1、江苏省苏微微生物研究有限公司地址：江苏省无锡市钱荣路 7 号电话：0510-85514690传真：0510-85514690网址： 中国试剂盒网1磺胺嘧啶酶联免疫反应测试盒使用说明书（M1033）一.简介1试剂盒描述MaxSignalTM磺胺嘧啶酶联免疫反应测试盒是用于肉类（鸡、牛和猪），肝脏， 肾脏，饲料，牛奶，奶粉，血清，尿液和蜂蜜等中磺胺嘧啶残留的定量检测。磺胺类药物被广泛用于饲料添加剂和动物疾病治疗药物。由于磺胺嘧啶具有致癌性，在家禽中过量残留可能会对消费者造成危害，为此已被禁止在食品生产应用。根据美国FDA和欧盟规定，在肌肉，脂肪，肝脏， 肾脏和牛奶中磺胺类药物的含量不能超 过100
2、 ng/g (ppb)。与传统的HPLC 方法相比，酶联免疫方法有操作 简便、灵敏度高、成本低的优点。MaxSignalTM磺胺嘧啶酶联免疫反应测试盒为养殖者和政府监督管理部门提供了更准确快速检测磺胺嘧啶残留的方法，这包括： 该试剂盒的专利提取方法将达到80%以上的回收率，不需用有机溶剂并在10-30分钟之内完成提取过程（而其他的方法将需1-2小时）。 高灵敏度（1ppb）；低定量检测下限（肉/肾脏/肝脏3ppb）。 检测过程只需要不到2小时。 高重复性。2试剂盒原理MaxSignaLTM 磺胺嘧啶酶联免疫反应测试盒基于竞争性酶联反应原理，相关的抗原已经包被于微孔板上，吸附在孔内的抗原与被测试
3、的样品中药物竞争性与一抗相结合。洗板后，只剩下与微孔内抗原相结合的抗体，与 经酶标记的二抗相结合， 酶底物在酶作用江苏省苏微微生物研究有限公司地址：江苏省无锡市钱荣路 7 号电话：0510-85514690传真：0510-85514690网址： 中国试剂盒网2下产生蓝色产物，加酸终止反应，此 时蓝色产物就会转化成黄色，在 450 nm 波长测定其吸收值（OD 值）。OD 值的大小与样品中磺胺嘧啶的含量成反比。3.试剂盒组成部分和储存（1（ 试剂盒包括：内容物 规格 保存条件微孔板 96 孔板（12 8 孔） 2-8磺胺嘧啶标准品：阴性质控1.0ng/mL2.0ng/mL5.0 ng/mL10
4、ng/mL25 ng/mL100 ng/mL（用于加标）0.8mL0.8mL0.8mL0.8mL0.8mL0.8mL0.8mL2-8磺胺嘧啶一抗 15mL 2-8100二抗 250L 2-8二抗稀释液 20mL 2-810样品提取液 25mL 2-820洗液 28mL 2-8终止液 20mL 2-8TMB 底物 12mL 2-8（2（ 试剂盒的保存本试剂盒应当在 2-8的温度下 储存，有效期 为一年。 如果超 过 3 个月不使用 试剂 盒，请 将一抗和 100二抗放置 -20或者冰 冻 保存。江苏省苏微微生物研究有限公司地址：江苏省无锡市钱荣路 7 号电话：0510-85514690传真：05
5、10-85514690网址： 中国试剂盒网3（3） 样品检测下限物质 检测下限（ng/g）肌肉/肝脏/肾脏 3牛奶 5奶粉 25饲料 4尿液 5血清 5蜂蜜 20（4） 交叉反应数据交叉反应物质 交叉反应（ %）磺胺嘧啶 100磺胺甲基嘧啶 20磺胺二甲噁唑 2磺胺二甲嘧啶 15磺胺吡啶 0.1磺胺噻唑 0.14其他需要而本试剂盒未提的设备或材料 酶标仪 恒温培养箱 移液器(10、 20 和 100L，1mL 各一支) 漩涡振荡器江苏省苏微微生物研究有限公司地址：江苏省无锡市钱荣路 7 号电话：0510-85514690传真：0510-85514690网址： 中国试剂盒网4 匀质器 多道移液器
6、（50-300L）二.警告实验前请阅读以下文字，以保证获得最佳实验效果。 标准品中含有磺胺嘧啶，请小心使用。 不要使用过期的试剂盒。 不同批次的试剂盒不要混用，抗体和微孔板具有盒与批次的特异性。确保二抗及二抗稀释液正确配制。 尽量保持室温 20-25，避免在通 风口操作防止温度 过低， 过热和/ 或者蒸发。同样的，不要在阳光直射下实验，防止过热及蒸发。在孵育期间，如果工作台温度 过低，应该铺垫若干纸巾或者其他物料。 水质量很重要，确保使用蒸馏或者去离子水。 加入样品或者试剂到空的微孔板时，吸嘴靠于微孔接近底部，并保持接触。 孵育时间的计算越规范越好，保持添加标准品的一致性，先添加标准品后添加样
7、品。 从低浓度到高浓度地添加标准品，降低影响标准品曲线质量的风险。 将微孔板置于放有干燥剂的密封袋中，冷藏保存。三. MaxSignal TM Sulfadazine ELISA Test Kit 检测方法1试剂的准备所有的试剂在使用之前应将其在室温下回温 1-2 小时，并在使用试剂前摇动几下，以保证合理的浓度。确保样品的合理保存，通江苏省苏微微生物研究有限公司地址：江苏省无锡市钱荣路 7 号电话：0510-85514690传真：0510-85514690网址： 中国试剂盒网5常样品保存于 2-4并且不超 过 1-2 天；如果样品需要保存更长的时间，请于-20 冰冻保存；冻结的样品可在室温（2
8、0-25）或者普通冷藏以解融。（1）1二抗工作液按 1：99 的比例来稀释二抗浓缩液和二抗稀释液，配成二抗的工作液。（2）1工作洗液按 1：19 的比例配制洗涤浓缩液和蒸馏水。（3）1样 品提取液按 1：9 的比例配制样品提取浓缩液和蒸馏水。2样品的准备2.1 肌肉/肝脏/肾脏（1（ 除去肌肉或组织中的脂肪，使用合适的匀浆器进行匀浆；（2（ 取 0.5g 样品，加入 1 mL1样品提取液，摇床 20 分钟或者最大转速振荡 3 分钟；（3（ 室温 4000g 离心 5 分钟，移取 0.5mL 上清液到另一试管（避免触碰脂肪层）；（4（ 在 75 C 水浴 5 分 钟，最大速度漩涡振荡 1 分钟；
9、（5（ 室温 4000g 离心 5 分钟；（6（ 移取 0.2mL 上清液到另一新的试管（避免触碰脂肪层）；（7（ 取样品进行检测。稀释倍数：3.0为了排除高的背景值干扰，可取已知空白样品作对照。如果有需要，可从第 6 步起，用样品提取液进行稀释。2.2 牛奶（1（ 对于无脂牛奶，用 1样品提取液进江苏省苏微微生物研究有限公司地址：江苏省无锡市钱荣路 7 号电话：0510-85514690传真：0510-85514690网址： 中国试剂盒网6行 5 倍稀释（如 20L 牛奶+80L 缓冲液），取 50L 稀释样品进行检测；（2（ 对于含脂牛奶，使用前需要以 4000g 离心 5 分钟除去上层脂
10、肪层。用 1样品提取液进行 5 倍稀释（如 20L 牛奶+80L 缓冲液），取 50L 稀释样品进行检测。稀释倍数：5.0。如果需要，可以用 1样品提取液作进一步稀释。2.3 奶粉（1（ 将 2g 奶粉溶于 10mL 蒸馏水中，振荡溶解；（2（ 4000g 离心 5 分钟，除去上层脂肪层；（3（ 用 1样 品提取液稀释 5 倍（20L 牛奶+80L 缓冲液）即可直接用于酶联反应的测试稀释倍数：25.02.4 饲料 （1（ 取 2g 样品加入 8mL 1 样品提取液，置于匀浆器中匀质；（2（ 称取 1.5g 匀质的样品加到离心管中，室温 4000g 离心 5 分钟；（3（ 移取 0.5mL 上清
11、液到另一离心管；（4（ 在 75孵育 5 分钟 ，在漩涡振荡器上以最大速度振 荡 1 分钟；（5（ 室温下 4000g 离心 5 分钟；（6（ 取 0.2mL 上清液到另一离心管，样本即可用于检测。稀释倍数：4.02.5 血清（1（ 取 0.5 mL 血清 4000g 离心 5 分钟；（2（ 取 20L 上清液，加入 80L 1样品提取液，混合均匀即可用于检测。稀释倍数：5.0江苏省苏微微生物研究有限公司地址：江苏省无锡市钱荣路 7 号电话：0510-85514690传真：0510-85514690网址： 中国试剂盒网72.6 尿样（1（ 取 0.5mL 尿液 4000g 离心 5 分钟；（2
12、（ 取 20L 上清液，加入 80L 1样品提取液，混合均匀即可用于检测。稀释倍数：5.02.7 蜂蜜（1（ 取 0.2g 蜂蜜，加入 3.8mL1样品提取液，混合均匀；（2（ 取 0.5mL 样品，4000g 离心 5 分钟；（3（ 移取 0.2mL 上清液到另一试管，样品直接进行检测。稀释倍数：20.03酶联免疫反应测试步骤以下为计算份量的表格，用户可根据自己的需要来确定需要配置多少试剂。试剂 每个反应需要的体积 24 次反应的体积一抗 100 L 2.4mL二抗 150 L 3.6 mL工作洗液 2 mL 48 mL终止液 100 L 2.4 mL底物 100 L 2.4 mL（1（ 加
13、入 50L 的标准液、阳性 质控和样品所设定的孔中；（2（ 在每孔中加入 100L 一抗， 轻轻摇动微孔板混匀 1 分钟；（3（ 室温（20-25）孵育 30 分钟；（4（ 洗板 3 次，每次应该加入 250L 1洗液，最后一次使板尽量甩干并在吸水纸上吸干；江苏省苏微微生物研究有限公司地址：江苏省无锡市钱荣路 7 号电话：0510-85514690传真：0510-85514690网址： 中国试剂盒网8（5（ 每孔加入 150L 二抗（避免阳光直射和工作台温度 过低，孵育 时适当覆盖微孔板）；（6（ 室温（20-25）孵育 30 分钟；（7（ 洗板 3 次，每次应该加入 250L，最后一次使板尽
14、量甩干并在吸水纸上吸干；（8（ 加入 100L 的 TMB 底物（底物本身无色， 颜 色出现变化不能使用）；（9（ 在室温下培养 15 分钟， 加入 100L 的终止液 终止反应，在 450nm 下读 OD 值(读数前，使用无绒布擦拭微孔底部水分和指模)。4结果计算（1（ 分别计算标准、质控和样品的平均吸光度值和相对吸光度值。相对吸光度值 (%) = (标准或样品吸光度值/零标准吸光度值) 100 （2（ 以相对吸光度值为纵坐标，标准浓度为横坐标建立标准曲线。（3（ 从标准曲线上读取质控和样品的浓度值。（4（ 样品检测下限和定量下限计算方法如下：样品检测下限 = (2.5ng/g) (稀释倍数)样品定量下限 = (5ng/g) (稀释倍数)备注：如结果呈阳性反应，应该用其他检验方法（如色谱/质谱方法等）进行确证。江苏省苏微微生物研究有限公司地址：江苏省无锡市钱荣路 7 号电话：0510-85514690传真：0510-85514690网址： 中国试剂盒网9以下曲线图是磺胺嘧啶酶联免疫反应测试盒典型标准曲线备注：中文翻译说明书仅供参考，具体明细请参照英文原件。
