1、酪氨酸酶及其抗体与自身免疫性白癜风酪氨酸酶及其抗体与自身免疫性白癜风文章标题：酪氨酸酶及其抗体与自身免疫性白癜风摘要: 酪氨酸酶是黑素合成的关键酶，可能是白癜风自身免疫的重要抗原。最近发现部分白癜风患者血清中有酪氨酸酶抗体，且与白癜风临床类型和分期密切相关。提示自身免疫性白癜风发病机制与酪氨酸酶抗体水平有关，为其免疫治疗提供依据。酪氨酸酶抗体可以作为白癜风活动性的一个指标。 酪氨酸酶（TYR）是一种 75kD 含铜酶，取的十肽能体外诱导 TIL，将 TIL 细胞与 IL-2 配伍应用于HLA-A2 黑素瘤患者，可消除自发性黑素瘤的转移灶。 二、酪氨酸酶抗体 （一）检测方法：TYR 抗体在白癜风
2、患者血清中检出。Song 等111994 年用细菌合成人 TYR，免疫印迹法检测 TYR 抗体。这种方法相对不敏感且不能定量检测。Baharav 等121996 年使用蘑菇 TYR，ELISA 法检测 TYR 抗体，此法敏感，但所用蘑菇 TYR 与人TYR 同源性低。而 Xie 等131996 年则用人 MC 提取物作为 TYR 的来源，免疫沉淀法等检测 TYR 抗体。Kemp 等141997 年采用放免法（RIA）检测 TYR 抗体。近来此法已被用来检测自身免疫性疾病患者血清中的特异性抗体15-17。这种方法能敏感定量检测抗体。 （二）产生、特点、特性： 1.抗 TYR 抗体的产生：用人TY
3、RcDNA 转染 L 细胞，获得 L-TY 细胞，免疫同源性 C3H 鼠，即用5106L-TY 细胞与等量 Frend 佐剂混合，腹膜内注入有 6 周鼠龄的雌性 C3H 鼠体内，每次间隔 2 周，第 3，4 次用 5106 细胞裂解物与等量 Frend 佐剂混合免疫动物。第 4 次注射后 3 天，抽血，分离血清，同时用未转染 L 细胞去除非特异反应性成分，结果用人TYRcDNA 转染 L 细胞免疫的 8 只 C3H 鼠中，4 次免疫后，有 4 只对TYRcDNA 转染 L 细胞的鼠血清抗体滴度10-4，C3H 鼠免疫前及正常鼠对 L-TY 细胞无反应性。用 L-TY 细胞免疫动物获得的血清能沉
4、淀L-TY 和有色素 MMC 细胞裂解物。免疫沉淀法可见分子量为70kD80kD 的宽幅条带，可能为 TYR 生物合成中间代谢产物，未转染 L 细胞，TYR 阴性无色素 MMC 中未见特异性条带。 2.免疫印迹法检测 TYR 抗体：用抗 TYR 血清 10-3 稀释度，在 TYR 转染 L 细胞和有色素 MMC 可见细胞内颗粒染色，亲代 L 细胞内无胞内染色，在L-TY 细胞，细胞内染色颗粒位于核周和胞质内。无色素 MMC，不表达 TYRmRNA，无 TYR 活性，与 TYR 抗体无相互作用。有色素 MMC 和培养 MC，高度表达 TYR 活性，黑素形成多，细胞质颗粒深度染色。 单克隆抗体 T
5、A99 能识别 TRP-1 糖蛋白，TA99 能与人有色素 MMC 表达的 TRP-1 和转染 L-GP 细（用编码 TRP-1 全长 cDNA 转染鼠 L 细胞获得）表达的全长人 TRP-1cDNA 相互作用，且免疫耗竭实验证实TA99 不耗竭能产生分子量为 70kD80kD 条带的抗 TYR 血清，免疫荧光分析抗 TYR 抗体与 TRP-1，TYRl-GP 细胞无相互作用，抗 TYR 抗体不沉淀来自 L-GP 细胞的 TRP-1。 3.TYR 抗体使 TYR 活性丧失：免疫鼠血清能沉淀鼠 MMC，L-TY 细胞裂解物，提示免疫鼠血清能灭活有色素 MMC 及 L-TY 细胞 TYR 的活性，
6、加入 L-多巴底物后，见黑素形成，提示 TYR 活性恢复，免疫沉淀时如用免疫前血清则无黑素形成7。 三、白癜风 白癜风与 TYR 抗体：TYR 抗体在白癜风中常常发生。Song 等11应用免疫印迹法检测了 26 例白癜风患者血清，其中有 16 例（61）可与重组 TYR 特异性结合。26 例白癜风患者，有 16 例（61）血清 TYR 抗体阳性，其中 7 例伴发非胰岛素性糖尿病（IDDM）有 4 例（57） 、8 例伴发桥本甲状腺炎有 4例（50） 、3 例伴发 Grave 病有 3 例（100） 、7 例伴发 Addison病有 4 例（57）阳性。Kemp 等14应用 35S 标记人 TY
7、R，放免法（RIA）检测白癜风患者血清 TYR 抗体。在被检测的 46 例白癜风患者的血清中，5 例（10.9）TYR 抗体阳性，20 例对照血清及 10 例桥本甲状腺炎患者血清阴性。Baharav 等应用固相 ELISA 法检测 18例白癜风患者（弥漫性 7 例，局限性 1 例）血清中的 TYRigG 抗体滴度，结果（OD 均值）弥漫性白癜风为 0.6580.251，局限性白癜风0.1880.05，健康对照组 0.0930.049，显示弥漫性白癜风TYRigG 抗体滴度较局限性白癜风及健康对照组显著增高。这些 TYR抗体与 TYR 的亲和力高，与 b 位点基因产物 TRP-1 没有交叉反应1
8、2。大多数急性白癜风及黑素瘤患者有对 MC、MMC 的抗体，这些抗体在体外通过补体介导细胞毒作用和抗体依赖细胞毒作用杀伤MC。Cui 等检测发现 30 例黑素瘤患者血清有 24 例（80） 、29 例白癜风患者血清有 24 例（83）抗体阳性，而 28 例对照组只有 2 例（7）阳性。人及动物黑素瘤中，白癜风的出现能改变其进程。用MMC 免疫动物可诱发白癜风。重组抗 MMC 抗体对黑素瘤有效18。黑素瘤伴发白癜风时预后较好，白癜风患者抗体出现的频率和水平与黑素瘤退变（regression）一致。提示抗白癜风和黑素瘤抗体作用于色素细胞（MC，MMC）上有相同的抗原，并且这些抗原能在 MC和 MM
9、C 上表达19。白癜风 MC 抗体既能溶解 MC，致皮肤白斑形成，又能有效破坏 MMC；MMC 抗体也能与正常 MC 结合，诱导黑素瘤产生白癜风样白斑，TYR 抗体则是二者之间的桥梁。 白癜风患者血清 MC 抗体滴度与该病活动性和严重程度密切相关，50局限性白癜风患者血清中有对 MC 的抗体，而弥漫性白癜风则高达 93，且弥漫性白癜风 MC 抗体能与 MMC 结合，抑制其增殖。在补体存在的情况下溶解细胞，减少体内鼠黑素瘤转移，MMC 上抗体表位滴度在白癜风较健康者及黑素瘤高。黑素体是黑素合成和贮存的亚细胞器，Ando 等20认为黑素体数量变化与 TYRmRNA 水平有关。UVB 上调TYRmR
10、NA 水平致皮肤色素沉着21。TYR 和 gp75 都是黑素体转膜糖蛋白，TYR 抗体与 gp75 没有交叉反应22。 白癜风患者血清含有抗 MC 抗体，MC 抗体在 Smyth 鸡模型中于脱色前数周被检测到。近来黑素瘤患者血清中亦分离到 TRP-1 自身抗体，循环中的这些抗体被认为是导致 Smyth 鸡色素脱失斑的主要原因23,24。白癜风患者血清中 TYR 抗体的检出，进一步提示白癜风的分子发病机制，为临床分型、分期、治疗及预后提供依据。 参考文献 1SpritzRAetal.JInvestDermatol,1997;109:207-212 2JanetEetal.IntJDermatol
11、,1997;36:831-836 3ValverdePetal.ExpDermatol,1996;5:245-253 4ValverdePetal.PigmentCellRes,1996;9:77-84 5PicardoMetal.JInvestDermatol,1996;107:322-326 6TomerYetal.ArthritisRheum,1995;38:1375-1381 7BouchardBetal.JInvestDermatol,1994;102:291-295 8BagaravEetal.MelanomaReserch,1995;5:337-348 9BrichardVeta
12、l.JExpMed,1993;178:489-495 10LepooleICetal.JImmunol,1993;151:7284-7292 11SongYHetal.Lancet,1994;344:1049-1052 12BaharavEetal.ClinExpImmunol,1996;105:84-88 13XieZetal.JInvestDermatol,1996;106:938(abstr) 14KempHEetal.JInvestDermatol,1997;109:69-73 15FalorniAetal.Autoimmunity,1994;19:113-125 16FalorniA
13、etal.JClinEndocrinolMetab,1995;80:2752-2757 17PetersonPetal.ClinDiagnLabImmunol,1996;3:290-294 18NeriDetal.JInvestDermatol,1996;3:164-170 19CuiJetal.ArchDermatol,1995;131:314-318 20AndoHetal.JCellPhysiol,1995;163:608-614 21ImokawaGetal.JInvestDermatol,1995;105(1):32-37 22SethJetal.JInvestDermatol,1995;105:3-7 23WangBRetal.JExpMed,1995;181:1799-1804 24AustinLMetal.AmJClinPathol,1995;146:152酪氨酸酶及其抗体与自身免疫性白癜风
