1、肝细胞癌 CD44v6 和 p16 基因蛋白的表达及其意义临床消化病杂志 2005 年第 l7 卷第期肝细胞癌 CD44v6 和 p16 基因蛋白的表达及其意义?69?谷化平,尚培中,倪灿荣(中国人民解放写第 251 医院 ,张家口 075000)摘要:目的探讨 CD44v6 和 p16 基因蛋白表达与肝细胞癌(HCC) 转移和预后的关系.方法应用免疫组织化学方法,检测分析 110 例 HCC 组织中 CD44v6 及 pl16 蛋白表达,结合随访资料分析 .结果在 HCC中,CD44v6 和 p16 阳性表达率分别为 42.7%和34.5%.CD44v6 阳性表达的 HCC 转移率高(P(O
2、.05),分化程度和患者5 年生存率低(P(O.05);p16 阳性表达的 HCC 转移率低(PO.O5),分化程度和患者5 年生存率高(PO.05).CD44v6 与 p16 表达呈负相关(r= 一 0.59,PO.005).结论 CD44v6 和 p16 表达与 HCC 转移和患者生存期密切相关,检测 CD44v6 和 p16 蛋白的表达可作为判断 HCC 预后的参考指标.关键词:肝细胞癌;CD44v6;p16 基因;转移;预后中国分类号R735.7文献标识码A 文章编号1005o541X(2005)024)69-03ExpressionofCD44v6andp16GeneProteini
3、nHepatoceUularCarcinomaanditsImplicationGUH 峨-pi 】唣,SttANGPei-zhong,Can-rongThe251stHospitalPLA,Zhangjiakou075000,ChinaAbstract:ObjectiveToinvestigatethecorrelationofCD44tv6andp16geneproteinexpressionwithpotentialofmetastasisandprognosisinhepatocellularcarcinoma(HCC).MethodsImmunohistochemicalmethod
4、WaSusedtodetectCD44v6andp16expressionin110case8ofHCC.ResultsThepositiveexpressionrateofCIM4v6andp16inHCCWaS42.7%and34.5%.respectively.HCCwithpositiveexpressionofCD4A4v6hadhighesmetastaticrate(P0.05),poorersurvivalratein5years(P0.05);HCCwithpositivep16expressionhadlowermetastaticrate(P0.05)andhighers
5、urvivalratein5years(P0.05).TheexpressionofCD44v6WaSareversecorrelationwthp16expressioninHCC(r=一 O.59,PO.001.ConduslonThesedatashowtheexpressionofCD44v6andp16wascloselyrelattothepotentialofmemstisandsurvivalrateinHCC.CD44v6andp16maybeprognosticindicatorsinHCC.Keywords:Hepatoeellularrcinoma;CD44v6;p16
6、gene;Metastasis;PrognosisCD44v6 和 p16 表达与许多肿瘤的侵袭和转移密切相关卜引.我们采用免疫组织化学方法,对肝细胞癌(HCC)组织进行 CD44v6 及 p16 基因蛋白检测,并结合临床随访资料分析,探讨其表达与 HCC 侵袭转移和患者预后的关系及两种基因表达的相关性.1 材料与方法1.1 材料标本取自解放军第 251 医院和第二军医大学长海医院的 1990 年2003 年问手术切除和尸检的原发性 HCC 标本 110 例 ,男 81 例,女 29 例,平均年龄 49.27.6 岁(2672 岁).肉眼形态:巨块型 50例,结节型 43 例,弥漫型 17 例
7、.肿瘤大小:5cm37例,5cm73 例.按 Edmondson 分级标准 I级为高分化癌 43 例,级为低为化癌 67 例.伴有转移(淋巴结 ,肝内和肝外) 者 49 例,无转移者 61 例.110 例 HCC 标本中 ,满 5 年随访完整资料者 67 例,其中已死亡病例 49 例,尚生存病例 18 例.选取癌旁肝组织(距癌灶 2cm)20 例和正常肝组织 10 例( 来自尸检)作为对照.标本经 10%甲醛固定,石蜡包埋,4pxn 厚连续切片.第二军医大学第一附属医院1.2 试剂鼠抗 CD44v6 和 p16 单克隆抗体,生物素化酪胺盐(BT) 和催化信号放大 (CSA)试剂盒均为丹麦 Da
8、ko 公司产品 .1.3 免疫组织化学染色采用 CSA 法,按文献报道方法操作.实验用已知 CD44v 和 p16 阳性大肠癌组织作为阳性对照,用 PBS 代替一抗作为阴性对照.1.4 结果判断 CD44v6 阳性信号为细胞膜和/或细胞质内出现棕黄色或棕褐色染色;p16 阳性信号为细胞核出现棕黄色或棕褐色染色.根据染色强度及显色癌细胞比例将染色结果分为(一),(+),(+)等级,其阳性结果判断标准参照文献报道方法.1.5 统计学处理采用检验和相关分析.2 结果2.1CD44v6 和 p16 在 HCC,癌旁组织和正常肝组织中的表达 15 例正常肝组织中 CD44v6 为阴性,p16均呈不同程度
9、的阳性表达.25 例癌旁肝组织中,CD44v6 和 p16 阳性表达率分别为 42.7%(47/110)和34.5%(38/110).CD44v6 在 HCC 中的表达阳性率均显着高于正常肝组织和癌旁肝组织(=6.94,=6.39,P0.05);p16 在 HCC 中的表达阳性率均?70?临床消化病杂志 2005 年第 l7 卷第 2 期显着低于癌旁肝组织和正常肝组织(=19.04,=5.67,P0.05).见表 1.表 1CC44v6 和 p16 表达与 HCC 临床病理特征的关系2.2CD44v6 和 p16 表达与 HCC 临床病理特征的关系 CD44v6 和 p16 表达与 HCC 患
10、者的性别,年龄,肉眼形态和肿瘤大小无关.CD44v6 表达与 HCC 的分化程度呈负相关,与肿瘤转移呈正相关;p16 表达与HCC 的分化程度呈正相关,与肿瘤转移呈负相关.见表 2.表 2CC44v6 和 p16 表达与 HCC 临床病理特征的关系与高分化癌比较,=5.88,=8.62,P0.05;一与无转移比较 ,=9.78,10.23,=P0.052.3CD44v6 和 p16 表达与 HCC 患者预后的关系本组 110 例 HCC 标本中, 满 5 年随访完整资料者 67例(占 60.9%),其中已死亡病例 49 例,尚生存病例18 例.CD44v6 表达阳性患者死亡率高,生存率低;p1
11、6 表达阳性患者死亡率低,生存率高.见表 3.表 3CC44v6 和 p16 表达与 HCC 临床病理特征的关系与生存组比较,2:4.43,2=13.55,P0.05临床消化病杂志 2005 年第 17 卷第 2 期2.4CD44v6 和 pl6 表达之间的关系在 CD44v6 阳性表达的 47 例 HCC 中,pl6 阳性表达为 5 例(10.6%);CD44v6 阴性的 63 例 HCC 中,pl6 阳性表达为 33 例(52.4%).CD44v6 表达与 pl6 表达呈负相关(r= 一 0.59,P0.005).3 讨论CD44 属 I 类膜蛋白,是软骨连接蛋白家族的一员.人类 CD44
12、 基因定位于 11 号染色体短臂(11p13),其在人体组织中分布极为广泛,主要参与细胞,细胞与基质之间的特异性黏连过程,从而维持组织与器官的基本结构.CD44 分为 2 种类型,即标准型 CD44(CD44s)和变异型 CD44(CD44v).基因组分析表明,变异型 CD44vlvl0 中,与肿瘤转移较为密切的是 CD44v6.其促进转移的作用机理可能是表达CD44v6 的肿瘤细胞与淋巴管或血管内某一配体结合,使转移至那里的肿瘤细胞更加稳定地寄宿与生长,由此形成转移瘤.近年研究证实,CD44v6 和转录分子水平的过量表达与许多肿瘤的发生发展,侵袭和转移密切相关-3.p16 基因是 1994
13、年分离鉴定出的一种新型抑癌基因,因其对多种肿瘤有抑制作用而被命名为多种肿瘤抑制基因.该基因定位于人染色体 9p21 区域,全长 8.5kb,由 2 个内含子及 3 个外显子构成,分子量为 l5.8kD,编码表达一个 148 个氨基酸残基的蛋白质(pl6INK4).pl6 蛋白是多肿瘤抑制基因的产物,参与细胞周期因子的调节,抑制细胞由 G 期进入 S 期,具有抑制肿瘤生长的作用.p16 蛋白的丧失可使细胞周期蛋白依赖性激酶 CDK4 活化,导致 Rb 蛋白持续磷酸化及细胞无限制增殖.p16 蛋白的缺失与多种肿瘤的发生发展及预后密切相关 J.我们采用高敏感的 CSA 免疫组织化学技术,通过对 11
14、0 例 HCC 组织的 CD44v6 和 p16 蛋白联合检测,并结合随访资料分析,结果显示,CD44v6 在正常肝组织中均为阴性,而 p16 呈不同程度的阳性表?71?达.在 HCC 组织中 ,CD44v6 表达阳性率显着高于癌旁肝组织,而 pl6 表达阳性率显着低于癌旁肝组织.CD44v6 表达阳性的 HCC 分化程度低,转移率高,患者5 年生存率低;pl6 阳性表达的 HCC 分化程度高,转移率低,患者 5 年生存率高.表明 CD44v6 的上调和pl6 的下调表达与 HCC 的发生密切相关,并在 HCC的细胞分化和转移过程中起着十分重要的作用.检测两者基因的表达对估计 HCC 转移及生
15、存有重要意义,可作为评估 HCC 生物学行为和预后的指标之一.本研究发现,在 HCC 组织中 CD44v6 表达与 pl6表达之间呈负相关.表明 CD44v6 和 pl6 在 HCC 的发生,细胞增殖,分化和转移的病理过程中有着密切的关联作用.其机理有待进一步探讨.参考文献1YoshidaR,KimuraN,HaradaY,eta1.ThelossofEcadherin,alpha.andbetacateninexpressionisassociatedwithmetastisandpoorprognosisininvasivebreastcancerJ.IntJ0ncol,2001,18(3
16、):5l3.2KajitaM,ltohY,ChibaT,eta1.Membranetype1matrixmetallopro.teinasecleavesCIM4andpromotescellmigrationJ.JCellBiol,2001,153(5):893.3weberGF,BmnnRT,llaganJ,eta1.AbsenceoftheCD44genepreventstIcomametasis【j.CancerRes,2002,62(8):2281.4美汉国,廖慰萍 ,廖新波,等.胃癌及淋巴结转移灶巾 CD44v6 和E 皮钙黏素的表达及其意义,I 临床消化痫杂忠,2001,13(2
17、):60.5KambA,OralsNA,WeaverFeldhausJ,eta1.AcellcycleregulatorpotentiallyinvolvedingenesisofmanytumortypesJ.Science.1994,264(2):436.6NakamuraT,TdeH,EguchiR,eta1.Concomitantanalysisofpl6/INK4,cyclinD1,andretinoblastomaproteinexpressioninesophagealsquamouscellcarcinomaJ.Hepatogastroenterology,2003,50(3):1321.7谷化平,尚培中 ,周翠玲.SialylLewis.X,E-cadherln 和 pl6 蛋白在胆管癌中的表达及临床意义.临床消化病杂志,2003,14(4):161.,8肖宁,吴小翎 ,李宇.胃癌及癌前病变中 Hp 感染与 p16,CyclinD1表达的关系.临床消化病杂志,2001,13(2):70.(收稿 Ft 期:2004.07.15)
