1、多肿瘤标志物蛋白芯片检测系统在临床的应用评价32 现代检验医学杂志 2007 年 1 月第 22 卷第 1 期JModLabMed.January2007,Vo1.22,No.1多肿瘤标志物蛋白芯片检测系统在临床的应用评价杜同信,王自正.,陈兴国.,傅雷,毛鸽华,周宝宁,叶亚军(南京医科大学附属南京第一医院,a.核医学科;b.体检中心,江苏南京 210006)摘要:目的探讨多肿瘤标志物蛋白芯片与化学发光检测对肿瘤诊断的临床应用价值.方法应用多肿瘤标志物蛋白芯片与化学发光技术,对 180 名健康体检者和已患肿瘤的 210$1 病人进行 12 种肿瘤标志物联合检测,并对检测结果进行比对分析.结果多
2、肿瘤标志物蛋白芯片与化学发光检测两种方法在对健康体检组阳性率和特异性经统计学分析没有显着性差异(P0.05);对已患肿瘤的 2105,112 种肿瘤标志物检测两种方法的检测结果为AFP,PSA,f-PSA,CA19-9,CA153,NSE有显着性差异(PO.05),CA242,口.HCG,HGH,CA125,FER,CEA 没有显着性差异(PO.05).结论多肿瘤标志物蛋白芯片与化学发光检测在对提高肿瘤诊断的阳性率和特异性方面具有一定的相关性,但多肿瘤标志物蛋白芯片在健康体检中应用价值优于化学发光检测,而对确诊的肿瘤患者检测化学发光优于多肿瘤标志物蛋白芯片检测.关键词:蛋白芯片;肿瘤标志物;化
3、学发光分析中图分类号:R730.43 文献标识码:A 文章编号:16717414(2007)0103203EvaluationofCliniealApplieationofDeteetiveSystem0fMultitumorMarkersProteinChipDUTongxin,WANGZizheng,CHENXingguo,FULei,MAOGehua,ZHOUBaoning,YEYajun(a.DepartmentofNuclearMedicine;b.Departmentof0ncology,TheFirstAffiliatedNanjingHospital,NanjingMedica
4、lUniversity,JiangsuNanjing210006,China)Abstract:ObjectiveIdentificationofclinicalapplicationstocancerdiagnosiswithmulti-tumormarkersproteinchipandchemiluminescenceassay.MethodsDetectedandanalysedcomparatively12tumormarkersin180healthypeopleofphysi-calcheck-?upand210patientssufferedwithdifferentcance
5、rbymulti-?tumormarkersproteinchipandchemiluminescenceassay.ResultsTherewasnosignificantdifferencebetweenmulti-tumormarkersproteinchipandchemilumlnescenceas-sayinpositiveratioandspecificityofhealthypeopleofphysicalcheck-up(P0.05).Therewassignificantdifferencebe-tweentheminAFP,PSA,f-PSA.CA19-9,CA153an
6、dNSEoftumorpatients(PO.05),whiletherewasnosignificantdif-ferenceinCA2-42,-HCG.HGH,CA125,FERandCEA(PO.05).ConclusionTherearesomerelativltiesbetweenmul-ti-tumormarkersproteinchipandchemiluminescenceassayinimprovingpositiveratioandspecificityofcancerdiagnosis.Butmulti-tumormarkersproteinchipisbettertha
7、nchemiluminescenceassayinthedetectionofhealthypeopleofphysicalcheck-up,whilechemiluminescenceassayexcelsmulti-tumormarkersproteinchipasamethodofdiagnosingtumorpa-tients.Keywords:proteinchip;multi-tumormarkers;chemiluminescenceassay恶性肿瘤是危胁人类健康的主要因素之一,也据.是世界上死亡率最高的疾病之一1.因此,对于肿 1 材料和方法瘤的早期诊断,早期治疗尤为重要.但
8、是,从前的肿 1.1 对象瘤标志物检测无论是化学发光或是酶联免疫分析 1.1.1 健康体检组:180 例( 男1O2 例,女 78 例),年均较为单一,其漏检率较高,阳性率较低,耽误或龄 2978Y, 平均 5714.8Y,受检者来院之前排(和)加重了病情 .随着生物技术的不断发展,多肿除肝,心,肾,肺,胰,内分泌系统,生殖系统功能异瘤标志物蛋白芯片在肿瘤的早期诊断,治疗,预常,且排除家族中有癌症病史的正常人.后随访已广泛应用.我们中心自 2003 年对 180 名健 1.1.2 肿瘤组:210 例( 男 124例,女 86 例),年龄 23康体检者和已确诊肿瘤的 210 例病人进行了系统的7
9、6Y, 平均 5O.421.7Y.其中:消化道肿瘤 63物理检查和实验室 12 种(AFP,CA-153,CA 一 199,例(男 37 例,女 26 例),年龄2372Y,平均 5418.1CA 一 125,CA 一 242,CEA,HGH,Ferritin,7-HCG,Y;呼吸道肿瘤 67 例(男 37 例,女 3O 例),年龄 26PSA,fPSA,NSE)肿瘤标志物检查,分别采用化 68Y,平均 572O.5Y;泌尿系统肿瘤 62 例,其中学发光,酶联免疫分析等不同的检测方法,对其结男性 37 例,年龄 2676Y, 平均572O.4,女性 25果进行相关性分析,探讨其临床的应用价值,
10、为亚例,年龄 3166Y, 平均5821.9Y;其它肿瘤 18f 临床肿瘤患者提供新的早期诊断,早期治疗的依例(男 12 例,女 6 例),年龄2467Y,平均 5322.7作者简介:杜同信(1957 一),男,硕士,副主任技师,目前从事标记免疫学,分子生物学方面的研究,Tel:025-52214754.现代检验医学杂志 2007 年 1 月第 22 卷第 1 期JModLabMed.January2007,Vo1.22.No.133o上述诊断均经临床影像学检查,实验室检测或病理证实的住院和(或)f-j 诊病人.1.2 方法患者采血前一天暂停用对检测结果有较大影响的饮食和药物,早晨空腹立位采血
11、,速分离血清一 20保存待检,12 种(AFP,CA 一 153,CA 一199,CA 一 125,CA 一 242,CEA,HGH,Ferritin,BHCG,PSA,fPSA,NSE)肿瘤标志物蛋白芯片检测,检测仪及蛋白芯片均为上海湖州数康科技发展公司提供;发光仪分别为天津 DPC 公司 IMMUIITE1000 型(HGH),美国 Abbott 公司AXSYM(AFP,CEA,CA 一 153,CA 一 199,CA 一 125);德国 Roche 公司 2010(Ferritin,13-HCG,PSA,fPSA,NSE,CA 一 242);各项检测严格按照仪器说明书进行操作.1.3 统
12、计学分析数据用 SPSS12.0 软件进行统计分析,数据以均数标准差()表示,多组资料用 ANOVA 方法,P0.05 差异有统计学意义.2 结果 180 例健康体检组及 210 例肿瘤患者多肿瘤标志物蛋白芯片检测与化学发光检测结果的比较分析见表 1.180 例健康体检及 210 例肿瘤患者检测结果的正常参考值与阳性界值(i2s)为 CA19935.00KU/i,NSE13.00gg/L,CEA5.00gg/I,CA24220.O0KU/L,Ferritin 男322/I 女219gg/L,BHCG3.00gg/I,AFP20.00g/L,fPSA1.00g/I,PSA5.00g/I,CA12
13、535.00KU/I,HGH7.50g/L,CA15335.00KU/i表 1 健康体检组及肿瘤组蛋白芯片 12 项检测结果与化学发光检测结果的比较分析注:为了_统计方便将上述检测的各类肿瘤组归为一类 ,按其均值分布,求出阳性率和特异性,并行显着性检验(尸0.05 为有显着性差异). PSA 和 f-PSA 主要为男性泌尿系统肿瘤检测的标志物.其他肿瘤患者该标志物反应不明显,因此在做统计学分析时其阳性率较低,但特异性较高.pHCG,HGH 检测作为常规的肿瘤标志物项目 ,目前还有待商榷,特别是在临床的应用方面,从以上数据看 HGH 不如 HcG 的阳性率和特异性高.肿瘤患者组中的阳性率是指各种
14、肿瘤单项阳性之和在所有肿瘤组中占的百分率3 讨论现在肿瘤检测主要依靠影像学,病理学用与化学发光仪检测在健康体检组比较,两种方法和血清生化学检测.其中影像学方法可知肿瘤舶大其结果经统计学分析没有显着性差异(P0.05),致部位但只可用于检测直径较大肿瘤(一般1 但化学发光法的仪器和试剂比蛋白芯片试剂盒成cm).病理学检测通过观察肿瘤的组织,细胞对肿本高的多.蛋白芯片法血清用量C12 型仅为 0.3瘤进行确诊,但对人有创伤性.而且这两种检测的 ml,而化学发光法最少需要1.2ml 血清,且检测时范围多为中晚期病人,不利于肿瘤患者的早期诊断间远少于化学发光法.尤其 PSA和 fPSA 在对健和治疗.
15、另外肿瘤标志物并非肿瘤特有的物质,正康体检组分析时其阳性率和特异性与化学发光法常组织和细胞都可以表达,只不过是表达量的不一样有较好的表达能力;但 C12型在检测到较高浓同,这主要取决于肿瘤细胞的生物特性的复杂性及度肿瘤标志物时升高的幅度(量)没有化学发光法多态性.因此,大多数研究者均主张采用联合检测表现的贴近真值.这一结果与国内有关报道基本一的方法 L3,联合检测可弥补单项检测的不足,有助致【4.在健康体检组当中发现1 例女性,年龄 29Y,B 一于提高肿瘤检出率.C12 型肿瘤用蛋白芯片进行诊 HCG 和 CA125 蛋白芯片67.5miu/ml,145.5KU/断是将多种肿瘤标志物的抗体固
16、定于同一张蛋白 I,化学发光法检测水平 BHCG 和 CA125 分别为质芯片上,这样可以同时检测多种肿瘤标志物,从10000miu/ml,265.7KU/L,宫外孕伴不完全本文表 1 结果可以看出多肿瘤标志物蛋白芯片的应流产.就此病人而言化学发光法优于蛋白芯片检现代检验医学杂志 2007 年 1 月第 22 卷第 1 期JModLabMed,January2007,Vo1.22,No.1测.对于临床已经确诊的 210 例恶性肿瘤病人,对l2 种肿瘤标志物用蛋白芯片和化学发光法同时用两种方法进行联合检测结果见表 1.在表 1 中发现蛋白芯片检测绝大多数结果与发光法较为一致,没有明显差异(P0.
17、05),如:CEA,FER,CA242,8 一HCG,HGH,CAI25,这几项结果可以信赖蛋白芯片.而另几项检测结果与化学发光法出现了一定的差异(P0.05),特别是 PSA 在阳性率,特异性及升高量的表达方面有明显差异(P0.01).我们认为 PSA 作为前列腺恶性肿瘤和良性增生或癌前病变的标志物,其 PSA 水平可呈轻度或中度升高,升高的水平与恶性程度,转移情况有密切关系,其灵敏度是化学发光法优于蛋白芯片5,再其次对于恶性度较高的 PSA 升高程度优于蛋白芯片.另外肿瘤患者 CA153 水平的表达两种方法比较也有显着性差异(PO.05),阳性率和特异性是化学发光法优于蛋白芯片法.从健康体
18、检和肿瘤患者合计 390 例 12 种肿瘤标志物检测总体结果分析来看,我们认为肿瘤标志物HGH,CA242 检测阳性率和特异性比其它肿瘤标志物低,并且临床使用诊断价值较小.在检测中我们发现随着肿瘤标志物检测项目的增多,检测敏感性下降,但特异性进行性升高.由于本文检测例数偏小,HGH,CA242 在临床其它方面的使用价值有待进一步探讨.综上所述,多肿瘤标志物蛋白芯片检测系统作为一种肿瘤标志物的联合检测技术,具有省时省力,快速敏感等特点,对健康体检者尤为实用,对肿瘤患者在治疗,预后判断上有一定的参考价值.参考文献:1ChapmanK.Theproteinchipbiomarkersystemfro
19、mclphergenbiosterns:anovelplaoteomicsforrapidbiomarkerdiscoveryandvaliotionJ.BiochemsicTrans,2002,30(2):8287.2VonEggelingF,DaviesH,LomasL,ela1.Tissue.specificmicrodissectioncoupledwithproteinchiparraytechnologies:applicationsincancerresearchJ.Biotechniques,2000,29(5):1O661O7O.I-3齐军,车轶群.使用多肿瘤标志物蛋白芯片诊
20、断系统检测卵巢肿瘤 EJ.中华检验医学杂志,2003,26(6):35836O.E4李春海.加强肿瘤生物学标志的研究和评价 EJ-I.中华检验医学杂志,2000,23(1):6 8.Es邹雄 .肿瘤标志在肿瘤早期诊断中的研究和应用发展J. 中华检验医学杂志,2002,25(2):7172.收稿 El 期:2006111o溴酚蓝在嗜酸性粒细胞计数中的应用李云,郭书侠.(1.河北省迁安市人民医院;2.河北省迁安市中医院 ,河北迁安 064400)中图分类号:R446.1l7 文献标识码:B 文章编号:16717414(2007)0103401临床上关于嗜酸性粒细胞计数方法的文献报道较多,05).本
21、法 4h 后计数(士 S)=(O.22 士 0.14)1O/L 与但一般使用的嗜酸性粒细胞着染物为溴甲酚紫,伊红,石棉 hinkelmann 氏液计数比较,差异无显着性(尸0.05),说明红,溴甲酚绿等.我们根据各着染物的特点,参考有关文献,本法在 4h 内计数结果可靠准确.在实践中配制用溴酚蓝为着染物的嗜酸性粒细胞计数稀释 3 讨论本法利用了溴酚蓝变色范围 pH3.O4.6 时,颜液,使用了 2 年,计数结果比较准确,令人满意,现介绍如下,色由黄变蓝,当试剂溴酚蓝中加入末梢血立即变蓝.Tri 一供同道们参考.tonX 一 100 浓度在 0.62 时,只破坏除嗜酸性粒细胞外的1 材料与方法白
22、细胞,而嗜酸性粒细胞不受影响,同时 TritonX 一 100 能促1.1 试剂称取溴酚蓝 40mg,加入到 100ml0.9g/dl 生进溴酚蓝的溶解 ,增强了溴酚蓝对细胞的渗透作用,使着色理盐水中,再加 O.6mlTritonX100,充分混匀,溴酚蓝完全加快 ,这样嗜酸性粒细胞被染成深蓝色.由于本法是在等渗溶解即可长期使用.溶液基础上配制而成,其它白细胞不完全被破坏,嗜酸性粒1.2 方法在试管中加入上述试剂 0.38ml,取病人末梢细胞在 4h 后形态较为完整且染色均匀,计数背景为浅蓝血 2Ol,混匀,10min 后充入计数池,用低倍镜计数嗜酸性色,嗜酸性粒细胞为深蓝色较易辨认.本法与其
23、它方法比粒细胞.此时的嗜酸性粒细胞被染成深蓝色,其它未被破坏较,具有着色快,细胞稳定时问长,很易辨认,试剂配制简的白细胞几乎不着色.计数 1O 个大方格内嗜酸性粒细胞 .单,保质期长等优点,易于推广.嗜酸性粒细胞 X1o/L=1o 个大方格嗜酸性粒细胞 2o参考文献:1O/L1叶应妩,王毓三.全国临床检验操作规程 EK.第 2 版.2 结果我们对门诊 5O 例病人进行嗜酸性粒细胞计数 ,用南京:东南大学出版社,1997:l1.本法稀释液与 hinkelmann 氏液计数比较,本法计数(士2辛建英,尹玲,王风学.TritonX 一 100 在嗜酸性粒细s)=(O.22+0.13)10./L,用 hinkelmann 氏液计数(i 士 s)胞直接计数的应用.陕西医学检验,1996,l1(3):50.一(O.22 士 0.17)1O/L,两法结果差异无显着性(P0.收稿 El 期:2006 0516
