1、EphA2在大肠腺癌中的表达,陈壬寅 李珊珊,郑州大学第一附属医院病理科 郑州大学基础医学院病理学教研室 河南省肿瘤病理重点实验室,第一部分,大肠腺癌中EphA2表达及其与临床病理学因素、DNA倍体、细胞周期关系的研究,EphA2基因的介绍,EphA2是Lindberg于1990年用简并引物从人角化细胞cDNA文库中筛选得到的一个Eph（Erythropoitin-produceing hepato-cellular,Eph) 亚家族成员 。 人EphA2基因定位于1p36.1,有17个外显子。Eph受体家族是已知最大的酪氨酸蛋白激酶受体(receptor tyrosine kinase, R
2、TK)家族最大的家庭。 Eph家族受体激酶和他们EFN配体介导的细胞信号传导参与神经系统的基本发生过程、神经系统的信号传递，在细胞的分化、发育、增殖，组织和器官的形成、血管生成、细胞与细胞之间的粘附及肿瘤的发生和肿瘤的新生血管的形成等过程中发挥重要的和必不可少的作用。,EphA2与肿瘤的关系,EphA2广泛高表达于不同的肿瘤组织和细胞系，如：乳腺癌、恶性黑色素瘤、前列腺癌和食管癌，肾细胞癌等，目前认为EphA2参与肿瘤的发生和发展，是功能强大的癌基因。 EphA2的高表达能诱导非转化乳腺和前列腺上皮细胞在体内、外的恶性转化，并促进其侵袭转移 。 应用EphA2蛋白的抗体靶向抑制试验，下调Eph
3、A2蛋白表达的同时，也抑制了肿瘤细胞的生长，进而降低肿瘤的恶性程度 。,154例大肠腺癌组织和相应正常大肠粘膜组织均来自郑州大学第一、二附属医院和河南省肿瘤医院2001年1月2004年12月手术切除标本的存档蜡块 (其中66例为手术切除新鲜标本和蜡块和88例存档蜡块),1份置4%多聚甲醛中固定存放,另2份置-82中存放,石蜡包埋、切片、 HE 染色,石蜡包埋、切片，进行免疫组化,提取总 mRNA、 进行RT- PCR,实 验 标 本,FCM检 侧DNA 倍体、细 胞周期 细胞增 殖率,临床病理资料,154例（88例存档石蜡包埋标本和66例手术切除新鲜大肠腺癌标本）大肠腺癌患者，术前均未接受化疗
4、、放疗及其他治疗。其中男性 78例，女性 76例，年龄在 23-85岁之间，平均年龄为 49.7岁。,66例新鲜手术切除标本均为大肠腺癌： 分化程度:高分化腺癌30例，中分化腺癌23 例，低分化腺癌13例。 浸润深度:粘膜层10例，粘膜下层0例，肌层14例，浆膜层37例，外周组织5例。 转移：有淋巴结转移者16例，无淋巴结转移者50例；有血道转移者1例，无血道转移者65例；无种植性转移。,88例存档蜡块全部为腺癌: 分化程度：高分化腺癌21例，中分化腺癌18例，低分化29例和未分化20例； 浸润深度：粘膜层62例，粘膜下层1例，肌层17例、浆膜层5例，外周组织3例； 转移：有淋巴结转移者14例
5、，无淋巴结转移者74例；有血道转移者11例，无血道转移者77例；有种植性转移者10例，无种植性转移者78例 。,技 术 路 线,免疫组化（SP法),FCM,RT-PCR技术,检测154例大肠腺癌组织和相应正常食管组织中EphA2蛋白表达,检测66例大肠腺癌手术切除新鲜组织和相应正常大肠粘膜手术切除新鲜组织中DNA倍体、细胞周期、细胞增殖率,探讨EphA2表达与大肠腺癌病理临床因素、DNA倍体、细胞周期的关系,检测66例大肠腺癌手术切除新鲜组织和相应正常大肠粘膜手术切除新鲜组织中EphA2mRNA表达,一. 免疫组化步骤 （略） 对照组设计：以已知EphA2阳性食管鳞癌和正常食管粘膜腺体组织切片
6、作为阳性对照，用正常兔IgG代替一抗作为阴性对照，用PBS代替一抗作为空白对照。免疫组化结果判定及定量分析：EPhA2免疫组化阳性表达位于细胞胞浆，呈棕黄色。定量分析采用高清晰图像处理系统，随机取10个高倍视野进行图像分析，对免疫组化切片检测EphA2阳性细胞数，依据阳性细胞所占肿瘤细胞面积的百分比和染色强度判断结果。,实 验 方 法,二 .组织中总RNA的提取及RT-PCR 步骤 （略）RNA浓度的测定 （略） 对照设置 ：（1）阴性对照：以去离子水代替提取 的总RNA，结果阴性。 （2）内参对照：用-actin作为内参引物，与EphA2和KAI1引物分别同管扩增，结果在紫外灯下出现一条33
7、0bp的荧光带 结果判定 阳性判断标准为：目的EphA2基因RT-PCR产物凝胶电泳后在紫外灯下分别出现一条586bp的荧光带。,实 验 方 法,取大肠腺癌和正常大肠粘膜组织0.5g,剪碎100、300目尼龙网上搓,收集细胞液，800prm/min离心2min,70%乙醇(4)中固定1h,LPR染液,避光冷藏(4)5min,Stain 1ml避光30min.,上机检测,FCM实验步骤：,FCM对照组设计和诊断标准：,设正常对照组：用正常人外周血淋巴细胞，即二倍体细胞作为DNA含量 和肿瘤细胞DNA倍体、细胞周期的参考标准 DNA倍体分析:用Partec流式细胞仪,计数10000个细胞,具有相同
8、DNA含 量的细胞群表现为直方图中独立的峰,即每个峰表示一定DNA含量或倍体 的细胞亚群。在正常对照组中,第1个峰代表单倍体(2C)细胞亚群,在实验 组中，第1个峰代表双倍体(G0/G1 ,2C)细胞亚群,第3个峰则代表四倍体 (G2/M，4C)细胞亚群，两峰之间代表S期细胞亚群。计算机系统算出每 个峰下的面积所表示的该倍体的细胞占全部细胞的百分比。诊断标准:根据左连富的标准,DNA倍体单倍体细胞百分数与正常对照组 单倍体细胞平均百分数相比较,在其两个标准差之内为正常,否则为异常。,FCM计算标准：,DNA指数(DI)计算公式：DI=样品细胞G1峰道数均值正常组织细胞G1峰道数均值。 DNA含
9、量分析:以DNA指数(DI)表示细胞DNA相对含量，根据DI值判断DNA倍体。0.9DI 1. 1 为DNA二倍体;DI 1. 1 为异倍体。 细胞周期分布的计算：运用DNA细胞分析软件，计算出各时相的分布百分比，以S期细胞比率(SPF)和增殖指数（PI）表示细胞的增殖活性。 SPF( %) = S ( G0/ G1 + S + G2M) 100 % PI=(S+G2)（G1+S+G2）100%,统计学处理,所有数据均经SPSS 12.0软件进行统计分析。计数资料计算阳性率，计量资料用采用XS表示；阳性率之间的比较采用2检验（chi-square）及Fisher确定概率计算法；两组均数的比较用
10、t检验(t-test)；两组以上均数的比较用方差分析（ANVOA）和 Spearman等级相关分析；两变量之间的关系分析采用相关分析；多变量之间的关系分析采用秩和Chi-sguare 检验；行程列表Chi-sguare检验。显著性水准=0.05。,结 果,EphA2mRNA及蛋白表达与大肠腺癌的关系：免疫组化结果,免疫组化检测结果： EphA2蛋白定位于癌细胞、粘膜上皮细胞及癌组织血管内皮胞浆内，呈棕黄色。 阴性对照均无阳性显示。,大肠腺癌组织及正常粘膜组织中EphA2蛋白的表达,正常粘膜 116(75.3) 6(3.9) 26（16.9） 6（3.9） 1.3690.663腺 癌 12（7.
11、8）32（20.8）48（22.7） 62（40.3）4.7890.542,组别 EphA2蛋白表达（例数%）a 阳性细胞面积（XS)b 0级 I级 II级 III级,一. 大肠腺癌组织和正常粘膜组织中EphA2蛋白表达,注：a:2=70.5706, P0.0001;b:2=90.523, P0.0001,正常粘膜组织中EphA2蛋白表达 SP法 200,大肠腺癌组织中 EphA2蛋白表达 SP法 200,二.EphA2蛋白表达在大肠腺癌癌细胞与癌组织中血管内皮细胞的比较,EphA2蛋白表达例数(%) 组别 0级 I级 II级 III级肿瘤细胞 200(11.2) 930(45.6) 700（
12、35.0） 170（8.2） 血管内皮细胞 170（8.3） 940（46.1） 690（34.5） 200（11.2）,注:2=1562.1481，2 =90.272， P0.000,大肠腺癌组织中癌细胞和血管内皮细胞EphA2蛋白的表达 SP法 400,三、EphA2蛋白表达与大肠腺癌患者临床病理学因素的关系 （A),临床病理 EphA2蛋白表达例数(%) 学因素 例数 0级 I级 II级 III级 P年龄a30 7 0 (00.0) 2 (1.30) 2 (1.30) 3 (1.95) 5170 79 4 (5.1) 16 (20.3) 26 (32.9) 33(41.8)70 30 5
13、 (16.7) 8 (26.8) 9(30.0) 8(26.8) 0.577 性别b男 78 7(9.0) 21 (26.8) 26(33.3) 2 4(30.9)女 76 5 (6.6) 11(14.5) 22 (28.9) 38 (50.0) 0.074 a: 2=7.580; b:2=6.928,临床病理 EphA2蛋白表达例数(%) 学因素 例数 0级 I级 II级 III级 P,肿 瘤部 位c升结肠 14 0 (0.0) 1 (7.1) 2 (14.3) 11 (78.6)横结肠 6 1（16.7） 1(16.7) 3(50.0) 1（16.7）降结肠 4 0(0.0) 1(25.0
14、) 2(50.0) 1(25.0)乙状结肠 23 3(13.0) 3(13.0) 8(34.8) 9(39.1)直 肠 86 4(4.7) 24(28.0) 28(32.6) 29(33.7) 结肠 24 4(16.7) 2(8.3) 5(20.8) 11(45.2) 0.0798 大体类型d隆突型 108 6（5.55） 25（23.14）31（28.7） 46（42.59）溃疡型 6 0 （0.00） 3（50.0） 3（50.0） 0（0.00）浸润型 27 3（11.11） 3（11.11）12（44.44） 9（33.33）管周型 13 3（23.08） 1（7.70） 5（38.4
15、6） 7（53.85） 0.0228,c:2=9.8600; d：2=7.5625,三、EphA2蛋白表达与大肠腺癌患者临床病理学因素的关系 （B),详细部位不清,EphA2蛋白表达与大肠腺癌患者临床病理学因素的关系(C),临床病理 EphA2蛋白表达例数(%) 学因素 例数 0级 I级 II级 III级 P,肿瘤体积 (直径cm)9.1 7 2(28.6) 2(28.6) 2(28.6) 1(14.2) 0.533,2=10.723,EphA2蛋白表达与大肠腺癌患者临床病理学因素的关系(D),临床病理 EphA2蛋白表达例数(%) 学因素 例数 0级 I级 II级 III级 P,分化程度a高
16、分化 51 3(5.0) 7(13.7) 18(35.3) 23(45.1)中分化 41 1(2.4) 9 (22.0) 18(43.9) 13(2.4)低分化 42 7 (16.7) 13(31.0) 10(23.8) 12(28.6)未分化 20 1(5.0) 3（15.0） 2(10.0) 14(70.0) 0.007a 浸润深度b粘膜层（T0） 72 6(8.3) 21(29.2) 24(33.3) 21(29.1)粘膜下层(T1) 1 0(0.0) 1(100) 0(0.0) 0(0.0) 肌层(T2) 31 2(6.5) 6 (19.4) 13(41.7) 10(32.3)浆膜层(
17、T3) 42 4(9.5) 2(4.8) 7 (16.7) 29(69.0) 外周组织(T4) 8 0(0.0) 2(25.0) 4(50.0) 2(25.0) 0.004b,A:2=22.730 ； b:2=29.225,EphA2蛋白表达与大肠腺癌的关系 (E),淋巴道转移c有 30 4 (13.3) 7(23.3) 12(40.0) 7(23.3)无 124 8(6.5) 25(20.2) 36(29.0) 55(44.3) 0.1207c 血道转移d有 12 0 (0.0) 1(8.3) 7(58.3) 4(33.3)无 142 12(8.5) 31(21.8) 41(28.9) 58
18、(40.8) 0.1348d 种植性转移e有 0 0 (0.0) 0(0.0) 7(70.0) 3(30.0)无 144 12(8.3) 32(22.2) 41(28.5) 59(41.0) 0.0783e,临床病理 EphA2蛋白表达例数(%) 学因素 例数 0级 I级 II级 III级 P,c:2=5.8205; d：2=5.565；e:2=6.8070,EphA2在大肠腺癌中的表达 SP法200 EphA2免疫染色定位于肿瘤细胞和血管内皮细胞的胞浆,强度I级,EphA2在大肠腺癌中的表达 SP法200,EphA2免疫染色定位于肿瘤细胞和血管内皮细胞的胞浆, 强度II级,EphA2在大肠腺
19、癌中的表达 SP法200 EphA2免疫染色定位于肿瘤细胞和血管内皮细胞的胞浆,强度III级,EphA2在大肠腺癌组织中的表达 SP法200 EphA2蛋白阳性染色定位在肿瘤区域和血管内皮细胞,EphA2基因RT-PCR结果,EphA2基因RT-PCR结果： 经RT-PCR扩增，目的条带为586bp。与EphA2引物同管扩增的-actin内参引物为 330bp的荧光条带。以去离子水代替提取的总RNA的阴性对照无任何荧光条带显示。,大肠腺癌癌组织和正常粘膜中EphA2mRNA表达,1 2 3 4 5 6 M,A Epha2 600bp B -actin 200bp,一.EphA2mRNA表达与大
20、肠腺癌临床病理学因素的关系,临床病理 Eph2mRNA EphA2/-actin 学因素 例数 + P (XS) P,正常组织 66 21 45 0.70750.3576癌组织 66 22 44 0.26a 0.85010.4610 0.54k 性别 男 33 13 20 0.36210.2314女 33 9 24 0.296b 0.20280.2996 0.888l 年龄30 1 0 1 0.35400.44630-60 40 19 21 0.79210.236460 25 3 22 0.006c 0.36910.4328 0.001m,EphA2mRNA表达与大肠腺癌临床病理学因素的关系(
21、A),A：2=0.161; b: 2=1.091; c: 2=10.322 k: F=6.277;l: F=0.20 ; m: F=11.405,EphA2mRNA表达与大肠腺癌临床病理学因素的关系(B),临床病理 Eph2mRNA EphA2/-actin学因素 例数 + P (XS) P 分化程度高分化 30 6 24 0.51620.6321中分化 23 11 12 0.74210.3261低分化 13 5 8 0.089d 0.50260.6741 0.499n 浸润深度粘膜层 5 2 3 0.50260.6459粘膜下层 5 2 3 0.36540.6598肌层 14 4 10 0.
22、86210.3654浆膜层 38 11 27 0.30110.3224外周组织 5 2 3 0.038e 0.71490.1190 0.000o,d: 2=4.837; e: 2=10.120; n:F=0.474; o: F=48465;,EphA2mRNA表达与大肠腺癌临床病理学因素的关系(C),临床病理 Eph2mRNA EphA2/-actin学因素 例数 + P (XS) P 转移淋巴道转移有 16 6 10 0.34620.1791无 50 16 34 0.685f 0.38960.1779 0.161p 血道转移有 1 1 0 0.24960.7961无 65 21 44 0.1
23、54g 0.24170.8192 0.953q,f: 2=0.165; g: 2=2.031; p: F=2.119; q: F=0.004;,EphA2mRNA表达与大肠腺癌临床病理学因素的关系(D),临床病理 Eph2mRNA EphA2/-actin 学因素 例数 + P (XS) P 部位升结肠 9 4 5 0.19850.751横结肠 2 1 1 0.24170.8192降结肠 0 0 0 0.00000.0000乙状结肠 16 6 10 0.24130.7231直 肠 39 11 28 0.720h 0.19510.7950 0.795r 肿瘤大体类型隆起型 38 17 21 0.
24、24130.7231溃疡型 22 4 18 0.24960.7211浸润型 3 0 3 0.23150.2339管周型 3 1 2 0.112i 0.23510.2996 0.366s 肿瘤体积(直径cm)5 32 14 18 0.43620.6655 34 8 26 0.082j 0.44610.674 0.060t,h: 2=1.337; i: 2=7.081; j: 2=3.033; r: F=0.342; s: F=1.076 t:F=9.286,1 2 3 4 5 6 MA Epha2 700bpB -actin 300bp,M: 标准分子量(100bp DNA ladder); A
25、: EphA2 cDNA，片段大小586bp; B： 内参照-actin, 片段大小330bp;1: 阳性对照：2：: 癌浸润浆膜层;3： 癌浸润肌层; 4： 癌浸润粘膜下层;5： 对应的正常粘膜6: 阴性对照,EphA2在大肠腺癌组织中的RT-PCR结果,二.大肠腺癌中EphA2蛋白表达与EphA2 mRNA表达的关系,大肠腺癌中EphA2蛋白表达与EphA2 mRNA表达的关系,EphA2 mRNA EphA2 protein + 合计 + 17 23 40 5 21 26 合计 22 44 66 2=0.25 ，P=0.6171,不同级别EphA2蛋白表达的大肠腺癌中的EphA2 mRN
26、A表达,EphA2蛋白表达分级 例数 EphA2/-actin (XS) 0 5 0.310.22I 3 1.120.30II 5 1.600.25III 9 1.390.31,注: 0:I:II:III F=17.811 P0.05,EphA2与DNA倍体、细胞周期和细胞增殖率关系,FCM检测结果,一.大肠腺癌和正常组织中DNA含量和DNA倍体,一.大肠腺癌和正常组织中DNA含量和DNA倍体的比较,病理临床因素 例数 DI (XS) DNA倍体 P 二倍体 异倍体 P 正常 组织 66 1.00.1 66 0 癌组织 66 1.670.19 0.005 7 59 0.005 a : F=6.
27、086;b：F=3.697;,二.大肠腺癌DNA含量和DNA倍体与病理临床因素的关系,二.大肠腺癌DNA含量和DNA倍体与病理临床因素的关系(A),病理临床因素 例数 DI (XS) DNA倍体 P 二倍体 异倍体 P 年龄30 1 1.100.17 1 0 30-60 40 1.260.21 5 3560 25 1.110.15 0.215c 1 24 0.086m 分化程度高分化 30 1.160.21 3 27中分化 23 1.230.16 2 21低分化 13 1.320.17 0.489d 2 11 0.455n,c: F=1.701;d：F=0.770; m:F=2.644;n:
28、F=0.890,大肠腺癌DNA含量和DNA倍体与病理临床因素的关系（B),病理临 例数 DI (XS) DNA倍体 床因素 P 二倍体 异倍体 P 性别 男 33 1.320.12 4 29 女 33 1.280.11 0.056 3 30 0.056,F=6.277;F=3.697,大肠腺癌DNA含量和DNA倍体与病理临床因素的关系(C),病理临床因素 例数 DI (XS) DNA倍体 P 二倍体 异倍体 P 浸润深度粘膜层 5 1.270.23 1 4粘膜下层 5 1.310.21 0 5肌层 14 1.300.22 2 12浆膜层 38 1.490.29 2 36外周组织 5 1.370
29、.15 0.11e 2 3 0.550o 淋巴道转移有 16 1.310.20 2 16 无 50 1.430.16 0.224f 5 45 0.224p 血道转移有 1 1.430.33 0 1无 65 1.390.20 0.938g 7 58 0.967qe：F=4.016; f：F=1.684; g：F=0.006; o: F=0.363;p: F=1.684;q: F=0.086,大肠腺癌DNA含量和DNA倍体与病理临床因素的关系（D),病理临床因素 例数 DI (XS) DNA倍体 P 二倍体 异倍体 P 部位升结肠 9 1.480.23 1 8横结肠 2 1.390.31 1 1降
30、结肠 0 1.100.20 0 0乙状结肠 16 1.460.26 2 14直 肠 39 1.430.21 0.765h 3 36 0.909r 肿瘤大体类型隆起型 38 1.430.21 3 35溃疡型 22 1.360.20 2 20浸润型 3 1.390.31 1 2管周型 3 1.660.23 0.432i 1 2 0.371s 肿瘤体积(直径cm)5 32 1.490.31 4 285 34 1.660.23 0.086 j 3 31 0.761t h：F=0.274; i：F=0.913; j:F=2.644; r: F=0.097; s:F=0.816;t:F=0.094,正常大
31、肠粘膜组织的细胞周期 分布 和DNA倍体,大肠腺癌的细胞周期分布，出现异倍体峰,三.大肠腺癌组织中EphA2蛋白和EphA2mRNA表达与DNA倍体和DI的关系,大肠腺癌组织中EphA2蛋白和EphA2mRNA表达与DNA倍体和DI的关系,EphA2 例数 DI (XS) DNA倍体 P 二倍体 异倍体 P 蛋白表达阳性 40 1.760.26 4 36阴性 26 1.690.32 0.903a 3 23 0.745c mRNA表达 阳性 22 1.790.31 4 18阴性 44 1.870.39 0.273b 3 41 0.518d a: F=0.016;b: F=1.243;c: F=0
32、.413;d: F=0.426,四.大肠腺癌DNA倍体与SPF、PI的关系,大肠腺癌DNA倍体与SPF、PI的关系,DNA倍体 例数 SPF( XS) P PI(XS) P 二倍体 7 11.062.52 20.732.52 异倍体 59 13.142.04 0.042a 23.32.66 0.032b 注：a: 2 =1.2; b: 2 =1.1,讨 论,EphA2蛋白的表达结果分析,一. EphA2在正常大肠粘膜上皮中的表达结果分析,1.EphA2 在正常大肠粘膜上皮低表达，阳性率仅为24.67%（38/154），且阳性细胞III级染色仅占3.9%，阳性细胞大部分定位于大肠粘膜隐窝上皮基底
33、部的胞浆,少量阳性细胞亦可见于表面粘膜腺体，提示可能EphA2作用于增殖期上皮细胞，也可能参与细胞分化。 2.本研究发现的EphA2在正常大肠粘膜上皮和血管内皮细胞的表达和分布模式提示，EphA2可能参与了正常大肠粘膜上皮的增殖过程。,二. EphA2在大肠腺癌中的表达结果分析 (1),EphA2广泛高表达于许多人类肿瘤，无论从肿瘤细胞还是肿瘤组织的检测都高表达，包括：乳腺癌、恶性黑色素瘤、前列腺癌、食管癌、肺癌和宫颈癌。本研究发现，相比正常大肠粘膜上皮，EphA2在腺癌组织中高表达，统计学分析差异有明显显著性(P0.001)，表明EphA2高表达可能与大肠腺粘膜上皮的癌变相关。,EphA2高
34、表达与大肠腺癌的生长方式、癌的组织学分级、癌细胞浸润深度相关，表明EphA2的高表达导致癌细胞恶性程度和侵袭性增加，使其更易发生浸润。EphA2高表达与淋巴道转移、血道转移、种植性转移无关，表明EphA2的高表达与大肠腺癌癌细胞的转移潜能无关。,二. EphA2在大肠腺癌中的表达结果分析(2),三. EphA2蛋白在大肠腺癌组织中血管内皮细胞的阳性表达结果分析,本研究发现在大肠腺癌组织中，EphA2阳性表达也见于血管内皮细胞，通过大肠腺癌细胞和血管内皮细胞EphA2阳性表达细胞计数对比，两者呈正相关，表明EphA2参与肿瘤组织中的血管形成，从而促进肿瘤的生长、发展。,EphA2mRNA 的结果
35、分析,一、EphA2mRNA表达与大肠腺癌临床病理学因素关系的结果分析,应用RT-PCR技术，本研究发现在大肠腺癌组织中，EphA2mRNA表达与大肠腺癌患者的发病年龄相关，可能随着肿瘤患者年龄变化，与体细胞存在基因突变的积累或基因修复系统功能低下或DNA甲基化相关。EphA2mRNA表达与大肠腺癌的浸润深度相关，表明：EphA2调节大肠腺癌细胞的迁移和黏附能力，参与大肠腺癌的演进过程。,二、EphA2mRNA表达与其蛋白表达的关系,EphA2蛋白0级表达的mRNA水平明显低于蛋白表达13级的mRNA，但二者在蛋白表达13级的样本中mRNA水平并无差异，这与前述的报道类似，提示在大肠腺癌中Ep
36、hA2蛋白与其mRNA表达水平不完全一致。这种结果的确切机制还不是很清楚，EphA2mRNA的表达水平高而蛋白水平低，提示二者在大肠腺癌中并不完全在转录水平调节，某种转录后翻译水平的调控机制可能存在。,FCM的结果分析,一、大肠腺癌组织中DNA倍体、细胞周期、癌细胞增殖率与临床病理因素的关系 (1),大肠腺癌中异倍体细胞群占83.39%，明显高于正常大肠粘膜组织。表明大肠腺癌有较高的恶性程度，但异倍体细胞群增高与临床病理因素无关，可能是取材标本组织成份为肿瘤细胞与间质正常细胞混合群体，影响检测分析。,本实验结果表明癌组织中异倍体癌及明显高于二倍体癌组织，而我们66例大肠腺癌标本中89.39%出
37、现异倍体癌，表明大肠腺癌癌细胞增殖分裂能力异常强大，具有无限分裂增殖的特性。,一、大肠腺癌组织中DNA倍体、细胞周期、癌细胞增殖率与临床病理因素的关系 (2),二、EphA2表达与DNA倍体、细胞增殖的关系,大肠腺癌组织中DNA倍体、DI值、及细胞殖率明显增高，表明癌细胞增值能力强，具有无限分裂增殖的特性。但与EphA2基因的表达无关，提示EphA2基因的表达与细胞的增值速度无关。,小 结,1EphA2蛋白的阳性表达在大肠腺癌组织中明显高于正常大肠粘膜组织，且EphA2蛋白的高表达与癌的大体类型、分化程度及浸润深度相关，提示EphA2的高表达可能与大肠腺癌的癌变有关，并提示癌细胞具有更强的侵袭
38、力。 2EphA2蛋白也定位于大肠腺癌的血管内皮细胞，提示EphA2基因表达参与了大肠腺癌的微血管生成，有望成为大肠腺癌基因治疗的新靶点。,4EphA2表达与KAI1的表达无相关性，提示在大肠腺癌中，EphA2和KAI1可能通过不同的调节通路参与大肠腺癌的发生及浸润转移。 5大肠腺癌组织中DNA异倍体、DI值及细胞增殖率明显增高，表明癌细胞增殖能力强，但与 EphA2基因的表达无关，提示EphA2基因的表达与细胞的增殖速度无关。,谢谢！ 陈壬寅：,我劝一个草率结婚的朋友离婚。她平静的告诉我，如果说当初鲁莽结婚是个错误。那么，现在草率离婚是一错再错。这位朋友后来还是离婚了，大家一致认为她的行为很
39、理性。 同样的故事正在互联网搜索巨头谷歌身上发生，但是谷歌选择了草率“离婚”。 饮鸩止渴 由于急于抑制苹果iphone手机翻天覆地的产业冲击，谷歌采取急功近利的粗糙型开放策略。饮鸩止渴的策略一时取得了成果。市场研究公司尼尔森最近公布的数据显示，在通过Verizon Wireless、AT&T和Sprint Nextel三大运营商经销后，谷歌Android手机在美国市场上的销售量已经超过iPhone。另一家市场研究公司iSuppli甚至认为，全球范围内使用Android操作系统的手机数量将在 2012年超过苹果iPhone。 表面繁华的背后，是Android生态系统的一团糟，谷歌正在为自己的粗放
40、型开放策略买单。 用户对谷歌手机的态度从开始的好奇、后来的犹豫，变成强烈的批评。“大多Android手机程序都是垃圾，乱七八糟的”，一位手机发烧友迅速投奔了iphone的阵营：“同样的植物人大战僵尸游戏，在谷歌手机和iphone手机上的体验简直没法比” 混乱，还是混乱。一切一切的乱象，折射出谷歌已经失去对Android生态系统的控制。这一切的根源，我的判断是开放策略初期过于宽松，导致失去控制权。混乱的生态系统表现在用户手机上，就是应用程序的混乱和粗燥。 一错再错 为此，谷歌开始采取对策。最近，有国内厂商称新的Android3.0开始关闭应用程序的API(应用程序编程接口)，统一Android界
41、面。这意味着，谷歌将放弃其初始开放策略，开始封闭管理。 粗看之下，谷歌认识到自己的错误。既然是过度开放导致的错误，那么收紧开放尺度是很自然的逻辑，无懈可击。但我认为，谷歌仓促收紧开放策略仍然是个错误。打个比喻。如果过度开放的政策是草率结婚，那么草率的封闭就是草率离婚。这么判断的原因很简单，谷歌把Android开放出去的那一天，Android已经不属于谷歌。谷歌没有认识到这一点，还以为Android只是自己的。 合作伙伴对谷歌封闭政策的反应加强了我的判断结论。经济观察报报道，国内第一家生产基于Android平台手机的设计公司创杨通信，近日已经被迫出售。创杨通信负责人给出的出售理由是，“因为不愿意
42、甘当炮灰而选择放弃。” 按照目前Android3.0将统一界面的想法，未来的手机市场将出现毫无差异化的产品。这对于企业来说，几乎意味着不可避免的价格战。利润空间的微薄，导致合作伙伴生存环境恶劣。于是大量退出几乎是一种必然。 除了为合作伙伴找到新的利益空间，谷歌还将面临开放阵营精神层面的声讨，这对谷歌的挑战会更大。如果说谷歌为了自己竞争的私利利用了开放，赢得了名声。那么，谷歌不能一脚把开放踢开，他现在还需要为这种名声买单。 如果只顾自己收网，谷歌会被面临铺天盖地的道德谴责。谷歌，希望你准备好了，三思而行。 木桶效应就是指一个水桶无论有多高，它盛水的高度取决于其中最低的那块木板。这在选购手机的时候
43、也同样适用。尤其是很多用户在购买手机的时候， 都会专注于某一个参数，比如要求处理器主频要高达1GHz，但一部手机的整机表现是由多个因素组成，所以在购买手机的时候一定要从整体的角度上来看一部手 机的性除了处理器主频以外，其实还有很多影响整机表现的元素，比如运行内存(RAM)、机身内存(ROM)、操作系统、厂商对系统的优化都会有所影 响。不过在很多用户眼中，这几项却远没有处理器主频重要。而如果忽略这几项的话，可能买到一个主频很高，但整机性能却仍然不令人满意的机型。 用户在-财务部员工 老子不求人，人人求老子！于是乎，这帮狗屎们天天拽得好像自己是救世主是其他员工的再生父母一样，牛！超级牛！100牛！
44、我活这么大了还真没看到过不牛的财务，这帮人其实在公司是同事们最不敢得罪、但更是最让人看不起，人际关系最差的一群人，当然，据我观察，也是离婚率最高的一类人。 最有城府最有心计的人-人力资源部员工 每天的工作就是算计如何搞出用最小代价换取最大回报的提议来讨好老板，看谁不顺眼就想方设法算计如何在考核、薪酬奖金分配方面给他穿小鞋的鸟人。：智商最高情商最差的人-研发部员工 技术过硬，为人木衲。上台发言三分钟 搞不出一句话来，向领导汇报工作结结巴巴没 更多精品文档请访问我的个人主页http:/ 谢，再见！个半小时理不出个头绪来。企业中最好管理的一群伪知识分子，可以被任意剥削，基本上不会反抗，或者从来就没有
45、过反抗的意识 最吊儿郎当和无耻的人-销售部员工 老板们财富的来源，老板们最想讨好的一群人，这群人其实也是最无耻公司内口碑最差却又人际关系最和谐的一群人。天天吊儿郎当的来公司报个到，调戏一下前台，和狐朋狗友打打电话，10点不到就开始琢磨找借口出门拜见客户，其实下午就是上 所述，大家在选购手机的时候一定要综合考虑一款手机的硬件规格。除此之外，也不要把硬件看的太过重要，就比如苹果iPhone 3GS在硬件配置上并不出众，但却在操控手感以及软件资源上目前难有机型企及。更高分辨率能获得更为逼真细腻的显示效果，所以对于屏幕的分辨率绝大多数人都会偏向于分辨率更高的机型。但对于笔者 所说的高分辨率未必是好事会有所怀疑。其实这里说的高分辨率“不好”更多是指采用非主流的高分辨率机型。在此前，就有几款“悲情”机型在分辨率上吃了不小 的亏。 大名鼎鼎的HTC Diamond就是一款颇具代表意义的机型，Diamond上市的手机市场还处于QVGA时代、只有少数旗舰机皇采用WVGA这样级别的屏幕，由于HTC Diamond却采用了VGA这一过渡型的分辨率，而也正是因为这一点，Diamond很多软件都未有支持或无法完美运行，可谓是一个不小的遗憾。除此之 外，曾经非常经典的,
