MenSCs对PCOS大鼠卵巢损伤修复、生殖系统及HSP90表达的影响.pdf

1、 论 著 M e n S C s对P C O S大 鼠 卵 巢 损 伤 修 复、生 殖 系 统 及H S P 9 0表 达 的 影 响*常 庆 玲1,2 蔡 文 涛1,2 陈 丽 华3(1.中 国 人 民 解 放 军 联 勤 保 障 部 队 第 九 八 九 医 院 生 殖 科,河 南 洛 阳 471000;2.慈 铭 博 鳌 国 际 医 院 生 殖 中 心,海 南 琼 海 571442;3.河 北 北 方 学 院 附 属 第 一 医 院 生 殖 科,河 北 张 家 口 075000)【摘 要】目 的 研 究 经 血 间 充 质 干 细 胞(MenSCs)移 植 对 多 囊 卵 巢 综 合 征(

2、PCOS)大 鼠 卵 巢 损 伤 修 复、生 殖 系 统 及热 休 克 蛋 白90(HSP90)表 达 的 影 响。方 法 选 取 健 康SPF级SD雌 性 大 鼠40只,随 机 分 为 健 康 组、模 型 组、治 疗 组、对照 组,每 组10只。除 健 康 组 外,剩 余30只 大 鼠 均 建 立PCOS模 型,其 中10只 为 模 型 组;10只PCOS模 型 大 鼠 于 尾 部 静脉 注 射200 L(5107个/mL)MenSCs悬 液,共 饲 养2周 为 治 疗 组;10只PCOS模 型 大 鼠 给 予 二 甲 双 胍20 mgkg-1d-1灌 胃,共 饲 养2周 为 对 照 组。E

3、LI SA检 测 性 激 素 水 平。阴 道 涂 片 观 察 动 情 周 期。RT-PCR检 测 生 殖 功 能 相 关 指 标PPARG1、NCOR1、HDAC3 mRNA表 达 水 平。HE染 色 观 察 卵 巢 病 理 形 态。免 疫 印 迹 检 测HSP90。结 果 与 健 康 组相 比,模 型 组 大 鼠 动 情 周 期 无 规 律 并 缩 短(P0.05);与 模 型 组 相 比,治 疗 组 与 对 照 组 大 鼠 动 情 周 期 均 有 所 改 善(P0.05)。模 型 组 大 鼠 有 较 多 闭 锁 坏 死 卵 泡 及 炎 性 细 胞;与 模 型 组 相 比,治 疗 组 与 对

4、 照 组 大 鼠 不 同 时 期 卵 泡 数 均 有 所 改 善。与 健 康 组 相 比,模 型 组FSH、PPARG1降 低,LH、T、NCOR1、HDAC3升 高(P0.0 5);与 模 型 组 相 比,治 疗 组FSH、PPARG1升高,LH、T、NCOR1、HDAC3降 低(P0.0 5)。与 健 康 组 相 比,模型 组HSP9 0蛋 白 表 达 降 低(P0.0 0 5);与 模 型 组 相 比,治 疗 组HSP9 0蛋 白 表 达 升 高(P0.0 5)。结 论 移 植Me nSCs细 胞 后 可 改 善PCOS大 鼠 的 生 殖 功 能 及 卵 巢 功 能,可 能 通 过上 调

5、HSP9 0表 达 影 响 性 激 素 水 平 从 而 改 善 卵 巢 损 伤。【关 键 词】MenSCs细 胞 移 植;热 休 克 蛋 白90;卵 巢 损 伤 修 复;生 殖 系 统【中 图 分 类 号】R711.75【文 献 标 志 码】A D O I:10.3969/j.i s sn.1672-3511.2023.12.003 基 金 项 目:河 北 省 卫 生 厅 科 研 基 金 项 目(20180836);张 家 口 市 科 技 计 划 项 目(1921041D)通 讯 作 者:陈 丽 华,E-mi a l:j i l a 88820448163.c om引 用 本 文:常 庆 玲,

6、蔡 文 涛,陈 丽 华.MenSCs 对PCOS 大 鼠 卵 巢 损 伤 修 复、生 殖 系 统 及HSP90 表 达 的 影 响J.西 部 医 学,2023,35(12):1729-1734.DOI:10.3969/j.i s sn.1672-3511.2023.12.003T h e e f f e c t o f M e n S C s o n P C O S r a t o v a r i a n i nju ry r epa i r,r epr o d u c t i v e sys t e m a n d h e a t s h o c k pr o t e i n 9 0 e x

7、pr e s s i o nC H A N G Q i n g l i n g1,2,C A I W e n t a o1,2,C H E N L i h u a3(1.D e p a r t m e n t o f R e p r o d u c t i o n,T h e 989 t h H o s p i t a l o f J o i n t L o g i s t i c S u p p o r t F o r c e o f C h i n e s e P e o p l e s L i b e r a t i o n A r m y,L u o y a n g 471000,H

8、e n a n,C h i n a;2.R e p r o d u c t i v e C e n t e r,C i m i n g B oa o I n t e r n a t i o n a l H o s p i t a l,Q i o n g h a i 571442,H a i n a n,C h i n a;3.D e p a r t m e n t o f R e p r o d u c t i o n,T h e F i r s t A f f i l i a t e d H o s p i t a l o f H e b e i N o r t h U n i v e r

9、s i t y,Z h a n g j i a k o u 075000,H e b e i,C h i n a)【A b s t r a c t】O b j e c t i v e To i nve s t i ga t e t he e f f e c t s o f MenSCs t r ansp l an t a t i on on HSP90 exp r e s s i on,ova r i an i n j u r y r epa i r and r ep r oduc t i ve sy s t em i n PCOS r a t s.M e t h o d s Fo r t y

10、 he a l t hy f ema l e SD r a t s we r e r andoml y d i v i ded i n t o he a l t hy g r oup,mode l g r oup(PCOS r a t s),t r e a tmen t g r oup(mode l+MenSCs t r ansp l an t a t i on)and c on t r o l g r oup(mode l+me t-f o rmi n).PCOS mode l wa s e s t ab l i shed i n mode l g r oup,and MenSCs susp

11、ens i on wa s i n j e c t ed 200L(5107 PCS/mL)i n t o t a i l ve i n o f r a t s f o r 2W.The c on t r o l g r oup wa s g i ven me t f o rmi n 200 mgkg-1 i n t r aga s t r i c admi n i s t r a t i on f o r a t o t a l o f 2W.ELI SA wa s us ed t o t e s t t he s ex ho rmone l e ve l s.Vag i na l sme

12、a r wa s us ed t o obs e r ve t he e s t r ous cy c l e.Rep r oduc-t i ve f unc t i on r e l a t ed i ndexe s PPARG1,NCOR1 and HDAC3 we r e de t e c t ed by RT-PCR.HE s t a i n i ng wa s us ed t o obs e r ve 9 2 7 1 西 部 医 学 2023年12月 第35卷 第12期 Med J We s t Ch i na,De c embe r 2023,Vo l.35,No.12t he p

13、a t ho l og i c a l mo r pho l ogy o f ova r y.We s t e r n b l o t t i ng wa s us ed t o de t e c t HSP90.R e s u l t s The e s t r ous cy c l e o f mode l g r oup wa s i r r egu l a r and sho r t ened(P0.05).Compa r ed wi t h mode l g r oup,bo t h t r e a tmen t g r oup and c on t r o l g r oup we

14、 r e imp r oved(P0.05).The r e we r e mo r e ne c r o t i c f o l l i c l e s and i n f l amma t o r y c e l l s i n mode l g r oup.Compa r ed wi t h mode l g r oup,t r e a tmen t g r oup and c on t r o l g r oup r a t s imp r oved.Compa r ed wi t h he a l t hy g r oup,FSH and PPARG1 i n mode l g r

15、oup we r e de c r e a s ed,wh i l e LH,T,NCOR1 and HDAC3 we r e i nc r e a s ed(P0.05).Compa r ed wi t h mode l g r oup,FSH and PPARG1 i n t r e a tmen t g r oup we r e i nc r e a s ed,wh i l e LH,T,NCOR1 and HDAC3 we r e de c r e a s ed(P0.05).Compa r ed wi t h he a l t hy g r oup,HSP90 p r o t e i

16、 n exp r e s s i on i n mode l g r oup wa s de c r e a s ed(P0.005).Compa r ed wi t h mode l g r oup,HSP90 p r o t e i n ex-p r e s s i on wa s i nc r e a s ed i n t r e a tmen t g r oup(P0.05).C o n c l u s i o n MenSCs t r ansp l an t a t i on c an imp r ove t he r ep r oduc-t i ve f unc t i on an

17、d ova r i an f unc t i on o f PCOS r a t s,wh i ch may a f f e c t t he l e ve l o f s ex ho rmone s by up r egu l a t i ng t he exp r e s-s i on o f HSP90,t he r eby imp r ove ova r i an i n j u r y.【K e y w o r d s】MenSCs c e l l t r ansp l an t a t i on;HSP90;Ova r i an i n j u r y r epa i r;Rep

18、r oduc t i ve sy s t em 多 囊 卵 巢 综 合 征(Po l yc ys t i c ova r y s ynd r ome,P-COS)是 常 见 的 内 分 泌 紊 乱 疾 病,其 发 病 率 高 达5%10%,是 女 性 无 排 卵 不 孕 的 的 最 常 见 原 因 1。PCOS通 常 在 青 少 年 时 期 开 始 出 现,其 临 床 表 现 具 有 显 著 的差 异 性,常 见 的 临 床 表 现 为 月 经 异 常、不 孕、多 毛、痤疮 等。此 外,PCOS还 常 伴 有 高 血 压、心 血 管 疾 病、子宫 内 膜 癌 等 多 种 并 发 症。相 关 调

19、 查 显 示 2,育 龄 期 女性PCOS发 病 率 接 近15%,在 无 排 卵 性 不 孕 患 者 中 该病 的 发 病 率 在90%以 上,是 目 前 致 使 女 性 不 孕 的 主 要原 因。PCOS引 起 的 无 排 卵 性 不 孕 是 妇 科 的 研 究 难点,也 是 我 国 生 育 保 健 的 难 题。研 究 发 现 3,抑 制 干细 胞 后 改 善 局 部 微 环 境 及 病 理 状 态,能 提 升 机 体 相 关器 官 的 功 能,且 对 受 试 者 无 不 良 影 响。目 前,关 于 间充 质 干 细 胞 应 用 于 妇 科 内 分 泌 疾 病 治 疗 的 研 究 逐 渐增

20、 加。研 究 发 现 4,将 骨 髓 间 充 质 干 细 胞(Bone ma r-r ow-de r i ved MSCs,BM-MSCs)移 植 到 卵 巢 早 衰 大 鼠体 内,发 现 可 缓 解 顺 铂 引 发 的 颗 粒 细 胞 凋 亡;另 外,研究 将 经 血 间 充 质 干 细 胞(Mens t rua l b l ood me s enchy-ma l s t em c e l l s,MenSCs)移 植 到Ashe rman综 合 征 大鼠 体 内,发 现 在 移 植 后 可 增 强 血 管 生 成 因 子 和 抗 炎 性因 子 的 分 泌,提 高Ashe rman综 合 征

21、 大 鼠 的 妊 娠 率 以及 产 仔 率 5。MenSCs是 从 育 龄 女 性 的 经 血 中 提 取 出的,易 于 收 集,来 源 丰 富,其 免 疫 原 性 与 炎 性 反 应 较低,显 著 优 于 其 他 类 干 细 胞,同 时 还 具 有 较 高 的 组 织容 受 性,增 殖 及 自 我 更 新 能 力 较 好,还 可 分 化 为 骨 细胞、软 骨 细 胞、神 经 元 细 胞 等 6。另 有 研 究 发 现 7,MenSCs在 特 定 条 件 下 还 可 分 化 为 卵 巢 颗 粒 样 细 胞 并具 有 该 细 胞 的 相 关 功 能,具 有 修 复 损 伤 卵 巢 组 织 并 促

22、进 再 生 的 作 用。另 外,热 休 克 蛋 白(He a t shock p r o-t e i n,HSP)也 参 与PCOS的 产 生 与 发 展,并 在 其 中 发挥 着 重 要 的 作 用。HSP90隶 属 于HSP家 族,具 有 分子 伴 侣 等 多 种 功 能,参 与 免 疫 调 控、抗 细 胞 凋 亡 等 过程。研 究 显 示 8,PCOS是 由 于 机 体 处 于 长 期 应 激 或卵 巢 内 卵 母 细 胞/颗 粒 细 胞 不 正 常 凋 亡 所 致,而 这 两种 状 态 均 有HSP的 参 与。目 前 有 关 运 用MenSCs治疗PCOS的 相 关 文 献 较 少,具

23、 体 的 治 疗 机 制 尚 未 完 全掌 握。因 此,本 文 通 过 构 建PCOS动 物 模 型,研 究MenSCs移 植 对PCOS大 鼠HSP90表 达、卵 巢 损 伤 修复 及 生 殖 系 统 的 影 响。1 材 料 与 方 法1.1 实 验 动 物 选 取 健 康SPF级SD雌 性 大 鼠40只,体 质 量200300 g,由 长 沙 市 海 天 勤 公 司 提 供 生产 许 可 证 号:SCXK(湘)-2019-0014。大 鼠 于 中 国 人民 解 放 军 联 勤 保 障 部 队 第 九 八 九 医 院 动 物 实 验 室 进行 饲 养,实 验 室 保 持 整 洁、通 风,维

24、持 昼 夜 规 律,室 温在2022,相 对 湿 度 在55%左 右,每 个 鼠 笼 中 饲 养5只 大 鼠,鼠 笼 中 保 持 充 足 的 饮 用 水 及 营 养 饲 料,适 应性 饲 养1周 后 进 行 实 验。本 实 验 已 通 过 我 院 动 物 伦理 委 员 会 批 准(批 号:19081123)。1.2 主 要 实 验 试 剂 及 仪 器 FSH、LH、LH试 剂 盒(上 海 研 生 实 业 公 司),PPARG1、NCOR1、HDAC3引物 序 列(上 海 齐 源 生 物 公 司),来 曲 唑(上 海 沪 峥 生 物科 技 有 限 公 司,货 号:Hhz y-2885),羟 甲

25、基 纤 维 素 钠(武 汉 荣 灿 生 物 科 技 有 限 公 司,货 号:9085-26-1),PCR仪(北 京 福 意 电 器 公 司,型 号:431L),HSP90一 抗(中国,碧 云 天 生 物 公 司),辣 根 过 氧 化 物 酶 二 抗(北 京 博尔 西 科 技 公 司)。1.3 细 胞 来 源 及 培 养 MenSCs细 胞 株 由 杭 州 易 文赛 生 物 技 术 有 限 公 司 提 供。将MenSCs细 胞 放 入 含有10%胎 牛 学 清 的DMEM培 养 基 中 常 规 培 养,待 细胞 融 合 至70%80%时 传 代,取 第3代 细 胞 进 行 实验。显 微 镜 下

26、观 察MenSCs呈 梭 状,成 旋 涡 状 排 列,贴 壁 生 长,具 有 典 型 的MSCs的 细 胞 特 征(图1)。运用 流 式 细 胞 仪 检 测 了 其 表 面 分 子 标 志 物,显 示 在 该 细0 3 7 1 西 部 医 学 2023年12月 第35卷 第12期 Med J We s t Ch i na,De c embe r 2023,Vo l.35,No.12胞 中 存 在CD29、CD73、CD90、CD105的 表 达,不 表 达CD34、CD45、CD117和HLA-DR,符 合 国 际 细 胞 治 疗学 会 建 议 的 关 于 间 充 质 干 细 胞 的 标 准。

27、图 1 M e n S C s 细 胞 形 态F i g u r e 1 M o r p h o l o g y o f M e n S C s c e l l s注:A.MenSCs 细 胞 原 代;B.MenSCs 细 胞 第3 代。1.4 模 型 建 立 及 分 组 40只 大 鼠 按 照 随 机 数 字 方 法分 为 健 康 组、模 型 组、治 疗 组 及 对 照 组,每 组10只。除 健 康 组 外,剩 余30只 大 鼠 均 建 立PCOS模 型 9:给予1 mgkg-1d-1来 曲 唑(溶 于0.5%羟 甲 基 纤 维素 钠1 mL)灌 胃,高 脂 饲 料 喂 养,直 至 出 现

28、多 囊 卵 巢样 改 变 以 及 高 表 达 的 睾 酮(t e s t os t e r one,T)提 示 建 模成 功。10只PCOS模 型 大 鼠 为 模 型 组;10只PCOS模 型 大 鼠 于 大 鼠 尾 部 静 脉 注 射200 L(5107个/mL)MenSCs悬 液 10,共 饲 养2周 为 治 疗 组;10只P-COS模 型 大 鼠 予 二 甲 双 胍20 mgkg-1d-1灌 胃,共 饲 养2周 为 对 照 组。1.5 检 测 指 标 1.5.1 ELI SA检 测 性 激 素 水 平 取4组 大 鼠 外 周 血2 mL,离 心5 mi n,1 250 r/mi n,后

29、取 血 清。ELI SA试剂 盒 检 测 促 卵 泡 激 素(f o l l i c l e-s t imu l a t i ng ho rmone,FSH)、黄 体 生 成 素(l u t e i n i s i ng ho rmone,LH)、睾 酮(T),实 验 严 格 按 照 试 剂 盒 说 明 书 进 行。1.5.2 阴 道 涂 片 观 察 动 情 周 期 每 日 上 午8:00时用 棉 签 将 大 鼠 阴 道 口 处 赃 物 擦 净,运 用 无 菌 柔 软 的 习惯 吸 取0.5 mL的 生 理 盐 水 放 于 阴 道 口0.5 cm处 进行 吹 打,并 冲 洗,吸 出 冲 洗 液

30、,离 心1 mi n,3000 r/mi n,吸 取50 L液 体 放 入 载 玻 片 上,涂 匀 后 晾 干。4%PFA滴 至 涂 片 上 固 定 标 本 30 mi n。PBS 浸 泡,摇 床 振 动,清 洗 后 涂 在 载 玻 片 上,吉 姆 萨 染 色,冲 洗 后 光 镜 下 观察,根 据 细 胞 种 类、形 态 判 断 动 情 周 期。动 情 前 期:有大 量 核 上 皮 细 胞,圆 形 深 染;动 情 期:大 量 角 化 细 胞,无 核 片 状;动 情 后 期:可 见 上 皮 细 胞,角 化 细 胞,白 细胞,各 占 三 分 之 一;动 情 间 期:有 大 量 白 细 胞。见 图2

31、。1.5.3 RT-PCR检 测 生 殖 功 能 相 关 指 标PPARG1、NCOR1、HDAC3 mRNA表 达 水 平 取4组 大 鼠 卵 巢组 织,剪 碎、研 磨、离 心 后,Tr i z o l提 取 总RNA后 逆 转录 合 成cDNA。PCR反 应 条 件:94 5 mi n;94 30 s,72 50 s,36个 循 环;72 10 mi n。以U6为 内参,用2-Ct计 算 相 对 表 达 量,引 物 序 列 见 表1。图 2 健 康 大 鼠 与 模 型 大 鼠 阴 道 涂 片F i g u r e 2 V a g i n a l s m e a r s o f h e a

32、l t h y a n d m o d e l r a t s注:A.健 康 大 鼠 阴 道 涂 片;B.PCOS 大 鼠 阴 道 涂 片。表 1 引 物 序 列T a b l e 1 P r i m e r s e q u e n c e s基 因 方 向 引 物 序 列P P A R G1 F 5-TGGAGTTTTATATTTGGGTTGTTTT-3 R 5-CACAATAAAACCCCTACTCACC-3 N C O R1 F 5-GGCACAGTCAAGGCTGAGAATG-3 R 5-ATGGTGGTGAAGACGCCAGTA-3 H D A C3 F 5-CTGAACCATGCA

33、CCCAGTGTC-3 R 5-CGGCATCCATGCTGCTCTTA-3 U6 F 5-GCTTCGGCAGCACATATACTAAAAT-3 R 5-CGCTTCACGAATTTGCGTGTCAT3-3 1.5.4 HE染 色 观 察 卵 巢 病 理 形 态 并 计 数 取4组大 鼠 戊 巴 比 妥 钠 麻 醉 后 处 死,取 卵 巢 组 织,手 术 刀 剪成 小 块,甲 醛 固 定,冲 洗1 h,脱 水,浸 蜡,包 埋,切5 m片,HE染 色 后 中 性 树 胶 封 固,光 镜 下 观 察 卵 巢 组 织 病理 学 形 态 并 计 数 卵 泡 数。1.5.5 免 疫 印 迹 检 测HS

34、P90 取4组 大 鼠 卵 巢 组 织剪 碎 后 研 磨,裂 解 液 裂 解,冰 浴 中 静 置20 mi n后,离 心取 上 清,BCA测 定 蛋 白 浓 度,电 泳 仪 电 泳,后 进 行 转膜,转 膜 终 止 后,PBS冲 洗5 mi n,用 丽 春 红 染 膜,观 察转 膜 效 果,然 后 用PBS将 丽 春 红 冲 洗 干 净,用 封 闭 液封 闭1.5 h,按 照 一 定 比 例 稀 释 一 抗,加 入 稀 释 的HSP90(1500)一 抗,孵 育 过 夜,PBS清 洗,加 入 辣 根过 氧 化 物 酶 二 抗(12000),孵 育1 h后 清 洗,ECL化学 发 光 试 剂 盒

35、 曝 光 显 影3 mi n,计 算HSP90蛋 白 相 对表 达 量。1.6 统 计 学 分 析 采 用Gr aphPad Pr i sm 8.0统 计 学软 件 进 行 分 析,计 数 资 料 采 用(x s)表 示,多 组 间 对比 采 用 单 因 素 方 差 分 析,多 组 内 两 两 比 较 采 用LSD-t法 检 测。以P0.05表 示 差 异 有 统 计 学 意 义。2 结 果2.1 MenSCs对4组 大 鼠 动 情 周 期 的 影 响 健 康 组大 鼠 动 情 周 期 稳 定;与 健 康 组 相 比,模 型 组 大 鼠 动 情1 3 7 1 西 部 医 学 2023年12月

36、第35卷 第12期 Med J We s t Ch i na,De c embe r 2023,Vo l.35,No.12周 期 无 规 律,动 情 前 期、动 情 间 期 时 间 延 长,动 情 期 时间 缩 短(P0.05);与 模 型 组 相 比,治 疗 组 与 对 照 组 小鼠 动 情 周 期 数、动 情 期 时 间 增 加,间 期 时 间 减 少,周 期相 对 规 律(P0.05),见 表2。表 2 M e n S C s 对 4 组 大 鼠 动 情 周 期 的 影 响(x s)T a b l e 2 E f f e c t o f M e n S C s o n e s t r o

37、 u s c y c l e o f r a t s i n e a c h g r o u p组 别 n 动 情 周 期 数(个)动 情 前 期(d)动 情 期(d)动 情 后 期(d)动 情 间 期(d)健 康 组 10 6.610.94 3.641.21 12.422.14 7.761.86 3.752.11模 型 组 10 3.711.959.262.134.522.616.712.08 7.522.96治 疗 组 10 5.241.167.942.287.142.386.223.07 5.972.65对 照 组 10 5.211.208.012.317.102.416.243.10

38、6.012.63F 7.512 14.610 19.260 0.776 3.552P 0.05 0.05 0.05 0.52 0.02注:与 健 康 组 比 较,P0.05;与 模 型 组 比 较,P0.05。2.2 MenSCs对4组 大 鼠 性 激 素 水 平 的 影 响 与 健康 组 相 比,模 型 组FSH降 低、LH与T升 高(P0.05);与 模 型 组 相 比,治 疗 组FSH升 高、LH与T降低(P0.05),见 表3。表 3 4 组 大 鼠 性 激 素 水 平 比 较(x s)T a b l e 3 E f f e c t s o f M e n S C s o n s e

39、x h o r m o n e l e v e l s i n e a c h g r o u p组 别 n FSH(mU/mL)LH(nmo l/L)T(nmo l/L)健 康 组 10 16.372.14 9.321.46 1.230.17模 型 组 10 7.211.5420.342.811.680.26治 疗 组 10 13.262.0516.212.371.410.28对 照 组 10 13.182.1216.322.251.450.31F 37.490 40.430 5.052P 0.001 0.001 0.001注:与 健 康 组 比 较,P0.05;与 模 型 组 比 较,P0

40、.05。2.3 MenSCs对4组 大 鼠 生 殖 功 能 相 关 指 标mRNA表 达 的 影 响 与 健 康 组 相 比,模 型 组PPARG1 mR-NA降 低,NCOR1 mRNA、HDAC3 mRNA升 高(P0.05);与 模 型 组 相 比,治 疗 组PPARG1 mRNA升 高,NCOR1 mRNA、HDAC3 mRNA降 低(P0.05),见 表4。表 4 4 组 大 鼠 生 殖 功 能 相 关 指 标 m R N A 表 达 比 较(x s)T a b l e 4 E f f e c t s o f M e n S C s o n t h e m R N A e x p r

41、 e s s i o n o f r e p r o d u c t i v e f u n c t i o n r e l a t e d i n d i c a t o r s i n e a c h g r o u p o f r a t s组 别 n PPARG1 mRNANCOR1 mRNA HDAC3 mRNA健 康 组 10 2.350.21 1.020.03 1.050.02模 型 组 10 0.520.062.680.262.540.27治 疗 组 10 1.670.121.590.131.520.11对 照 组 10 1.610.151.610.121.550.08F 27

42、0.800 192.500 171.100P 0.001 0.001 0.001注:与 健 康 组 比 较,P0.05;与 模 型 组 比 较,P0.05。2.4 MenSCs对4组 大 鼠 卵 巢 组 织 病 理 形 态 的 影 响 健 康 组 大 鼠 卵 巢 组 织 结 构 正 常;模 型 组 大 鼠 卵 巢 结构 紊 乱,可 见 较 多 闭 锁 坏 死 卵 泡、较 多 卵 泡 囊 性 扩 张、颗 粒 细 胞 疏 松 且 层 数 减 少、成 熟 卵 泡 内 未 见 卵 母 细胞、放 射 冠 消 失,发 育 期 卵 泡 与 黄 体 数 量 明 显 减 少;与模 型 组 相 比,治 疗 组 与

43、 对 照 组 大 鼠 卵 巢 组 织 有 所 改善,见 图3。与 健 康 组 相 比,模 型 组 原 始 卵 泡、生 长 卵泡 数 量 减 少,闭 锁 卵 泡 数 量 增 加(P0.05);与 模 型 组相 比,治 疗 组 与 对 照 组 生 长 卵 泡 数 量 增 加、闭 锁 卵 泡数 量 减 少(P0.05),见 表5。2.5 4组 大 鼠 卵 巢 组 织HSP90蛋 白 表 达 的 影 响 健康 组、模 型 组、治 疗 组 及 对 照 组 的HSP90蛋 白 表 达 水平 分 别 为(1.520.25)、(0.260.03)、(0.850.11)及(0.870.10)。与 健 康 组 相

44、 比,模 型 组HSP90蛋 白 表 达 降 低(t=20.450,P0.001);与 模型 组 相 比,治 疗 组HSP90蛋 白 表 达 升 高(t=25.330,P0.001);治 疗 组 与 对 照 组HSP90蛋 白 表 达 水 平 比较 差 异 无 统 计 学 意 义(t=0.595,P=0.559),见 图4。3 讨 论应 激 状 态 通 过 激 活HSP90影 响 性 激 素 平 衡,使得 卵 泡 发 育 失 常,导 致 多 囊 卵 巢 发 生 11。HSP90主要 定 位 于 卵 巢 的 颗 粒 细 胞 中,在 闭 锁 的 卵 泡 中 显 著 减少 12-13。LH通 过 刺

45、 激 卵 泡 膜 增 加 雄 激 素 含 量,阻 滞卵 泡 成 熟,未 成 熟 的 卵 泡 会 分 泌 雌 二 醇 并 转 化 为 雌酮,此 时 机 体 雌 酮 为 异 常 高 表 达,促 进LH分 泌,形 成恶 性 循 环,使FSH水 平 降 低,从 而 发 展 为 多 囊 卵 巢 的症 状 14。本 研 究 结 果 显 示,PCOS大 鼠 无 明 显 动 情 周期,且 促 黄 体 酮 生 成 素、睾 酮 水 平 增 加,呈 现 多 囊 卵 巢样 病 变,同 时HSP90水 平 下 降,与 吴 庚 香 等 15报 道 一致。MenSCs细 胞 具 有 较 低 的 免 疫 原 性,可 以 逃

46、避 宿主 免 疫 系 统 的 清 除 而 不 引 起 免 疫 应 答,是MenSCs细胞 成 为 临 床 细 胞 治 疗 强 有 力 的 候 选 者 的 原 因 之 一 16。与 其 他 多 种 干 细 胞 相 比,MenSCs细 胞 具 有 增 殖 快 等特 点,异 体 移 植 成 功 率 高,当MenSCs细 胞 移 植 于 机2 3 7 1 西 部 医 学 2023年12月 第35卷 第12期 Med J We s t Ch i na,De c embe r 2023,Vo l.35,No.12 图 3 M e n S C s 对 4 组 大 鼠 卵 巢 组 织 病 理 形 态 的 影

47、响F i g u r e 3 E f f e c t o f M e n S C s o n p a t h o l o g i c a l m o r p h o l o g y o f o v a r i a n t i s s u e s o f r a t s i n e a c h g r o u p注:A、E 为 健 康 组(A:200,E:400);B、F 为 模 型 组(B:200,F:400);C、G 为 治 疗 组(C:200,G:400);D、H 为 对 照 组(D:200,H:400)。表 5 4 组 不 同 时 期 卵 泡 数 比 较(x s,个)T a b l e

48、5 F o l l i c u l a r s u r g e r y i n d i f f e r e n t p e r i o d s i n e a c h g r o u p组 别 n 原 始 卵 泡 生 长 卵 泡 闭 锁 卵 泡健 康 组 10 73.155.94 168.4526.17 24.683.56模 型 组 10 58.224.71105.7617.6536.122.67治 疗 组 10 59.985.18 148.7625.8121.232.55对 照 组 10 57.644.87 146.2226.3420.642.38F 19.93 11.75 64.73P 0

49、.001 0.001 0.001注:与 健 康 组 比 较,P0.05;与 模 型 组 比 较,P0.05。图 4 M e n S C s 对 4 组 大 鼠 卵 巢 组 织 H S P 9 0 蛋 白 表 达 的 影 响F i g u r e 4 E f f e c t o f M e n S C s o n H S P 9 0 p r o t e i n e x p r e s s i o n i n o v a r i a n t i s-s u e s o f r a t s i n e a c h g r o u p体 内 后,通 过“归 巢”方 式 修 复 损 伤 卵 巢 17-1

50、9。有 研究 20显 示,MenSCs可 能 只 在PCOS特 殊 病 理 条 件 下起 作 用,通 过 这 种 环 境 里 的 某 种 机 制 增 加 了PCOS大鼠 芳 香 化 酶 的 产 生,进 而 促 使 卵 巢 颗 粒 细 胞 内 雄 激 素向 雌 激 素 的 转 化 量 增 加。目 前 已 有 研 究 证 实 9二 甲双 胍 对PCOS的 治 疗 效 果 显 著,因 此 本 研 究 运 用 二 甲双 胍 作 为 对 照 组,证 实 移 植MenSCs后 对PCOS的 治疗 效 果。在 本 研 究 中,与 模 型 组 相 比,移 植MenSCs细 胞 后 治 疗 组FSH、LH、T水