1、第 10 章 原核生物基因表达的调控10.1 原核生物基因调控序列调控序列是调节基因表达的序列，位于基因的侧翼（flanking region） ，可对一些特定分子起反应。调控序列并不表达，它所包含的信息是为信号分子提供识别序列并与信号分子相互作用，从而调节附近的结构基因的转录。常见的调控序列有 5类：（1） 启动子（promoter，P）：启动子是指能被 RNA聚合酶识别、结合并启动基因转录的一段 DNA序列。常位于结构基因的上游，长度 20200bp。原核生物启动子含有两段共同的保守序列，一个是位于-10 区的保守序列 TATAAT，由 D.Pribnow(1975)发现，故称 Pribn
2、ow box；另一个是-35 区的保守序列TTGACA。-10 区的保守序列是 因子的结合区，-35 区的保守序列是 RNA聚合酶的另一个结合区。启动子也可以结合其他调节蛋白而调控转录。（2） 操纵子（operator，O）：操纵子位于结构基因和启动子之间，是与阻遏蛋白质结合的一段 DNA序列。阻遏蛋白质与操纵子有很强的亲合力，可以阻止RNA聚合酶到达转录起始点。（3） 衰减子（attenuator）：衰减子位于前导序列的 P-O区与第一个结构基因起始点之间，长度为 162bp，它可以微调转录活性，其效果约为 10倍。衰减作用并不依赖于阻遏作用，它是由于结构基因转录前体的终止而产生。（4） 增
3、强子（enhancer）：增强子是通过增加对所调节基因进行转录的 RNA聚合酶的分子数量而提高转录效率的顺式作用因子，它并无特定的位置，在不同的基因中位置是可变的，可以位于基因上下游。增强子可以被序列特异性结合蛋白激活，主要在组织特异性基因表达和发育过程中的基因时序表达中起调节作用。（5） 终止子（terminator）：终止子是为 RNA聚合酶转录提供终止信号的一段DNA序列。终止子按其作用是否需要蛋白质因子的协助可分成 2类：不依赖 因子的终止子和依赖于 因子的终止子。10.2 操纵元的概念及一般结构10.2.1 操纵元概念的提出 细菌能随环境的变化，迅速改变某些基因表达的状态，这就是很好
4、的基因表达调控的实验模型。人们就是从研究这种现象开始，打开认识基因表达调控分子机理的窗口的。大肠杆菌可以利用葡萄糖、乳糖、麦芽糖、阿拉伯糖等作为碳源而生长繁殖，当培养基中含有葡萄糖和乳糖时，细菌优先使用葡萄糖，当葡萄糖耗尽，细菌停止生长，经过短时间所以适应，就能利用乳糖，细菌继续呈指数式繁殖增长。大肠杆菌利用乳糖至少需要需要两个酶：促使乳糖进入细菌的乳糖透过酶(lactose permease)和催化乳糖分解第一步的 半乳糖苷酶( -galactosidase)。在环境中没有乳糖或其他 -半乳糖苷时，大肠杆菌合成 - 半乳糖苷酶量极少，加入乳糖 23 分钟后，细菌大量合成 -半乳糖苷酶，其量可
5、提高千倍以上，在以乳糖作为唯一碳源时，菌体内的 -半乳糖苷酶量可占到细菌总蛋白量的 3%。在上述二阶段生长细菌利用乳糖再次繁殖前，也能测出细菌中 -半乳糖苷酶活性显著增高的过程。这种典型的诱导现象，是研究基因表达调控极好的模型。针对大肠杆菌利用乳糖的适应现象，法国的 Jocob 和 Monod 等人做了一系列遗传学和生化学研究实验，于 1961 年提出乳糖操纵元（lac operon ）学说。操纵元（operon）是指代谢上相关的一些基因聚合在一起组成一个受共同调控序列控制的转录单元。一个操纵元内的基因在代谢途径上一般都是关联的，其表达也协同地被调节，作为一个转录单位，这样也便于原核生物对外界
6、环境迅速地做出反应。10.2.2 操纵元(operon)的基本组成乳糖操纵元模型被尔后的许多研究实验所证实，对其有了更深入的认识，并且发现其他原核生物基因调控也有类似的操纵元组织，操纵元是原核基因表达调控的一种重要的组织形式，大肠杆菌的基因多数以操纵元的形式组成基因表达调控的单元。下面就以半乳糖操纵元为例子说明操纵元的最基本的组成元件（elements）。(1)结构基因群 操纵元中被调控的编码蛋白质的基因可称为结构基因 (structural gene, SG)。一个操纵元中含有 2 个以上的结构基因，多的可达十几个。每个结构基因是一个连续的开放读框(open reading frame),
7、5端有翻译起始码，3端有翻译终止码。各结构基因头尾衔接、串连排列，组成结构基因群。至少在第一个结构基因 5侧具有核糖体结合位点(ribosome binding site, RBS)，因而当这段含多个结构基因的 DNA 被转录成多顺反子mRNA，就能被核糖体所识别结合、并起始翻译。核糖体沿 mRNA 移动，在合成完第一个编码的多肽后，核糖体可以不脱离 mRNA 而继续翻译合成下一个基因编码的多肽，直至合成完这条多顺反子 mRNA 所编码的全部多肽。乳糖操纵元含有 、 和 3 个结构基因。 基因长 3510bp，编码含 1170 个氨基酸、分子量为 135,000 的多肽，以四聚体形式组成有活性
8、的 - 半乳糖苷酶，催化乳糖转变为别乳糖(allolactose)，再分解为半乳糖和葡萄糖； 基因长 780bp，编码有 260 个氨基酸、分子量为 30,000 的半乳糖透过酶，促使环境中的乳糖进入细菌； 基因长 825bp，编码275 氨基酸、分子量为 32,000 的转乙酰基酶，以二聚体活性形式催化半乳糖的乙酰化。 基因 5侧具有大肠杆菌核糖体识别结合位点（ribosome binding site ，RBS ）特征的 Shan-Dagano(SD)序列，因而当乳糖操纵元开放时，核糖体能结合在转录产生的 mRNA 上。由于、 三个基因头尾相接，上一个基因的翻译终止码靠近下一个基因的翻译起
9、始码，因而同一个核糖体能沿此转录生成的多顺反子（polycistron）mRNA 移动，在翻译合成了上一个基因编码的蛋白质后，不从 mRNA 上掉下来而继续沿 mRNA 移动合成下一个基因编码的蛋白质，一气依次合成这基因群所编码所有的蛋白质。(2)启动子 启动子(promoter, P) 是指能被 RNA 聚合酶识别、结合并启动基因转录的一段DNA 序列。操纵元至少有一个启动子，一般在第一个结构基因 5侧上游，控制整个结构基因群的转录。用 RNA 聚合酶与分离的一段 DNA 双链混合，再加入外切核酸酶去水解 DNA，结果只有被 RNA 聚合酶识别结合而被保护的那段 DNA 不被水解，由此可以测
10、出启动子的范围及其序列。虽然不同的启动子序列有所不同，但比较已经研究过的上百种原核生物的启动子的序列，发现有一些共同的规律，它们一般长 4060bp，含 A-T 碱基对较多，某些片段是很相似的，这些相似的保守性片段称为共有性序列(consensus sequences)。如图 7-4 所示，启动子一般可分为识别（R， recognition）、结合（B ，binding）和起始（I，initiation）三个区段。转录起始第一个碱基（通常标记位置为+1）最常见的是 A；在10bp 附近有TATAAT 一组共有序列，因为这段共有序列是 Pribnow 首先发现的，称为 Pribnow 盒（Pri
11、bnow box）；在35bp 处又有 TTGACA 一组共有序列。不同的启动子序列不同，与 RNA 聚合酶的亲和力不同、启动转录的频率高低不同，即不同的启动子起动基因转录的强弱不同，例如：P L、 PR、 PT7 属强启动子，而 Plac 则是较弱的启动子。(3)操纵子 操纵子（ operator）是指能被调控蛋白特异性结合的一段 DNA 序列，常与启动子邻近或与启动子序列重叠，当调控蛋白结合在操纵子序列上，会影响其下游基因转录的强弱。以前许多书中将操纵子称为操纵基因（operator gene）。但现在基因定义是为蛋白质编码的核酸序列，而操纵序列并不是编码蛋白质的基因，却是起着调控基因表达
12、强弱的作用，正如启动序列不叫启动基因而称为启动子一样，操纵序列就可称为操纵子。以前将operon 译为操纵子则可改译为操纵元，即基因表达操纵的单元之意。举乳糖操纵元中的操纵子为例，其操纵子（o）序列位于启动子（p）与被调控的基因之间，部分序列与启动子序列重叠。仔细分析这操纵子序列，可见这段双链 DNA 具有回文（palindrome）样的对称性一级结构，能形成十字形的茎环（stem loop）构造。不少操纵子都具有类似的对称性序列，可能与特定蛋白质的结合相关。阻遏蛋白与操纵子结合，就妨碍了 RNA 聚合酶与启动子的结合及其后 - 半乳糖苷酶等基因的转录起始，从而阻遏了这群基因的表达。最早只把与
13、阻遏蛋白结合、起阻遏作用的序列称为操纵子，但其后发现有的操纵元中同一操纵序列与不同构像的蛋白质结合，可以分别起阻遏或激活基因表达的作用，阿拉伯糖操纵元中的操纵序列就是典型的例子。因而凡能与调控蛋白特异性结合、从而影响基因转录强弱的序列，不论其对基因转录的作用是减弱、阻止或增强、开放，都可称为操纵子。(4)调控基因 调控基因（regulatory gene）是编码能与操纵序列结合的调控蛋白的基因。与操纵子结合后能减弱或阻止其调控基因转录的调控蛋白称为阻遏蛋白（repressive protein），其介导的调控方式称为负调控（negative regulation）；与操纵子结合后能增强或起动其
14、调控基因转录的调控蛋白称为激活蛋白（activating protein），所介导的调控方式称为正调控（positive regulation）。某些特定的物质能与调控蛋白结合，使调控蛋白的空间构像发生变化，从而改变其对基因转录的影响，这些特定物质可称为效应物（effector），其中凡能引起诱导发生的分子称为诱导剂（inducer），能导致阻遏发生的分子称为阻遏剂或辅助阻遏剂（corepressor）。操纵子对调节蛋白的响应是结构基因被开启或关闭。所谓开启或关闭，最主要的是允许结构基因能产生或阻止产生 mRNA。也可能是指 mRNA 能有效地翻译蛋白质或非常微量地翻译，这是结构基因在二个层次
15、上的调控。这里主要指转录水平上的开启或关闭。所谓“关闭”状态，是表达水平很低，常常会残留、漏渗出很低水平的表达，是基础水平上的表达，细胞内该结构基因只表达 12 个 mRNA 分子，从关闭到开启常有各种程度的差异，会相差 10100 倍，甚至上千倍。例如在乳糖操纵元中，调控基因 lac I 位于 Plac 邻近，有其自身的启动子和终止子，转录方向和结构基因群的转录方向一致，编码产生由 347 个氨基酸组成的调控蛋白 R，在环境没有乳糖存在的情况下，R 形成分子量为 152,000 的活性四聚体，能特异性与操纵子 紧密结合，从而阻止利用乳糖的酶类基因的转录，所以 R 是乳糖操纵元的阻遏蛋白；当环
16、境中有足够的乳糖时，乳糖受 -半乳糖苷酶作用转变为别乳糖，别乳糖与 R 结合，使 R 的空间构像变化，四聚体解聚成单体，失去与操纵子特异性紧密结合的能力，从而解除了阻遏蛋白的作用，使其后的基因得以转录合成利用乳糖的酶类。在这过程中乳糖（实际起作用的是别乳糖）就是诱导剂，与 R 结合起到去阻遏作用（derepression），诱导了利用乳糖的酶类基因转录开放。许多调控蛋白都是变构蛋白（allosteric protein），通过与上述类似的方式与效应物结合改变空间构像，从而改变活性，起到调节基因转录表达的作用。(5)终止子 终止子（terminator，T）是给予 RNA 聚合酶转录终止信号的
17、DNA 序列。在一个操纵元中至少在结构基因群最后一个基因的后面有一个终止子。终止子按其作用是否需要蛋白因子的协助至少可以分为两类：一类是不依赖 因子（蛋白性终止因子）的终止子，这类终止子在序列上有一些共通的特点，即有一段富含GC 的反向重复序列（inverted repeat sequence），其后跟随一段富含 AT 的序列（见图 7-6），因而转录生成的 mRNA 的序列中能形成发夹式结构，后继一连串 U，正是 RNA 聚合酶转录生成的这段 mRNA 的结构阻止 RNA 聚合酶继续沿 DNA 移动、并使聚合酶从 DNA链上脱落下来，终止转录。另一类是依赖 因子的终止子，即其终止转录的作用需
18、要 因子的协同，或至少是受 因子的影响。不同的终止子的作用也有强弱之分，有的终止子几乎能完全停止转录；有的则只是部分终止转录，一部分 RNA 聚合酶能越过这类终止序列继续沿 DNA 移动并转录。如果一串结构基因群中间有这种弱终止子的存在，则前后转录产物的量会有所不同，这也是终止子调节基因群中不同基因表达产物比例的一种方式。有的蛋白因子能作用于终止序列，减弱或取消终止子的作用，称为抗终止作用（antitermination ），这种蛋白因子就称为抗终止因子（antiterminator）。以上 5 种元件是每一个操纵元必定含有的。其中启动子、操纵子位于紧邻结构基因群的上游，终止子在结构基因群之后
19、，它们都在结构基因的附近，只能对同一条 DNA 链上的基因表达起调控作用，这种作用在遗传学实验上称为顺式作用（cis-action），启动子、操纵子和终止子就属于顺式作用元件（cis-acting element）。调控基因可以在结构基因群附近、也可以远离结构基因，它是通过其基因产物调控蛋白来发挥作用的，因而调控基因不仅能对同一条 DNA 链上的结构基因起表达调控作用，而且能对不在一条 DNA 链上的结构基因起作用，在遗传学实验上称为反式作用（trans-action），调控基因就属于反式作用元件（trans-acting element），其编码产生的调控蛋白称为反式调控因子（ trans-
20、acting factor）。由此也可窥测到基因表达调控机理的关键在蛋白质与核酸的相互作用上。10.3 乳糖操纵元的表达调控10.3.1 乳糖操纵元的结构乳糖操纵元的结构及其基因表达调控可综合于图 10-1。(1) 调控序列：启动子 P 和纵子 O；(2) 结构基因：lacZ，lacY，lacA；(3) 调控基因：lacI；(4) 相互作用的调控成分：RNA 聚合酶；阻遏蛋白（四聚体变构蛋白，有 4 个半乳糖结合位点，当无半乳糖时它结合于 P 位点上。）；乳糖（诱导物）：当乳糖进入细胞后，-半乳糖苷酶将其转化为葡萄糖和半乳糖，后者起真正的诱导作用；CAP （分解代谢物激活蛋白，也称 CRP 环
21、腺苷酸受体蛋白）：二聚体变构蛋白，当 cAMP 与之结合后发生变构作用而被激活，激活的 CAP-cAMP 能结合在调节序列上。cAMP。10.3.2 乳糖操纵元的调控(1)当细胞内外有葡萄糖时，大多数微生物都以葡萄糖作为唯一的 C 源和能量代谢物。这种情况下葡萄糖起着分解代谢阻遏物的作用，从而使乳糖操纵元等其他能量代谢物的操纵元处于被阻遏状态。分解葡萄糖的酶为组成形表达的，在有葡萄糖时，CAP-cAMP 浓度很低，不能激活乳糖操纵元。当细胞内外无葡萄糖时，膜上转运葡萄糖的 EIIIg 蛋白激活环腺苷磷酸化酶，后者将ATP 转化为 cAMP，cAMP 与 CAP 结合后作用于调节序列。（2）乳糖
22、的作用：当乳糖进入细胞后，本底水平表达产生的-半乳糖苷酶将其转化为别乳糖（allolactose），随着别乳糖浓度的增加，被灭活的阻遏蛋白越来越多；此时如果cAMP 的浓度也上升，当两者浓度达到一定水平时乳糖操纵元开始转录。（3）当环境中同时存在葡萄糖和乳糖时，细菌优先使用葡萄糖。（4）乳糖操纵元诱导转录后的灭活：如果环境中的乳糖浓度越来越低，进入细胞内的乳糖分子也越来越少，别乳糖的分子也越来越少，阻遏蛋白结合在调节序列上的分子就越来越多，因而基因表达逐渐被阻遏，直至降低为本底水平。因此，维持乳糖操纵元表达需要持续供给别乳糖。此外，当有葡萄糖存在时，cAMP 的浓度下降，乳糖操纵元的表达也逐渐
23、被阻遏。10.3.3 阻遏蛋白的负调控当大肠杆菌在没有乳糖的环境中生存时，lac 操纵元处于阻遏状态。此 基因在其自身的启动子 Pi 控制下，低水平、组成性表达产生阻遏蛋白 R，每个细胞中仅维持约 10 个分子的阻遏蛋白。R 以四聚体形式与操纵子 结合，阻碍了 RNA 聚合酶与启动子 Plac 的结合，阻止了基因的转录起动。R 的阻遏作用不是绝对的， R 与 偶尔解离，使细胞中还有极低水平的- 半乳糖苷酶及透过酶的生成。当有乳糖存在时，乳糖受-半乳糖苷酶的催化转变为别乳糖，与 R 结合，使 R 构象变化，R 四聚体解聚成单体，失去与 的亲和力，与 解离，基因转录开放，使-半乳糖苷酶在细胞内的含
24、量可增加 1000 倍。这就是乳糖对 lac 操纵元的诱导作用。一些化学合成的乳糖类似物，不受-半乳糖苷酶的催化分解，却也能与 R 特异性结合使 R 构象变化，诱导 lac 操纵元的开放。例如异丙基硫代半乳糖苷(isopropylthiog-alactoside，IPTG)就是很强的诱导剂，不被细菌代谢而十分稳定。X-gal（5-溴-4- 录-3-吲哚-半乳糖苷）也是一种人工化学合成的半乳糖苷，可被 -半乳糖苷酶水解产生兰色化合物，因此可以用作-半乳糖苷酶活性的指示剂。 IPTG 和 X-gal 都被广泛应用在分子生物学和基因工程的工作中。10.3.4 CAP 的正调控细菌中的 cAMP 含量
25、与葡萄糖的分解代谢有关，当细菌利用葡萄糖分解产生能量时，cAMP 生成少而分解多，cAMP 含量低；相反，当环境中无葡萄糖可供利用时，cAMP 含量就升高。细菌中有一种能与 cAMP 特异结合的 cAMP 受体蛋白 CRP（cAMP receptor protein， CRP），当 CRP 未与 cAMP 结合时它是没有活性的，当 cAMP 浓度升高时，CRP与 cAMP 结合并发生空间构象的变化而活化，称为 CAP（CRP-cAMP activated protein），能以二聚体的方式与特定的 DNA 序列结合。在 lac 操纵元的启动子 Plac 上游端有一段序列与 Plac 部分重叠的
26、序列，能与 CAP 特异结合，称为 CAP 结合位点（ CAP binding site）。CAP 与这段序列结合时，可增强 RNA 聚合酶的转录活性，使转录提高 50 倍。相反，当有葡萄糖可供分解利用时，cAMP 浓度降低，CRP 不能被活化，lac 操纵元的结构基因表达下降。在 lac 操纵元的启动子 Plac 上游端有一段序列与 Plac 部分重叠的序列，能与 CAP 特异结合，称为 CAP 结合位点（CAP binding site）。CAP 与这段序列结合时，可增强 RNA 聚合酶的转录活性，使转录提高 50 倍。相反，当有葡萄糖可供分解利用时，cAMP 浓度降低，CRP 不能被活化
27、，lac 操纵元的结构基因表达下降。由于 Plac 是弱启动子，单纯因乳糖的存在发生去阻遏使 lac 操纵元转录开放，还不能使细菌很好利用乳糖，必需同时有 CAP 来加强转录活性，细菌才能合成足够的酶来利用乳糖。lac 操纵元的强诱导既需要有乳糖的存在又需要没有葡萄糖可供利用。通过这机制，细菌是优先利用环境中的葡萄糖，只有无葡萄糖而又有乳糖时，细菌才去充分利用乳糖。细菌对葡萄糖以外的其他糖（如阿拉伯糖、半乳糖、麦芽糖等）的利用上也有类似对乳糖利用的情况，在含有编码利用阿拉伯糖的酶类基因群的阿拉伯糖操纵元（ara operon）、半乳糖操纵元（gal operon）中也有 CAP 结合位点，CA
28、P 也起类似的正性调控作用。所以CAP 的通用名称是分解代谢基因激活蛋白（catabolic gene activator protein）。不难看出：CAP 结合位点就是一种起正性调控作用的操纵子，CAP 则是对转录起正性作用的调控蛋白激活蛋白，编码 CRP 的基因也是一个调控基因，不过它并不在 lac 操纵元的附近，CAP 可以对几个操纵元都起作用。从上所述，乳糖操纵元属于可诱导操纵元（inducible operon），这类操纵元通常使是关闭的，当受效应物作用后诱导开放转录。这类操纵元使细菌能适应环境的变化，最有效地利用环境能提供的能源底物。10.4 色氨酸操纵元色氨酸是构成蛋白质的组分
29、，一般的环境难以给细菌提供足够的色氨酸，细菌要生存繁殖通常需要自己经过许多步骤合成色氨酸，但是一旦环境能够提供色氨酸时，细菌就会充分利用外界的色氨酸、减少或停止合成色氨酸，以减轻自己的负担。细菌所以能做到这点是因为有色氨酸操纵元（trp operon）的调控。10.4.1 色氨酸操纵元的结构与阻遏蛋白的负性调控如图 7-10 所示，合成色氨酸所需要酶类的基因 E、D、C 、B、A 等头尾相接串连排列组成结构基因群，受其上游的启动子 Ptrp 和操纵子 的调控，调控基因 trpR 的位置远离 P- -结构基因群，在其自身的启动子作用下，以组成性方式低水平表达其编码分子量为47000 的调控蛋白
30、R，R 并没有与 结合的活性，当环境能提供足够浓度的色氨酸时， R 与色氨酸结合后构象变化而活化，就能够与 特异性亲和结合，阻遏结构基因的转录。因此这是属于一种负调控的、可阻遏的操纵元（repressible operon），即这操纵元通常是开放转录的，有效应物（色氨酸为阻遏剂）作用时则阻遏关闭转录。细菌不少生物合成系统的操纵元都属于这种类型，其调控可使细菌处在生存繁殖最经济最节省的状态。 10.4.2 衰减子及其作用实验观察表明：当色氨酸达到一定浓度、但还没有高到能够活化 R 使其起阻遏作用的程度时，产生色氨酸合成酶类的量已经明显降低，而且产生的酶量与色氨酸浓度呈负相关。仔细研究发现这种调控
31、现象与色氨酸操纵元特殊的结构有关。在色氨酸操纵元 Ptrp- 与第一个结构基因 trpE 之间有 162bp 的一段先导序列（leading sequence，L ），实验证明当色氨酸有一定浓度时，RNA 聚合酶的转录会终止在这里。这段序列中含有编码由 14 个氨基酸组成的短肽的开放读框，其序列中有 2 个色氨酸相连，在此开放读框前有核糖体识别结合位点（RBS ）序列，提示这段短开放读框在转录后是能被翻译的。在先导序列的后半段含有 3 对反向重复序列（图 7-11 中 A、B 及 C），在被转录生成 mRNA 时都能够形成发夹式结构，但由于 B 的序列分别与 A 和 C 重叠，所以如果 B形成
32、发夹结构，A 和 C 都不能再形成发夹结构；相反，当 A 形成发夹结构时，B 就不能形成发夹结构，却有利于 C 生成发夹结构。 C 后面紧跟一串 A（转录成 RNA 就是一串 U），C 实际上是一个终止子，如果转录成 mRNA 时它形成发夹结构，就能使 RNA 聚合酶停止转录而从 mRNA 上脱离下来。 在色氨酸浓度未达到能起阻遏作用时，从 Ptrp 起始转录，RNA 聚合酶沿 DNA 转录合成 mRNA 同时，核糖体就结合到新生成的 mRNA 核糖体结合位点上开始翻译。当色氨酸浓度低时，生成的 tRNAtrp-色氨酸量就少，能扩散到核糖体-mRNA 形成的翻译复合体中供给合成短肽的几率低，使
33、核糖体沿 mRNA 翻译移动的速度慢，赶不上 RNA 聚合酶沿 DNA移动转录的速度，这时核糖体占据短开放读框的机会较多，使 A 不能生成发夹结构，于是B 就形成发夹结构，阻止了 C 生成终止信号的结构，RNA 聚合酶得以沿 DNA 前进，继续去转录其后 trpE 等基因，trp 操纵元就处于开放状态。当色氨酸浓度增高时， tRNAtrp-色氨酸浓度随之升高，核糖体沿 mRNA 翻译移动的速度加快，占据到 B 段的机会增加，B 生成发夹结构的机会减少，C 形成终止结构的机会增多， RNA 聚合酶终止转录的几率增加，于是转录减弱。如果当其他氨基酸短缺（注意：短开放读框编码的 14 肽中多数氨基酸
34、能由环境充分供应的机会是不多的）或所有的氨基酸都不足时，核糖体翻译移动的速度就更慢，甚至不能占据 A 的序列，结果有利于 A 和 C 发夹结构的形成，于是 RNA 聚合酶停止转录，等于告诉细菌：“整个氨基酸都不足，即使合成色氨酸也不能合成蛋白质，不如不合成以节省能量”。图 7-12 三种不同情况下 A、B、C 形成发夹结构的状态由此可见，先导序列起到随色氨酸浓度升高降低转录的作用，这段序列就称为衰减子（attenuator）。在 trp 操纵元中，对结构基因的转录阻遏蛋白的负调控起到粗调的作用，而衰减子起到细调的作用。细菌其他氨基酸合成系统的许多操纵元（如组氨酸、苏氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苯丙
35、氨酸等操纵元）中也有类似的衰减子存在。The following table shows the amino acid sequences of some leader peptides:Operon LeaderLength Sequencetrp 14 MKAIFVLKGWWRTSpheA 16 MKHIPFFFAFFFTFPhis 16 MTRVQFKHHHHHHHPDthr 21 MKRISTTITTTITITTQNGAGleu 28 MSHIVRFTGLLLLNAFIVRGRPVGGIQHilv 32 MTALLRVISLVVISVVVIIIPPCGAALGRGKANOTE: (1)
36、 The number of sensing codons reflects the abundance of tRNAs for those amino acids in the cell. (2) The thr and ilv operons code for enzymes that are required in the biosynthesis of more than one amino-acid as indicated10.5 原核基因表达的时序调控原核细胞基因存在不同时序的表达。时序调控都在转录这一主要调控点中进行，大致可以采取 3种不同的方式：几种新的蛋白因子代替 RNA
37、聚合酶原来的。因子，协助 RNA聚合酶识别新的启动子。合成新的 RNA聚合酶，代替原有的酶开动一套新的启动子。这两类方式都是新基因的表达依赖于原来基因的表达，合成新的。因子或 RNA聚合酶，识别新的启动子共同序列，以此来达到新的一套基因的表达。合成新的调控因子，影响 RNA聚合酶在转录终止信号的行为，如抗终止因子控制不同阶段的基因表达。从这三种方式可以看出，RNA 聚合酶结构的复杂性、启动子结构和转录因子的多样性是时序性调控的基础。10.5.1 因子控制的转录时序细菌只有一种 RNA聚合酶负责转录细胞内所有基因，这些基因转录的时间、水平和所需条件各不相同，那么 RNA聚合酶如何识别种类广泛的不同基因的启动子? 看来至少某些细菌依靠 因子使 RNA聚合酶选择性地识别不同的启动子序列，来控制不同时序的转录。 因子直接参与聚合酶对 DNA的识别。 E.coli大多数启动子都由 70参与识别，如果 70识别的启动子序列与共同序列不是非常吻合，除了 70之外，还需要结合 DNA的活化因子来帮助转录有效
