅纸吸净血迹.弥重,接重量(g)的倍体积加入 0.32mmol/L 蔗糖溶液匀浆;1ooog.4离心 lOmin,取上清液.将上清液以 350OOg,4c 离心 25min,取沉淀.用 15 倍体积缓冲液悬浮混匀.重复高速离心.取沉淀.用 l0 倍体积缓冲液悬渡 .-20冻存.Lowrys 法蛋白定量.1.2HqNB 和 ytI 悒与膜受体的结合实验接文献“ 方法进行操作.1.5 数据处理放射配体受体结台实验的数据分析使用军事医学
8、科学院汤仲明教授提供的 LIGAND 软件进行计算纽间差异分析采用 SAS 软件包进行单因裹的方差分析.2 结果2.1 衰老对大鼠脑 M,N 一受体的影响衰老大鼠大脑皮层 N受体密度(B)较正常成年大鼠明显减少(Po.01).N 受体对放射配基的亲和力()无明显改变0.05)而 M 受体在衰老大鼠脑皮层的密度及亲和力相对于正常成年组有一定的下降趋势,但均无统计学意义(P0.o5)(表 1).2.2SAaB 对衰老大鼠脑 M,N 一受体的调节衰老大鼠经不?380?同剂量的 SAaB 给药 30d,M 受体的特征(B和 Kd)无明显改变;而 K 受体密度显着增加,表明 SAaB 对衰老大鼠脑组织减
9、少的 N 受体数目具有上调作用,方差分析显示,SAaB 的作用具有明显的剂量依赖性(表 2)表 1 正常与衰在鼠大脑皮 M,N 受体的特征特征比较(;土 s,一一 5)衰老组 1.80/_0.21m24+0.0747.24251J091:O19与正常组比较:1)P0.01表 2S.mll 对衰老大鼠大脑皮层 M,N 受体的量;响(;士,月一 5)剂量(rag/kg)M 受体 N 受体pmol/mg)Kd(ranol/L)(fmol/rag)Kd(nmoL/L)与未绪药组比较:1)P0013 讨论前,人们一直认为,AD 病人中枢胆碱能系统的病变主要在 M 受体系统近来,由于放射自显影,正电子断层
10、扫描(PET)以及放射配体受体结合试验技术的不断进步,绝大多数实验 13.“坳表明 ,AD 病人脑组织至多可能只有 M.受体亚型位点的轻度下降,与 M 受体相近.N 受体在 AD 中的研究日益引起人们的重视,80 年代后期以来,众多的实验几乎一致显示AD 病人的脑(无论活检还是尸检)组织 N 受体较正常人减少约 5o.本研究也显示,在衰老大鼠脑皮层,M 受体的数目及亲和力均无明显下降,而 N 受体的密度较正常成年大鼠显着减少,表明随增龄,脑神经元突触膜表面的 N 受体可能存在生成减少或代谢增多,由此导致 N 受体绝对数目的下降 ,其机制有待进一步的探讨临床研究【表明,AD 病人经 Tacrin
11、e(他克林)治疗后 ,PET 显示其脑组织 N 受体数目有明显升高鉴于N 受体在学习记忆中的作用,应用药物使衰老造成的减少的 N受体上调,对于 AD 的治疗是有益的既往研究发现知母水提取物增强衰老大鼠的学习记忆生国耋室盈壶 Q 生 9 月躯里堂能力.并认为其作用机制在于促进衰老时脑 M 受体分子的合成.本研究利用较新的方法制备脑突触膜受体,解决了往脑匀浆中 N 受体较少的缺点,也使 M 受体的收集率明显增加.并改用亲和力较.H 一烟碱高的 H.Cytisine 为配体标记 N 受体.因此,增加了受体结合实验的准确性.本实验结果显示,知母皂苷能剂量依赖性地上调衰老大鼠脑 N 受体,表明知母皂苷对
12、衰老大鼠学习记忆的增强作用与其增加 N 受体密度相关 ,这与知母皂苷对整体动物的促智作用及临床益智疗教是一致的.4 参考文献1 胡雅儿,易宁育,夏宗勤打 a/.老年大鼠脯 M 受体亚型的变化及知母的调节作用J).中药药理与临床,19939(1):15 182 范国煌,易宁育.夏宗勤 al 知母皂甙元对原代培养的神经细胞M 受体密度和代谢动力学的影响,J.中国中医基础医学杂志,1997;3(6):15173Hard),JA.AdolfssonF,AlafumffIa/.TramitterdeficitsinA【zheimersdisease1.NeurochemIm,1985F7;5455534
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15、19591192:265275lo 徐江平,张晋杰,刘传绩大鼠烟碱依赖对脑皮层 M,N 胆碱能受体的影响J.中国药物依赖性杂志.19987(2):8184llNordbergA.WnbtadB.ReducednumberofH-nicotineandHacetycholinebindingsitesinthefrontaleotexofAlzheimerbraimsJNeurosclLett,198672:11511912DeSarnoP,GiacobinlE,ClarkB.ChangesinnicotinicreceptorsmhumanandratCNSCJ7.Fedprc,1988236436913NordbergA,LiljaA.LundqvistH.TarrlnercstorchoLinerglcnicotinicreceptrosandglucosemetabolisminAIzheimerpatientsasvisualizedbypositionemissiontomographJ.NeurohioAg1gt1992;13:747758(20000915 收稿 2000-1225 修回(编辑胡国义)
