1、蒽酮-硫酸法测定生地黄提取物中总糖的含量 摘 要 目的：建立生地黄提取物中总糖的含量测定方法。方法：以葡萄糖为对照品采用蒽酮-硫酸法于625nm处测定总糖含量。结果：葡萄糖对照品溶液在0.0050.05 mg/mL范围内呈良好的线性关系，线性回归方程为A=15.362C0.000 07，r0.999 8，平均加样回收率为102.4，RSD为2.6。结论：本法操作简便、快速、重现性良好，可用于生地黄提取物中总糖的测定。 关键词 生地黄提取物 总糖 蒽酮硫酸法 中图分类号：R917 文献标识码：B 文章编号：1006-1533(2008)08-0368-03 Anthrone-sulfuric a
2、cid colorimetric methods for determination of total sugar content in the extract of Rehmannia glutinosa Libosch Ding Liqin, Liu Li, Xu Desheng (Shuguang Hospital of Shanghai Traditional Chinese Medicine University，Shanghai，200021) ABSTRACT Objective: To determine the total sugar content in the extra
3、ct of Rehmannia glutinosa Libosch. Methods: Anthrone-sulfuric acid colorimetric methods were used. Results: The glucose control solution had a good linearity in the range of 0.005-0.05 mg/mL. The linear regression standard curve was A=15.326C+0.000 07 (r=0.999 8). The mean recovery rate was 102.4% a
4、nd the RSD was 2.6%. Conclusion: The rapid method is simple to handle and has good reproducibility. It can be used for determination of the total sugar content in the extract of Rehmannia glutinosa Libosch. KEYWORDSthe extract of Rehmannia glutinosa Libosch; total sugars; anthrone-sulfuric acid colo
5、rimetric methods 生地黄为玄参科多年生草本植物地黄(Rehmannia glutinosa Libosch)的干燥块根，具清热凉血、养阴生津之功1。生地黄中的糖类是地黄的有效成分之一，现代药理研究表明，它具有增强免疫、降血糖、抗肿瘤等作用24。 曾有采用苯酚硫酸法5测定地黄中总糖含量的报道，其样品处理方法较复杂，且目前苯酚硫酸法中所用的苯酚需进行蒸馏后方可使用，污染较大，因此，笔者参考相关文献6,7，采用蒽酮硫酸法对自制的生地黄提取物进行总糖含量测定，为生地黄的质量控制提供依据。 1 材料与方法 1.1 仪器与试药 可见-紫外分光光度仪（UV-240，Shimadzu）、电光分
6、析天平(TG328A，上海天平仪器厂)、电子分析天平(AEL-160，Shimadzu)。 D-无水葡萄糖对照品（中国药品生物制品检验所，批号：110833-200302），浓硫酸(上海实验试剂有限公司，优级纯)，蒽酮（北京五七六O一有机化工厂，分析纯），生地黄提取物（自制，批号分别为061005、060927、061011），蒸馏水。 1.2 方法 1.2.1 溶液的配制 葡萄糖对照品储备液：称取葡萄糖对照品适量，精密称定，置于25 mL量瓶中，加水配制成0.251 2 mg/mL的储备液。精取此储备液1 mL，加水定容于10 mL量瓶中即得葡萄糖对照品溶液。 蒽酮试剂：称取蒽酮约0.2 g
7、，用浓硫酸溶解并定容到100 mL，临用时配制。 122 样品溶液的配制 称取自制的生地黄提取物适量，精密称定，加水溶解，稀释定容至每毫升溶液含生地黄药材0.04 mg。 123 吸收光谱波长的选择 分别取葡萄糖对照品溶液和样品溶液各适量，与蒽酮试剂显色稳定后，在可见-紫外分光光度仪上从400800 nm波长范围内自动扫描，另取蒸馏水适量，同法操作，作为空白。葡萄糖对照品溶液和样品溶液均在625 nm处有最大吸收峰。故本实验采用625 nm为测定波长。 124 显色剂用量的选择 取6支具塞试管，第1管加入2 mL蒸馏水，作为空白，其他各管依次以11、12、13、14、18的比例加入葡萄糖对照品
8、溶液与蒽酮试剂，摇匀，室温放置30 min后测吸收值，结果发现,葡萄糖对照品溶液与蒽酮试剂的比例在12时吸收值最大，故本实验使用对照品溶液与蒽酮试剂用量的比例为12。 125 显色时间选择 取12支具塞试管，第1管加入2 mL蒸馏水，作为空白，其他各管均加入2 mL葡萄糖对照品溶液，再分别加入4 mL蒽酮试剂混合摇匀，室温放置，分别在显色后0、5、10、15、20、25、30、45、60、90、120 min时测A625，发现在显色30 min时吸收值最大，故本实验选择30 min作为显色时间。 126 标准曲线的制备 分别精取“121”项下葡萄糖对照品储备液0、0.1、0.2、0.4、0.6
9、、0.8、1.0 mL于5 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。分别精取2 mL上述溶液于10 mL具塞试管中，均加入4 mL蒽酮试剂，摇匀，室温放置30 min，以第1管为空白对照，测A625。以葡萄糖溶液浓度C为横轴，吸光度A为纵轴，进行线性回归，得标准曲线回归方程：A =15.362C0.000 07，r0.999 8，线性范围为0.0050.05 mg/mL。 2 结果 21 样品溶液显色稳定性试验 取样品溶液适量，按照“126”项下操作，分别在显色后0、5、10、15、20、25、30、45、60、90、120 min时测A625，结果得出样品溶液在显色30120 min内吸收值
10、基本稳定。 22 精密度试验 取葡萄糖对照品溶液适量，按照“126”项下操作，连续测定6次，结果RSD为0.3，表明精密度良好。 23 重复性试验 取相同制法制备的同一批6份样品，按照“126”项下操作，结果RSD为2.8，表明重现性良好。 24 加样回收率试验 在已知含量的样品中分别加入一定量的葡萄糖对照品，按照“126”项下操作测定吸收值，计算回收率，结果见表1。 25 生地黄提取物中总糖含量测定 分别称取不同批号的生地黄提取物样品适量，精密称定，按“122”项下配制样品溶液，再按照“126”项下操作，由回归方程计算生地黄提取物中总糖含量。结果表明，河南、河北、山西产地的总糖含量分别为43
11、.5%、25.8%和26.3%。 3 讨论 目前测定中药材及其制剂中总糖含量的方法较多采用蒽酮硫酸法和苯酚硫酸法，以葡萄糖或其他单糖为对照品，测定得到样品中以葡萄糖或其他单糖计的相对含量，产生的偏差较小。其原理均为己糖在硫酸作用下失水形成糠醛可与之形成有色配合物，从而可在可见波长区有最大吸收。 笔者采用0.2蒽酮硫酸溶液作为显色剂，通过显色反应条件试验，确定了显色剂用量、反应时间，建立了相对比较稳定的显色反应方法。 笔者曾对不同显色方法进行了比较，方法1：取2支具塞试管置于冰水中，分别加入适量葡萄糖溶液及蒸馏水,加入蒽酮试剂，操作完成后，摇匀，置沸水中，煮沸，保持沸腾10 min，取出，放入冰
12、水浴中冷却；方法2：同“1.2.3”项下操作，发现方法1得到的溶液显褐色，而方法2为蓝绿色，且最大吸收波长在625 nm，与文献报道相符，故采用方法2显色。 本文分别测定了不同产地的生地黄制备得到的提取物中总糖的含量，发现河南的提取物中总糖的含量较其它两产地的高。 参考文献 1 国家药典委员会编.中华人民共和国药典一部M.北京:化学工业出版社,2005:82-83. 2 刘福君,赵修南,聂伟,等.地黄低聚糖增强小鼠免疫功能的作用J.中国药理学通报,1998,14(1):90-92. 3 郭丽民,张汝学,贾正平,等.地黄寡糖对HepG2细胞增殖及胰岛素抵抗的作用J.中国中药杂志,2007,32(13):1328-1332. 4 陈力真,冯杏婉,周金黄,等.地黄多糖b的免疫抑瘤作用及其机理J.中国药理学与毒理学杂志,1993,7(2):153-156. 5 边宝林,王宏洁,倪慕云.地黄及其炮制品中总糖及几种主要糖的含量测定J.中国中药杂志,1995,20(8):469-471. 6 易剑平,毕雅静,宋秀荣,等.蒽酮硫酸法测定枸杞多糖质量分数的研究J.北京工业大学学报,2005,31(6):641-646. 7 杨莉,王志华,陶健生.黄芪中黄芪多糖含量测定方法的比较J.中国医药工业杂志,2005,36(9):562-563. (收稿日期：2008-05-28)第 7 页 共 7 页
