1、非小细胞肺癌 EGFR 和 BCL-2 的表达与放射敏感性相关性的研究中国现代实用医学杂志,2006 年 9 月,第 5 卷,第 9 期?论着?tPd,细胞肺癌 EGFR 和 BCL.2 的表达与放射敏感性相关性的研究魏来胡德胜【摘要】目的探讨表皮生长因子受体(EGFR)和 B 细胞淋巴瘤/ 白血病-2 蛋白(BCL-2)在非小细胞肺癌中的表达及其与放疗敏感性的关系.方法选用经纤维支气管镜或 CT 介导下经皮肺穿刺病理活检确诊的 6l 例 IP4,细胞肺癌石蜡组织标本切片,应用免疫组化法,对 EGFR 和 BCL-2 的表达进行检测,并根据国际统一标准定义放射治疗近期疗效(运用螺旋 CT 评价
2、)进行评价及运用 SPASS10.0 统计分析软件进行分析.结果肺癌组织中 EGFR 阳性表达率为 42.63%(26/61),癌旁正常肺组织表达率为 9.8%(6/61),其表达与肺癌患者的年龄 ,性别 ,病理类型无关(P0.05),EGFR 阳性表达组放射治疗近期有效率低于阴性表达组(尸=O.O01). 肺癌组 BCL-2 的阳性表达率为 45.9%(28/61),癌旁正常肺组织 BCL-2 的阳性表达率为 l6.39%(10/61),BCL-2 的表达与肺癌患者的年龄,性别,病理类型等无关 (P0.05),BCL-2 阳性表达组放射治疗近期有效率低于阴性表达组(P=0,002).EGFR
3、 和 BCL-2 表达无相关性(P=0,283).结论(1)EGFR 和 BCL-2 的异常表达与非小细胞肺癌浸润性发展有关,为患者放射治疗敏感性低下及预后不良指标;(2)EGFR 与 BCL-2 的表达无相关性;(3)EGFR 抑制剂单独使用或联合抗 BCL?2拮抗剂可能成为非小细胞肺癌新的治疗手段.【关键词】IN,细胞肺癌 EGFRBCL 一 2 放射治疗近期疗效TheRelationshipsBetweenExpressionsofEGFRandBCL-2andRadio.sensitivityofNon.smallLungCancer.WeiLai.HuDesheng.Depaamen
4、tofRadiationOncology,HubeiProvinceTumorHospital,Wuhan430070ChinaAbstractObjectiveTostudytheexpressionofepidermalgrwthfactor(EGFR,andBcl-2proteininnon-smallcelllungcancer(NSCLO,andtoevaluateitsrelationshipwithradio-sensitivity,MethodsEGFRandBCL.2weresurveyedbyimmunohistochemicalmethodstoresectedtissu
5、esamlesof61patientswithNSCLCgainedbyFibrebranchoscopytestorCT-guidepercutaneouslungpuncturebiopsy.RecenteffectsofRadiotherapywereevaluatedintheinternationalstandard(suchasApplicationofspiralCT)andwereanalysedwithSPASS10.0software.ResultsThepositiverateofEGFRinNSCLCandinnormaltissuewas42.63%and9.8%re
6、spectively(P=0.01).TherewerentstatisticallysignificantcorrelationsbetweenEGFRexpressionwithage,sexandpathologicalkinds.AsignificantrelationshipbetweenelevatedEGFRexpressionandbatedrecenteffectsofRadiotherapywasobservedinEGFRpositivegroup(PO.05),ThepositiverateofBCL-2inNSCLCandinnormaltissuewas45.9%a
7、nd16.39%rcspectively(尸=O.o2),therewerentstatisticallysignificantcorrelationbetweenBCL-2expressionwithage.sexandpathologicalkinds.AsignificantrelationshipbetweenelevatedBCL-2expressionandbatedrecenteffectsofRadiotherapyWasobservedinEGFRpositivegroup(P0.05).ThereWasnegativecorrelationinexpressionofEGF
8、RandBCL?2(P=O.283).ConclusionTherefindingssuggestthatEGFRandBCL-2overexpresslonmaybeclinicallysignificantfortheprognosisofNSCLCpatientsundergo?ingradiotherapy.TherewasnegativecorrelationinexpressionofEGFRandBCL-2,butEGFRinhibitorand/orBCL?2antagonistsmayhavegreaterefficacyoftheiruseasadjunctstovario
9、usanticanceragentsandhavepotentialvalueinthetreatmentofNSCLC.1KeywordsNon-smallcelllungEpidermalgrowthfactorreceptorBCL-2Recenteffectsofradiotherapy中图分类号:R-331 文献标识码:B 文章编号:1726-619X(2006)09.0001-04肺癌是最常见的恶性肿瘤之一,其中非小细胞肺癌比例最大为 75%80%,首选治疗是手术 ,因临床症状而发现的多为中晚期已不适合手术治疗,对于不适合手术治疗患者,放疗是并发症最少也是最有效的非外科治疗手段.因
10、此,如何提高肺癌的放射敏感性是一个值得深入探讨的问题.影响肿瘤放射敏感性的因素很多,如细胞的凋亡水平,增殖速度,【作者单位】:湖北省肿瘤医院放疗科(武汉 430079)【作者简介】:魏来,男,35 岁,副主任医师.DNA 的修复等情况,其中能提高非小细胞肺癌恶性增殖的表皮细胞生长因子受体(EGFR)【IJ 以及抑制细胞凋亡导致细胞相对增多的 B 细胞淋巴瘤/自血病?2 蛋白(BCL-2)与肺癌组织放射敏感性的关系目前相关报道不多,因此,此项课题的主要目的是研究肺癌 EGFR 和 BCL?2 的表达水平与肿瘤放射敏感性是否具有相关性.本实验则探讨两者对放射敏感性影响,通过免疫组化染色监测其表达水
11、平,研究在肺癌中的这两种指标与其放疗的近期疗效之间的关系,从而进一步探讨影响肿瘤放射敏感性的因素,为今后进行合理的临床干预提2ChineseJourna1ofCHITentPractica1Medicine.Seotember2006.Vo15,No9供有利的理论依据.1 资料与方法l_1 一般资料 2003 年 l1 月2005 年 l1 月在湖北省肿瘤医院行根治性放射治疗的非小细胞肺癌的患者共 61 例,男 48例,女 13 例,年龄 3275 岁(平均年龄 58 岁,中位年龄65 岁),KS 评分均在 60 分以上,全部病例均经纤维支气管镜或 CT 介导下经皮肺穿刺病理活检确诊的并需放射
12、治疗的患者,其中鳞癌 45 例,腺癌 l6 例,所有患者入组时临床分期均为期,对照组为癌旁正常肺组织.1.2 治疗方法放疗采用湖北省肿瘤医院的 VARIAN 直线加速器,选用 x 射线(15MV).所有患者均行根治性放疗(常规放疗及适形放疗),原发灶 DT=6870Gy/3435f/4849d,SAD=IOOcm,剂量率为 2Gy/min,所有病例均顺利完成了上述治疗.放疗结束后 23 个月复查肺部 CT,根据照射野内病灶变化情况进行近期疗效评价,按国际统一标准,(CR+PR)者为放射敏感性肿瘤 .(NC+PD)者为放射抵抗性肿瘤.1.3 观察指标及评判标准切片予微波抗原修复后,sP 法,DA
13、B 显色,EGFR 定位于细胞膜 ,BCL-2 蛋白定位于细胞膜.每张切片随机选取 45 个高倍视野(4OOX),记数单位视野阳性细胞占总细胞数的百分率,辅以计算机图像分析仪分析结果.所有结果均进行盲法单独判定.1.3.IEGFR 与 BCL-2 蛋白判断标准均为据阳性细胞的比例判定,阳性细胞比例为 l0%5o%N 定为阳性(+),阳性细胞比例大干 5o%N定为强阳性 【+), 少于 10%的细胞与背景一致不着色定为阴性(一).1.3.2 影像学观察患者在结束放疗后 l3 个月内再次行 CT检查,按照国际统一标准进行肿瘤的近期疗效评价,CR:照射野内肿瘤完全消失;PR: 照射野内肿瘤缩小不到
14、50%以上;NC:照射野内肿瘤缩小不到 50%或无明显变化;PD:照射野内肿瘤增大或出现新病灶.CR 和 PR 属于有效,NC 和 PD属于无效.1.3.3 患者临床症状此项指标仅作为参考.症状完全消失为完全缓解(CR),症状明显缓解为部分缓解(PR),无明显变化为(NC), 症状加重或出现新的症状为进展(PD).1.4 统计方法用 SPSSl1.5forWindows 统计软件进行)【z 检验和相关分析,以|P0.05 为差异有显着性.2 实验结果2.1EGFR 及 BCL-2 蛋白表达及相关关系 6l 例患者中 ,EGFR 表达为强阳性者 9 例(14.75%), 阳性者 l7 例(27.
15、86%),阴性者 35 例(57.37%),阳性率为 42.62%,对照组癌旁组织中EGFR 表达阳性者 6 例(9.8%).两组有极显着的差异 C=16.94,尸0.OO5).BCL-2 蛋白表达为强阳性者 6 例(9.83%),阳性者22 例(36.06%),阴性者 33 例(54.1%), 阳性率为 45.9%,对照组癌旁组织中 BCL-2 表达阳性者 l0 例(16.39%),两组有极显着性的差异()【z=l2.38,|P0.OO5).EGFR 及 BCL-2 的表达无相关性(x1.15,P=O.283),见表 l.2.2 放疗近期疗效及病理分型的关系所有患者均顺利完成根治性放疗,无严
16、重不良反应发生.经影像学评价 61 例患者近期疗效结果为:CR 为 ll 例(18.03%),PR 为 32 例(52.45%),NC 为 l5 例(24.59%),PD 为 3 例(4.92%),有效率(CR+PR)为 70.48%.分化低的非小细胞肺癌的有效率(73.68%)高于分化高的非小细胞肺癌的有效率(25%),并有显着性差异(|P0.O5).说明分化程度显着影响放疗的近期疗效,见表 2.表 1EGFR 及 BCL-2 阳性表达之间的相互关系(例)组织学类型鳞癌腺癌腺鳞癌分化程度低中高肿瘤大小TlT2T,T423(23/31)18(18/25)2(2/5)4O(4O/48)2(2/9
17、)1(1/4):01570692:0128:0300:2642:000100261000545013100810l040l650691:为 fisher 精确卡方检验2.3 瘤内 EGFR 和 BCL-2 的表达与病理分型的关系 EGFR和 BCL-2 的表达在分化低的和分化高的非小细胞肺中无差别,说明两者的表达与病理分型无相关性(|P0.05),见表 3.表 3EGFR 和 BCL-2 在瘸内的表达与病理分型的关系2.4NSCLC 中 EGFR 的表达与放疗近期疗效的关系本实验中 NSCLC 患者中共 6l 例,在 EGFR 表达阴性的 35 例中放疗达有效的有 30 例(85.7%),阳性
18、 26 例中达有效的有 l3例(50%),两者比较有显着性差异(|P0.05),见表 4.EGFR与放疗近期疗效的呈负相关的.2.5NSCLC 中 BCL-2 的表达与放疗近期疗效的关系在BCL-2 表达阴性的 33 例中放疗达有效的有 29 例(87.8%),高(1l(,中国现代实用医学杂志,2006 年 9 月,第 5 卷,第 9 期于阳性 I4 例(5O%), 两者比较有显着性差异(尸0.05),见表 5.表 4EGFR 的衷与放疗近期疗效的关系阳性表达阴性表达2833l4292.6 影响放疗疗效的其他因素分析如年龄(尸=4.63)$I 患者放射治疗后的近期疗效有相关性.性别(尸=0.5
19、88) 与患者放射治疗后的近期疗效无相关性.3 讨论IM,细胞肺癌的放射治疗已有多年的历史,人们发现放射治疗的疗效个体差异很大,并对影响放射治疗疗效的诸多因素如肿瘤大小,生长部位,增殖能力,病理分型及分化程度等进行了深入的研究.它们与放射治疗疗效虽然存在相关性,但在临床上常出现例外病例.近年来随着分子生物学理论及其技术的发展,肿瘤的基因表达与放疗敏感性之间的关系正受到越来越多的重视.目前已发现许多的原癌基因和抑癌基因的异常表达可影响肿瘤细胞的凋亡及放射敏感性.例如放射治疗肿瘤的机制之一是通过 p53 依赖途径诱导细胞凋亡来实现对肿瘤细胞的杀伤,放疗使肿瘤细胞的 DNA 受损伤,损伤的 DNA
20、与 p53 蛋白结合,启动 p53 基因,从而使细胞进入 Gl 期生长抑制并诱导损伤严重的细胞进入凋亡状态.若 p53 基因失括或缺失,则凋亡途径不能进行,使细胞对放疗不敏感,将 p53 基因治疗与放疗联合应用能提高肿瘤细胞对放疗的敏感性【l.而且发现任何参与细胞周期调节的基因产物都有可能影响细胞对放射线的敏感性.原癌基因 EGF和凋亡抑制 BCL-2 基因表达有可能作为判定肿瘤放射治疗疗效的参考指标.本实验应用人 EGF 及 BCL-2 基因产物蛋白单克隆抗体对6l 例接受单纯放射治疗的非小细胞肺癌患者 EGFR 及 BCL-2基因表达情况进行了回顾性研究,发现 EGFR 与 BCL-2 在
21、非小细胞肺癌组织中有较高的阳性表达,EGFR 的阳性表达率为 42.62%,BCL-2 阳性表达率为 45.9%,与对照组相比有统计学意义(尸0.05).此组数据与文献报道的研究数据相近,说明 EGF 及 BCL-2 的阳性表达与非小细胞肺癌的发生有关,可能是支气管上皮转变为癌的重要因素.EGF 最早由 Cohenp41 于 20 世纪 60 年代初发现,又称原癌基因 cerbB-l,编码胞膜外侧酪氨酸激酶生长因子受体,也即表皮生长因子(EGFR,cerbB-I 蛋自).多项研究表明,NSCLC 中存在 EGFR 的过度表达 ,表达水平显着高于肺部正常组织.通过激活细胞内的信号传递系统(主要是
22、酪氨酸激酶系统)对细胞生长进行调节.BCL-2 也被称为凋亡抑制基因【l,本实验显示其在 IN,j细胞肺癌中高表达,并且它的表达和放疗敏感性及预后呈负相关,可能与 BCL-2 的生物学特性有关,BCL-2 的主要生物学功能是抑制细胞凋亡,延长细胞寿命,增加了其他癌基因表达的机会,同时它还保护发生基因突变的细胞长期生存而不凋亡,并能增加细胞对多种凋亡刺激因素的抵抗性,阻止细胞死亡的最后通路,从而调控肿瘤的发生和发展.它也可以抑制由放射所带来的细胞凋亡,进而影响患者的放射治疗效果以及患者的预后.BCL-2 抑制细胞凋亡的作用一般认为是通过封闭细胞核转运,抑制细胞内钙离子的浓度增高,抗氧化破坏等实现
23、,但其确切的机制及具体的生化途径尚未完全阐明,有待进一步研究.研究中对于组织学类型及分化程度是否与放射治疗近期疗效相关存有一定争议【1,本实验的结果显示鳞癌的放射治疗近期疗效好于腺鳞癌,分化低 I14,细胞肺癌放疗近期疗效的好于分化高的 IH,细胞肺癌近期疗效.年龄与放射治疗近期疗效存在相关性.性别的因素与放射治疗近期疗效无明显相关性.I14,细胞肺癌放射治疗疗效是受多种因素影响决定的,如能应用相关因素对 I14,细胞肺癌放射治疗疗效进行多因素综合分析判定,将会提高判定准确率,对预后及选择治疗方案具有重要的临床意义.目前已经发展起来的一种新兴的基因放射治疗技术,将转基因技术与放射治疗结合起来,
24、也就是利用肿瘤相关基因对肿瘤的生长调节及对放射线介导肿瘤细胞凋亡影响,将能极大提高肿瘤的放射治疗效果,MICHAEL【I 等将转基因治疗应用于晚期肺癌的治疗取得了较好的疗效.所以,我们利用基因对于放射治疗肿瘤结果的研究将具有重要的意义.【参考文献】【l】TateishiM,KanekoS,FukuyamaYeta1.ThecloserelationshipbetweengrowthfactorsandthenucleolarorganizerregionsinadenocarcinomaofthelungJ.EurJsurgOncol,1995,2I(4):389402【2】AidaS,Tam
25、aiS.SekiguchiS,eta1.Distributionofepidermalgrowth/hctorandepidermalgrowthfactorreceptorinhumanlung:immunohistochemicalandimmunoelectronmicroscopicstudies【J】.Respiration,1994,6l(3):161 一 I66【3】储大同.当代肿瘤内科治疗的新热点细胞,分子耙向性药物的发展.见:秦叔逵,王建民,王杰军,主编.中国临床肿瘤学教育专辑(2001). 北京:中国医药科技术出版社,2001.15【4】SalmonDS,bradtR,CiardielloN,eta1.Epidermalgrowthfactor-relatedpeptidesandtheirreceptorsinhuman
