1、广西近岸海域麻痹性贝类毒素分析第 24 卷第 3 期2005 年 8 月海洋环境科学MARINEENVIR0NMENTALSCIENCEVo1.24.No.3Aug.2005广西近岸海域麻痹性贝类毒素分析卢楚谦一,吴施卫,张纯超,余汉生,朱小山,刘孟兰(1 中旧海洋人学环境科学与 J:程学院,山东青岛 266003;2.国家海洋局南海环境监测中心,广东广州 I510300)摘要:通过对近年来广西近岸海域贝类样品的麻痹性贝毒素小白鼠生物法和高效液相色谱法检测结果的分析,表明广阿近岸海域多处地区和多种生物有麻痹性叭毒素;4 5 门及 711 月为两个毒性值的年高峰期;Gq,X,GTX5 和 G1,
2、x3 毒素成分的检牢较高等关键词:广西近岸海域;麻痹性贝毒素;小门鼠生物法; 高效液相色谱法中图分类号:$944.3;R99 文献标识码:A 文章编号:1007.6336(2005)03.0047.04AnalysisofparalyticshellfishpoisoninshellfishintheoffshoreoftheGuangxiLUChuqian,WUShiwei2,ZHANGChunehao2,YUHansheng2,ZHUXiaoshan2.LIUMeng.1an2(1.CollegeofEnvionmentS(ieneean(1Engineering,OceanUnivers
3、ityofChina.Qingdao266003.China;2.SouthChinaSeaEnvironmentMonitoringCenter,SOA,Guangzhou510300,China)Abstract:Theparalytieshellfishpoison(PSP)lmellf】theshellfishintheeo,4toftheGuangxilateryearsweredeternfinedtytheM(,useBioassayandHPICrrhedetectedresultsshowedthatPSPtoxieitiesweredetectedinthespecieso
4、fmanyshellfishatthesamplingstations.ThedetectedresultswerehighinApr. MarandJubN0,.Thedetectedratiosarehighfor(Tx4,GTXsandGTX3.Keywords:alongshoreseaareaoftheGtmngxi;pared3ticshellfishpoisoning;nlousebioa.ssa3;HPLC麻痹性贝类毒素(paralvtishellfishpoison.ing,PSP)是目前已知贝类毒素中,分布最广,毒性最强,对人类威胁最严重的毒素,已知这种毒素有 20 种以上
5、的天然衍生物.为了确保水产品的食用安全,许多国家已将贝类主产区的 PSP 列为全年常规监测项目我国是贝类养殖大国,南北沿海均有 PSP 存在,其已成为影响我围海产贝类安全食用和商品出口的主要海洋生物毒素,危及水产贝类养殖的健康持续发展.有关广西近岸海域麻痹性贝毒素的成分,含量等情况的资料很少.本文就我们近几年来的有关调查检测结果予以报道,并进行初步分析:1 材料和方法1.1 样品采集和处理于 2001 年 11 月至 2004 年 4 月间,在广西的涠洲岛,北海,铁山港和防城港进行了样品采集(大部分样品为现场采集,少量样品通过市场购买并同时向卖主了解其原产地资料),所采样品均为当地主要的养殖和
6、食用贝类.样品采集后,立即在现场对样品进行预处理:用干净的海水洗去贝类外壳的附着物后,再用解剖刀将贝类的软组织与贝壳分离;用于高效液相色谱检测的部分样品,用解剖剪将软组织的消化腺与其他组织分离,称量后置人保鲜食品袋内,冻冷保存转移至实验室,于.26qC 低温冰箱中保存.采样海域见图 1.1.2 检测方法和条件多数样品采用小白鼠生物检测法,但为了解毒素的成分情况,部分样品采用高效液相色谱(HPLC)检测法.收稿日期:200406.03,修订日期:20040810基金项目:围家海洋局海洋科学技术研究项日(国海汁财字 2000:134 号)作者简介:卢楚谦(1975.), 男 ,广东惠来人,工程师,
7、工程硕士,长期从事海洋环境监测和研究工作.48 海洋环境科学第 24 卷图 1 广西近岸海域贝类样品采集地点Fig.1SamplingsitesforshellfishPSPdetectioninthecoastofGuangxi1.2.1 小白鼠生物检测法(MOtlSebioassav)采用海洋监测规范第 7 部分1“近海污染生态调查和生物监测“中赤潮毒素 麻痹性贝毒的检测方法(GB17378.7.1998).选择健康无孕的雌性 BALB/c 小鼠,每只重量约 1822g,每个样品使用 9 只小白鼠.采用腹腔注射方法,由受试小白鼠的重量和死亡时间,按一定关系式计算毒素含量.毒素含量以鼠单位表
8、示.1.2.2 高效液相色谱检测法(HPLC)采用 Oshima 麻痹性贝毒素高效液相色谱(HPLC)检测法_2j.样品在经室温解冻后,用美国分析化学家协会(AOAC)推荐的小白鼠生物测定法_3_3 提取毒素,提取的毒素液经滤纸过滤后取约 0.5mL 的过滤液于 10000 道尔顿(Dalton) 的超滤离心管(美国 Millipore 公司生产),经高速离心510min 后取过滤液进行 HPLC 分析.实验所用的 PSP 毒素标准品由暨南大学水生生物研究所提供.荧光检测器为 RF.10Axl(日本岛津公司生产),激发波长 330nm,发射波长 390nm;色谱柱为 InertsilC85,1
9、50mm4.6mm(美国 Inert.sil 公司生产);柱后反应温度为 80,流动相流速为 0.8mL?min 一,柱后氧化剂流速为 0.4mL?min,酸化剂流速为 0.4mL?min.国际上常用鼠单位(Mu)或石房蛤毒素(saxi.toxin)的当量/lgSTX 表示贝类所含的 PSP 毒性.1Mu 表示一只重 20g 的小白鼠在 15min 内死亡所需的腹腔注射的毒素剂量.石房蛤毒素,因PSP 各成分毒性大小不同,依其毒性大小_4,转换成 STX 值,以 tlgSTXeq 表示.本文用每 100g 组织毒素含量 p(Mu),表示 100g 壳内全部软组织所含的毒素含量(Mu);用 gS
10、TXeq?100g,表示100g 贝类软组织(或壳内全部软组织,或消化腺)所含的 PSP 石房蛤毒素的毒性.我国目前规定的麻痹性毒素的警戒标准是 80tgSTXeq/100g软组织(相当于 400Mu/100g 软组织).2 结果与讨论2.1 小白鼠生物法检测结果采用麻痹性贝毒素小白鼠生物检测方法对2002 年 9 月至 2004 年 4 月间样品进行了检测,其检测结果见表 1.2.2 高效液相色谱法检测结果采用 Oshima 麻痹性贝毒素高效液相色谱(HPLC)检测法对 2001 年 11 月至 2002 年 9 月间的样品进行了检测,其检测结果见表 2.2.3 广西近岸海域麻痹性贝毒素分布
11、的特点在时间上,45 月及 711 月为两个毒性值的年高峰期,79 月间,尤其要特别注意.2003年 79 月潮监份,涠洲赤潮监控区样品超标严重,达 2.153.54 倍.2002 年 9 月北海文蛤的消化腺也超标达 2.67 倍.在贝类种类上,染毒的品种具有普遍性.已检测的所有品种中,除菲律宾蛤仔外,文蛤,长牡蛎,箱形栉孔扇贝,华贵栉孔扇贝,波纹巴非蛤均已检测出较高的毒性值.其中文蛤,长牡蛎,箱形栉孔扇贝,华贵栉孔扇贝有超标现象,波纹巴非蛤也接近警戒值.从染毒部位来看,除防城港 2001 年 l1 月的文蛤样品外,消化腺的毒性值高于壳内全部软组织.2002 年 9 月北海文蛤样品小白鼠法结果
12、为检不出,但其消化腺用高效液相色谱检测结果为213.68tgSTXeq/100g 软组织,超警戒标准 2.67倍,且多为高毒性的 GTX 成分,占总毒性值的86.5%.2001 年 11 月份铁山港文蛤样品的消化腺,也有超标现象.从地理分布看,在所有检测样品中,涠洲赤潮监控区有 3 个样品超标,分别在 2003 年的 7,8,9月份,为警戒标准的 2.153.54 倍,另在 2003 年的 5 月和 2004 年的 4 月,也具有较高的毒素含量,分别是 318.2(6)和 349.7(8).北海 2003 年10 月的样品达 419.8(5),超标 1.04 倍,另在2002 年 9 月文蛤的
13、消化腺中,也有超警戒标准 2.67 倍的检测值.铁山港 2001 年 11 月的样品,其消化腺和壳内全部软组织,有轻微超标,分别为1.04 和 1.06 倍.防城港的样品虽有一定毒性值,第 3 期卢楚谦等:广西近岸海域麻痹性贝类毒素分忻表 1 广西近岸海域贝类中麻痹性贝毒素含量Tab.1PSPtoxicityofshellfishinnearshorewatersinGuangxi,MoLIsebioassav,49注:()内的数值表示 9 只小白鼠中的死个数表 2 广西近岸海域贝类中麻痹性贝毒素含量Tab2.PSPtoxicityofshellfishinnearshorewatersinG
14、uangxi,HPIC注:“腺 “指消化腺 ;“全身“指壳内全部软组织 ;“总毒性“为 8 种毒素成分依其毒性大小,转换成 STXff,然fl 】加;m1“ 指榆不出但没有超标现象.总之,根据检测结果的初步结出率,分别为 36.4%和 27.3%.从各毒素成分的论是:在四个海域中,主要染毒区是涠洲赤控区,比毒性一(STX2483,GTXI2468,GTx41803,其次是北海和铁山港,防城港最小.另外,同为涠GTX31584,GTX2892,C2239,GTX5160,CI15)看,洲赤控区,因采样点的不同,毒性值也相差悬殊,高毒性的 STX2483 和 GTX2468成分的检 m 率如 20
15、03 年 9 月小白鼠法的检测结果.不高,且均在消化腺中才柃测出,仉中毒性的对同一地点,同一生物品种 2002 年 9 月和 GTX1803 和 GTX31584 成分的 f:;=出j 荐较高,广2003 年 10 月小白鼠法的检测毒素值进行比较,泛分布在消化腺和可食部分.其 2003 年的检测值高过 2002 年.麻痹性贝类毒素,大多数是外源性毒素,来源从毒性成分看,在已检测的 11 个样次中,对于有毒藻毒素.但在中网海湾忠6和我们的已检? 贝 0 的 8 种成分来说,GTX,GTX5 和 GTX3 检有关调查中,广西近岸海域未发现能引起麻痹性出率最高,分别为 100%,91%和 82%.G
16、TX2 和贝毒素的相关有毒藻的存在.因此,其毒素来源STX 的检出率最低,均为 9.1%,且仅在消化腺中尚待进一步的研究 .但根据藻种组成进行危害/检测出.GTXl 检出率为 27.3%.c1 和 c2 的检毒性判断也有很大的局限性 ,因为这种判断是基海洋环境科学第 24 卷于人们以往对藻种毒性的研究基础,但由于人们对藻种的鉴定有时还存在一定的困难_7,对赤潮藻的毒性类型的了解也还很不全面;而且,同种藻不同藻株或同一株藻的不同状态,不同时间下,其毒性都可能有差异.有关的研究表明,能引起麻痹性贝毒素的有毒藻孢囊存在于一定海区的底泥中,且通常以年轻的比年老的细胞毒,休眠的比浮游的毒性大,底栖性贝类
17、因其滤食性,就会累积刚萌发的年轻或休眠孢子於其体内,因而染毒;广西近岸海域贝类染毒的原因是否是如此,也有待研究.另外,广西作为西南的主要出海通道,由国际贸易引起的外来有毒藻种的侵害,也应引起高度的重视3 结论环境监测表明,广西近岸海域的海水污染呈现加剧趋势.除了人海生活污水和工业废水的增加外,不合理开发海洋以及不断扩张的海水养殖是其近岸海域的主要污染源.目前广西近岸海域麻痹性贝毒素的基本情况是:(1)在时间上,4 5 月及 7l1 月为两个毒性值的年高峰期,79 月间,尤其要特别注意.(2)在贝类种类上,染毒的品种具有普遍性.(3)消化腺的毒性值一般高于壳内全部软组织(4)主要染毒区是涠洲赤潮
18、监控区,其次是北海和铁山港,防城港最小.(5)2003 年的检测值高过 2002 年.(6)高毒性的 STX 和 GTX 成分的检出率不高,且均在消化腺中才检测出.但中毒性的GTX 和 GTX 成分的检出率较高,广泛分布在消化腺和可食部分.参考文献:1GB17378.7.1998,海洋监测规范S.12JOSHIMAY.Post-columnderivatizationHPLCmethodsforDar.alytieshellfishpoisons【Aj.HALLEGRAEFFG,ANDERSONDM,CEMBELLAAD.eta1.Manualonharmfulmarinemi.eroalga
19、e【Cj.France:UNESCOSWorkshops,1995.81.943AssociationofOfficialAnalyticalChemist(AOAC).StandardmousebioassayforparalyticshellfishtoxinsA.HORWITZP.OfficialmethodsofanalysislC.WashingtonDC:AssociationofOfficialAnalyticChemists,1980.298-299.4周宏农.水产品藻源毒素检测操作手册M.基隆:水产出版社.1999.23.53.5中华人民共和国渔政渔港监督管理局.贝类生产环境卫生监督管理暂行规定J.中国水产,1998,5:6.11.6中国海湾志编篡委员会.中国海湾志(第十二分册)M.北京:海洋出版社,1999.414.416.7于仁诚 ,周名江.麻痹性贝毒研究进展J.海洋与湖沼 ,1998,29(3):330.338.8王朝晖 ,齐雨藻,吕颂辉.有毒亚历山大藻和链状裸甲藻孢囊在中国沿海的分布J.海洋与湖沼,2003,34(4):422.430.
