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1基础知识考前最后梳理(6)实验一 观察 DNA、RNA 在细胞中的分布 1、原理、步骤、结论2、实验注意事项(1)选材:口腔上皮细胞、无色的洋葱表皮细胞,不能用紫色洋葱表皮细胞或叶肉细胞,防止颜色的干扰。(2)缓水流冲洗目的:防止玻片上的细胞被冲走。(3)几种试剂在实验中的作用①0.9%NaCl 溶液(生理盐水):保持口腔上皮细胞正常形态。②8%盐酸:a.改变细胞膜等的通透性;b.使染色体中 DNA与蛋白质分开。③蒸馏水:a.配制染色剂;b.冲洗载玻片。④甲基绿吡罗红染液:混合使用且现配现用。(4)DNA和 RNA在细胞核和细胞质中都有分布,只是量的多少不同。故结论中强调“主要”而不能说“只”存在于细胞核或细胞质中。实验二 检测生物组织中还原糖、脂肪和蛋白质1、实验原理及步骤2、实验注意事项(1)还原糖鉴定实验材料要求①浅色:不能用绿色叶片、西瓜、血液等材料,防止颜色的干扰。②还原糖含量高:不能用马铃薯(含淀粉)、甘蔗、甜菜(含蔗糖)。(2)唯一需要加热— 还原糖鉴定,且必需水浴加热,不能用酒精灯直接加热。若不加热则无砖红色沉淀出现。(3)非还原糖(如蔗糖)+斐林试剂(水浴加热),现象不是无色而是浅蓝色[Cu(OH) 2的颜色]。(4)唯一需要显微镜—— 脂肪鉴定,实验用50%酒精的作用——洗掉浮色。(5)记准混合后加入—— 斐林试剂,且现配现用;分别加入——双缩脲试剂(先加 A液,后加 B液,且 B液不能过量)。两者成分相同,但 CuSO4的浓度不同,所以不能混用。(6)若用大豆做材料,必须提前浸泡;若用蛋清作材料,必须稀释,防止其粘在试管壁上不易涮洗;且该实验应预留部分组织样液做对比。(7)易写错别字提示:“斐林试剂”中的“斐”不可错写成“非”;双缩脲试剂中“脲”不可错写成“尿”。实验三 用显微镜观察多种多样的细胞1、显微镜的使用22、显微镜使用的一般程序:①、取镜和安放:右手握住镜臂,左手托住镜座;轻拿轻放,并略偏左;装好目镜和物镜。②、对光:扭动转换器,使镜头(低倍镜)、镜筒和通光孔成一直线;根据光线强弱,调节反光镜和遮光器(光圈)③、放置标本:玻片标本放置要正对通光孔的中央,用压片夹固定④、调焦观察:转动粗准焦螺旋,使镜筒缓缓下降,直到物镜接近玻片标本为止(此时眼睛应当看到物镜镜头与标本之间,以免物镜与标本相撞);左眼看目镜内,同时反向缓缓转动粗准焦螺旋,使镜筒上升,直到看到物象为止,在稍稍转动细准焦螺旋,使看到的物象更清晰;移动装片,在低倍镜下使需要放大观察的部分移动到视野中央;转动转换器,换成高倍物镜;缓缓调节细准焦螺旋,使物象清晰;调节光圈,使视野亮度适宜。⑤、善后整理:将显微镜外表擦拭干净;转动转换器,把两物镜偏到旁边,下调镜筒至最低,送回镜箱。3、显微镜使用的注意事项:先低后:先低倍镜后高倍镜;先放低镜筒,再向上调节(换高倍镜后只能用细准焦螺旋!)成像规律:上下、左右颠倒(如何移动玻片)变化规律:图像变大、数量减少、视野变暗 放大倍数:物 x目 指的是长度上的放大倍数高放大倍数的表现:目镜越短,物镜越长,物镜距离玻片越近(目短物长距离近)污点位置判断:分别转动镜头、移动装片,看污点是否随之而动4、高倍镜与低倍镜的比较物像大小 看到细胞数目 视野亮度 物镜与玻片的距离 视野范围高倍镜 大 少 暗 近 小低倍镜 小 多 亮 远 大实验四 观察线粒体和叶绿体1、实验原理①叶绿体呈绿色的椭球形或球形,不需染色,制片后直接观察。②线粒体呈无色棒状、圆球状等,用健那绿染成蓝绿色后制片观察。2、实验步骤①观察叶绿体:制作藓类叶片的临时装片→先低倍镜后高倍镜观察叶绿体②观察线粒体:制作人的口腔上皮细胞临时装片(健那绿染液染色)→先低倍镜后高倍镜观察观察线粒体3、注意问题①实验过程中的临时装片要始终保持有水状态。②要漱净口腔,防止杂质对观察物像的干扰。③用菠菜叶带叶肉的下表皮的原因:靠近下表皮的叶为海绵组织,叶绿体大而排列疏松,便于观察;带叶肉是因为表皮细胞不含叶绿体。④叶绿体在弱光下以椭球形的正面朝向光源,便于接受较多的光照;在强光下则以侧面朝向光源以避免被灼伤。实验五 通过模拟实验探究膜的透性 1.渗透系统的组成(如图)及条件(1)半透膜可以是生物性的选择透过性膜,如细胞膜,也可以是物理性的过滤膜,如玻璃纸。(2)半透膜两侧的溶液具有浓度差。浓度差的实质是单位体积溶液中溶质分子数的差,即物质的量浓度之差,即摩尔浓度而不是质量浓度。2、注意事项①若溶质分子能通过半透膜,则先是浓度高的一侧液面升高,随后另一侧液面上升,最后达到渗透平衡。②上图中,在达到渗透平衡后,只要存在液面差 Δh ,则 S1溶液的浓度仍大于 S2溶液的浓度。③若 S1为10%蔗糖溶液,S 2为10%葡萄糖溶液(葡萄糖不能透过半透膜),则水分子由漏斗进烧杯使漏斗液面下降。④水分子的移动方向:双向移动,但最终结果是单位体积内水分子数多(低浓度)溶液流向单位体积内水分子数少(高浓度)溶液。实验六 观察植物细胞的质壁分离和复原1、原理:成熟的植物细胞构成渗透系统,可发生渗透作用。2、流程33、质壁分离的原因分析外因:外界溶液浓度>细胞液浓度内因:原生质层相当于一层半透膜细胞壁的伸缩性小于原生质层表现:液泡由大变小,细胞液颜色由浅变深原生质层与细胞壁分离。4、特别提醒(1)实验成功的关键是实验材料的选择,必须选择有大液泡并有颜色的植物细胞,便于在显微镜下观察。(2)质壁分离和质壁分离复原中水分子移动是双向的,结果是双向水分子运动的差别所导致的现象。(3)质壁分离后在细胞壁和细胞膜之间充满的是浓度降低的外界溶液,因细胞壁是全透性且有水分子通过原生质层渗出来。(4)若用50%蔗糖溶液做实验,能发生质壁分离但不能复原,因为细胞过度失水而死亡。(5)若用尿素、乙二醇、KNO 3、NaCl 做实验会出现自动复原现象,因外界物质会转移到细胞内而引起细胞液浓度升高。实验七 探究影响酶活性的因素1、酶的高效性——比较过氧化氢在不同条件下的分解(1)实验过程分析(2)实验注意事项实验时必须用新鲜的、刚从活的动物体中取出的肝脏作实验材料。肝脏如果不新鲜,肝细胞内的过氧化氢酶等有机物就会在腐生细菌的作用下分解,使组织中酶分子的数量减少且活性降低。2、酶的专一性3、探究温度对酶活性的影响(1)实验过程分析 (2)实验注意事项①因为过氧化氢酶的反应底物过氧化氢受热会分解,所以用其做温度探究的实验,会对实验结果带来干扰。②因为斐林试剂在使用时需要加热,这对温度探究带来干扰,而使用碘液无需加热,对实验无干扰。4、探究 pH对酶活性的影响思考:为什么不能用淀粉酶做探究 pH的实验?答:因为淀粉在酸性条件下会分解,这对于判断淀粉酶能否使得淀粉水解出现干扰。故不能使用。实验八 叶绿体色素的提取和分离1、提取色素原理:色素能溶解在酒精或丙酮等有机溶剂中,所以可用无水酒精等提取色素。42、分离色素原理:各色素随层析液在滤纸上扩散速度不同,从而分离色素。溶解度大,扩散速度快;溶解度小,扩散速度慢。3、各物质作用:无水乙醇或丙酮:提取色素;层析液:分离色素;二氧化硅:使研磨得充分;碳酸钙:防止研磨中色素被破坏。4、结果:滤纸条从上到下依次是:胡萝卜素(最窄)、叶黄素、叶绿素 a(最宽)、叶绿素 b(第 2宽),色素带的宽窄与色素含量相关。5、注意事项: (1)画滤液细线:均匀,直,细,重复若干次 (2)分离色素:不能让滤液细线触及层析液 实验九 探究酵母菌的呼吸方式 1、原理: 酵母菌在有氧条件下进行有氧呼吸,产生二氧化碳和水: C6H12O6 + 6O 2 + 6H 2O6 →CO 2 + 12H 2O + 能量 在无氧条件下进行无氧呼吸,产生酒精和少量二氧化碳: C6H12O6 → 2C 2H5OH + 2CO 2 + 少量能量 2、检测:(1)检测 CO2的产生:使澄清石灰水变浑浊,或使溴麝香草酚蓝水溶液由蓝变绿再变黄。 (2)检测酒精的产生:橙色的重铬酸钾溶液,在酸性条件下与酒精发生反应,变成灰绿色。 实验十 观察细胞的有丝分裂 1、材料:洋葱根尖(葱,蒜) 2、步骤:(1)洋葱根尖的培养 (2)装片的制作流程:解离→漂洗→染色→制片 3、观察 (1)先在低倍镜下找到根尖分生区细胞:细胞呈正方形,排列紧密,有的细胞正在分裂。 (2)换高倍镜下观察:处于分裂间期的细胞数目最多。 考点提示: (1)培养根尖时,为何要经常换水? 答:增加水中的氧气,防止根进行无氧呼吸造成根的腐烂。 (2)培养根尖时,应选用老洋葱还是新洋葱?为什么? 答:应选用旧洋葱,因为新洋葱尚在休眠,不易生根。(3)为何每条根只能用根尖?取根尖的最佳时间是何时?为何? 答:因为根尖分生区的细胞能进行有丝分裂;上午 10时到下午 2时;因为此时细胞分裂活跃。 (4)解离和压片的目的分别是什么?压片时为何要再加一块载玻片? 答:解离是为了使细胞相互分离开来,压片是为了使细胞相互分散开来;再加一块载玻片是为了受力均匀,防止盖玻片被压破。 (5)若所观察的组织细胞大多是破碎而不完整的,其原因是什么? 答:压片时用力过大。 (6)解离过程中盐酸的作用是什么?丙酮可代替吗? 答:分解和溶解细胞间质;不能,而硝酸可代替。 (7)为何要漂洗? 答:洗去盐酸便于染色。 (8)细胞中染色最深的结构是什么? 染答:色最深的结构是染色质或染色体。 (9)若所观察的细胞各部分全是紫色,其原因是什么?答:染液浓度过大或染色时间过长。(10)为何要找分生区?分生区的特点是什么?能用高倍物镜找分生区吗?为什么? 答:因为在根尖只有分生区的细胞能够进行细胞分裂;分生区的特点是:细胞呈正方形,排列紧密,有的细胞处于分裂状态;不能用高倍镜找分生区,因为高倍镜所观察的实际范围很小,难以发现分生区。 (11)分生区细胞中,什么时期的细胞最多?为什么? 答:间期;因为在细胞周期中,间期时间最长。 (12)所观察的细胞能从中期变化到后期吗?为什么? 答:不能,因为所观察的细胞都是停留在某一时期的死细胞。 (13)观察洋葱表皮细胞能否看到染色体?为什么? 答:不能,因为洋葱表皮细胞一般不分裂。 (14)若观察时不能看到染色体,其原因是什么? 答:没有找到分生区细胞;没有找到处于分裂期的细胞;染液过稀;染色时间过短。实验十一 观察细胞的减数分裂 1、实验原理:蝗虫的精母细胞进行减数分裂形成精细胞,再形成精子。此过程要经过两次连续的细胞分裂:减数第一次分裂和减数第二次分裂。在此过程中,细胞中的染色体形态、位置和数目都在不断地发生变化,因而可据此识别减数分裂的各个时期。2、方法步骤:低倍镜观察→高倍镜观察→绘图3、讨论:(1)如何判断视野中的一个细胞是处于减数第一次分裂还是减数第二次分裂? 答:减数第一次分裂会出现同源染色体联会、四分体形成、同源染色体在赤道板位置成对排列、同源染色体分离、移向细胞两极的染色体分别由两条染色单体组成等现象;减数第二次分裂的中期,非同源染色体成单排列在细胞赤道板位置,移向细胞两极的染色体不含染色单体。5(2)减数第一次分裂与减数第二次分裂相比,中期细胞中的染色体的不同点是什么?末期呢? 答:减数第一次分裂的中期,两条同源染色体分别排列在细胞赤道板的两侧,末期在细胞两极的染色体由该细胞一整套非同源染色体组成,其数目是体细胞染色体数的一半,每条染色体均由两条染色单体构成;减数第二次分裂的中期,所有染色体的着丝点排列在细胞的赤道板的位置。末期细胞两极的染色体不含染色单体。实验十二 低温诱导染色体加倍 1、原理:用低温处理植物分生组织细胞,能够抑制纺锤体的形成,以致影响染色体被拉向两极,细胞也不能分裂成两个子细胞,于是,植物细胞染色体数目发生变化。 2、方法步骤: (1)洋葱长出约 1cm左右的不定根时,放入冰箱的低温室内(4℃),诱导培养 36h。 (2)剪取诱导处理的根尖约 0.5~1cm,放入卡诺氏液中浸泡 0.5~1 h,以固定细胞的形态,然后用体积分数为95%的酒精冲洗 2次。 (3)制作装片:解离→漂洗→染色→制片 (4)观察比较:视野中既有正常的二倍体细胞,也有染色体数目发生改变的细胞. 3、讨论:秋水仙素与低温都能诱导染色体数目加倍,这两种方法在原理上有什么相似之处? 答:秋水仙素与低温都能诱导染色体数目加倍,这两种方法在原理上是一样的:都是抑制纺锤体的形成,使染色体不能移向细胞两极,而引起细胞内染色体数目加倍。区别:秋水仙素诱导加倍的成功率高于低温处理;低温处理比秋水仙素要安全,方法更简便。实验十三 调查常见的人类遗传病 1、 要求:调查的群体应足够大;选取群体中发病率较高的单基因遗传病。如红绿色盲、白化病、高度近视(600度以上)等. 2、 方法: 分组调查,汇总数据,统一计算. 3、计算公式:某种遗传病的发病率= ×100% 某 种 遗 传 病 的 患 病 人 数某 种 遗 传 病 的 被 调 查 人 数实验十四 探究植物生长调节剂对扦插枝条生根的作用 1、常用的生长素类似物:α-萘乙酸,2,4-D,,苯乙酸,吲哚丁酸 2、方法: 浸泡法:这种处理方法要求溶液的浓度较低。 沾蘸法:把插条的基部在浓度较高的药液中蘸一下(约 5s),深约 1.5cm即可。 3、预实验:先设计一组浓度梯度较大的实验进行探索,在此基础上设计细致的实验. 4、实验设计的几项原则: ①单一变量原则(只有溶液的浓度不同);②等量原则(控制无关变量,即除溶液的浓度不同外,其他条件都相同);③重复原则(每一浓度处理 3~5段枝条) ;④对照原则(相互对照、空白对照);⑤科学性原则 实验十五 模拟尿糖的检测1、取样:正常人的尿液和糖尿病患者的尿液 2、检测方法:斐林试剂(水浴加热)或班氏试剂或尿糖试纸 3、结果:(用斐林试剂检测)试管内发生出现砖红色沉淀的是糖尿病患者的尿液,未出现砖红色沉淀的是正常人的尿液。 4、分析:因为糖尿病患者的尿液中含有还原糖,与斐林试剂发生反应产生砖红色沉淀,而正常人尿液中无还原糖,所以没有发生反应。实验十六 探究培养液中酵母菌数量的动态变化 1、实验原理(1)酵母菌可以用液体培养基来培养,培养液中的酵母菌种群的增长情况与培养液中的成分、空间、pH、温度等因素有关,我们可以根据培养液中的酵母菌数量和时间为坐标轴做曲线,从而掌握酵母菌种群数量的变化情况。(2)利用血球计数板在显微镜下直接计数是一种常用的细胞计数法,这种方法可以直接测定样品中全部的细胞数目,所以一般用于单细胞微生物数量的测定,由于血球计数板上的计数室盖上盖玻片后的容积是一定的,所以可根据在显微镜下观察到的细胞数目来计算单位体积的细胞的总数目。2、注意事项①用显微镜计数时,对于压在小方格界线上的酵母菌,应至计数相邻两边及其顶角的;②吸取培养液计数前要将试管轻轻振荡几次,目的是使培养液中的酵母菌均匀分布,减少误差;实验十七 土壤中动物类群丰富度的研究 1、土壤动物有较强的活动能力且身体微小,不适于用样方法或标志重捕法进行调查。62、丰富度的统计方法有两种:一是计名计算法(指在一定面积的样地中,直接数出各种群的个体数目,一般用于个体较大,种群数量有限的群落);二是目测估计法(按预先确定的多度等级来估计单位面积上个体数量的多少。等级划分表示方法有:非常多、多、较多、较少、少、很少)实验十八 探究水族箱(或鱼缸)中群落的演替 1、实验目的:探究生物群落的演替过程。2、实验原理:在有限的空间内,依据生态系统原理,将生态系统具有的基本成分进行组织,构建一个人工微生态系统是可能的。但同时,这个人工生态系统的稳定性是有条件的,也可能是短暂的,它会发生群落的演替。3、实验方法:在水族箱或鱼缸中加入适量的池塘水,形成一个小型环境→将上述装置放在室内通风、光线良好的地方(但要避免阳光直接照射)→每天用吸管吸取少许水族箱内的水,制成临时装片,用显微镜观察→统计池塘水中生物种类和每个物种个体数量(连续观察 7天,并做好记录)→进行实验分析并得出结论。1基础知识考前最后梳理(5)三、多聚酶链式反应扩增DNA片段1.PCR:多聚酶链式反应的简称,是一种体外迅速扩增 DNA片段的技术,它能以极少量的 DNA为模板,在几小时内复制出上百万份的 DNA拷贝。2.扩增方向:总是从子链的 5′端向 3′端延伸。3.需要引物的原因:DNA 聚合酶不能从头合成 DNA,而只能从引物 3′端延伸 DNA链,因此 DNA复制需要引物。4.原理:热变性原理,5.条件:DNA 模板,分别与两条模板链相结合的两种引物,脱氧核苷酸,耐热的 Taq DNA聚合酶,同时控制温度。6.过程:变性(高温 94℃)、复性(低温 55℃)、延伸(中温 72℃)7.结果:DNA 聚合酶只能特异地复制处于两引物之间的 DNA序列,使这段固定长度的序列呈指数扩增。四、血红蛋白的提取和分离1、实验原理:利用蛋白质各种特性的差异,如分子的形状和大小、所带电荷的性质和多少、溶解度、吸附性质和对其他分子的亲和力,分离不同种类的蛋白质。2、凝胶色谱法原理:根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效方法。相对分子质量小的分子要穿过多孔凝胶颗粒的内部通道,路程长,流动慢;相对分子质量大的分子直接通过凝胶颗粒的间隙,路程短,流动快。第十单元 现代生物科技一、基因工程1. 基因工程的诞生(1)基因工程:按照人们的意愿,进行严格的设计,并通过体外 DNA 重组和转基因等技术,从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。(2)基因工程诞生的理论基础是在生物化学、分子生物学和微生物学科的基础上发展起来,技术支持有基因转移载体的发现、工具酶的发现,DNA 合成和测序仪技术的发明等。2基因工程的原理及技术(3)基因工程操作中用到了限制酶、DNA 连接酶、运载体考点限制酶细化:限制酶主要从原核生物生物中分离纯化出来,这种酶在原核生物中的作用是识别 DNA 分子的特定核苷酸序列,并且使每条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。① 限制酶的特性是识别特定核苷酸序列,切割特定切点。限制酶产生的末端有两种:粘性末端和平末端。② DNA 连接酶与 DNA 聚合酶的作用部位是磷酸二酯键,二者在作用上的区别为前者是恢复被限制性内切酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键,后者单个的核苷酸连接到DNA分子上。③ 作为基因工程的载体应该具备标记基因、多个限制性内切酶切点、能够在宿主细胞内复制和稳定存等特点。⑤ 常见的载体种类有质粒、动植物病毒、噬菌体(4)基因工程四步骤:目的基因的获取、基因表达载体的构建、将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测和表达。考点细化:① 目的基因的获取方法为根据基因的核苷酸序列、基因的功能、基因在载体上的位置、基因的转录产物、以及基因的表达产物蛋白质等特性来获取目的基因。② 基因文库、基因组文库、cDNA 文库的区别:含有某种生物不同基因的许多DNA 片段,导入受体菌的群体中储存,各个受体菌体分别含有这种生物的不同基因,称之为基因文库。如果含有一种生物所有基因,叫做基因组文库。只包含一种生物的一部分基因,这种基因文库叫做部分基因文库,如cDNA 文库。③ 基因重组操作中构建基因表达载体的目的是将目的基因在受体细胞中稳定存在,并且遗传给下一代,同时目的基因能够表达和发挥作用。④ 一个完整的基因表达载体包括:目的基因、启动子、终止子、标记基因。⑤ 将目的基因导入植物细胞、动物细胞和微生物细胞的常用方法分别是脓杆菌转化法、显微注射法、Ca 2+处理法。⑥ 基因工程的受体细胞选择,植物可以采用体细胞,动物不能用体细胞,一般采用受精卵细胞。因为受精卵具有全能性。⑦ 当受体细胞是大肠杆菌时常用Ca 2+处理细胞,这样做的目的是使细胞处于一种能够吸收周围环境中的DNA 分子的感受态细胞。⑧ 目的基因的检测:转基因生物的 DNA 是否插入了目的基因(DNA分子杂交技术);目的基因是否转录出了 mRNA(分子杂交技术);目的基因是否翻译成蛋白质(抗原-抗体杂交);个体生物学水平鉴定。⑨ 目的基因的获取、基因表达载体的构建、目的基因的检测和表达一般需要碱基互补配对。将目的基因导入受体细胞不需要碱基互补配对3. 基因工程的应用2(5)在农业生产上:主要用于提高农作物的抗逆能力(如:抗除草剂、抗虫、抗病、抗干旱和抗盐碱等),以及改良农作物的品质和利用植物生产药物等方面。(6)基因治疗不是对患病基因的修复,基因检测所用的 DNA 分子只有处理为单链才能与被检测的样品,按碱基配对原则进行杂交。4. 蛋白质工程(7)蛋白质工程的本质是通过基因改造或基因合成,对先有蛋白质进行改造或制造新的蛋白质,所以被形象地称为第二代基因工程;基因工程在原则上只能生产自然界已存在的蛋白质二、克隆技术1. 植物的组织培养(1)细胞工程:指应用细胞生物学和分子生物学的原理和方法,通过细胞水平或者细胞器水平上的操作,按照人们的意愿来改变细胞内的遗传物质或获取细胞产品的一门综合科学技术。在细胞器水平上改变细胞的遗传物质,属于细胞工程。(2)细胞全能性:具有某种生物全部遗传信息的任何一个细胞,都具有发育成完整生物体的潜能。考点细化:① 都具有该生物全部遗传信息,因此从理论上讲,生物体的每一个活细胞都应该具有全能性。② 细胞在生物体内没有表现出全能性的原因是基因选择性表达。③ 植物细胞的全能性得以实现的条件是离体,合适的营养和激素,无菌操作。④ 在生物的所有的细胞中,受精卵细胞的全能性最高。(3)植物组织培养:在无菌和人工控制的条件下,将离体的植物器官、组织、细胞,培养在人工配置的培养基上,给予适宜的培养条件,诱导其产生愈伤组织、丛芽,最终形成完整的植株。考点细化:① 已分化的细胞经过诱导后,失去其特有的结构和功能而转变成未分化细胞的过程叫脱分化。② 再分化是愈伤组织继续进行培养,重新分化出根或芽等器官。③ 愈伤组织细胞排列疏松而无规则,高度液泡化的呈不定型状态的薄壁细胞。④ 植物组织培养时培养基的成分有矿质元素、蔗糖、维生素、植物激素、有机添加物,与动物细胞培养相比需要蔗糖、植物激素,不需要动物血清。⑤ 在植物组织培养脱分化过程中,需要植物激素⑥ 植物组织培养全过程中都需要无菌,愈伤组织之前不需要光照(4)植物组织培养技术的用途:微型繁殖、作物脱毒、制造人工种子、单倍体育种、细胞产物的工厂化生产。考点细化:① 用植物体的茎尖、根尖来获得无病毒植物②人工种子中人工胚乳相当于大豆种子的子叶,人工种子与正常种子相比发芽率高。③ 转基因植物的培育需要植物组织培养(5)将不同种植物的体细胞,在一定条件下融合成杂种细胞,并把杂种细胞培育成新的植物体叫做植物体细胞杂交。考点细化:① 用纤维素酶、果胶酶去除细胞壁获得原生质体② 物理方法:点刺激、振荡、离心;化学方法:聚乙二醇③ 植物体细胞杂交完成的标志是新细胞壁的形成④ 融合后的杂种细胞通过植物组织培养才能发育成完整的植物体(6)植物体细胞杂交这一育种方法的最大优点是克服远缘杂交不亲和障碍2.动物的细胞培养与体细胞克隆(7)动物细胞工程常用的技术手段有动物细胞培养、动物细胞核移植、动物细胞融合、生产单克隆抗体、胚胎移植等(8)动物细胞培养经过原代培养和传代培养考点细化:① 动物细胞培养液的成分有糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等② 动物细胞培养基固体,植物细胞培养基液体,培养的动物细胞通常取自胚胎、幼龄动物的组织器官② 动物细胞培养时的气体环境是95%的空气+5%二氧化碳的混合气体,CO 2 起到调节 PH值作用③ 使用胰蛋白酶处理使动物组织分散成单个细胞④ 动物组织处理使细胞分散后的初次培养称为原代培养⑤ 贴满瓶壁的细胞需要重新用胰蛋白酶等处理,然后分瓶继续培养,让细胞继续增殖。这样的培养过程通常被称为传代培养。3.细胞融合与单克隆抗体(9)动物细胞融合与植物原生质体融合的区别:操作步骤不同:植物原生质体融合需要先去除细胞壁,动物细胞无细胞壁;诱导方法不同:动物细胞融合可以用物理、化学和生物三种方法,植物原生质体融合只能用物理、化学方法;最终目的不同:植物原生质体融合最终是为了获得杂种植株,动物细胞融合最主要目的是获得单克隆抗体。(10)单克隆抗体与血清抗体相比特异性强、灵敏度高并可大量制备3(11)熟悉单克隆抗体制备过程。考点细化① 生产杂交瘤细胞要用B 淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合② 注射相应抗原后,从小鼠脾脏中提取出B 淋巴细胞③ 杂交瘤细胞既能大量增殖,又能产生专一抗体。④ 制备单克隆抗体过程中需要两次筛选⑤ 体外条件下做大规模培养杂交瘤细胞或者注射到小鼠腹腔内增殖,从细胞培养液或者小鼠腹水内就可以提取出大量的单克隆抗体。联想拓展:①杂交瘤细胞融合时,对 B 淋巴细胞为免疫过的B 淋巴细胞②一种 B 细胞只能产生一种抗体③A 和 B 两种细胞融合,只考虑两两融合,融合方式有 AA、BB、AB 融合三种④制备单克隆抗体过程中需要经过两次筛选?第一次:特定的选择性培养基。第二次:抗体检测(13)单克隆抗体在多种人类疾病及动植物病害的诊断和病原鉴定中发挥重要作用。主要用于癌症治疗,也有少量用于其它疾病治疗。拓展:生物导弹中,单抗的作用是导向作用,能将药物定向带到癌细胞所在位置,在原位杀死癌细胞。既不损伤正常细胞,又减少了用药量。(14)去核卵母细胞能够激发核的全能性,选用的卵母细胞应该是培养到减数第二次分裂中期的卵母细胞(15)核移植技术获得的动物因为有细胞质基因的影响、生活环境的差异、可能发生基因突变造成核移植动物与供核动物性状不完全相同。三、胚胎工程1. 动物胚胎发育的基本过程与胚胎工程的理论基础动物胚胎发育的基本过程:受精卵→2细胞→4细胞→8细胞→桑葚胚→囊胚→原肠胚胚胎工程的理论基础:哺乳动物受精和早期胚胎发育规律(1)精子和卵子的产生过程中精子变形,卵子没有。卵泡的形成和在卵巢内的储备,是在出生前完成的。考点细化:①精细胞产生后要经过顶体形成、尾部发育、细胞质浓缩最终精子形成②卵子的发生在胎儿时期就完成了卵泡的形成和在卵巢内的储备,排卵前后进行了减数第一次分裂,减Ⅱ分裂在精子和卵细胞结合过程中完成。(2)精、卵细胞结合前各自要发生哪些生理过程?(提示:在受精前精子要在雌性动物生殖道内获能;排出的卵子要在输卵管中进一步成熟到减Ⅱ中期才具备受精能力)。(3)受精过程:精子获能→卵子准备阶段→受精。卵子防止多精入卵的屏障:透明带反应和卵黄膜封闭作用拓展:① 桑椹胚一般指 32 个左右的细胞数目的胚胎。② 胚胎分割选用的胚胎最好处于桑椹胚或者囊胚时期,因为全能性较高(6)胚胎工程包含的技术:体外受精技术、胚胎早期培养技术、胚胎干细胞培养、胚胎分割技术、胚胎移植技术(7)获得精子必须经获能处理后才能进行体外受精(8)采集卵子前一般要对雌体进行促性腺激素处理,从较大体型动物卵巢中采集卵母细胞都要经过体外人工培养成熟后,才能与获能精子受精。(9)胚胎的早期培养培养液还需要添加激素和血清(10)获得的早期胚胎有向受体移植、冷冻保存两种去向2. 胚胎干细胞的移植(11)从早期胚胎或原始性腺中分离出来的一类细胞可以称为胚胎干细胞(12)胚胎干细胞在形态上:体积小、细胞核大、核仁明显;在功能上,具有发育的全能性。另外在体外培养的条件下,胚胎干细胞可以增殖二不发生分化。对它可以进行冷冻保存,也可进行遗传改造。(13)干细胞按分化潜能可分为全能干细胞(如胚胎干细胞可以分化形成所有的成体组织细胞,甚至发育成为完整的个体)、 多能干细胞(具有多向分化的潜能,可以分化形成除自身组织细胞外的其他组织细胞,如造血干细胞、神经干细胞、间充质干细胞、皮肤干细胞等)和专能干细胞(维持某一特定组织细胞的自我更新,如肠上皮干细胞)三种类型。(14)干细胞可以通过从哺乳动物的早期胚胎(囊胚的内细胞团)或从胎儿的原始性腺中分离而来3. 胚胎工程的应用(15)胚胎分割时要注意注意将内细胞团均等分割。(16)胚胎移植技术包括对供、受体的选择和处理,配种或进行人工授精,对胚胎的收集(冲卵),检查、培养或保存,对胚胎进行移植,以及移植后的检查等步骤考点细化:① 胚胎移植的生理学基础:a.哺乳动物发情排卵后,不论是否妊娠,在一段时间内同种动物的供、受体生殖器官的生理变化是相同的,这为胚胎移入受体提供了相同的生理环境4b.早期胚胎在一定时间内处于游离状态,为胚胎的收集提供了可能c.受体对移入子宫的外来胚胎基本上不发生免疫排斥反应,为胚胎在受体内的存活提供了可能d.供体胚胎可与受体子宫建立正常的生理和组织联系,但移入受体的供体胚胎的遗传特性,在孕育过程中不受任何影响。②胚胎移植的实质是生产胚胎的供体和孕育胚胎的受体共同繁殖后代的过程。③胚胎移植的优势是可以充分发挥雌性优良个体的繁殖潜力。④胚胎移植过程中两次使用促性腺激素的目的是:第一次,对供体、受体进行同期发情处理;第二次,对供体母牛做超数排卵处理。⑤胚胎移植过程产下的犊牛性状取决于供体牛⑥不同动物其胚胎移植的时间不同,例如:牛、羊一般要培养到桑椹胚或囊胚阶段才能进行移植,小鼠等可在更早的阶段移植。第九单元 教材实验总结1、生物科学实验的一般程序为:观察并提出问题→提出假说→设计并完成实验→分析数据,得出结论2、实验操作步骤应遵循四大基本原则(1)科学性原则——符合实验的原理和程序;(2)可重复性原则——使其他人能按照该步骤完成实验并能不断重复而得到相同的结果;(3)简便性原则——能以最简单的步骤、材料(经济易得)完成实验;(4)单一变量原则——排除干扰、控制变量(强调变量的惟一性)。3、设计实验步骤常用“四步法”。 第 1步:共性处理实验材料,均等分组并编号。选择实验材料时要注意应用一些表示等量的描述性语言,如:“生长一致的”,“日龄相同的,体重一致的”等等。分成多少组要视题目中所给的信息而定,(一般情况分两组)。编号最好用 A、B、C 或甲、乙、丙,而不用 1、2、3 避免与实验步骤相混淆。 第 2步:遵循单因子变量原则,对照处理各组材料。方法为一组为对照组(往往为处于正常生理状态的),其余为实验组,对照组与实验组只能有一个实验条件不同(单因子变量),其他条件要注意强调出相同来,这是重要的得分点或失分点。至于变量是什么要根据具体题目来确定。 第 3步:相同条件培养(饲养、保温)相同时间。 第 4步:观察记录实验结果。 实验结果的预测(预期);首先要根据题目判断该题是验证性实验还是探究性实验,如果是验证性实验,则结果只有一个,即题目中要证明的内容。如果是探究性实验,则结果一般有三种:①实验组等于对照组,说明研究的条件对实验无影响。②实验组大于对照组,说明研究的条件对实验有影响,且影响是正相关。③实验组小于对照组,说明研究的条件对实验有影响,且影响是负相关。1基础知识考前最后梳理(4)四、人体内环境的稳态与调节1.稳态的生理意义(1)人体内环境指人体内细胞生活的液体环境拓展:①内环境=细胞外液=血浆+组织液+淋巴②下列物质属于内环境成分的是:血糖、抗体、激素(2)血浆和组织液之间双向渗透,组织液也可渗透进入淋巴,淋巴回流到血浆。2.神经、体液调节在稳态中的作用动物体内各项生命活动常常同时受神经和体液的调节,这两种调节协调作用,各器官、系统的活动才能协调一致,内环境的稳态才能得以维持,细胞的各项生命活动才能正常进行,机体才能适应环境的不断变化。(3)神经调节与体液调节区别:比较项目 神经调节 体液调节反应速度 迅速 较缓慢作用范围 准确、比较局限 较广泛作用时间 短暂 比较长联系体内大多数内分泌腺直接或间接受中枢神经系统的控制,如性激素的分泌受中枢神联系经系统的调节;内分泌腺所分泌的激素也可以影响神经系统的功能,如甲状腺激素影响着大脑的生长发育。3.体温调节、水盐调节和血糖调节(4)人体所需水的主要来源是饮水和食物,人体水分排出的最主要途径是肾脏。(5)抗利尿激素的作用是促进肾小管和集合管对水分重吸收。是由下丘脑神经细胞分泌,垂体后叶释放的(6)胰岛素通过促进葡萄糖进入肝脏、肌肉、脂肪等组织细胞,并且在这些细胞中合成糖元、氧化分解或者转化成脂肪;另一方面又能够抑制肝糖元的分解和非糖类物质转化为葡萄糖从而降低血糖浓度。(7)血糖调节的方式是神经-体液调节(8)血糖含量升高时,胰岛素分泌增多,促进葡萄糖进入肝脏、肌肉、脂肪等组织细胞,并且在这些细胞中合成糖元、氧化分解或者转化成脂肪;另一方面又能够抑制肝糖元的分解和非糖类物质转化为葡萄糖。从而降低血糖。血糖含量降低时,胰高血糖素含量升高,促进肝糖元分解,促进非糖类物质转化为葡萄糖五、免疫调节1.免疫系统在维持稳态中的作用(1)免疫是机体的一种特殊的保护性生理功能。(2)非特异性免疫是人类生来就有的,不针对某一特定的病原体,而是对大多数病原体起到防御作用。人体抵御病原体的三道防线分别是第一道防线:皮肤和粘膜;第二道防线:杀菌物质、吞噬细胞;第三道防线:特异性免疫。(3)特异性免疫是人类后天形成的,免疫器官、免疫细胞借助血液循环和淋巴循环,进行的免疫,针对某一特定的病原体起到防御作用。非特性免疫中依靠杀菌物质和吞噬细胞消灭病原体。(4)淋巴细胞的分化过程:造血干细胞在骨髓中分化为 B 细胞,在抗原刺激下分化为效应B细胞。造血干细胞在胸腺中分化为 T 细胞,在抗原刺激下分化为效应 T 细胞。(5)能够引起机体产生特异性免疫的物质叫做抗原。抗原具有大分子、一般异物性和特异性的性质。抗原不一定是异物。(6)抗体是抗原刺激下产生,能够与相应抗原特异性结合的免疫球蛋白。拓展:①抗体是浆细胞(效应B细胞)合成的,其化学本质是球蛋白,分布在血清、组织液和外分泌物②抗原:细菌、细菌外毒素、病毒、花粉、癌细胞(7)体液免疫的三个阶段:感应阶段、反应阶段、效应阶段拓展:①参与体液免疫感应阶段的细胞有有吞噬细胞、T 细胞、B 细胞②在体液免疫中,吞噬细胞在感应阶段发挥作用③当同一种抗原再次进入机体时,体液免疫的反应阶段是记忆细胞迅速增殖分化,形成大量的浆细胞和少量的记忆细胞。④二次免疫反应产生抗体与初次相比,产生的速度快、数量多。(8)细胞免疫的三个阶段:感应阶段、反应阶段、效应阶段拓展:①干扰素、白细胞介素属于淋巴因子,化学本质是蛋白质。2②上述物质由 T 细胞合成;在接受抗原刺激后合成;能够促进 B 细胞的增殖和分化,加强各种有关细胞的作用来发挥免疫效应。(9)当细菌毒素进入人体后,会发生体液免疫。(10)当结核杆菌、麻风杆菌进入人体后,会发生细胞免疫。(11)当病毒进入机体后,人体会发生体液免疫和细胞免疫。(12)过敏原第一次进入人体后,人体内产生抗体吸附在皮肤、呼吸道或消化道黏膜以及血液中某些细胞的表面。当相同过敏原再次进入机体时,就会与吸附在细胞表面的相应抗体结合,使上述细胞释放组织胺等物质,引起毛细血管扩张,血管壁通透性增强,平滑肌收缩,腺体分泌增多等,引发各种过敏反应。(13)过敏反应产生的抗体吸附在皮肤、呼吸道或消化道黏膜以及血液中某些细胞的表面,体液免疫中产生的抗体主要分布在血清中。(14)过敏反应属于免疫过强,风湿性心脏病属于自身免疫病,艾滋病属于免疫缺陷病。2.艾滋病的流行和预防(15)艾滋病是由人类免疫缺陷病毒(HIV)引起,该病毒主要侵染人体T 细胞。(16)艾滋病主要通过性接触、血液和母婴三种途径传播。第八单元 生物与环境一、种群和群落1.种群的特征(1)种群具有种群密度、出生率和死亡率、迁出率和迁入率、年龄组成和性别比例四个基本特征。拓展:①种群在单位面积或单位体积中的个体数就是种群密度。②决定种群大小和种群密度的重要因素是出生率和死亡率。③预测种群数量的变化趋势具有重要意义的种群特征是年龄组成④种群的性别比例能够影响种群密度。2.种群的数量变化(2)从组成种群的个体角度看,种群数量变化的内在原因是种群内部个体之间的斗争,每一个体均需占有一定的生存资源,包括对实物、空间和配偶的争夺,使得在个体数量达到一定值斗争加剧,引起种群数量的变化趋势发生改变。(3)种群数量呈“J”型增长的条件是食物和空间无限、气候适宜、没有敌害等条件。J 型增长的关系式:Nt=N0λ t ;(4)自然界的资源和空间总是有限的,因此种群数量呈“S”型增长。拓展:①自然界的资源和空间总是有限的,当种群密度增大时,种内竞争就会加剧,以该种群为食的动物的数量也会增加,这就使种群的出生率降低,死亡率增高,有时会稳定在一定的水平,形成“S”型增长曲线。②在环境条件不受破坏的情况下,一定空间中所能维持的种群最大数量称为环境容纳量,又称为 K 值。③渔业捕捞需要考虑该种群的增长率问题,原则上说是要在种群数量超过K/2 时进行捕捞,而且严格限制捕捞量,有利于有效地保护渔业资源。防治害虫需要考虑改善环境,以降低 K 值,才能使防治效果最好。(5)影响种群数量变化的因素有气候、食物、天敌、传染等。3.群落的结构特征(6)同一时间内聚集在一定区域中各种生物种群的集合叫做群落。(7)生物群落的结构包括垂直结构和水平结构。①在垂直方向上,大多数群落都具有明显的分层现象,例如森林中自下而上分别有草本植物、灌木和乔木,形成群落的垂直结构。②某草地在水平方向上由于地形的变化、土壤湿度和盐碱度的差异等因素,不同的地段往往分布着不同的种群,这就形成了群落的水平结构。拓展:①森林生物群落的垂直结构与光照强度密切相关。②森林生物群落的水平结构与阳光、水、等生态因素密切相关。4.群落的演替(8)随时间的推移,一个群落被另一个群落代替的过程,叫做演替。演替的种类有初生演替和次生演替两种。二、生态系统的结构和功能1.生态系统的结构(1)有生物群落和它的无机环境相互作用而形成的统一整体叫做生态系统。生态系统的基本类型有海洋生态系统、湿地生态系统、森林生态系统、草原生态系统、农田生态系统、城市生态系统等。(2)生态系统的结构包括组成成分和营养结构(食物链和食物网)两方面。(3)生态系统的组成成分有非生物的物质和能量、生产者、消费者、分解者四部分。(4)生物通过食物关系建立起来的联系叫做食物链。捕食链不包括分解者。2.物质循环和能量流动的规律及应用(6)生态系统得物质循环和能量流动的渠道是食物链和食物网。3(7)生态系统中的能量流动从生产者固定太阳能开始。(8)能量流动特点为单向,逐级递减。生态系统中,能量流动只能从第一营养级流向第二营养级,再依次流向后面的各个营养级,因此是单向不可逆转的。拓展:①能量金字塔呈正金字塔型,数量金字塔一般为正金字塔型,有时也会出现倒金字塔型。②在一个生态系统中,营养级与能量流动中消耗能量的关系是营养级越低,消耗量越大。(9)研究能量流动可以帮助人们科学规划、设计人工生态系统,使能量得到最有效的利用。(10)组成生物体的C、H、O、N、P、S 等元素,都不断进行着从无机环境到生物群落,有从生物群落到无机环境的循环过程,这就是生态系统中的物质循环。(11)结合“碳循环”图解,简述碳循环的过程。拓展:①碳在无机环境中是以二氧化碳和碳酸盐形式存在的。②碳在无机环境和生物群落之间是以二氧化碳形式进行循环的。③碳在生物群落中,以含碳有机物形式存在。④大气中的碳主要通过植物光合作用进入生物群落。⑤生物群落中的碳通过动植物的呼吸作用、微生物的分解作用、化石燃料的燃烧等方式可以回到大气中。(12)物质循环和能量流动是生态系统的主要功能,二者是同时进行,彼此相互依存,不可分割的。能量的固定、储存、转移和释放都离不开物质的的合成和分解的等过程。物质作为能量的载体,是能量沿食物链(网)流动;能量作为动力,使物质能够不断地在生物群落和无机环境之间循环往返。3.生态系统中的信息传递(13)生态系统的信息种类有物理信息、化学信息、行为信息三类。(14)生态系统的信息的作用:1、生命活动的正常进行,离不开信息的作用,生物种群的繁衍,也离不开信息的传递。2、信息还能调节生物的种间关系,以维持生态系统的稳定。三、生态系统的稳定性和生态环境的保护1.生态系统的稳定性(1)生态系统所具有的保持或恢复自身结构和功能相对稳定的能力,叫做生态系统的稳定性。(2)生态系统的稳定性包括抵抗力稳定性和恢复力稳定性两个方面。(3)生态系统的抵抗力稳定性是指生态系统抵抗外界干扰并使自身的结构和功能保持原状的能力。(4)生态系统具有一定的自我调节能力,因此具有抵抗力稳定性。(5)生态系统抵抗力稳定性与生态系统组成成分多少和营养结构的复杂程度有关。(6)生态系统的恢复力稳定性指生态系统受到外界干扰因素的破坏后恢复到原状的能力。(7)对于一个生态系统来说,抵抗力稳定性与恢复力稳定性的强弱是一般呈相反的关系。(8)提高生态系统的稳定性,一方面要控制对生态系统干扰的程度,对生态系统的利用应该适度,不应超过生态系统的自我调节能力;另一方面,对人类利用强度较大的生态系统,应实施相应的物质、能量投入,保证生态系统内部结构与功能的协调。2.人口增长对环境的影响(9)我国人口剧增的原因是因为我国人口基数大。我国的控制人口过快增长的基本国策是计划生育。3.全球性的环境问题(10)全球性生态环境问题主要包括全球气候变化、水资源短缺、臭氧层破坏、酸雨、土地荒漠化、海洋污染和生物多样性锐减等4.生物多样性保护的意义和措施(11)生物圈内所有的植物、动物和微生物,它们所拥有的全部的基因以及各种各样的生态系统,共同构成了生物多样性。生物多样性的价值有潜在价值、间接价值(生态功能)和直接价值。(12)生物多样性破坏的原因有人类对资源的过度开发、破坏,对环境的污染,破坏食物链等。保护生物多样性可以概括为就地保护和易地保护,协调人与生态环境的关系。第九单元 生物技术实践一、传统发酵技术的应用1、果酒制作原理:酵母菌是兼性厌氧微生物。在缺氧、呈酸性发酵液中,酵母菌可以生长繁殖,而绝大多数其他微生物生长受抑制。 酵母菌在无氧条件下进行酒精发酵:C6H12O6→2C2H5OH+2CO2+少量能量2、果醋制作原理:当氧气、糖源都充足时,醋酸菌将葡萄汁中的糖分解成醋酸;当缺少糖源时,醋酸菌将乙醇变为乙醛,再将乙醛变为醋酸。3、果酒果醋制作流程:挑选葡萄→冲洗→榨汁→酒精发酵→果酒(→醋酸发酵→果醋)4、腐乳制作原理:多种微生物参与了豆腐的发酵,其中起主要作用的是毛霉。毛霉是一种丝状真菌。代谢类型是异养需氧型。毛霉等微生物产生的蛋白酶能将豆腐中的蛋白质分解成小分子的肽和氨基酸;脂肪酶可将脂肪水解为甘油和脂肪酸。在多种微生物的协同作用下,普通的豆腐转变成风味独特的腐乳。5、腐乳制作流程:让豆腐上长出毛霉→加盐腌制→加卤汤装瓶→密封腌制6、泡菜制作原理:制作泡菜所用微生物是乳酸菌 ,其代谢类型是异养厌氧型。在无氧条件下,将葡萄糖分解为乳酸。47、泡菜制作流程:8、测定亚硝酸盐含量的方法是比色法。二、微生物的培养和应用(一)微生物的培养与利用1. 微生物的培养和分离技术(1)微生物生长需要一般都含有水、碳源、氮源、无机盐(2)培养基的制作合格与否通过未接种的培养基表面是否有菌落生长来验证(3)常用的无菌技术有 1、对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒。2、将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌。3、为避免周围环境中的微生物的污染,实验操作应在酒精灯火焰附近进行。4、实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围物品相接触。考点细化:①灭菌是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物,包括芽孢和孢子。消毒是指用较为温和的理化方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物,不包括芽孢、孢子。②灭菌的方法有灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌,灼烧灭菌用于接种用的金属工具;干热灭菌用于能耐高温的,需要保持干燥的玻璃器皿等;高压蒸汽灭菌用于培养基等③消毒的方法有煮沸消毒法,用于液体消毒;巴氏消毒法,用于不耐高温的液体;化学药剂或紫外线消毒,用于物体表面的消毒。(4)微生物的纯培养指的是防止外来杂菌入侵。(5)配制固体培养基的步骤:计算、称量、溶化、灭菌、倒平板(6)微生物接种的方法最常用的是平板划线法和稀释涂布平板法。平板划线法是通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作。将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。在数次划线后培养,可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体,这就是纯化的菌落。稀释涂布平板法是将菌液进行一系列的梯度稀释,然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面,进行培养。分为系列稀释操作和涂布平板操作两步。考点细化:①平板冷凝后,要是有水滴滴到培养基上,会导致菌蔓延,这样就不能计数,分离了。为防止冷凝水滴到培养基上,所以培养时平板一定要倒置。②接种操作每次划线之前都要灼烧接种环,是因为每次操作都要及时灭菌,以防污染杂菌。操作结束时,仍然需要灼烧接种环的原因是防止杂菌污染环境。2. 特定微生物的数量的测定(6)测定微生物数量的方法有显微镜直接计数、统计菌落数目。3. 培养基对微生物的选择作用(7)在微生物学中,将允许特定种类的微生物生长,同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基,称做选择培养基。例如:在选择培养基的配方中,将尿素作为培养基中唯一的氮源,原则上只有能够利用尿素的微生物才能够生长。考点细化:①选择培养基配置的原理是增加或减去某种成分,使要选择的微生物能生长,其它微生物不能生长。②培养基中加入青霉素可以分离出酵母菌和霉菌③培养基中不加氮源可以分离出固氮微生物
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