1、孕前优生健康检查临床检验项目操作规范 汉南计生站 检验科 陈荔 一、阴道分泌物常规检二、尿常规检验验 三、淋球菌检测四、血型检测五、血液常规检验六、血清葡萄糖检七、谷丙转氨酶检测八、血清肌酐检测九、乙型肝炎血清学检测十、丙型肝炎血清学检测十一、梅毒血清学筛查 十二、人类免疫缺陷病毒抗体检测十三、风疹病毒 IgM和 IgG抗体测定十四、巨细胞病毒 IgM抗体和 IgG抗体测定十五、弓形体 IgM抗体和 IgG抗体测定十六、沙眼衣原体检测十七、促甲状腺激素 TSH 检测一、 阴道分泌物常规检(一 ) 检验方法 : 涂片镜检(二 ) 试 剂 : 生理盐水、 10%氢氧化钾（三）仪器设备 : 光学显微
2、镜、载玻片、盖玻片（四）操作步骤：1.将采集标本的拭子用生理盐水制备后涂在载玻片上，盖上盖玻片。2.用低倍镜观察有无阴道毛滴虫、念珠菌菌丝等。3.再用高倍镜观察白细胞、上皮细胞、杆菌、球菌的多少，并寻找有无念珠菌菌体及其孢子。（五）质量控制：（ 1）阴道分泌物最重要的是取材正确，采集前 24小时内禁止性交，采集后及时送检，否则阴道毛滴虫死亡。（ 2）阴道毛滴虫活动的最适温度为 25-42 ，递送标本要注意保温。（ 3）生理盐水应一周更换一次，避免污染干扰实验。二、尿常规检验（一）尿液干化学检验（二）尿沉渣检查（一）尿液干化学检验1.检验方法 : 干化学试带法2.试剂 : 尿干化学试纸条3.仪器
3、设备 : 尿液分析仪4.操作步骤：（ 1）标本采集：应留取新鲜尿，以清晨第一次尿为宜；应避免经血、白带、精液、粪便等混入；标本留取后，应及时送验；使用清洁干燥的有盖容器 (一次性容器为好 )。（ 2）质控品测定：做阴性和阳性， 2个水平，用尿液分析仪测试。具体操作见仪器说明书。（ 3）室内质控在控，即可测定标本。5.质量控制：（ 1）检测前质量控制：包括正确的尿液标本收集方法、有效的标本标记与识别、规定的时间内完成检测等，同时应了解患者可能影响尿化学检测的进食及用药情况等。（ 2）检测中质量控制：在尿液分析仪全面鉴定和定期校正的基础上，每天对仪器和试带按规范化质控程序进行，每次使用 “正常 ”
4、和 “异常 ”两种浓度的质控尿液。任意一个试剂膜块的测定结果与质控尿液期望 “靶值 ”允许有 1个定性等级的差异，超过此范围或结果在 “正常与异常 ”之间跳跃均应视为失控。（ 3）检测后质量控制：主要体现在对检验报告的审核、签发。除注意报告单的无错误外，更应分析检测结果之间的关联性，即尿化学分析结果与显微镜镜检结果的相互关系。（二）尿沉渣检查1.检验方法 :显微镜法2.仪器设备 :光学显微镜、玻片3.操作步骤：（ 1）取 10ml尿液于离心管中，以 1500转 /min离心 5min；（ 2）将上清液弃去，用一次性吸管将管底沉淀吸出，滴入载玻片；（ 3）用低倍镜观察尿分布情况、注意管型和结晶，
5、然后转换高倍镜观察10个视野。4.质量控制：（ 1）留取尿液容器要干净；（ 2）细胞等有形成分较多时，应在载玻片上选择较薄处进行检查，防止因遮盖漏报或少报；（ 3）观察管型时光线不能太强，避免透明管型的漏检。 三、 淋球菌检测（一）检验方法 : 涂片镜检（二）试剂 : 革兰染液（三）仪器设备 : 玻片、光学显微镜（四）操作步骤1.涂片经火焰固定后，加结晶紫染液染 1min，清水缓慢冲去染液；2.吸水纸吸干玻片后加碘液媒染 1min，水洗；3.加脱色液，匀速摇动 20-30s，至无紫色脱落为止，水洗；4.加复染液，复染 30s，水洗；5.干后镜检。6.阳性：革兰氏染色显微镜下为革兰氏阴性双球菌，
6、呈双肾形成对排列。（五）质量控制：（ 1）新配置的革兰染液应先用已知的革兰阴性和革兰阳性菌进行对照实验 ,以检查染液的质量。（ 2）结晶紫和草酸铵溶液混合不能保存太久 ,如有沉淀应重新配置。（ 3）取样是不论男女尿道及子宫颈均需用拭子插入尿道及子宫颈 3cm深处取样 ,要避免阴道分泌物污染拭子。（ 4）对高度怀疑为淋病奈瑟氏菌的标本还可用细菌培养法的方法进行确认 .四、血型检测（一） ABO 血型鉴定1. 检验方法 : 玻片凝集法2. 仪器设备 : 光学显微镜、玻片3. 试剂 :抗 A、抗 B分型定型试剂血清4.操作步骤 :（ 1）取一张玻片在中间划线，左边写： “A”,右边写标本号；（ 2）
7、在玻片两侧相对应位置各加一滴抗 A、抗 B标清；（ 3）取末梢血或全血，在玻片两侧各加一小滴；（ 4）分别将抗 A、抗 B标清与血球混匀；（ 5）肉眼观察凝集，必要时用低倍镜观察。5.质量控制：（ 1）抗 A、抗 B分型定型试剂应符合商品合格试剂的要求，鉴定结束后应放回冰箱；（ 2）滴管和玻片必须清洁干燥，防止溶血；（ 3）观察时应注意红细胞呈特异性凝集、继发性凝固及缗钱状排列的区别。（ 4）判断结果后应仔细核对、记录、避免笔误。（ 5）发报告时由两人核对后在化验单上签字。（二） RhD血型鉴定1. 检验方法 : 玻片凝集法2. 仪器设备 : 光学显微镜、玻片3. 试剂 : RhD血型定型试剂
8、4. 质量控制：（ 1）滴管和玻片必须清洁干燥，防止溶血；（ 2）试剂如出现浑浊不能使用，若开瓶时间长后，最好用已知的 RhD阴性、 RhD阳性红细胞检查结果是否相符；（ 3）发报告时由两人核对后在化验单上签字。 五、 血液常规检验（一） 三分类血细胞分析仪 （二） 红细胞计数（三）白细胞计数（四）血小板计数（五）血红蛋白测定（六）白细胞分类计数（一） 三分类血细胞分析仪1. 检验方法 : 电阻抗法2. 试剂 : 血细胞仪稀释液、溶血剂、清洗液3. 仪器设备 : 全自动三分类血细胞分析仪4. 操作步骤不同型号的仪器操作程序不同，请严格按照仪器使用说明书执行。5. 质量控制：(1)质量控制水平：
9、高、中、低三个水平（至少一个水平） ;(2)质量控制规则：目前行业要求血常规至少选择 12S和 13S规则 ;(3)质量控制记录：保存三年以上 ;(4)质量控制结果分析：在发现违反质量控制规则后，分析失控原因，重新测定质量控制，测试合格后方可进行检测。（二） 红细胞计数1. 检验方法 :显微镜计数法2. 试剂 :红细胞稀释液（枸橼酸钠 1g， 36%甲醛 1ml，氯化钠0.6g 加蒸馏水至 100ml,过滤两次后备用）3. 仪器设备 : 光学显微镜、血细胞计数板、微量吸管4. 质量控制：(1)改良牛鲍计数板每年要鉴定一次 ;(2)当白细胞结果过高（ WBC 100106/L），红细胞计数结果应
10、校正 ;(3)每个中方格间计数相差超过 20个应重新充池 ;(4)血液稀释倍数必须准确，否则可造成假性增高 ;(5)采血部位不同，结果不同。 （三）白细胞计数1. 检验方法 :显微镜计数法2. 试剂 : 白细胞稀释液（冰乙酸 2ml，蒸馏水 98ml，10g/L亚甲蓝溶液 3滴，过滤后备用）3. 仪器设备 : 光学显微镜、血细胞计数板、微量吸管4. 质量控制：（ 1）与红细胞数比较 :在正常情况下 ,红细胞数 /白细胞数约为 (500-1000):1,根据红细胞数值 ,可以估计白细胞计数是否正确；（ 2）与血涂片白细胞分布密度一致性。 （四）血小板计数1. 检验方法 :显微镜计数法2. 试剂
11、:1%草酸铵稀释液、荧光桃红液3. 仪器设备 : 光学显微镜、血细胞计数板、微量吸管4. 质量控制：（ 1）血小板稀释液应防止微粒和细菌污染 ,定期监测 ;(2)采血时针刺应稍深，避免用力挤压使血小板聚集破坏 ;(3)充池后应静置 10min，否则影响计数结果。 （五）血红蛋白测定1. 检验方法 : 氰化高铁血红蛋白测定法2. 试剂 : KCN 0.05g,高铁氰化钾 0.2g,无水磷酸二氢钾 0.14g,非离子表面活性剂 0.5-1.0ml,加蒸馏水至1000ml.)3. 仪器设备 : 分光光度计4. 质量控制：（ 1）高铁氰化钾试剂应 4 保存 ,不能 0 保存 ;（ 2）试剂应新鲜，至少
12、一个月配置一次 ;(3)试剂中白细胞或球蛋白异常增高时，可干扰实验结果。 （六）白细胞分类计数1. 检验方法 : 涂片显微镜分类法2. 试剂 : 瑞氏染液3. 仪器设备 : 光学显微镜、计数器、玻片4. 质量控制：（ 1）血涂片的质量要求： 载玻片应干燥清洁、无油性， 血推片的边缘应平滑，推时应用力均匀；（ 2）血涂片干燥后进行染色，贫血涂片应适当缩短染色时间；（ 3）冲洗时不能先到掉染液，应用小水流冲洗，以免血膜脱落，也可防止沉淀沉渣在血膜上；（ 4）分类计数的质量要求： 先用低倍镜浏览全片，尤其注意血膜处，大细胞和幼稚细胞在涂片尾部，防止漏检。 当白细胞有聚集现象时，应重新推片。 六、 血
13、清葡萄糖检测（一）检验方法 : 葡萄糖氧化酶法、葡萄糖脱氢酶法、己糖激酶法（二）仪器设备 :实验室可根据条件选择全自动或半自动生化分析仪，或手工法仪器：分光光度计。（三）试剂 : 购买经国家食品药品监督管理局批准的专用商品试剂盒，在有效期内使用。（四）操作步骤：校准程序、质控程序、操作程序均需要根据实验室所使用的生化分析仪自行建立，并严格依据生化仪的操作规程来进行校准、质控及常规操作。（五）质量控制：（ 1）质量控制品：应选择稳定的、瓶间差小、基质效应小的物质。应选择两个不同浓度水平的质量控制品；（ 2）质量控制方法：目前血糖测定至少应选择 12S、 13S、 22S、 R4S（ 3）所有浓度
14、水平质控品结果在控，才可以对病人标本进行检测；（ 4）此外手工法注意：严格按试剂盒说明操作 七、谷丙转氨酶检测（一）检验方法 : 速率法、赖氏比色法（二）试剂 : 购买经国家食品药品监督管理局批准的专用商品试剂盒，在有效期内使用。（三）仪器设备 : 实验室可根据条件选择全自动或半自动生化分析仪，或采用手工比色法，仪器：分光光度计。（四）操作步骤：校准程序、质控程序、操作程序均需要根据实验室所使用的生化分析仪自行建立，并严格依据生化仪的操作规程来进行校准、质控及常规操作。（五）质量控制：（ 1）质量控制品：应选择稳定的、瓶间差小、基质效应小的物质。应选择两个不同浓度水平的质量控制品 ;（ 2）质
15、量控制方法：目前 ALT测定至少应选择 12S、 13S、 22S、 R4S（ 3）所有浓度水平质控品结果在控，才可以对病人标本进行检测；（ 4）此外比色法注意： 严格按试剂盒说明操作 每批试剂都要重新绘制标准曲线 血清标本保存： 20 48小数， 4 一周， -25 1个月 活性超过 150卡门单位，标本应稀释。 八、血清肌酐检测（一）检验方法 : 肌氨酸氧化酶法、苦味酸速率法（二）试剂 : 购买经国家食品药品监督管理局批准的专用商品试剂盒，在有效期内使用。（三）仪器设备 : 实验室可根据条件选择全自动或半自动生化分析仪，或采用手工比色法，仪器：分光光度计。（四）操作步骤：校准程序、质控程序
16、、操作程序均需要根据实验室所使用的生化分析仪自行建立，并严格依据生化仪的操作规程来进行校准、质控及常规操作。（五）质量控制：（ 1）质量控制品：应选择稳定的、瓶间差小、基质效应小的物质。应选择两个不同浓度水平的质量控制品；（ 2） Jaff法主要缺点是特异性差，血中丙酮、丙酮酸、叶酸、抗坏血酸、葡萄糖、乙酰乙酸等都能在此反应中呈色，注意非肌酐色原的干扰；（ 3）此外手工法注意：严格按试剂盒说明操作。 九、乙型肝炎血清学检测（ 一）乙肝五项胶体金检测1. 检验方法 : 胶体金免疫层析法2. 试剂 : 购买经国家食品药品监督管理局批准的专用商品试剂盒，在有效期内使用。3. 仪器设备 : 无设备要求
17、4. 操作步骤： 参照试剂盒说明书5. 质量控制： 根据试剂盒的要求进行结果的判定（二）乙肝五项酶联免疫检测1. 检验方法 : ELISA法2. 试剂 : 购买经国家食品药品监督管理局批准的专用商品试剂盒，在有效期内使用。3. 仪器设备 : 酶标仪、水浴箱、振荡器4. 操作步骤： 参照试剂盒说明书5. 质量控制：（ 1）应避免样品溶血。溶血、粘稠及高脂标本可导致检测结果不稳定。如有细菌污染，菌体中可能含有内源性 HRP，也会产生假阳性反应 。如在冰箱中保存过久，其中的 IgG可发生聚合，在间接法ELISA中可使本底加深 ；（ 2）实验环境保持一定的湿度，避免在高温下进行实验；（ 3）试剂盒自冰
18、箱取出后应恢复室温后在开封使用；（ 4）不同厂家、不同批号试剂不可混用，不得使用过期试剂；（ 5）洗涤微孔板时应充分拍干，否则孔内残留液体会影响结果的判定；（ 6）不同试剂盒所用抗原可能存在差异，检测敏感度也有差别，应参照阴性、阳性对照设定 Cutoff值。 十、丙型肝炎血清学检测（一） 丙肝抗体胶体金检测1. 检验方法 :胶体金免疫层析法2. 试剂 : 购买经国家食品药品监督管理局批准的专用商品试剂盒，在有效期内使用。3. 仪器设备 : 无设备要求4. 操作步骤： 参照试剂盒说明书5. 质量控制： 根据试剂盒的要求进行结果的判定（二） 丙肝抗体酶联免疫检测1. 检验方法 : ELISA法2.
19、 试剂 : 购买经国家食品药品监督管理局批准的专用商品试剂盒，在有效期内使用。3. 仪器设备 : 酶标仪、水浴箱、振荡器4. 操作步骤： 参照试剂盒说明书5. 质量控制： 参考乙肝酶联免疫检测法质量控制。 十一、梅毒血清学筛查（一）检验方法 : 甲苯胺红不加热血清试验 （ TRUST)（二）试剂 : 购买经国家食品药品监督管理局批准的专用商品试剂盒，在有效期内使用。(三 ) 仪器设备 : 无设备要求（四）操作步骤： 严格按试剂盒说明书（五）质量控制：（ 1）试验在 23-29 条件下进行；（ 2）试剂在使用前应充分摇匀；（ 3）本试验是非特异性反应，需结合临床进行综合分析，必要时需做梅毒螺旋体
20、抗体特异性试验。 十二、人类免疫缺陷病毒抗体检测（一）检验方法 : ELISA法（二）试剂 : 购买经国家食品药品监督管理局批准的专用商品试剂盒，在有效期内使用。（三）仪器设备 : 酶标仪、水浴箱、振荡器（四）操作步骤： 严格按试剂盒说明书（五）质量控制：(1)试剂盒保存在 2-8 ,在有效期内使用。检验前将 2-8 平衡到室温 ;(2)试剂盒勿于高温、阳光照射环境中使用 ;(3)不同厂家不同批号的试剂不可混用 ;(4)溶血、脂血、细菌污染的血清不宜使用(5)洗涤微孔板时应充分拍干 ;(6)建立室内质量控制，可购置定值血清作为室内质量控制物，每日临界值质量控制物的 S/O比值应在其均值 3SD
21、范围内。 十三、风疹病毒 IgM和 IgG抗体测定（一）风疹病毒 IgM和 IgG抗体胶体金检测1. 检验方法 :胶体金免疫层析法2. 试剂 : 购买经国家食品药品监督管理局批准的专用商品试剂盒，在有效期内使用。3. 仪器设备 : 无设备要求4. 质量控制： 根据试剂盒的要求进行结果的操作和结果的判定。（二）风疹病毒 IgM和 IgG抗体酶联免疫检测1. 检验方法 : ELISA法2. 试剂 : 购买经国家食品药品监督管理局批准的专用商品试剂盒，在有效期内使用。3. 仪器设备 : 酶标仪、水浴箱、振荡器4. 操作步骤： 参照试剂盒说明书5. 质量控制：（ 1）应避免样品溶血。溶血、粘稠及高脂标
22、本可导致检测结果不稳定。如有细菌污染，菌体中可能含有内源性 HRP，也会产生假阳性反应 。如在冰箱中保存过久，其中的 IgG可发生聚合，在间接法 ELISA中可使本底加深 。（ 2）实验环境保持一定的湿度，避风。避免在高温下进行实验。（ 3）试剂盒自冰箱取出后应恢复室温后在开封使用。（ 4）不同厂家、不同批号试剂不可混用，不得使用过期试剂。（ 5）洗涤微孔板时应充分拍干，否则孔内残留液体会影响结果的判定。（ 6）不同试剂盒所用抗原可能存在差异，检测敏感度也有差别，应参照阴性、阳性对照设定 Cutoff值。 十四、巨细胞病毒 IgM抗体和 IgG抗体测定（一）巨细胞病毒 IgM抗体和 IgG胶体
23、金检测1. 检验方法 :胶体金免疫层析法2. 试剂 : 购买经国家食品药品监督管理局批准的专用商品试剂盒，在有效期内使用。3. 仪器设备 : 无设备要求4. 质量控制： 根据试剂盒的要求进行结果的操作和结果的判定。（二）巨细胞病毒 IgM和 IgG抗体酶联免疫检测法1. 检验方法 : ELISA检测法2. 试剂 : 购买经国家食品药品监督管理局批准的专用商品试剂盒，在有效期内使用。3. 仪器设备 : 酶标仪、水浴箱、振荡器4. 质量控制：同上。 十五、弓形体 IgM抗体和 IgG抗体测定（一）弓形体 IgM和 IgG抗体 胶体金检测1. 检验方法 :胶体金免疫层析法2. 试剂 : 购买经国家食
24、品药品监督管理局批准的专用商品试剂盒，在有效期内使用。3. 仪器设备 : 无设备要求4. 质量控制： 根据试剂盒的要求进行结果的操作和结果的判定。（二）弓形体 IgM和 IgG抗体 体酶联免疫检测法1. 检验方法 : ELISA检测法2. 试剂 : 购买经国家食品药品监督管理局批准的专用商品试剂盒，在有效期内使用。3. 仪器设备 : 酶标仪、水浴箱、振荡器4. 质量控制：同上。 十六、沙眼衣原体检测（一）检验方法 :胶体金法（二）试剂 : 购买经国家食品药品监督管理局批准的专用商品试剂盒，在有效期内使用。（三）仪器设备 : 无设备要求（四）操作步骤： 参照试剂盒说明书（五）质量控制：（ 1）衣
25、原体的生物活性不稳定 ,实验室检验的标本需要低温储存 ,并且应缩短采集与检验之间的时间差；（ 2）如标本不在 1天内接受检测 ,应将其冷藏 (2-8 ),不要冷冻 ,这样最多可保持 5天；（ 3）对于脓性排泄物样本 ,在采集时应对患处进行清洗后再采取样本。 十七、促甲状腺激素 TSH 检测（一）检验方法 : 化学发光法（二） 试剂 : 购买经国家食品药品监督管理局批准的配套商品试剂盒，在有效期内使用。（三）仪器设备 : 全自动化学发光分析仪（四）质量控制：（ 1）试剂盒仅供体外诊断使用。操作前仔细阅读使用说明书，严格按照试剂盒内说明进行试验操作，以保证结果可靠，重复性好。不同试剂盒不能通用。（
26、 2）包被条打开后，应将剩余包被条用不干胶封膜覆盖，装入袋中密封保存，以免受潮。（ 3）试剂请在有效期内使用。试剂盒使用完以后要及时放置到 2-8 条件下贮存。(4)标准品开始使用后，应保存于 2-8 ，尽快使用。(5)质控血清复溶后，于 2-8 保存，最多使用两周；分装后于 -20 保存，可使用一个月。（ 6）加样头不可混用，以免交叉污染。（ 7）孔内样品需震荡混合均匀，不能有气泡存在。（ 8）严格控制每步反应时间和温度，操作应紧凑。（ 9）洗涤要彻底，洗液应注满每孔，但不可用水过猛，避免产生气泡。每次洗涤均应甩干孔内液体，最后应将孔内液体拍干。推荐使用洗板机。 孕前优生健康检查临床检验及意
27、义 汉南计生站 检验科 陈荔 一、阴道分泌物检查二、血常规检测 三、尿液检测四、血型鉴定五、血清葡萄糖检测 六、肝功血清丙氨酸七、氨基转移酶检测八、乙肝五项检测九、肾功能血清肌酐检测十、甲状腺功能促甲状腺激素检测十一、梅毒螺旋体检测 十二、弓形体（ Tox） 十三、风疹病毒（ Rv） 十四、巨细胞病毒（ CMV）一、阴道分泌物检查标本采集：生殖道分泌物，检验项目不同，标本采集要求不同。（一）白带常规（二）淋病奈瑟氏菌（ N.Gonorrhoeae）（三）沙眼衣原体（一）白带常规目的：阴道分泌物是女性生殖系统分泌的液体，通过检查，可诊断女性生殖系统炎症、肿瘤，以及雌激素水平的判断。用显微镜观察阴
28、道分泌物图片，根据多视野观察到的白细胞（或脓细胞）、上皮细胞、乳酸杆菌、杂菌的多少，将阴道清洁度分成 度，以反映阴道清洁度程度。悬滴法检测： 清洁度 - 度 滴虫 阴性 霉菌 阴性革兰染色检查：淋病双球菌 阴性临床意义：了解孕妇产前阴道分泌物中病原体的检出率 ,为临床诊治提供参考依据 .方法 对 414名妇科门诊的孕妇作白带常规检查 .结果 414例标本中 ,清洁度异常 ( 度 )的标本明显高于清洁正常 ( 度 )的标本 .念珠菌和滴虫分别在早孕期和早、中孕期有较高的检出率 .线索细胞的检出率 ,早孕期明显高于晚孕期 (P0.05),且线索细胞检出率与念珠菌和滴虫的检出率差异有统计学意义。 (P0.05).三种病原体存在一定的混和感染 .结论 孕妇在产前尤其是在怀孕第 27周前要做好阴道分泌物中有关病原体特别是细菌性阴道病的检测 ,做到早发现 ,早治疗。 （二）淋病奈瑟氏菌（ N.Gonorrhoeae）淋病奈瑟氏菌（ N.Gonorrhoeae）属于奈瑟氏菌（Neisseria） , 是淋病的病原菌。目的：查找标本中白细胞内的革兰阴性双球菌，规范淋病奈瑟氏菌的涂片检测，保证检测结果的准确性。
