1、通 讯 作 者：郭 新 军【临 床 医 学】分 泌 蛋 白 胶 体 金 法 检 测 痰 液 在肺 结 核 诊 断 中 的 价 值郭 新 军，杜 小 倩（滨 州 市 中 心 医 院 医 学 检 验 科，山 东 滨 州）摘 要 目 的：探 讨 结 核 分 枝 杆 菌（，）分 泌 蛋 白 胶 体 金 法 检 测患 者 痰 液 在 肺 结 核 诊 断 中 的 临 床 应 用 价 值。方 法：选 取 年 月 至 年 月 在 滨 州 市中 心 医 院 确 诊 的 住 院 肺 结 核 患 者 例 作 为 研 究 对 象，留 取 晨 痰，分 别 采 用 痰 抗 酸 染 色 涂 片 镜 检法、痰 培 养 法、分
2、 泌 蛋 白 胶 体 金 法、法 进 行 检 测，对 比 不 同 方 法 的 诊 断 效能。结 果：例 患 者 痰 涂 片 阳 性 例（），痰 培 养 阳 性 例（），痰 胶 体 金 阳 性 例（），法 阳 性 例（）。痰 胶 体 金 法 与 痰 培 养 结 果 比较 差 异 有 统 计 学 意 义（，）；法 和 痰 培 养 法 结 果 比 较 差 异有 统 计 学 意 义（，）；痰 胶 体 金 法 与 法 结 果 比 较 差 异 无统 计 学 意 义（，）。例 患 者 痰 液 检 测，菌 阳 组 阳 性 检 出 率 明 显 高 于 菌 阴 组（，；，）；通 过 痰 胶 体 金 法，菌 阳 组
3、 和 菌 阴 组 检 出 结 果差 异 有 统 计 学 意 义（，），但 初 治 和 复 治 患 者 之 间，结 果 比 较 差 异 无 统 计 学意 义（，）。结 论：分 泌 蛋 白 胶 体 金 法 检 测 患 者 痰 液 在 肺 结 核 诊 断 中 有较 大 临 床 价 值，且 快 速、简 便，值 得 推 广 应 用。关 键 词 肺 结 核；分 枝 杆 菌；蛋 白 质 组 学；抗 体 胶 体 金 法：，（，）：，：，（），年 第 卷 第 期.（），（），（）（，）；（，）；（，），（，；，），（，），（，）：，（），年 我 国 新 发 万 结 核 患 者，位 居 全 球第 位，其 中 肺
4、结 核 发 病 万 例。随 着 我 国生 活 水 平 的 提 高 和 国 家 预 防 控 制 结 核 力 度 的 加 大，我 国 肺 结 核 患 者 略 有 减 少，但 仍 需 不 断 改 善 预 防、诊断 及 治 疗 措 施，才 能 在 未 来 实 现 终 止 结 核 病 的 愿 景。目 前 临 床 诊 断 肺 结 核 的 方 法 有 传 统 的 痰 涂 片 法 和 痰培 养 法 以 及 分 子 生 物 学 方 法。但 这 些 方 法 对 专业 技 术 及 实 验 室 环 境 要 求 较 高，无 法 在 基 层 大 规 模开 展。因 此，目 前 需 要 一 种 操 作 简 单，检 测 快 速
5、 的 方法。研 究 发 现 结 核 分 枝 杆 菌（，）分 泌 蛋 白 仅 存 在 于 活 动 性 的 中，且 非 结 核 分 枝 杆 菌（，）不 存 在。本 研 究 采 用 分 泌 蛋 白 胶 体 金法 检 测 肺 结 核 患 者 的 痰 液，并 与 不 同 的 检 测 方 法 进行 比 较，探 索 该 免 疫 学 方 法 在 肺 结 核 诊 断 中 的 价 值。对 象 与 方 法 一 般 资 料 选 取 年 月 至 年 月在 滨 州 市 结 核 病 防 治 院 确 诊 的 住 院 肺 结 核 患 者 例，其 中 男 性 例、女 性 例，年 龄 岁、平均 年 龄 岁。纳 入 标 准：菌 阴
6、性 肺 结 核 次 痰涂 片 抗 酸 染 色 及 次 痰 培 养 均 阴 性 的 肺 结 核，同 时 需 满 足 以 下 条 件（）（）条 中 项 或 是（）（）条 中 任 何 一 项 即 可 确 诊。条 件 包 括：（）典 型 的肺 结 核 临 床 表 现 及 胸 部 影 像 学 表 现；（）临 床 可 排除 其 他 非 结 核 性 肺 部 疾 病；（）病 理 证 实 肺 外 组 织病 灶 为 结 核 病 变；（）血 清 抗 结 核 抗 体 阳 性，试验（）强 阳 性；（）痰 的 和 探 针 检 测 呈阳 性；（）抗 结 核 药 物 治 疗 有 效；（）支 气 管 肺 泡 灌洗 液（）检 出
7、；（）病 理 证 实 支 气 管 或 肺 部组 织 病 灶 为 结 核 病 变。菌 阳 肺 结 核 为 痰 涂 片 或 痰培 养 阳 性。所 有 病 例 均 满 足 中 华 人 民 共 和 国 卫 生行 业 标 准 肺 结 核 诊 断（）。排 除标 准：合 并 艾 滋 病 病 毒 感 染（）艾 滋 病（）；合 并 肺 部 肿 瘤 或 非 结 核 分 枝 杆 菌 肺 病。本 研 究 通 过我 院 伦 理 委 员 会 批 准 审 议，已 入 选 的 所 有 研 究 病 例及 家 属 均 知 情 同 意。标 本 留 取 例 肺 结 核 患 者 分 别 留 取 晨 痰 于 无 菌 痰 盒 中，由 专
8、门 护 理 人 员 收 集，并 转送 检 验 科 立 即 检 查。仪 器 与 试 剂 分 泌 蛋 白 胶 体 金 试 纸 条 由济 南 杏 恩 生 物 科 技 有 限 公 司 生 产；系 统（美 国）由 国 药 公 司 提 供；酸 性 罗 氏 培 养 基，抗 酸 染 色 液（齐 尼 氏 法）染 液 均 由 珠 海 贝 索 生 物 技术 有 限 公 司 提 供。检 测 方 法 痰 涂 片 法 从 痰 标 本 中 挑 取 痰 液 涂 片，经 抗 酸 染 色 镜 检。质 量 控 制：染 色 完 成 年 第 卷 第 期.后，痰 膜 肉 眼 观 察 应 呈 蓝 色，无 红 色 团 块；阳 性 质 控玻
9、片 来 源 于 排 菌 阳 性 病 人 的 痰 标 本，阴 性 质 控 玻 片来 源 于 阴 性 病 人 的 痰 标 本。痰 胶 体 金 法 挑 取 痰 标 本 分 别 加 到含 缓 冲 液 的 软 管 中 混 合，待 痰 液 消 化 后，分别 将 胶 体 金 试 纸 条 垂 直 插 入，经 过 虹 吸 现 象 标 本 虹吸 上 移 并 通 过 线 后，取 出 试 纸 条 平 放 于 白 色 背 景的 记 录 纸 上，后 判 定 结 果。痰 培 养 法 将 溶 液 与 痰 等 体 积混 匀，消 化 约，吸 取 接 种 于 酸 性 罗 氏培 养 基 中，孵 育 周，报 告 结 果。实 验 操 作
10、 和结 果 报 告 严 格 按 结 核 病 实 验 室 操 作 规 程 进 行。法 用 一 次 性 吸 管 吸取 痰 置 于 痰 杯 中，将 倍 体 积 的 样品 处 理 液 加 入 痰 杯 中 并 拧 紧 螺 旋 盖，将 痰 杯 置 于 涡旋 振 荡 器 上 振 荡，直 至 痰 与 处 理 液 完 全 混匀，在 室 温 下 静 置，轻 轻 打 开 检 测 匣 盖，使 用 专 用 的 移 液 管，吸 取 消 化 充 分 的标 本，沿 加 样 孔 位 置 缓 慢 加 入，扫 描 试 剂 盒 的 条 码，输 入 标 本 信 息，然 后 开 始 测 试。统 计 学 方 法 建 立 数 据 库 收 集
11、 数 据，运用 软 件 进 行 统 计 学 处 理 分 析，阳 性 检 出率 采 用 率 表 示，组 间 结 果 比 较 采 用 检 验，以 为 差 异 有 统 计 学 意 义。结 果 种 检 测 方 法 阳 性 检 出 情 况 痰 涂 片 法 和 痰培 养 法 比 较，结 果 差 异 无 统 计 学 意 义（，）；痰 胶 体 金 法 与 痰 培 养 结 果 比 较，差 异 有统 计 学 意 义（，）；法 与 痰 培 养 结 果 比 较，差 异 有 统 计 学 意 义（，）；痰 胶 体 金 法 与 法 比 较，差 异 无 统 计 学 意 义（，）。见 表。以 痰 培 养 为 金 标 准 分 析
12、 三 种 方 法 各 项 指 标 例 肺 结 核 以 痰 培 养 结 果 作 为 金 标 准，痰 涂 片 法灵 敏 度、特 异 度、假 阳 性 率 和 假 阴 性 率 分 别 为（）、（）、表 种 检 测 方 法 阳 性 检 出 情 况（）方 法阳 性 率（）阴 性 率（）痰 涂 片 法 痰 培 养 法 痰 胶 体 金 法 法（）和（），痰 胶 体 金 法 灵 敏 度、特 异 度、假 阳 性 率 和 假 阴 性 率 分 别 为（）、（）、（）和（），法 灵 敏 度、特 异 度、假 阳 性 率 和 假 阴 性 率 分 别 为（）、（）、（）和（）。见 表。表 以 痰 培 养 为 标 准 三 种
13、方 法 阳 性 检 出 情 况痰 涂 片 法阳 性 例 数 阴 性 例 数合 计痰 胶 体 金 法阳 性 例 数 阴 性 例 数合 计 法阳 性 例 数 阴 性 例 数合 计痰 培 养 法 阳 性 例 数 阴 性 例 数 合 计 菌 阳 性 和 菌 阴 性 患 者 两 种 方 法 检 出 阳 性 情 况 例 肺 结 核 患 者，痰 涂 片 阳 性 例，痰 培 养 阳性 例，合 计 菌 阳 患 者 例，菌 阴 患 者 为 例。通 过 痰 胶 体 金 法 和 法，菌 阳 组和 菌 阴 组 阳 性 检 出 率 差 异 有 统 计 学 意 义（，；，）。菌 阳组 阳 性 检 出 率 高 于 菌 阴 组
14、（，；，）。两 种 方 法 阳 性 检 出 情 况见 表。表 菌 阳 性 和 菌 阴 性 患 者 两 种 方 法 阳 性 检 出 率 情 况方 法菌 阳 组（例）阳 性 率（）阴 性 率（）菌 阴 组（例）阳 性 率（）阴 性 率（）痰 胶 体 金 法 法 初 治 和 复 治 患 者 两 种 方 法 阳 性 检 出 情 况 例 患 者 中，初 治 例，复 治 例，痰 胶 体 金 法和 法 初 治 和 复 治 患 者 结 果 比 较差 异 均 无 统 计 学 意 义（），见 表。年 第 卷 第 期.表 初 治 和 复 治 患 者 两 种 方 法 阳 性 检 出 情 况方 法初 治 组（例）阳 性
15、 率（）阴 性 率（）复 治 组（例）阳 性 率（）阴 性 率（）痰 胶 体 金 法 法 讨 论 结 核 病 是 一 种 非 常 古 老 的 疾 病，至 今 仍 威 胁 着 人类 健 康，也 是 全 球 的 重 大 公 共 卫 生 问 题。近 年 来 诊 断结 核 病 的 技 术 不 断 发 展，但 仍 以 细 菌 学、免 疫 学 和 分子 生 物 学 诊 断 三 大 方 法 为 主。除 传 统 细 菌 学 方 法，干 扰 素 释 放 试 验（）是 一 种 新 型 免 疫 学 方 法。优 点 是 阴 性 结 果 能 排 除 感 染，且 不 受 卡介 苗 和 大 多 数 影 响，缺 点 是 不
16、能 区 分 活 动 性 结核 和 潜 伏 性 结 核，且 操 作 步 骤 复 杂，成 本 较 高。另外，技 术 虽 然 能 准 确 快 速 鉴 定，且 能 同 时 检 测 利 福 平 的 耐 药 性，但 价 格 昂 贵。研 究 发 现 结 核 分 枝 杆 菌 基 因 序 列 中 的 一 些 片 段在 牛 分 枝 杆 菌 或 卡 介 苗 基 因 组 中 缺 失，这 些 缺 失 的片 段 被 称 为 差 异 区 域（，），主 要 为、和。、和 可表 达 分 泌 蛋 白，这 些 分 泌 蛋 白 主 要 有、等。这 些 分 泌 蛋 白 仅 存 在 于 致 病性 的 结 核 分 枝 杆 菌 中，且 与
17、结 核 分 枝 杆 菌 的 毒力 密 切 相 关，为 此 在 结 核 病 诊 断 新 方 法 建 立 中具 有 较 大 的 临 床 意 义。本 研 究 通 过 胶 体 金 法 判 断 标本 是 否 含 有 活 动 性 结 核 分 枝 杆 菌 基 因 序 列 中、以 及 片 段 所 转 译 出 的 分 泌 蛋 白，从 而 判 断是 否 患 有 结 核 病。与 和 技 术 相 比，痰 胶 体 金 法 操 作 简 便、快 速，成 本 较 低。本 研 究 中，例 肺 结 核 患 者 经 痰 涂 片 法、痰 培养 法、痰 胶 体 金 法 和 法 检 测，痰胶 体 金 阳 性 率，痰 胶 体 金 法 和
18、法 阳 性 检 出 率 明 显 高 于 痰 涂 片 法 和 痰 培养 法，说 明 肺 结 核 患 者 的 痰 液 中 有 分 泌 蛋 白 的 存 在。有 研 究 报 道，结 核 病 患 者 痰 胶 体 金 法 对 和 的 阳 性 检 出 率 分 别 为 和。本 研 究 中，以 痰 培 养 结 果 为 金 标 准，痰胶 体 金 法 和 法 有 较 高 的 灵 敏度，但 相 对 而 言，痰 胶 体 金 法 和 法 假 阳 性 率 和 假 阴 性 率 也 较 高，分 别 为、和、。痰 胶 体 金 法 和 法 假 阳 性 率 较 高，说 明 培 养 法存 在 敏 感 性 较 低 的 不 足。而 痰 胶
19、 体 金 法 假 阴 性率 较 高，可 能 是 部 分 患 者 因 抗 结 核 药 物 的 化 疗，使 结核 分 枝 杆 菌 尽 管 存 活，但 其 生 长 繁 殖 受 到 抑 制，导 致分 泌 蛋 白 分 泌 降 低，甚 至 失 去 分 泌 的 能 力。例 肺 结 核 患 者 中，菌 阳 组 阳 性 检 出 率 显 著高 于 菌 阴 组，而 初 治 组 和 复 治 组 的 阳 性 检 出 率 差 异无 统 计 学 意 义（），说 明 患 者 痰 液 结 核 分 枝杆 菌 含 量 越 大，产 生 的 分 泌 蛋 白 越 多，患 者 无 论 是 初治 或 复 治，只 要 抗 结 核 药 物 没
20、有 有 效 地 抑 制 结 核 分枝 杆 菌 的 生 长 繁 殖，结 核 分 枝 杆 菌 仍 可 分 泌 蛋 白。目 前，以 建 立 的 免 疫 学 检 查 方 法 诊 断 肺 结核 在 临 床 中 已 得 到 较 为 广 泛 的 应 用。国 内 外 诸 多 报道 以 建 立 的 免 疫 学 来 检 测 诊 断 肺 结 核，具 有 较高 的 特 异 度 和 敏 感 度，。本 研 究 通 过 检 测 肺结 核 患 者 的 痰 液 来 诊 断 肺 结 核，并 与 传 统 检 测 方 法进 行 比 较，是 一 种 有 益 的 尝 试，并 验 证 了 胶 体 金 法 检测 患 者 的 痰 液，对 诊
21、断 肺 结 核 有 一 定 的 临 床 参 考 价值。法 价 格 昂 贵，而 痰 胶 体 金法 操 作 简 便、快 速，成 本 较 低，且 与 法 在 阳 性 检 出 率 方 面 并 无 明 显 差 异，因 此 痰 胶体 金 法 值 得 临 床 及 基 层 推 广 应 用，但 因 观 察 病 例 较少，仍 需 在 临 床 应 用 中 不 断 深 入 研 究。参 考 文 献 徐 彩 红，赵 雁 林 从 年 全 球 结 核 病 报 告 看 我 国结 核 病 防 治 工 作 中 华 传 染 病 杂 志，（）：，：，中 国 疾病 预 防 控 制 中 心 周 报，（）：白 云，安 黎 云 结 核 病 实
22、 验 室 诊 断 技 术 研 究 进 展 临 床 误 诊 误 治，（）：（下 转 第 页）年 第 卷 第 期.徐 磊，马 晓 春，代 军，等 贵 州 省 遵 义 医 学 院 级实 验 动 物 设 施 的 建 设 与 管 理 医 学 动 物 防 制，（）：彭 丽 娜，王 朝 霞 高 校 实 验 动 物 屏 障 设 施 微 生 物 监 控管 理 实 验 动 物 与 比 较 医 学，（）：刘 晓 楠，彭 博 雅，杜 小 燕，等 高 校 实 验 动 物 资 源 供应 管 理 的 优 化 模 式 研 究 中 国 医 学 装 备，（）：国 家 质 量 监 督 检 验 检 疫 总 局，中 国 国 家 标 准
23、 化 管 理 委员 会 实 验 动 物 环 境 及 设 施：北京：中 国 标 准 出 版 社，赵 东 岳，林 丹 枫 实 验 动 物 屏 障 系 统 的 运 营 管 理 实 验 室 科 学，（）：董 浩 然，王 萧，桑 传 兰，等 温 度、湿 度 对 实 验 动 物 福利 的 影 响 广 州 中 医 药 大 学 学 报，（）：寇 举，张 来 宾，胡 士 鹏，等 屏 障 系 统 环 境 因 素 对 实验 动 物 的 影 响 畜 牧 与 饲 料 科 学，（）：，（）：卢 昊，杨 文 祥 湖 北 省 实 验 动 物 设 施 环 境 控 制 中 存在 的 问 题 中 国 比 较 医 学 杂 志，（）：
24、王 宁，王 萧，王 金 林 基 于 动 物 福 利 的 实 验 动 物 管 理 动 物 医 学 进 展，（）：，：赵 天，王 国 军，彭 孝 坤，等 氨 气 和 硫 化 氢 应 激 对 肉羊 免 疫 及 抗 氧 化 功 能 的 影 响 畜 牧 兽 医 学 报，（）：，：，（）：孙 洪 计，李 祥 子 医 学 院 校 级 动 物 实 验 室 建 设与 管 理：以 皖 南 医 学 院 为 例 实 验 技 术 与 管 理，（）：（收 稿 日 期：）（上 接 第 页），（）：中 华 人 民 共 和 国 国 家 卫 生 和 计 划 生 育 委 员 会 肺 结 核诊 断（）新 发 传 染 病 电 子 杂
25、志，（）：周 新 华 从 建 立 影 像 分 析 思 路 入 手 把 握 结 核 病 影 像 诊断 与 鉴 别 要 点 中 国 防 痨 杂 志，（）：李 文 彬，万 康 林 结 核 分 枝 杆 菌 区 蛋 白 研 究 进 展 中 国 人 兽 共 患 病 学 报，（）：王 烁 程，任 清 丹，陶 晨 璐，等 结 核 分 枝 杆 菌 抗 原 蛋白 研 究 的 新 进 展 吉 林 畜 牧 兽 医，（）：，（）：李 忠 奇，吴 冰 心，刘 巧，等 结 核 病 实 验 室 诊 断 技 术研 究 进 展 中 国 热 带 医 学，（）：，（）：，（）：谢 燕 玲，宁 唤 唤，梁 璇，等 结 核 分 枝 杆 菌 分 泌 蛋 白 单 克 隆 抗 体 的 制 备 及 其 特 异 性 中 国 人 兽共 患 病 学 报，（）：（收 稿 日 期：）年 第 卷 第 期.
