1、王 伟，章 国 磊，李 铮，等.林 下 参 提 取 物 对 慢 性 不 可 预 知 温 和 应 激 模 型 小 鼠 抑 郁 样 行 为及HPA轴 影响J.食 品 工 业 科 技，2023，44（14）：377385.doi:10.13386/j.issn1002-0306.2022090267WANG Wei,ZHANG Guolei,LI Zheng,et al.Effects of Understory Panax ginseng Extract on Depression-like Behavior and HPAAxis of Chronic Unpredictable Mild St
2、ress Model MiceJ.Science and Technology of Food Industry,2023,44(14):377385.(inChinese with English abstract).doi:10.13386/j.issn1002-0306.2022090267营养与保健林下参提取物对慢性不可预知温和应激模型小鼠抑郁样行为及HPA轴影响王伟，章国磊，李铮，陆勃帆，李慧*，吴巍*（长春中医药大学吉林省人参科学研究院，吉林长春 130117）摘 要：目 的：研 究 林 下 参 提 取 物（understory Panax ginseng extract，UPGE
3、）对 慢 性 不 可 预 知 温 和 刺 激（chronicunpredictable mild stress，CUMS）模 型 小 鼠 抑 郁 样 行 为 及 下 丘 脑-垂 体-肾 上 腺（hypothalamic-pituitary-adrenal，HPA）轴 的 影 响。方 法：超 高 效 液 相 色 谱-串 联 质 谱（UPLC-MS/MS）方 法 鉴别UPGE 中 的 皂 苷 成 分。将60只 雄性 昆 明 小 鼠 随 机 分 为 空 白 组（Control），模 型 组（CUMS），文 拉 法 辛 组（10 mgkg1 Ven）以 及 林 下 参 提 取 物 组（100 mgkg
4、1 UPGE）。除 空 白 组 外，均 采用CUMS诱 导 各 组 小 鼠 抑 郁，灌 胃 给药21 d 后 通 过 小 鼠 体 质 量，进 行糖 水 偏 好 实 验，旷 场 实 验，水 迷 宫 实 验 分 析 其 行 为 学 变 化；采 用 酶 联 免 疫 吸 附 测 定 法（enzyme linkedimmunosorbent assay，ELISA）检 测 促 肾 上 腺 皮 质 激 素 释 放 激 素（corticotropin-releasing hormone，CRH），促 肾 上腺 皮 质 激 素（adrenocorticotropic hormone，ACTH）和 皮 质 酮（
5、corticosterone，CORT）的 含 量，苏 木 精-伊 红 染 色（hematoxylin-eosin staining，HE）法 观 察 小 鼠 海 马 CA1，CA3区 神 经 元 细 胞 病 理 变 化，原 位 末 端 标 记 法（TUNEL）显 色 法 检 测 海 马 区 细 胞 凋 亡 情 况。结 果：UPGE中含16种 皂 苷 成 分。相 比 于 模 型 组，UPGE给 药 组 小鼠 糖 水 偏 好 度 显 著 提 升（P0.01）、旷 场 实 验 中 水 平 运 动 距 离 增 加 和 垂 直 站 立 次 数 增 加（P0.05，P 0.01）、水迷 宫 实 验 中
6、逃 避 潜 伏 期 降 低（P0.05）、增 加 目 标 象 限 停 留 时 间、穿 越 平 台 次 数（P 0.05，P 0.01）、能 够 缓 解海 马 神 经 元 细 胞 的 损 伤，血 浆中ACTH、CORT 和CRH 水 平 降 低（P 0.05），海 马 区 细 胞 凋 亡 率 降 低（P 0.05，P 0.01）。结论：UPGE 有显著的抗抑郁作用，其作用机制可能与调节HPA轴功能有关。关键词：林下参，慢性不可预知温和刺激，下丘脑-垂体-肾上腺轴，抑郁本文网刊:中图分类号：TS201.4 文献标识码：A 文章编号：10020306（2023）14037709DOI:10.1338
7、6/j.issn1002-0306.2022090267EffectsofUnderstoryPanaxginsengExtractonDepression-likeBehaviorandHPAAxisofChronicUnpredictableMildStressModelMiceWANGWei，ZHANGGuolei，LIZheng，LUBofan，LIHui*，WUWei*（Changchun University of Chinese Medicine,Jilin Ginseng Academy,Changchun 130117,China）Abstract：Objective:To
8、explore the effect of understory Panax ginseng extract(UGPE)on depression-like behavior andhypothalamic-pituitary-adrenal(HPA)axis of chronic unpredictable mild stress(CUMS)model mice.Methods:Ultra-highperformance liquid chromatography-tandem mass spectrometry(UPLC-MS/MS)were used to detect the cont
9、ents ofginsenosides.Totally 60 male Kunming mice were randomly divided into four groups:Control,model,positive venlafaxine(10 mgkg1 Ven)and UGPE group(100 mgkg1 UPGE).The depression model was induced by CUMS in mice except forthose in the control group,they were received corresponding drug by intrag
10、astric administration for 21 days.The sucrose 收稿日期：20220926 基金项目：国家自然科学基金（No.82003969）；吉林省教育厅项目（JJKH20220883KJ）；吉林省科技厅项目（YDZJ202201ZYTS162）；长春中医药大学青年科学家项目（QNKXJ2-2021+zr21）资助；吉林省卫健委项目（No:2020Q027）。作者简介：王伟（1997），男，硕士研究生，研究方向：中药分析学，E-mail：。*通信作者：李慧（1984），女，博士，副研究员，研究方向：中药制剂研究，E-mail：。吴巍（1974），女，博士，研究员
11、，研究方向：质谱分析研究，E-mail：weiwu_。第 44 卷 第 14 期 食品工业科技 Vol.44 No.142023 年 7 月 Science and Technology of Food Industry Jul.2023 preference test,open field test and Morris water maze experiments were conducted to analyze their behavioral changes.Thecontents of corticotropin-releasing hormone(CRH),adrenocorti
12、cotropic hormone(ACTH)and corticosterone(CORT)inplasma were measured by enzyme linked immunosorbent assay(ELISA).Hematoxylin-Eosin(HE)staining was used toinvestigate the pathological changes of neurons in the CA1 and CA3 area of hippocampus.The apoptosis of hippocampalneurons was observed by termina
13、l-deoxynucleoitidyl transferase mediated nick end labeling(TUNEL)method.Results:UPGE contained 16 ginsenosides.Compared with the model group,the UPGE group significantly improved sugar-waterpreference(P0.01),increased horizontal movement distance,and increased vertical standing times in the absentee
14、ismexperiment(P 0.05,P 0.01).Shortened the escape latency in Morris water maze test(P0.05).Increased the targetquadrant residence time and the platform crossing times in Morris water maze test(P 0.05,P 0.01).UPGE would alleviatehippocampal neuron injury.The levels of ACTH,CORT and CRH in plasma were
15、 decreased(P 0.05),the apoptosis ofhippocampal cells was decreased(P 0.05,P 0.01).Conclusion:The UGPE would improve antidepressant behavior ofCUMS mice,and its mechanism might be related to the regulation of HPA axis function.Key words：understory Panax ginseng；chronic non-predictable mild stress mic
16、e；hypothalamic pituitary adrenal axis；depression 抑 郁 症 是 一 种 中 枢 系 统 精 神 障 碍，以 情 绪 低 落，思维迟钝，语言行动减少，绝望等为主要表现，难治愈且 易 反 复 发 作1。发 病 机 制 与 下 丘 脑-垂 体-肾 上 腺（hypothalamic-pituitary-adrenal，HPA）轴有关。HPA轴是脑内重要的神经内分泌反馈调节轴，在面对应激时，由 于 促 肾 上 腺 皮 质 激 素 释 放 激 素（corticotropin-releasing hormone，CRH），促 肾 上 腺 皮 质 激 素（ad
17、re-nocorticotropic hormone，ACTH）和 皮 质 酮（cortico-sterone，CORT）的 大 量 释 放，HPA轴 过 度 激 活，导 致功 能 亢 进，负 反 馈 调 节 机 制 受 损，并 伴 有 海 马 神 经 元的损伤23。目前临床抑郁症治疗多采用神经递质再摄 取 抑 制 剂 并 辅 以 心 理 治 疗，但 疗 效 差 并 伴 有 副 作用。中药治疗抑郁症不仅可以缓解症状，并可长期服用，具有多成分，多靶点的特点，能够成为抗抑郁药物重要来源4。林下参（understory Panax ginseng，UPG）是把人参 种 子 撒 播 到 山 林 后 数
18、 年 采 收，主 要 成 分 为 人 参 皂苷、多 糖、挥 发 油 等 物 质，具 有 调 五 脏，安 精 神，定 魂魄 之 功 效5。研 究 证 实 人 参 皂苷Rg1、Rb1、Rg3等68单 体 成 分 具 有 抗 抑 郁 活 性，可 改善HPA轴 调 节 紊乱，提 高 脑 源 性 营 养 神 经 因 子 与 单 胺 神 经 递 质 水平9。人参类中药材在2012年被国家卫生部批准为药食同源后，在保健食品中的开发应用成为了一大热潮。与 园 参 相 比，UPG中 的 皂 苷 种 类 和 含 量 更 为 丰富，药用价值更高。但因其生长年限长，对栽培技术，生 长 环 境 要 求 严 格，导致UP
19、G数 量 并 不 多，并 且 价格 较 为 昂 贵 而 少 有 研 究10。因 此 本 课 题 采 用 慢 性 不可 预 知 温 和 应 激（chronic unpredictable mild stress，CUMS）诱 导 的 小 鼠 抑 郁 模 型，观 察 林 下 参 提 取 物（UPGE）给 药对CUMS小 鼠 的 行 为 学 影 响，并 探 讨UPGE对HPA轴 的 反 馈 调 节 作 用，以 探索UPGE 治疗 抑 郁 症 可 能 的 作 用 机 制，为UGPE抗 抑 郁 的 保 健类药物的开发提供新思路。1材料和方法 1.1材料与仪器健 康 雄 性 昆 明 种 小 鼠 60只，S
20、PF级，体 重 在1822 g左右，来源于辽宁长生实验动物技术有限公司，合格证号：SCXK（辽）2020-0001。喂养标准（0.5 d光照/0.5 d黑暗，温度213，相对湿度50%10%）内，自由饮食饮水。本研究获得长春中医药大学实验动物伦理委员会批准（批准编号2020198）。UPG（十年 生）实 验 室 提 供，经 鉴 定 来 源 于 五 加 科 植 物 林 下参understory Panax ginseng，符 合2020年 版 中 国药 典 标 准。生 理 盐 水 四 川 科 伦 药 业 股 份 有 限 公司；盐 酸 文 拉 法 辛 成 都 康 弘 药 业；无 水 乙 醇 广 东
21、光华科技股份有限公司；ACTH试剂盒、CORT试剂盒、CRH试 剂 盒 黄 石 研 科 生 物 科 技 有 限 公 司；色谱甲醇、色谱乙腈美国Fisher公司；香草醛麦克林 生 物 公 司；冰 乙 酸 天 津 新 通 精 细 化 工 有 限 公 司；二甲苯、盐酸国药集团化学试剂有限公司；BSASolarbio；苏 木 素 染 液、PBS缓 冲 液 武 汉 谷 歌 生 物科技有限公司；组化试剂盒DAB显色剂DAKO。N-1100旋转蒸发仪日本东京理化器械株式会社；TM-Vision旷 场 行 为 学 实 验 系 统、WMT-100S型Morris水 迷 宫 视 频 分 析 系 统 泰 盟 公 司
22、；InfiniteN200 pro酶 标 测 定 仪 美国TECAN公 司；ST8R高 速冷冻离心机美国Thermo公司；OLYMPUS CKX53荧 光 倒 置 显 微 镜 日 本 奥 林 巴 斯 株 式 会；BT25S型电 子 天 平 德国Sartorius公 司；Agilent accurate 6520四 极 杆-飞 行 时 间 质 谱 仪 美国Agilent公 司；Pro200组 织 研 磨 仪 美 国 Pro Scientific公 司；Milli-Q超 纯 水 系 统 美国Millipore公 司；SHB-循 环 水式多用真空泵郑州长城科工贸有限公司；JB-P5包埋机武汉俊杰电子
23、有限公司；RM2016病理切片机上海徕卡仪器有限公司；KD-P组织摊片机浙江省 金 华 市 科 迪 仪 器 设 备 有 限 公 司；WD-9405A脱 色摇床北京市六一仪器厂。1.2实验方法 1.2.1 药 液 的 配 制 参 照 李 海 军11药 材 提 取 方 法，并加以改进。称取UPG 20 g，置于加热回流装置中，按照1:8的 固 液 比 加入70%乙 醇 溶 液 回 流 提 取，回流 提 取 三 次，时 间 分 别为2、2、1 h，趁 热 过 滤 合 并 滤 378 食品工业科技 2023年 7 月液，减 压 浓 缩至48 mL，得 到 提 取 物 浓 缩 液。样 品 处理 精 密
24、量取UPGE 1 mL，加入9 mL的 蒸 馏 水 混 匀，置于分液漏斗中，加入20 mL的乙醚脱脂三次，收集下 层 水 相。向 水 相 中 加 入 水 饱 和 的 正 丁醇20 mL，萃 取 三 次，合 并 正 丁 醇 层，置 于 蒸 发 皿 中，40 水 浴挥干，适量的色谱甲醇溶解，最后定容到10 mL的容量 瓶 中，过0.22 m滤 膜，即 得 供 试 样 品。对 照 品 溶液 制 备：精 密 称 取 人 参 皂 苷 Rg1、Re、Rb1、Rb2、Rc、Rd 0.1 mg，用甲醇溶解并稀释，制成浓度分别 为0.1 mg/mL的对照品溶液。利用外标法，以对照品的保 留 时 间 和 峰 面
25、积，对UPGE中 人 参 皂 苷 进 行 定 性和定量分析。1.2.2 皂 苷 的 测 定 总 皂 苷 测 定以Re标 准 品 为 对照，参照药典方法12测定总皂苷为香草醛-冰醋酸显色 法，紫 外 可 见 分 光 光 度 法 测 定 总 皂 苷 含 量：配 制 人参 皂 苷 标 准品Re 1 mg/mL，分 别 取 标 准品10、20、40、60、80、100 L，并 精 密 量 取“1.2.1”项 下 制 得 的样品100 L至 具 塞 刻 度 试 管 中，氮 气 吹 干，加 入5%的 香 草 醛 冰 醋 酸 溶液0.2 mL，高 氯酸0.8 mL，摇匀，60 水 浴 加热10 min，冰
26、水 浴 冷却10 min，加入5 mL冰 醋 酸 终 止 反 应，于550 nm处 测 定 吸 光 度值。根据不同浓度下标准品所做标准曲线方程，将样品吸光度值代入，得到总皂苷含量。色 谱 及 质 谱 条 件：色 谱 柱：Thermo C18色 谱 柱（50 mm3 mm，2.7 m）；柱 温：35；样 品 室 温 度：4；流 动 相：为0.1%甲 酸 水 溶 液，B为 乙 腈；流速：0.2 mL/min。梯 度 洗 脱 程 序：05.0 min，19%B；5.07.0 min，19%B20.5%B；7.011.9 min，20.5%B20.9%B；11.913.0 min，20.9%B21%B
27、；1315.0 min，21%B21.3%B；15.030.0 min，21.3%B27%B；30.032.0 min，27%B31%B；32.049.0 min，31%B36%B；4950.0 min，36%B37.5%B；50.055.0 min，37.5%B45%B；55.067.0 min，45%B90%B；67.070.0 min，90%B；70.073.0 min，90%B19%B；73.078.0 min，19%B。进样量：3 L。采 用 电 喷 雾 电 离 方 式 进 行 离 子 化，全 扫 描 模 式（Full Scan）。扫 描 范 围：m/z 3001300；喷 雾 电
28、压：4000；鞘 气 压 力：6.125 MPa；辅 助 气 压 力：0.875 MPa；传 输 毛 细 管 温 度：350；雾 化 器 温 度：300；针 泵进样。数据采用Thermo Xcalibar软件进行分析。采用外标法计算公式为：Cx=CrAxAr式 中：Cx为 样 品 浓 度；Cr为 对 照 浓 度；Ax为 样品峰面积；Ar为对照峰面积，UPGE中的皂苷浓度根据 六 种 已 知 浓 度 皂 苷 标 准 品 作 为 对 照 峰 面 积 进 行 定量计算得出。1.2.3 动物分组给药及CUMS小鼠模型的建立雄性 昆 明 小 鼠 适 应 性 饲 养 一 周，记 录 体 重，分 组 前 对
29、 小鼠 进 行 糖 水 适 应 性 训 练，在 禁水24 h后 进 行 糖 水 偏好实验，剔除对糖水过于敏感或极不喜爱的不合格小鼠，使小鼠的糖水偏好率基本保持一致。将剩余小鼠随机分为四组（n=15），分别为空白组（Control），模型组（CUMS），文 拉 法 辛 组（10 mgkg1 Ven）以 及 林 下参 提 取 物 组（100 mgkg1 UPGE）。正 常 组 小 鼠 正 常饲 养 并 不 采 取 任 何 刺 激，其 余 各 组 参 照 戴 国 梁 等13CUMS小 鼠 造 模 方 法。具 体 做 法 如 下：禁水24 h，45 热 水 中 游泳5 min，潮 湿 垫料24 h，摇
30、 晃 鼠 笼15 min，夹尾5 min，电 击 足 部 一 次（3 mA，5 s），8 冷 水 游泳5 min，束缚3 h，45倾 斜 鼠笼24 h，禁 食24 h，昼夜颠倒24 h。每天上午九点随机采取一种刺激 方 式 且 不 连 续，小 鼠 无 法 预 知。造 模 时 间 持 续 六周，在造模之前记录小鼠体质量，进行糖水偏好，旷场实 验 行 为 学 实 验 记 录14。造 模 后 小 鼠 出 现 体 质 量 减轻，糖 水 偏 好 度 下 降，自 发 活 动 及 探 索 行 为 减 弱 的 情况，表 明 造 模 成 功。造 模 三 周 后，各 组 灌 胃 给 药 同 时继续进行CUMS操作
31、，文拉法辛研成粉，用生理盐水配 制为1 mg/mL药 液，UPGE用 生 理 盐 水 稀 释 至10 mg/mL，生 理 盐 水 对 小 鼠 健 康 状 态 并 无 影 响。小鼠按照体质量给药，并根据动物和人体间的等效剂量换算公式进行换算，每组按10 mLkg1灌胃小鼠，正常 组 及 模 型 组 给 予 等 剂 量 生 理 盐 水 灌胃3周。具 体实验流程见图1。1.2.4 小 鼠 一 般 情 况 和 体 质 量 记 录 观 察 小 鼠 饮 食量、饮 水 量、毛 色 光 滑 度 及 精 神 状 态，每隔7 d对 小鼠进行体质量记录。1.2.5 行为学指标检测小鼠抑郁样行为 1.2.5.1 糖
32、水 偏 好 测 试 通 过 糖 水 摄 入 量 的 改 变 情况 反 映 小 鼠 快 感 缺 失，快 感 缺 失 是 抑 郁 症 的 核 心 症状。参 照 贾 志 霞 等15报 道 的 方 法，所 有 小 鼠 在 实 验 适应性饲养 CUMS模型的建立及分组各组灌胃给药治疗同时进行CUMS操作行为学测试 处死空白组糖水偏好实验 ELISA试剂盒检测相关激素模型组旷场实验 海马HE染色文拉法辛组Morris水迷宫实验 海马TUNEL染色UGP提取物组Day 70 Day 121 Day 2142 Day 4349 Day 50图 1 实验流程Fig.1 Experimental procedur
33、e 第 44 卷 第 14 期 王伟，等：林下参提取物对慢性不可预知温和应激模型小鼠抑郁样行为及HPA轴影响 379 前 及 开 始 造 模 后 进 行 糖 水 偏 好 实 验。动 物 在第1 d后 放 入 给 予 小鼠2瓶1%的 蔗 糖 水（200 mL）；第2 d给予1瓶1%的 蔗 糖 水（200 mL）和1瓶 普 通 饮 用 水（200 mL）；第3 d在 禁 食 和水23 h后，1瓶1%的 蔗糖 水（200 mL）和1瓶 普 通 饮 用 水（200 mL），0.5 h后互 换 位 置，取 走 再 次 称 重。计 算 糖 水 偏 爱 比 率（%）=糖水消耗总液体消耗100。1.2.5.2
34、 旷 场 实 验 通 过 动 物 在 陌 生 环 境 下 的 自 发活 动 能 力 以 及 探 索 活 动，反 映 兴 趣 丧 失，评 价 小 鼠 状态。参 照 王 威 等16报 道 的 方 法，将 每 只 小 鼠 轻 放 在旷 场 实 验 箱 的 正 中 间，通 过 上 方 相 机 拍 摄 记 录 小 鼠在5 min的 运 动 轨 迹，分 析 水 平 运 动 得 分（水 平 运 动总距离）与垂直得分（站立次数），在每只小鼠测试前，箱 底用75%乙 醇 彻 底 清 洗，避 免 气 味 干 扰 下 一 只 小鼠实验结果。1.2.6 Morris水 迷 宫 实 验 反 映 小 鼠 海 马 依 赖
35、的 空间 学 习 和 记 忆 能 力，参 照 薛 岱 榆 等17报 道 的 方 法。把 小 鼠 放 在 一 个 盛 有高50 cm，直径160 cm的 圆 形水池中（温度2426）。水池分成A、B、C、D 4个象 限，A象 限 池 中 放 置 平 台 于 水下2 cm处，小 鼠 面向 水 池 壁 轻 放 于 水 中，记 录 逃 避 潜 伏 期（爬 上 平 台 时间），若90 s没 有 找 到 平 台，引 导 至 平 台 上 停留10 s，此 时 逃 避 潜 伏 期为90 s，再 次 进 行 重 复。每天2次试 验，以 确 保 观 察 当 天 产 生 的 短 期 记 忆 的 可 能 性，连续 测
36、量3 d。Morris水 迷 宫 实 验 完 成 后，转 移 走 水 下平 台，小 鼠 从 背 对 平 台 放 入 水 中，记录300 s内 小 鼠游泳运动情况，记录在A象限停留的时间，即目标象限停留时间。1.2.7 HPA轴 相 关 激 素 的 检 测 参 照 韦 震 等18报道 的 方 法，于 末 次 给 药后2 h后 处 死 小 鼠，眼 球 取 血法 采 集 血 液 样 本，于3000 rmin1下，离心15 min获得上清液，分离血清和血浆样本，转移至80 下储存。于 冰 浴 下，从 小 鼠 上 取 出 完 整 大 脑 组 织，再 通 过生理盐水对其进行洗涤，取出双侧海马，于80 下储
37、存。分析采用ELISA试剂盒说明书要求检测各组小鼠血浆中CORT、ACTH和CRH含量。1.2.8 HE染 色 观 察 海 马 形 态 学 变 化 参 照 赵 洪 庆等19报 道 的 方 法，小 鼠 海 马 组 织用10%中 性 福 尔 马林固定，石蜡化，切片，完成HE染色后脱蜡，水化，染色，脱 水 中 性 树 胶 封 片 等 步 骤 后，用 高 倍 显 微 镜 观 察小鼠海马组织形态学变化，进行图像采集分析。1.2.9 TUNEL法 检 测 小 鼠 海 马 组 织 神 经 元 凋 亡 参 照 曹 智 怡 等20报 道 的 方 法，将 海 马 组 织 脱 水、包埋、切 片，脱 蜡，水 化，经过
38、PBS浸 洗 和 细 胞 通 透 后，置于50 L体 积的TUNEL反 应 混 合 物 中，避 光 孵育1 h。最 后用DAPI染 色，在 荧 光 显 微 镜 下 观 察 整个 海 马 区，观 察 倍 数 为100和400。记 录 凋 亡 细 胞数 量，TUNEL阳 性 细 胞与DAPI阳 性 细 胞 的 比 值 评价凋亡程度。1.3数据处理全 部 试 验 数 据 采 取 均 数标 准 偏 差 表 示。通 过SPSS17.0程 序 实 施 相 应 分 析，组 间 对 比 通过ONE-WAY ANOVA进行。当P0.05，判定对比为存在差异，P0.01，判定对比存在显著差异。2结果与分析 2.1
39、总皂苷含量的测定结果以Re为 标 准 品，采 用 香 草 醛-冰 醋 酸 显 色 法，紫外分光光度法测定提取物中总皂苷的含量，该方法得到 标 准 曲 线为Y=0.001X+0.057（R2=0.994），线 性 范围良好，精密度，稳定性符合要求，样品吸光值代入标准 曲 线，提 取 物 中 主 成 分 总 皂 苷 的 浓 度为26.5 mg/mL，总 皂 苷是UPG中 主 要 活 性 成 分 和 有 效 成 分，经 查 证文 献7,21，提 取 液 中 其 他 成 分 的 存 在 并 不 会 影 响 实 验结 果。所 提 取的20 g UPG药 材 中 总 皂 苷 的 含 量 占比为6.36%。
40、2.2UPGE中皂苷单体的鉴别采用TSQ Endura三 重 四 级 杆 质 谱 仪对UPGE进行了质谱数据收集，对分离得到的色谱峰进行了分析，结合一级和二级质谱图以及人参皂苷化学成分文献 的 报 道，最 终对UPGE中 的 鉴 别 出 人 参 皂 苷 成 分16种，其 中 归 属为PPD型 人 参 皂 苷有9种，分 别 为Rb1、Rc、Rb2、丙二酰人参皂苷Rc（mRc）、Rd、Quin-quenoside R1、Rs1、Rg3、Rg5。归属为PPT型人参皂苷 有 六 种，分 别 为 20-Glu-Rf、Rg1、Re、Rf、F3、Rg2。归 属 为 齐 墩 果 酸 类 皂 苷 类 一 种，为
41、 人 参 皂 苷Ro。由“1.2.1”项下所得供试品总离子流图如图2所 Rg1Rg2RoRb1Rb2RdRcRg3Rg5 F3Rs1mRcReRf20-Gle-Rf0 5 10 15 20 25 30 35 40时间(min)丰度(%)45 50 55 60 65 70 75 80100500Quinquenoside R1图 2 林下参提取物的离子流色谱图Fig.2 TIC chromatography of UPGE 380 食品工业科技 2023年 7 月示。并对其中几种常见皂苷Rg1、Re、Rb1、Rb2、Rc、Rd含 量 进 行 计 算，得到Rg1含 量为0.039 mg/mL，Re
42、含 量为0.044 mg/mL，Rb1含 量为0.042 mg/mL，Rc含 量为0.060 mg/mL，Rb2含 量为0.025 mg/mL，Rd含量为0.058 mg/mL。2.3UPGE对CUMS小鼠一般状态和体质量影响小 鼠 一 般 状 态 观 察：空 白 组 小 鼠 精 神 状 态 良 好，毛发光泽，粪便正常，探索行为较多；模型组小鼠毛色黯淡且杂乱，食欲减退，精神状态较差，极少有探索行为，常 处 于 不 动 蜷 缩 状 态。Ven组（10 mgkg1）及UPGE给 药 组（100 mgkg1）与 模 型 组 小 鼠 对 比 较 为活 跃、双 眼 有 神、毛 发 光 泽。小 鼠 体 质
43、 量 变 化：造 模前 各 组 小 鼠 之 间 体 质 量 基 本 一 致。与 空 白 组 小 鼠 比较，模 型 组 小 鼠 体 质 量 增 长 缓 慢 且 变 化 幅 度 显 著 降低；与 模 型 组 比 较，Ven组（10 mgkg1）及UPGE 组（100 mgkg1）在21 d开始灌胃给药后体质量及增长速 率 均 显 著 上 升，且 出 现 显 著 统 计 学 差 异（P 0.05）。给 药 结 束 后，与 模 型 组 比 较，给 药 组 小 鼠 体 质 量 有 着明显增加（P0.05），见图3。2.4UPGE对CUMS小鼠行为学的影响 2.4.1 UPGE对CUMS小 鼠 糖 水 偏
44、 好 率 的 影 响 在21 d造模实验结束后，与空白组比较，模型组小鼠对 蔗 糖 水 的 食 用 减 少（P0.01）。与 模 型 组 比 较，Ven组（10 mgkg1）及UPGE组（100 mgkg1）的 糖水 偏 爱 率 均 显 著 升 高（P 0.01），对 小 鼠 的 抑 郁 有 一定 的 改 善 作 用，差 异 具 有 统 计 学 意 义（P0.05，P0.01），见图4。90#*60糖水偏好率(%)300Control CUMS Ven UPGEx 图 4 UGPE对小鼠糖水偏嗜度的影响（s,n=10）xFig.4 Effect of UGPE on sugar water p
45、reference in mice(s,n=10)2.4.2 UPGE对CUMS小 鼠 水 平 及 垂 直 运 动 的 影 响 造 模 前 实 验 各 组 的 小 鼠，水 平 和 垂 直 得 分 基 本 一致；从造模后第3周开始，与正常组比较，模型组小鼠水 平 运 动 距 离 及 垂 直 运 动 得 分 均 明 显 下 降（P0.05，P0.01）；与 模 型 组 比 较，Ven组（10 mgkg1）及UPGE组（100 mgkg1）小 鼠 的 水 平 及 垂 直 活 动 行 为有一定的改善作用（P0.05，P 0.01），见图5。605550454035300010 20 3021 d#*天
46、数(d)体质量(g)40 50ControlCUMSVenUPGEx 图 3 UPGE 对小鼠的体质量变化影响（s,n=10）x Fig.3 Effect of UPGE on weight changes of mice(s,n=10)注：与 空 白 组 比 较，#P 0.05，#P0.01；与 模 型 组 比 较，*P 0.05，*P 0.01；图4图7，图9同。Control(c)CUMS Ven UPGEMAX 0 Control CUMS Ven UPGE60(a)#*水平得分40200Control CUMS Ven UPGE(b)#*垂直得分4530150 x 图 5 UPGE对
47、CUMS小鼠自主活动的影响（s,n=10）x Fig.5 Effect of UPGE on autonomic activity of CUMS mice(s,n=10)注：（a）水平得分；（b）垂直得分；（c）旷场实验热图。第 44 卷 第 14 期 王伟，等：林下参提取物对慢性不可预知温和应激模型小鼠抑郁样行为及HPA轴影响 381 2.4.3 UPGE对CUMS小 鼠 逃 避 潜 伏 期 和 空 间 探 索影响在Morris水迷宫实验中，与正常组相比，模型组 的 逃 避 潜 伏 期 显 著 上 升（P0.01）；与 模 型 组 比 较，Ven组（10 mgkg1）和UPGE给 药 组（
48、100 mgkg1）的 逃 避 潜 伏 期 均 有 降 低（P0.05），与 正 常 组 比 较，模型 组 于 目 标 象 限 的 穿 越 平 台 次 数 以 及 目 标 象 限 停 滞时 间 存 在 明 显 减 少（P 0.01）；与 模 型 组 比 较，Ven组（10 mgkg1）和UPGE给 药 组（100 mgkg1）的 小 鼠的 穿 越 平 台 次 数 和 目 标 象 限 滞 留 时 间 显 著 提 升（P0.05，P0.01），见图6。2.5UPGE对CUMS小鼠HPA轴相关激素的影响实 验 结 果 显 示，与 正 常 组 比 较，模 型 组 小 鼠 血 清中 三 种 激 素 水
49、平 含 量 呈 现 上 升 趋 势（P0.05，P0.01）。与 模 型 组 比 较，Ven对 照 组（10 mgkg1）和UPGE 给药组（100 mgkg1）血清中激素的含量呈现降低趋势（P0.05），见图7。2.6UPGE对CUMS小鼠海马组织病理结构影响通过对小鼠脑海马组织进行HE染色观察可见，正 常 组 小 鼠 脑 组 织 海马DG区及CA3区 细 胞 呈 排列 整 齐，形 状 规 则，而 且 层 次 分 明，细 胞 核 清 晰 完 整，胞 体 无 空 泡 现 象。模 型 组 小 鼠 海马DG区 细 胞 数 目与 正 常 组 比 较 明 显 减 少，部 分 神 经 元 胞 体 呈 空
50、 泡 状，CA3区细胞排列稀疏并且层次感杂乱，密度下降，细胞核形态异常，或出现皱缩，核膜边界模糊，细胞质着色较浅，伴有核碎裂和核溶解，说明神经元受损；与模型 组 相 比，Ven组（10 mgkg1）和 UPGE给 药 组（100 mgkg1）小 鼠的DG区和CA3区 的 海 马 神 经元细胞密度增加，细胞数量增多，而且改善细胞形态，减小细胞的间隙，整体状况有明显的缓解趋向于正常组，对于神经元的损伤有一定的修复作用，见图8。2.7UPGE对CUMS小鼠海马神经元的影响实验通过TUNEL法检测CUMS抑郁模型小鼠海马神经元细胞的凋亡细胞的数量及分布情况（绿色荧 光为TUNEL标 记 的 阳 性 细
