1、SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分析壳寡糖(1)作者：王亮,吴昌英,刘桦,张涛【摘要】 目的研究一种快速准确的分析壳寡糖组成的定性测定方法。方法通过连续电泳和不连续电泳对比实验确定壳寡糖的最佳分析条件。结果浓缩胶浓度为 3%，分离胶浓度为%，上样量为 10l，恒定电流为 40mA，电泳时间50min 条件下，获得最佳壳寡糖分析图谱。结论 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳分析壳寡糖组成的方法的确是一种简单快速有效地定性检测方法。【关键词】 壳寡糖；电泳分析；聚丙烯酰胺凝胶电泳【Abstract】 ObjectiveToexploreaqualitative,fastandaccuratewayforanaly
2、zingcompositionofchitooligosaccharide.MethodsByconsecutiveelectrophoresisandnonconsecutiveelectrophoresisexperiments,thebestanalysisconditionsofchitooligosaccharideweredetermined.ResultsTheconcentrationofplasticwas3percent,theconcentrationofseparationofplasticwaspercent,thevolumeofsampleswas10l,cons
3、tantcurrentwas40mA,electrophoresistimewas50min.BestanalysisphotosofchitooligosaccharideCanbeobtainedunderthoseconditions.ConclusionThemethodofanalyzingcompositionofchitooligosaccharideistrulyasimple,effective,accurateandqualitativeway.【Keywords】chitooligosaccharide；electrophoreticanalysis；polyacryla
4、midegelelectrophoresis壳寡糖是壳聚糖经水解制得的产物，是 D 葡萄糖胺通过 糖苷键连接的吡喃葡萄糖键合而成的 210 个单元的低聚糖。文献报道13 ，壳寡糖具有促进脾脏抗体生成、抑制肿瘤生长等生理功能，在食品和日化用品方面也有着广泛的应用。一般壳寡糖的检测多采用薄层层析和高效液相色谱法。对于薄层层析法，虽然价格低廉，但是操作时间长，无法定量，而高效液相色谱法，效果好，但是它需要大型的仪器且流动相，花费昂贵，对于一般的实验室来说初期筛选是不利的。所以需要一种简便快捷低廉检验壳寡糖的方法。本研究使用 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳检测寡糖，快速、简便，弥补了传统检测方法的缺点，具
5、有较好的应用和推广价值。1 实验部分仪器和试剂寡糖，盐酸氨基葡萄糖（中国医药集团上海试剂公司） ，壳聚糖（脱乙酰度90%，上海伯奥生物科技有限公司） ，蜗牛酶（LvshengyuanBiotechnology 公司）,硼氢化腈钠（Fluka） ，其余试剂均为国产分析纯。冷冻干燥机,高速冷冻离心机（Eppendorf 公司） ，pH计,10kD 超滤管,MINIPROTEIN 电泳系统（BioRad 公司）,凝胶成像系统。方法壳聚糖的降解方法按参考文献4方法，取 1%壳聚糖醋酸溶液，加入1mg/ml 的酶溶液，于 40的水浴锅中反应 100min，煮沸10min 终止反应，加 1mol/LNaO
6、H 溶液，4000r/min 离心5min，取上清液于 10kD 的超滤管中,3000r/min 离心10min，收集滤液进行真空冷冻干燥。标记溶液的制备方法 取邻氨基苯甲酸,硼氢化腈钠溶于 10ml 水中，于 65水中溶解。样品液的制备方法 按参考文献5方法取上述实验步骤得到的冻干样品、盐酸氨基葡萄糖和寡糖各，分别加入已预热的标记溶液，65的水浴锅中保温 2h 后加入 ml丙酮，于 15000r/min 离心 3min，收集沉淀并加入样品缓冲溶液（mol/LTris 盐酸缓冲溶液，+5%SDS+87%甘油+溴酚蓝）,混匀。电泳按参考文献6方法分别配制%、15%、%的分离胶和 3%的浓缩胶。加样：取制得的样品液 10l 进行 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳。成像将电泳后的凝胶在紫外光下成像。（作者：未知本文来源于爬虫自动抓取，如有侵犯权益请联系 service立即删除）
