1、宫瘤宁胶囊质量标准中含量测定的方法学探讨淮海医医2007 年 l1 月第 25 卷第 6 期JHuaihaiMed,November2007,Vo1.25,No.6宫瘤宁胶囊质量标准中含量测定的方法学探讨王惠娟,李树鹏,姚华.【关键词】宫瘤宁胶囊;海藻;碘;总多糖;氧化还原滴定法;紫外分光光度法【中图分类号】R286,R927.2【文献标识码】A【文章编号】1008.7044(2007)06.0569.03宫瘤宁胶囊为主要用于治疗妇科疾病子宫瘤的中成药,处方由海藻,三棱,蛇莓,石见穿,党参,山药等十味中药组成.其中海藻为君药,是马尾藻科植物海蒿子 Sargassumpahhidum(Turn.
2、)C.Ag.或羊栖菜 Sargassumfusiforme(Haiv.)Setch.的干燥藻体.化学成分主要包括藻胶酸与马尾藻多糖,还含有氨基酸,甘露醇,钾及碘等.其中碘为海藻的特征成分,也是主要活性成分之一,故将碘的含量作为药品的质量控制指标.又因为宫瘤宁胶囊为抗肿瘤药,多糖为其主要药理活性成分,故对药品中多糖的含量进行测定,并做方法学考察,以更好地控制药品质量.1 碘含量测定1.1 仪器与试剂 SXZ 一 410 箱式电阻炉(上海祖发实业有限公司);德国 BP21lDSartorius 电子天平(1/10 万); 氢氧化钠,锌粉,盐酸,氯仿等试剂均为分析纯基准化钾(中国药品生物制品检定所提
3、供,批号:07379910).1.2 碘酸钾滴定液(0.001mol/L)的帝】备精密称取在 105干燥至恒重的基准碘酸钾 0.214g,置于1000ml 量瓶中,加水适量使溶解并稀释至刻度,即得.1.3 供试品溶液的制备取宫瘤宁胶囊 40 粒,倾出内容物,研细,取药 10g,精密称定,置蒸发皿中,加 2mol/L 氢氧化钠溶液 30ml,锌 2g,搅拌均匀,用表面皿覆盖,低温加热至微沸,保持 30min,表面皿用少量水洗净,洗液并入蒸发皿中,继续蒸发至干,缓缓加热炽灼,温度每上升 100C 维持 10min,升温至400500C 时维持 8Omin,取出,放冷,残渣研细,置烧杯中,加水 50
4、ml,煮沸约 5min,滤过,残渣用水重复处理 3 次,每次 40ml,滤过,滤液合并,加热浓缩约30ml,放冷,即得供试品溶液.1.4 测定方法取供试品溶液,加入氯仿 5ml,用碘酸钾滴定液(0.001mol/L)滴定,同时强烈振摇,滴定至氯仿层显紫红色,继续滴定至氯仿层颜色消失【作者单位】1.安徽省蚌埠市第三人民医院中药科,233000;2. 安徽省蚌埠市药品质量监督检测所,233000【作者简介】王惠娟(1975 一)女,安徽蚌埠市人,中药师,大专.即得.每 1ml 的碘酸钾滴定液(0.001mol/L)相当于0.2538mg 的碘.根据公式:碘含量(/g/粒)一 V0.2538mg/m
5、L(c/o.001)M10000.45(V:消耗碘酸钾滴定液体积,C:碘酸钾滴定液浓度,M:样品量,0.45:标示量,0.45g/粒)计算,即得.1.5 重现性试验取同批样品 5 份,照碘含量测定项下的方法滴定,同时作空白对照,记录滴定液的体积,计算结果,并计算 RSD,结果平均碘含量为195.00.g/粒,RSD 为 1.4,表明本品含量测定方法重现性良好.1.6 加样回收率实验精密称取已知含量的样品(碘含量为 195.00.g/粒)5 份 ,每份约 5g,分别精密加入基准碘化钾溶液(浓度 2.731mg/m1),按含量测定项下的方法,同时以空白为对照进行滴定,记录滴定液的体积,计算碘含量(
6、每 1ml0.001mol/L 的碘酸钾滴定液相当于 0.2538mg 的碘),并计算 RSD,结果样品平均加样回收率为 96.60,RSD 为1.52,表明本方法准确度良好.2 总多糖含量测定本品为抗肿瘤药,多糖为其主要药理活性成分,具有增强免疫力,抗氧化,抗自由基等多种药理作用,而原宫瘤宁片质量标准中,仅以测定碘的含量来作为质量控制指标,碘在本品中含量低,原标准为每片不得少于 0.05mg(约万分之一),而且其测定方法操作步骤较多,影响因素大.因此,我们参照文献1q,增加了用紫外线分光光度法测定处方中总多糖含量的方法,以更好地控制药品的质量,具体试验如下:2.1 仪器与试剂 TU 一 18
7、10H 紫外分光光度仪(北京普析);德国 BP211DSartorius 电子天平(I/10万);苯酚,硫酸等试剂均为分析纯;D 一葡萄糖对照品(中国药品生物制品检定所提供;批号:07379910).2.2 样品溶液的制备2.2.1 葡萄糖标准溶液的制备精密称取 105干燥至恒重的葡萄糖 23.28mg,置 100ml 容量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,摇匀,即得葡萄标准溶液,浓度为 0.2398mg/ml.2.2.2 供试品溶液的制备取装量差异项下的样品约 150mg,精密称定,置烧瓶中,加 80 乙醇回流提淮海医医2007 年 11 月第 25 卷第 6 期JHuaihaiMed.Novem
8、ber2007.Vo!.25.No.6取 1h,趁热过滤,滤渣加 80 热乙醇洗洗涤 3 次.滤渣加蒸馏水 100ml,加热提取 1h,趁热过滤,滤渣用热水洗涤 3 次,合并滤液及洗涤液,放冷,加到已处理好的 AB 一 8 型大孔树脂柱(内径 15mm,高 150mm)上,用水洗脱,用 250ml 量瓶收集流出液及洗脱液至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得.2.2.3 阴性对照溶液的制备按上供试品溶液处理方法,取缺海藻样品适量,研细,取约 150mg,精密称定,同供试品溶液制备方法同法制成阴性对照溶液.2.3 检测波长的确定精密吸精密吸取萄萄糖溶液(37.248gg/m1)2ml,供试品溶液 2
9、m1,阴性对照溶液 2m1 及蒸馏水 2m1,分别加入 5 苯酚溶液 1m1,混匀,迅速加入浓硫酸 5ml,摇匀,放置 5min,于沸水浴中放置 15min,取出冷却至室温,在 700300nm 范围内进行扫描,结果葡萄糖对照品溶液在 488nm 处有最大吸收峰;样品溶液在 488nm 处有最大吸收,且峰形和对照品峰形基本一致;空白对照在484.5nm 处有一很低的吸收峰,峰吸收度 A 为0.0404,基本不影响光度测定;阴性对照溶液在 488nm 处也有最大吸收峰,且峰形和对照品峰形基本一致,吸收度 A 为 0.2674,比样品溶液 A 值小很多,说明除海藻外,其它几昧药中也含有多糖,但含量
10、较海藻低,从以上扫描图谱看,葡萄糖对照溶液,样品溶液及缺海藻阴性对照液均在 488rirfl 左右处有最大吸收峰,因此选择 488nm 作为测定样品总多糖含量的检测波长.2.4 辅料干扰试验宫瘤宁胶囊以淀粉为辅料,为考察淀粉是否干扰多糖的测定,进行淀粉干扰试验.按宫瘤宁制剂工艺处方中淀粉的比例,称取淀粉13.5mg,照上法制备供试品溶液,并于 7O0300nm范围内进行扫描,结果图谱与空白图峰形和峰高基本相同,说明淀粉不干扰多糖的测定.2.5 线性范围考察精密吸取葡萄糖标准溶液(0.2328mg/m1)各 2,4,8,12,l6ml 置 50m1 量瓶中,加蒸馏水至刻度,摇匀.精密吸取上述溶液
11、各 2m1,分别加入 5 苯酚溶液 1m1,混匀,迅速加入浓硫酸 5m1,摇匀,放置 5min,于沸水浴中放置 15min,取出冷却至室温,以空白为对照,在 488nm 处进行光度测量,记录 A 值,由溶液浓度(C)对吸光度(A)值,进行线性回归,得回归方程.r 一 0.0112X+0.0394,F-0.9995.结果见表 1.表 1 线性范围考察结果葡萄糖浓度(z/rod9.321l8.62437.24855.87274.496吸收度(A)0.14820.25420.44770.65830.8776表 1 结果表明:在 9.31274.496vg/ml 浓度间,本法的线性关系良好.2.6 精
12、密度试验取线性范围考察中的 3 号样品溶液 5 份,每份 2ml,分别加入 5%苯酚溶液 1ml,混匀,迅速加入硫酸 5ml,摇匀,放置 5min,于沸水浴中放置 15min,取出冷却至室温,在 488rim 处进行光度测量,记录吸光度 A 值,计算 RSD 为 0.82,表明精密度良好.2.7 溶液稳定性试验取供试品溶液 2ml,加入 5%苯酚溶液 1m1,混匀,迅速加入浓硫酸 5ml,摇匀,放置 5min,于沸水浴中放置 15min,取出冷却至室温后,分别于 0,15,30,45,60miri,在 488rim 处进行光度测量,记录吸光度 A 值,计算 RSD 为 1.2,结果表明供试品溶
13、液在 1h 内基本稳定.2.8 重现性试验取同批样品 5 份,照供试品溶液项下的方法制备供试品溶液,分别吸取各份样品溶液2m1,照含量测定项下的方法,以空白作对照,在 488rim 处进行测定,记录吸光度 A 值,计算测定结果与RSD 值,结果重现性试验样品平均总多糖含量为40.08mg/粒,RSD 为 1.16%,表明本含量测定法重现性良好.2.9 加样回收率实验精密称取已知含量的样品(总多糖含量为 40.08/粒)5 份,加 80 乙醇回流提取 1h,趁热过滤,滤渣加 80%热乙醇洗涤 3 次.滤渣加蒸馏水 100ml,再分别加入葡萄糖对照品,按含量测定项下的方法测定,计算 RSD,结果见
14、表 2.表 2 样品加样回收率实验结果结果样品平均加样回收率为 98.88%,RSD 为1.249/6,表明本方法准确度良好.3 实验结论3.1 碘测定方法通过以上试验研究结果可知,碘测定方法对样品中碘的含量测定,具有良好的重现性及回收性,该法准确性和重现性均良好,可用于宫瘤宁胶囊中碘的含量测定.3.2 总多糖测定方法总多糖测定方法对样品总多糖的含量测定,具有良好的精密度,重现性及回收率,该法准确性和重现性均良好,可用于宫瘤宁胶囊中总多糖的含量测定.两方法均具有良好的准确性,精密度及回收率,可同时作为控制宫瘤宁胶囊质量标准的方法.淮海医医2007 年 11 月第 25 卷第 6 期JHuaih
15、aiMed,November2007,Vo1.25,No.6果糖注射液联合纳洛酮,可拉明治疗中重度急性酒精中毒杜卫星【摘要】目的通过总结果糖糖注射液联合纳洛酮,可拉明对中重度酒精中毒的治疗效果,为临床提供治疗经验.方法对 54 例中重度急性酒精中毒患者的发病情况及用果糖注射液联合纳洛酮,可拉明的治疗效果进行分析.结果54 例患者全部恢复清醒并治愈,尤其 2h 内恢复清醒者达 75.9%,3h 内恢复达 92.6%.结论果糖注射液联合纳洛酮,可拉明治疗中重度急性酒精中毒,清醒时间缩短,疗效满意.【关键词】酒精中毒;果糖注射液;纳洛酮;可拉明【中图分类号】R595.6【文献标识码】A【文章编号 】
16、10087044(20O7)O6 一O571 一 O2急性酒精中毒现在越来越多见,死亡病例亦在增多.笔者 2004 年 10 月2006 年 12 月采用果糖注射液联合纳洛酮,可拉明抢救治疗中重度急性酒精中毒54 例,取得满意效果,报告如下.1 临床资料1.1 一般资料本组 54 例,男 48 例,女 6 例,年龄2278 岁,平均 38 岁.中毒酒量:饮白酒 0.1O.9kg 者 21 例;红酒 0.252kg 者 7 例;啤酒 4504500ml 者 13 例;黄酒 0.53kg 者 l1 例;米酒 1.52kg 者 2 例.就诊时间为饮酒后 0.58h.1.2 发病情况 54 例患者均由
17、同伴或“120“护送至医院,均不能配合检查和回答问题,中重度患者主要为共济失调和昏睡期患者,其中共济失调期 18 例,昏睡期 36 例,昏睡期中浅昏迷 4 例,昏迷 2 例,大部分患者后期表现以抑制症状为主.就诊时呕吐者占80.血压正常者 18 例,血压增高者 13 例,最高达210/110mmHg;血压下降者 23 例,最低为 30/0mmHg.1.3 治疗方法发病 2h 以内者,应尽可能催吐,洗【作者单位】江苏省南通市虹桥医院内科,226006【作者简介】杜卫星(1958 一),男,江苏靖江市人,副主任医师,大学.胃,每个患者均给予吸氧,补液,抗休克,抗感染,纠正水电酸碱失衡,保护胃黏膜等
18、处理,血压较高者予降压,脱水治疗,在此基础上,根据病情及个体给予纳洛酮 0.40.8mg 静脉注射,接着予果糖注射液 250500ml 加纳洛酮 0.81.6mg 及可拉明 0.751.5g 静脉滴注,密切观察生命体征,必要时可再重复静滴 1 次.1.4 治疗结果全部病例均恢复清醒,生命体征好转,稳定并治愈.其中 0.51h 清醒者 16 例(共济失调期者 l1 例,昏睡期者 5 例),12h 清醒者 25 例(共济失调期者 6 例,昏睡期者 19 例),23h 清醒者9 例(共济失调期者 1 例,昏睡期者 8 例),34h 清醒者 3 例,1 例 6h 后清醒(均为昏睡期患者).2 讨论酒精
19、又名乙醇,是中枢神经系统抑制剂.急性酒精中毒是指短期内饮人过量酒精后出现的中枢神经系统先兴奋后抑制的状态.饮酒后进人体内的乙醇超过肝脏的氧化代谢能力而蓄积,经血一脑屏障进人中枢神经系统.此时机体亦处于氧化应激状态,释放具有阿片样作用的 fi-内啡肽增加 ,进一步加重神志障碍和中枢神经系统功能紊乱1.4 讨论药品中选择碘及多糖作为含量测定的指标,因为碘是原片剂标准中已有,故收载.处方中含甘草,且甘草次酸含量测定的方法成熟,但处方中甘草含量小,干扰大,不便于含量测定.故选择含量大,且药理作用明显的多糖作为含量测定的指标.在总多糖含量测定方法中,参考文献用 899,5 乙醇除去脂溶性杂质,并使多糖成
20、分析出,然后再用水提取多糖测定,但该方法杂志干扰大,紫外图谱中无多糖峰,故应对供试品溶液重新处理.根据大孔树脂不吸附多糖等水溶性成分,而脂溶性成分容易被吸收的性质,以 AB 一 8 型大孔树脂处理样品,除去脂溶性杂质,结果样品溶液在 488nm 处有最大吸收,吸收度A 值为 0.6266,且峰形与对照品峰形基本一致,说明供试品溶液处理方法可行,效果明显.【参考文献】E13 中华人民共和国药品标准“WS3579(Z 一 083)一 2003(z)“宫瘤宁片质量标准.E23 芦金清,邓可众.中药海藻多糖的提取与分析 EJ3.中成药,1998,20(6):9E33 国家药典委员会.中华人民共和国药典(二部)Es3.北京,化学工业出版社,2005 附录.(收稿日期:200701-15)
