1、 基 金 项 目:湖 北 省 卫 生 计 生 委 重 点 支 撑 项 目(WJ2017Z027)湖 北 省 高 等 学 校 优 秀 中 青 年 科 技 创 新 团 队 计 划 项 目(T201717)湖 北 省 大 学 生创 新 训 练 计 划 项 目(201710927028)作 者 简 介:陈 莹 莹(1989)女 硕 士 生 研 究 方 向 为 环 境 毒 理 学 Email:*通 讯 作 者(Corresponding author)E mail:增 塑 剂 邻 苯 二 甲 酸 二 异 壬 酯 对 雄 性 小 鼠 生 殖 毒 性 的 氧化 损 伤 机 制摘 要:研究 增塑剂邻苯 二甲酸
2、二异 壬 酯(diisononyl phthalate,DINP)对 雄 性 小 鼠 生 殖 毒 性 的 氧 化 损 伤 机 制 以 昆 明 雄 性 小 鼠 为 受试动物 随机 分为7 组 包括空白 对 照组(生 理盐 水)4 个 DINP 暴 露 组(0.2、2、20 和 200 mg kg1)和 褪 黑 素(melatonin,Mel)对 照 组50 mg kg1、Mel 处理 组(200 mg kg1DINP+50 mg kg1Mel)灌 胃 14 d 以 睾 丸 组 织 匀 浆 测 定 活 性 氧(ROS)、还 原 型 谷 胱 甘 肽(GSH)和8 羟基 脱 氧 鸟苷(8 OHdG)含
3、 量 以睾 丸组织 细 胞测定DNA 蛋 白 交 联(DPC)系 数 随 着 DINP 暴 露 剂 量 的 增 加DINP 暴露组睾 丸 组织ROS、8 OHdG 含量 和 DPC 系 数 逐 渐 上 升GSH 含 量 逐 渐 降 低 差 异 有 统 计 学 意 义(P0.05 P0.01)Mel 处 理 组 ROS、8 OHdG 含量 和DPC 系 数相应 降低 GSH 含 量逐 渐上 升 雄 性 小 鼠睾丸 组织形 态观 察 结果 表 明 随 着 DINP 暴 露 剂 量 的 增加 小鼠 睾丸 组织的病理 损 伤程度呈 上 升 趋势 实 验 结果 表明 较 高 剂 量(20 mg kg1)
4、的 DINP 能 造 成 小 鼠 睾 丸 组 织 的 病 理 损伤和氧 化 损伤50 mg kg1Mel 的抗 氧 化能力可以有 效对 小鼠睾 丸组 织起 保 护作 用 使 组织 损伤 减 轻 即 生殖毒 性 减弱 关 键 词:邻 苯 二 甲 酸 二 异 壬 酯 活 性 氧 还 原 型 谷 胱 甘 肽 8 羟 基 脱 氧 鸟 苷 DNA 蛋 白 质 交 联文 章 编 号:1673 5897(2018)5 281 07 中 图 分 类 号:X171.5 文 献 标 识 码:A Chen Yingying1,Ge Shuzhen1,Huang Jian1,Zhang Ye2,Xiang Xianl
5、an2,Wu Yang2,Yan Biao2,Ma Ping2,*1.School of Pharmacy,Hubei University of Science and Technology,Xianning 437100,China2.Lab of Environment immunological and Neurological Diseases,School of Basic Medical Sciences,Hubei University of Science andTechnology,Xianning 437100,China 6 November 2017 26 Decem
6、ber 2017:To investigate the oxidative damage mechanism of plasticizer diisononyl phthalate on reproductive sys tem in male mice,Kunming male mice were divided randomly into seven groups and administered daily for four teen days.The groups included saline group,four DINP exposure groups(0.2,2,20 and
7、200 mg kg1),melatonin 生 态 毒 理 学 报 第13 卷control group(50 mg kg1),and melatonin treatment group(200 mg kg1DINP+50 mg kg1Mel).The contents ofreactive oxygen species(ROS),reduced glutathione(GSH)and 8 OhdG,and DNA protein crosslinking(DPC)co efficients were determined by testicular homogenate.With the i
8、ncreasing dose of DINP exposure,the content ofROS and 8 OhdG,and DPC coefficients in testis tissue of DINP exposure group gradually increased and the con tent of GSH gradually decreased.The differences was statistically significant(P0.05,P0.01).Meanwhile,the content of 8 OHdG and DPC coefficients de
9、creased correspondingly,and the content of GSH gradually increased inmelatonin treatment group.The differences was statistically significant(P0.05,P0.01).Morphological observa tion of testis in male mice showed that the pathological damage of testis was more serious with the increase of theDINP expo
10、sure dose.Our results revealed that DINP at higher dose(20 mg kg1)could cause pathological dam age and oxidative damage in mouse testis.The 50 mg kg1Mel could effectively protect the testicular tissue ofmice and alleviate the tissue damage.In short,the reproductive toxicity of DINP is weakened.:diis
11、ononyl phthalate;reactive oxygen species;glutathione;8 hydroxy 2deoxyguanosine;DNA proteincrosslinks 邻 苯 二 甲 酸 酯 类 物 质(PAEs)是 由 邻 苯 二 甲 酸(phthalate acid)酯 化 衍 生 的 一 系 列 酯 类 化 合 物 作 为增 塑 剂 使 用 时 可 以 从 塑 料 制 品 中 迁 移 到 环 境 造 成环 境 的 污 染(包 括 食 物 污 染)并 通 过 呼 吸 道、消 化 道和 皮 肤 粘 膜 进 入 人 体 内 对 人 体 健 康 造 成 潜 在
12、危害1 邻 苯 二 甲 酸 二 异 壬 酯(DINP)作 为 PAEs 中 的一 种 是 目 前 使 用 量 较 大 的 增 塑 剂 之 一 主 要 用 于 食品 包 装 材 料2 有 关DINP 的 毒 性 的 报 道 诸 多 有 研究 表 明 DINP 可 在 大 鼠 体 内 诱 导 过 氧 化 物 酶 的 生成 进 而 诱 导 肝 肿 瘤3 Ma 等4的 研 究 也 发 现 DINP 可 导 致 肝 脏 和 肾 脏 出 现 病 理 变 化 会 致 肝 肾组 织 发 生 脂 质 过 氧 化 和 DNA 损 伤 Saillenfait 等5对 Sprague Dawley 大 鼠 进 行 D
13、INP 的 口 服 染 毒 实验 发 现 DINP 能 导 致 其 胚 胎 发 育 毒 性 和 产 后 畸 形 动 物 实 验 发 现 某 些 PAEs 具 有 典 型 的 类 雌 激 素作 用 这 种 作 用 主 要 是 由 于“雌 激 素 核 受 体 介 导 效应”所 致6:即 增 塑 剂 进 入 细 胞 后 首 先 与 雌 激 素 核受 体 结 合 随 即 受 体 复 合 物 发 生 构 型 变 化 在 核 内 与雌 激 素 反 应 基 因 的 特 异 DNA 序 列 结 合 启 动 基 因表 达 从 而 在 特 异 性 靶 组 织 中 表 现 出 生 物 效 应 例如 被 邻 苯 二
14、甲 酸 二 乙 基 己 基 酯(DEHP)、邻 苯 二 甲 酸二 丁 酯(DBP)、邻 苯 二 甲 酸 丁 基 苄 酯(BBP)染 毒 的 雄性 啮 齿 类 动 物 可 以 表 现 出 生 殖 系 统 畸 形 包 括:附睾 发 育 不 全、隐 睾、尿 道 下 裂、输 精 管、前 列 腺 异 常等 以 及 肛 殖 距 的 缩 短 和 乳 头 残 留 雄 性 不 育 等72005 年 美 国 Rochester 大 学 的 Swan 等8针 对134 名236 个 月 龄 的 男 性 婴 儿 进 行 流 行 病 学 研 究 表 明 孕妇 产 前 接 触 较 高 浓 度 水 平 的 邻 苯 二 甲
15、酸 酯 可 能 使男 婴 生 殖 系 统 出 现 畸 形 Boberg 等9研 究 发 现 高 于300 mg(kg d)1剂 量 的 DINP 对 Wistar 大 鼠 有 抗 雄性 激 素 作 用 具 有 生 殖 毒 性 肛 门 生 殖 器 距 离(ano genital distance,AGD 简 称“肛 殖 距”)的 缩 短 是 生 殖系 统 畸 形 的 一 个 表 现 Bornehag 等10研 究 发 现 孕妇 产 前 DINP 暴 露 可 以 导 致 新 生 儿 AGD 缩 短 目前 国 内 对 DINP 生 殖 毒 性 的 研 究 并 不 多 本 实 验 以雄 性 昆 明 小
16、 鼠 为 实 验 材 料 通 过 测 定 不 同 剂 量DINP作 用 下 睾 丸 组 织 的 活 性 氧(ROS)、还 原 型 谷 胱 甘 肽(GSH)和 8 羟 基 脱 氧 鸟 苷(8 OHdG)的 含 量 以 及DNA 蛋 白 质 交 联(DPC)系 数 的 变 化 同 时 观 察 睾 丸组 织 切 片 的 病 理 变 化 探 究 DINP 对 雄 性 小 鼠 生 殖毒 性 的 氧 化 损 伤 机 制 材 料 与 方 法().实 验 动 物42 只 SPF 级 雄 性 昆 明 小 鼠(2325 g)购 买 自 湖北 省 实 验 动 物 研 究 中 心(实 验 动 物 许 可 证 号 为:
17、SYXK(鄂)2013 0071 动 物 质 量 合 格 证 号:No:42000600001035).主 要 仪 器 与 试 剂主 要 仪 器:Hide Chameleon V 多 功 能 荧 光 酶 标 仪(芬 兰Hidex 公 司)Power wave XS 酶 标 仪(美 国 Bio Tek 公 司)DP73 光 学 显 微 镜(日 本 Olympus 公 司)5415R 低 温 冷 冻 机、5424/5424R 离 心 机(德 国 Eppen dorf 公 司)RM2245 切 片 机(德 国LEICA 公 司)HH 42三 用 电 热 温 水 箱(北 京 长 源 实 验 仪 器 厂
18、)MX S 可 调式 涡 旋 仪(北 京 大 龙 兴 创 实 验 仪 器 有 限 公 司)主 要 试 剂:邻 苯 二 甲 酸 二 异 壬 酯(DINP 99.6%Sigma 公 司)Hoechst33258 荧 光 染 料(98%Sigma 公 司)二 氯 二 氢 荧 光 素 乙 酰 乙 酸 酯第5 期 陈 莹 莹 等:增 塑 剂 邻 苯 二 甲 酸 二 异 壬 酯 对 雄 性 小 鼠 生 殖 毒 性 的 氧 化 损 伤 机 制(DCFH DA 99.9%Sigma 公 司)蛋 白 酶K(Proteinase K 30 units mg1protein Sigma 公 司)还 原 型谷 胱 甘
19、 肽 试 剂 盒(南 京 建 成 生 物 工 程 研 究 所)三 羟基 氨 基 甲 烷 盐 酸 盐(Tris HCL 分 析 纯 Amresco 分装)5,5 二 硫 代 二 硝 基 苯 甲 酸(DTNB 分 析 纯 国 药集 团 化 学 试 剂 有 限 公 司)小 鼠 8 OHdG ELISA 试 剂盒(济 南 朋 远 生 物 技 术 有 限 公 司)十 二 烷 基 硫 酸 钠(SDS 分 析 纯 国 药 集 团 化 学 试 剂 有 限 公 司)褪 黑 素(Melatonin 98%Sigma 公 司).动 物 分 组 与 染 毒42 只 昆 明 雄 性 小 鼠 随 机 分 为 7 组 包
20、括 1 个空 白 对 照 组(生 理 盐 水)4 个 DINP 暴 露 组 1 个 褪 黑素 对 照 组 1 个 褪 黑 素+DINP 组 每 组 6 只 根 据 已有 的 研 究4 以0.2、2、20、200 mg kg1定 为 暴 露 组 的染 毒 剂 量 以 生 理 盐 水 稀 释 成 0.02、0.2、2、20 mg mL14 种 浓 度 的 使 用 液 稀 释 过 程 中 加 与 DINP 等体 积 的 吐 温80(VDINP:V吐 温80=1:1)助 溶 因 吐 温 80 仅 为 DINP 的 助 溶 剂 量 很 小 对 生 物 体 无 毒 无 副 作用 所 以 阴 性 对 照 组
21、 只 是 给 予 生 理 盐 水 稀 释 液 现用 现 配 使 用 前 在 旋 涡 混 悬 仪 上 充 分 混 匀 50 mg kg1的 褪 黑 素 用 3%乙 醇 和 无 菌 生 理 盐 水 配 制 而成11 对 于 褪 黑 素+DINP 组 给 予 小 鼠200 mg kg1DINP 3 h 后 给 药50 mg kg1褪 黑 素 每 组 均 经 口 灌胃 给 予 灌 胃 量 为 10 mL kg1 每 天 一 次 连 续 染 毒14 d 分 别 于 实 验 前 称 小 鼠 体 重 并 记 录.睾 丸 组 织 切 片 的 制 备 和 观 察染 毒 结 束 后 用 颈 椎 脱 臼 法 处 死
22、 小 鼠 立 即 取 睾丸 组 织 并 用4%多 聚 甲 醛 将 其 固 定 常 规 脱 水 石 蜡切 片 H E 染 色 普 通 光 学 显 微 镜 下 观 察 睾 丸 组 织的 病 理 组 织 学 变 化.睾 丸 组 织 匀 浆 和 细 胞 悬 液 的 制 备经 称 重 处 理 后 的 睾 丸 组 织 置 于 冰 冷 PBS(pH=7.5)中 漂 洗 滤 纸 拭 干 分 成 两 部 分 一 部 分 睾 丸 组织 加 冰 冷 的 PBS 制 成 10%(mg mL1)匀 浆 液 4、10 000 g 离 心10 min 后 取 上 清 用 于 ROS、GSH 和8 OHdG 的 检 测 另
23、一 部 分 睾 丸 组 织 剪 成 1 mm3糜 状 组 织 块 4 层 擦 镜 纸 过 滤 将 滤 液 在 200 g 离 心5 min 后 弃 上 清 用 PBS 重 悬 细 胞 制 备 细 胞 悬 液.ROS 含 量 的 测 定取 睾 丸 组 织 匀 浆 上 清 液4 L 加 入396 L PBS作100 倍 稀 释 取100 L 稀 释 液 于 酶 标 板 中 排 列 加 入100 L 荧 光 染 料DCFA DA 染 色 37 中 避 光反 应5 min 用 荧 光 酶 标 仪 检 测 485 nm 激 发 光、528nm 发 射 光 的 荧 光 强 度 荧 光 强 度 以 相 对
24、荧 光 单 位(RFU)表 示.GSH 含 量 和 蛋 白 质 含 量 的 测 定GSH 含 量 的 测 定 严 格 按 照 试 剂 盒 操 作 说 明 进行 GSH 含 量(mol g1prot)=(测 定 OD 值 空 白OD 值)/(标 准 OD 值 空 白 OD 值)标 准 管 浓 度 样本 稀 释 倍 数 待 测 匀 浆 蛋 白 浓 度(g prot L1)蛋 白含 量 按 照 Folin 酚 法 测 定.8 OHdG 含 量 的 测 定8 OHdG 含 量 的 测 定 严 格 按 照 试 剂 盒 操 作 说 明进 行 以0,3,6,12,24,48 ng mL1等 标 准 品 浓
25、度 为横 坐 标 以 450 nm 处 OD 值 为 纵 坐 标 绘 制 标 准 曲线 根 据 标 准 曲 线 来 确 定 样 品 中8 OHdG 的 含 量.DPC 系 数 的 测 定DPC 采 用 KCL SDS 沉 淀 法 进 行 检 测12 13 分 别测 定 交 联 DNA 的 含 量(用 A 表 示)和 原 液 中 游 离 DNA 的 含 量(用 B 表 示)DPC 系 数 用 公 式=A/(A+B)表 示.统 计 分 析采 用SPSS 12.0 统计 分 析 软 件 进 行 统 计 分 析 多组 间 均 数 用 比 较 实 用 的 单 因 素 方 差 分 析(ANOVA)然后 使
26、 用 最 小 显 著 性 差 异 法(LSD)检 测 两 组 间 均 数 的 差异 性 P0.05P0.01 表 示 差 异 有 统 计 学 意 义 结 果().小 鼠 睾 丸 组 织 形 态 的 光 镜 观 察 结 果如 图 1 所 示:空 白 对 照 组 切 片 中 睾 丸 组 织 结 构正 常 生 精 小 管 正 常、无 脱 落 各 级 生 精 细 胞 排 列 整齐 层 次 清 楚 结 构 正 常 管 腔 中 可 见 大 量 精 子 0.2mg kg1DINP 组 生 精 小 管 未 脱 落 各 级 生 精 细 胞 排列 基 本 完 整 结 构 尚 可 管 腔 中 可 见 数 目 尚 可
27、 的 精子 2 mg kg1DINP 组 生 精 上 皮 可 见 零 星 脱 落 生精 细 胞 排 列 紊 乱 管 腔 内 精 子 数 目 少 20 mg kg1DINP 组 生 精 细 胞 明 显 脱 落 入 管 腔 上 皮 变 薄 可 见空 泡 管 腔 内 精 子 数 目 明 显 减 少 睾 丸 细 胞 损 伤 明显 可 见 病 理 性 核 分 裂 像 200 mg kg1DINP 组 大量 生 精 细 胞 脱 落 入 管 腔 上 皮 明 显 变 薄 管 腔 内 精 子的 数 目 极 少 或 无 睾 丸 细 胞 结 构 破 坏 坏 死 明 显 与空 白 对 照 组 相 同 50 mg kg
28、1褪 黑 素 组 睾 丸 组 织 结构 和 细 胞 形 态 正 常 而 200 mg kg1DINP+50 mg kg1褪 黑 素 组 生 精 细 胞 部 分 脱 落 部 分 完 整 管 腔 内可 见 脱 落 的 生 精 细 胞 和 大 量 精 子 结 果 表 明 随 着DINP 暴 露 剂 量 的 加 大 小 鼠 睾 丸 细 胞 的 病 理 损 伤越 严 重 由 于 褪 黑 素 的 保 护 睾 丸 细 胞 损 伤 现 象 有 生 态 毒 理 学 报 第13 卷图 不 同 处 理 组 小 鼠 睾 丸 切 片 图(染 色)注:DINP 为 邻 苯 二 甲 酸 二 异 壬 酯 Mel 为 褪 黑
29、素 Fig.1 Testis slices of mice in different groups(10 40,H E stains)Note:DINP is diisononyl phthalate;Mel is melatonin.图 不 同 处 理 组 小 鼠 睾 丸 含 量注:n=6 F=4.2436 P0.01 AE 组 的 比 较 经 LSD 检 验 与 对 照 组 相 比 较*P0.05#P0.05 G 组 与 E 组 比 较 Fig.2 ROS content in mouse testis of different groupsNote:n=6,F=4.2436,P0.01,
30、comparison betweengroup A and E;by LSD test,*P0.05,comparedwith control group;#P0.05,comparison between group G and E.图 不 同 处 理 组 小 鼠 睾 丸 含 量注:n=6 F=3.6326 P0.05 AE 组 的 比 较 经 LSD 检 验 与 对 照 组 相 比 较*P0.05*P0.01#P0.05 G 组 与 E 组 比 较 Fig.3 GSH content in mouse testis of different groupsNote:n=6,F=3.6326,
31、P0.05,comparison betweengroup A and E;by LSD test,*P0.05,*P0.01,comparedwith control group;#P0.05,comparison between group G and E.所 缓 解 也 表 明 了 此 损 伤 为 氧 化 损 伤 褪 黑 素 可 以 改善 DINP 所 致 的 氧 化 损 伤.小 鼠 睾 丸 组 织 ROS 含 量 的 变 化ROS 含 量 是 反 映 机 体 氧 化 应 激 水 平 的 指 标 图2 可 见 不 同 处 理 组 睾 丸 组 织 的 ROS 含 量 的 变 化 随 着 D
32、INP 暴 露 剂 量 的 升 高 ROS 含 量 逐 渐 上 升 并呈 一 定 的 剂 量 效 应 反 应 与 空 白 对 照 组 比 较 0.2、2 mg kg1DINP 组 差 异 无 统 计 学 意 义 20、200 mg kg1DINP 组 差 异 有 统 计 学 意 义(P0.05 P0.01)较 高 剂 量 的 DINP 能 造 成 ROS 含 量 的 上 升 与 单独200 mg kg1的 DINP 组 比 较 200 mg kg1DINP+50 mg kg1褪 黑 素 组 的 ROS 含 量 显 著 下 降.小 鼠 睾 丸 组 织 GSH 含 量 的 变 化GSH 是 GPx
33、(谷 胱 甘 肽 过 氧 化 物 酶)催 化 过 氧 化物 还 原 的 必 需 底 物 故 GSH 含 量 也 可 反 应 机 体 抗 氧化 应 激 的 水 平 图 3 可 见 不 同 处 理 组 睾 丸 组 织 的第5 期 陈 莹 莹 等:增 塑 剂 邻 苯 二 甲 酸 二 异 壬 酯 对 雄 性 小 鼠 生 殖 毒 性 的 氧 化 损 伤 机 制 GSH 含 量 的 变 化 随 着 DINP 暴 露 剂 量 的 升 高 GSH含 量 逐 渐 下 降 呈 一 定 的 剂 量 效 应 反 应 与 空 白 对照 组 比 较 0.2、2 mg kg1剂 量 组 差 异 无 统 计 学 意 义 20
34、、200 mg kg1剂 量 组 有 统 计 学 意 义(P0.05 P 0.01)较 高 剂 量 的 DINP 可 使 小 鼠 睾 丸 GSH 含 量明 显 下 降 与 单 独 200 mg kg1的 DINP 组 比 较 200 mg kg1DINP+50 mg kg1褪 黑 素 组 中 的 GSH含 量 显 著 上 升.小 鼠 睾 丸 组 织8 OHdG 含 量 的 变 化不 同 处 理 组 睾 丸 组 织 的8 OHdG 含 量 的 变 化 见图4 随 着 DINP 染 毒 剂 量 的 升 高 8 OHdG 含 量 逐渐 上 升 与 空 白 对 照 组 相 比 0.2、2 mg kg1
35、DINP组 差 异 无 统 计 学 意 义 20、200 mg kg1DINP 组 差 异有 统 计 学 意 义(P0.05 P0.01)较 高 剂 量 的 DINP 能 造 成 ROS 含 量 的 上 升 与 单 独 200 mg kg1的DINP 组 比 较 200 mg kg1DINP+50 mg kg1褪 黑 素组 中 的8 OHdG 含 量 明 显 减 少 图 不 同 处 理 组 小 鼠 睾 丸 含 量注:n=6 F=16.1475 P0.01 AE 组 的 比 较 经 LSD 检 验 与 对 照 组 相 比 较*P0.01#P0.01 G 组 与 E 组 比 较 Fig.4 8 O
36、HdG content in mouse testis of different groupsNote:n=6,F=16.1475,P0.01,comparison betweengroup A and E;by LSD test,*P0.01,comparedwith control group;#P0.01,comparison between group G and E.小 鼠 睾 丸 DPC 系 数 的 变 化如 图5 所 示 随 着 DINP 暴 露 剂 量 的 升 高 DPC系 数 逐 渐 上 升 呈 一 定 的 剂 量 效 应 关 系 与 空 白 对照 组 相 比 0.2、2 m
37、g kg1DINP 组 差 异 无 统 计 学 意义 20、200 mg kg1DINP 组 差 异 有 统 计 学 意 义(P 0.05 P0.01)较 高 剂 量 的 DINP 能 造 成 DPC 系 数 的 上 升 与 单 独 200 mg kg1的 DINP 组 比 较 200mg kg1DINP+50 mg kg1褪 黑 素 组 DPC 系 数 明 显下 降 图 不 同 处 理 组 小 鼠 睾 丸 系 数注:n=6 F=3.2805 P0.05 AE 组 的 比 较 经 LSD 检 验 与 对 照 组 相 比 较*P0.05#P0.05 G 组 与 E 组 比 较 Fig.5 DPC
38、 coefficients in mouse testis of different groupsNote:n=6,F=3.2805,P0.05,comparison betweengroup A and E;by LSD test,*P0.05,comparedwith control group,#P0.05,comparison between group G and E.讨 论()ROS 是 分 子 氧 在 还 原 过 程 中 的 一 系 列 中 间 产物14 其 含 量 反 应 细 胞 内 氧 自 由 基 水 平 ROS 的 累积 可 以 导 致 氧 化 应 激 的 产 生 氧 化
39、应 激 可 使 组 织 出现 不 同 程 度 的 损 伤 还 原 型 的 GSH 作 为 预 防 性 抗氧 化 剂 是 ROS 的 主 要 清 除 剂 GSH 的 消 耗 可 以 反应 机 体 的 氧 化 损 伤 程 度 在 评 价 氧 化 损 伤 中 具 有 重要 意 义15 16 本 研 究 中 随 着 DINP 暴 露 剂 量 的 升高 ROS 含 量 逐 渐 上 升 GSH 含 量 逐 渐 下 降 与 空白 对 照 组 相 比 20、200 mg kg1DINP 组 差 异 有 统 计学 意 义(P0.05 P0.01)说 明 在 较 高 剂 量 的 DINP 诱 导 下 小 鼠 睾
40、丸 组 织 细 胞 内 产 生 了 过 量 的 ROS 以致 细 胞 的 抗 氧 能 力 下 降 ROS 可 造 成 DNA 损 伤 表 现 为 DNA 分 子 碱 基修 饰 和 链 断 裂 两 大 类 8 OHdG 是 最 具 代 表 性 的 碱基 修 饰 产 物 其 只 能 通 过 DNA 氧 化 损 伤 途 径 形 成 可 作 为 评 价 DNA 氧 化 损 伤 的 重 要 指 标 之 一17DNA 断 裂 可 以 与 蛋 白 质 结 合 形 成 DPC DPC 对DNA 的 构 象 和 功 能 可 以 产 生 严 重 影 响 并 易 造 成 某些 严 重 疾 病 的 产 生18 在 本
41、 研 究 中 随 着 DINP 暴 露剂 量 的 升 高 8 OHdG 含 量 和 DPC 系 数 逐 渐 上 升 与 空 白 对 照 组 比 较 20 200 mg kg1DINP 组 差 异 有 生 态 毒 理 学 报 第13 卷统 计 学 意 义(P0.05 P0.01)说 明 较 高 剂 量 的 DINP 能 使 小 鼠 睾 丸8 OHdG 的 形 成 及 DNA 和 蛋 白 质 交联 增 多 造 成 睾 丸 组 织 的 DNA 损 伤 褪 黑 素 是 松 果 体 分 泌 的 一 种 神 经 内 分 泌 激 素 既 可 以 清 除 脂 溶 性 又 可 以 清 除 水 溶 性 自 由 基
42、 抗 氧化 作 用 显 著19 本 研 究 中 200 mg kg1DINP+褪 黑素 组 与 200 mg kg1DINP 组 相 比 较 睾 丸 组 织 的ROS、8 OHdG 含 量 和 DPC 系 数 均 显 著 下 降 GSH含 量 显 著 上 升 睾 丸 组 织 的 病 理 损 伤 减 轻 说 明 褪 黑素 对 睾 丸 组 织 的 氧 化 作 用 有 拮 抗 作 用 有 研 究 表 明 DBP 对 雄 性 生 殖 系 统 有 毒 性 作 用 慢 性、持 续 性 地 破 坏 Rasd1 MEK1/2 以 及 Bcl 2/Bax的 表 达 不 同 剂 量 的 DBP 引 起 雄 性 大
43、 鼠 生 殖 发 育 毒性 包 括 肛 殖 距(AGD)降 低 睾 丸 的 组 织 学 损 伤 以及 生 精 小 管 细 胞 凋 亡20 但 也 有 对 男 性 生 殖 损 害 的研 究 并 未 发 现 PAEs 代 谢 产 物 与 精 液 常 规 指 标、精子 凋 亡、精 子 DNA 损 伤 存 在 显 著 关 联 认 为 其 对 成年 男 性 生 殖 作 用 影 响 较 轻21 DINP 作 为 PAEs 中的 一 种 本 实 验 研 究 证 明 了 DINP 对 雄 性 小 鼠 有 氧化 损 伤 作 用 具 有 生 殖 毒 性 为 揭 示 PAEs 生 殖 毒 性机 制 奠 定 了 基
44、础 综 上:通 过 对 睾 丸 组 织 进 行 病 理 学 观 察 发 现 随着 DINP 暴 露 剂 量 的 升 高 小 鼠 睾 丸 细 胞 的 病 理 损伤 越 严 重 20 mg kg1剂 量 时 生 精 细 胞 明 显 脱 落入 管 腔 上 皮 变 薄 管 腔 内 精 子 数 目 明 显 减 少 睾 丸细 胞 损 伤 明 显 可 见 病 理 性 核 分 裂 像 200 mg kg1剂 量 时 大 量 生 精 细 胞 脱 落 入 管 腔 上 皮 明 显 变 薄 精 子 数 目 极 少 或 无 睾 丸 结 构 破 坏 坏 死 明 显 较 高 剂 量 的 DINP(20 mg kg1)能 使
45、 小 鼠 睾 丸组 织 细 胞 内 产 生 过 量 的 ROS 破 坏 自 身 的 氧 化 与 抗氧 化 平 衡 使 细 胞 抗 氧 化 能 力 下 降 以 致 小 鼠 睾 丸 组织 的8 OhdG 的 形 成 及 DNA 和 蛋 白 质 交 联 的 增 多 造 成 了 氧 化 损 伤 和 病 理 损 伤 从 而 造 成 了 小 鼠 的 生殖 毒 性 褪 黑 素 对 睾 丸 组 织 的 氧 化 作 用 有 拮 抗 作 用 通 讯 作 者 简 介:马 萍(1968)女 教 授 主 要 从 事 环 境 医 学、分子 毒 理 学 方 面 研 究 发 表 学 术 论 文40 余 篇 参 考 文 献()
46、:1 中 华 人 民 共 和 国 卫 生 部.GB 9685 2008 食 品 容 器、包装 材 料 用 添 加 剂 使 用 卫 生 标 准S.北 京:中 国 标 准 出版 社,20082 毛 伟 峰,刘 飒 娜,刘 兆 平,等.中 国 居 民 邻 苯 二 甲 酸 二异 壬 酯 膳 食 摄 入 水 平 及 其 风 险 评 估J.卫 生 研 究,2015(5):822 826Mao W F,Liu S N,Liu Z P,et al.Dietary intake and riskassessment of diisononyl phthalate(DINP)in Chinesepopulatio
47、n J.Journal of Hygiene Research,2015(5):822 826(in Chinese)3 Kaufmann W,Deckardt K,Mckee R H,et al.Tumor in duction in mouse liver:Diisononyl phthalate acts via per oxisome proliferation J.Regulatory Toxicology andPharmacology,2002,36(2):175 1834 Ma P,Yan B,Zeng Q,et al.Oral exposure of Kunmingmice
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