1、包虫囊液接种昆明小鼠后某些细胞因子变化的观察第 16 卷第 4 期2001 年 11 月地方病通报ENDEMICDISEASESBULLE=Vo1.16.No.4NOV.,2001文章编号:i0003711(2001)04002902包虫囊液接种昆明小鼠后某些细胞因子变化的观察许晏,王松,朱明,觉肯? 阿海 ;付玉才(1.新疆医科大学微生物学教研室,新疆乌鲁木齐 830054;2.广东省汕头大学医学院病原生物学教研室,广东汕头 515000)摘要:为研究昆明小鼠在接种包虫囊液后的免疫机制 ,进昆明小鼠 23 只,取其 16只分两组人工瘦腔接种包虫囊液,其中8 只于初次接种 10 日后二次接种,
2、第 3 组 7 只作正常对照,检测血清中 IL 一 4,IL一 2GM2,SF,IFN水平 t 接种囊液小鼠在注射后均正常存活,无过敏性休克症状.与正常对照组相比,实验小鼠 IL 一4,GMCSF 水平均明显增高(PO?01).而1FNIL 一 2 水平低于正常组(P0.05).表明在小鼠对包虫囊液的免疫中 tTh2 处于优势激活地位.关键词昆明小鼠包虫囊踱 细胞因子;Thl 细胞;Th2 细胞中圈分类号:R383-33 文献标识码:AAnObservationonSomeCytokinesLevelinKunmingMiceInoculatedwithHydatidFluidXUYan,WA
3、NGSong,ZHUMing,eta1.(TeachingandResearchSectionofMicrobiology,XinjiangMedicalUniversityUrumqi,Xinjiang830054,China)Abstract:Wehayeevaluatedtheimmunologicalmechanismsafterhydatidfluidinoculated-Therewere23Kunmingmiceforbothinoculatedandnormalcontrolgroups.Animalsweredividedintothreeparts(n=23).Thesec
4、ondpartwasinoculatedwithhydatidfIuidagainafter10daysOftheprimaryinoculation(n=8),andthethirdpartwasnormalcontrolgroup(一 7)-AndthenwedetectedtheserumlevelsofIL4,IL 一 2,GMCSF,IFN 一.Itshowedthat23micewereallSurvival-Comparedwiththec0ntr0IgrouD,thelevelsOfIL4andGMCSFintheinoculatedmicehadasignificantinc
5、rease(P0.01),andthelevelsofIFNandIL.2hadasignificantdecrease(P0-05)-Afterhydatidfluidinoeulated.Th2cellsofmicewerepriorityactivition-Keywords:Kunmingmice;Hydatidfluid;Cytokine.Thlcell;Th2eel包虫病是我国西部地区广泛分布的人畜共患病,尤其在新疆广大牧区是常见的地方性疾病.有关包虫病的发病机制,诊断和治疗等诸多问题尚未完全解决.本试验通过观察昆明小鼠在初次和二次接种包虫囊液后体内细胞因子的水平变化,研究包虫囊液
6、的免疫机制.1 材料与方法1.1 包虫囊液:感染包虫的羊肝,由乌鲁木齐市东环?收稿日期:200107 一 i6 傩回日期:20010827基圭项目:国家自然科学基金资助项目(39360074)作者简介:许晏(1948 一), 男教授 .屠宰厂提供.无菌抽取囊液,自然沉淀.取上清备用.1-2 实验动物感染摸型的建立:雌性 24w 龄昆明小鼠 23 只,体重 1822g,购自新疆地方病研究所动物中心.将小鼠分为 3 组,第 1,2 组为实验组,每组 8 只,第 3 组为对照组,共 7 只.两组实验鼠每只小鼠腹腔接种 lmL 囊液,第.1 组于接种后次日摘眼取血,分离血清;第 2 组于 10 日后再
7、行瘦腔接种 lmL 囊液?并于接种后次日收集血清.对照组于瘦腔接种 lmL 无菌生理盐水,其余操作同第一组.血清于一 40保存.?29?地方病通报 16 卷1.3 蛔胞因子检测试荆盒:均采用法国迪龙公司原装ELISA 试剂盒(1)IL 一 2 试剂盒:批号 200204;(2)IL 一4 试剂盒:批号 20043;IFN-7 试剂盒:批号 220004;GMCSF 试剂盒:批号 20GM 一 01T.方法均为 AB-ELISA(亲和素一生物素放大的夹心法 ELISA).1.4 数据分析:应用专业统计软件 SPSS9.0 对所得数据进行方差分析和 q 检验2 结果2.1 接种囊液后小鼠的反应:实
8、验组和对照组小鼠均健康存活,未出现焦躁,跳跃,竖毛,呃逆,失禁及过敏性休克等典型过敏症状.两组实验小鼠在初次和再次接种后与对照组相比,反应无显着差异.2.2 蛔胞因子水平:四种细胞因子的检测结果见表 1.寰 1 接种包虫液后的小豆细胞园子水平临土)Table1LevelsofCKsafterhydatidfluidinoculated 在)*与对照组比 tPO.05Comparedwiththecontrolgroup,P0.05;*与对照组比.P0.01Comparedwiththeoontrogroup,P0.0l2+3 初次接种和二次接种的差异性比较:表 1 中第 1组和第 2 组数据分
9、别为初次接种和二次接种后血清中细胞因子水平.可以看出,第 2 组与第 1 组比较,IL 一 2水平显着降低(P0.0.5),而其余 3 种细胞因子水平均显着升高(PO.01).3 讨论研究人员发现 t 包虫病的常见致死原因除了包虫囊肿长期压迫周围组织,引起组织的压迫性坏死以外,在诊断和治疗中由于包虫囊破裂导致囊渣外泄引起的过敏反应,也是主要原因之一_1J,也有人认为患者死亡是由于囊液进入血流引起肺栓塞所致4.s3.本实验通过对接种包虫囊液后的小鼠进行细胞因子的检测,对包虫囊液的免疫机制给予解释.(】)不论是一次免疫还是二次免疫的小鼠,在腹腔注射囊液抗原后,均未发现有典型的过敏症状,更未发生过敏
10、性休克,与对照组相比,无显着差异,怀疑可能与小鼠品系,接种前是否已感染包虫,囊液抗原组成和剂量及免疫方法等因素有关.有人报道将含包虫囊砂的液体静脉注射已感染包虫的绵羊,可致接种对象过敏性休克死亡_6?, 也有人对已感染包虫的长爪沙鼠进行腹腔免疫,建立过敏动物模型 J.(2)过敏症的发生主要是由于小鼠针对抗原产生IgE 类抗体,而 Th2 细胞分泌 IL 一 4 等细胞因子,对IgE 的产生有重要促进作用,Thl 细胞则分泌 IFN等因子,抑制 IgE 合成.分析免疫后小鼠细胞因子的水平变化,可以看出两组实验鼠 IL-4 水平均明显高于正常组 t 而 IL-2 水平均明显低于正常组,且两者的产生
11、呈负相关(初次/- 次接种 r 一一 0+312/一 0.718),而IL 一 4 是由 Th1 细胞活化后分泌,IL-2 是由 Th2 细胞活化后分泌,可以认为在针对包虫囊濠的免疫反应中,Th1 细胞相较于 Th2 细胞处于优势激活地位,尤其是抗原二次免疫后(3)在本实验中,初次免疫后小鼠 IFN 一 7 水平降低,二次免疫后 IFN 一 7 水平升高但仍低于对照组,从其与 IL 一 2 的相关性来看 ,初次免疫时呈低度的正相关(r=0.209),提示此时 IFN 一 7 的合成是以 Th1 细胞合成为主,其他细胞(如 NK 细胞等)合成为辅,在二次免疫后其与 IL-2 水平呈显着负相关 (
12、r 一一 0.802),提示此时 IFN-7 产生与 Thl 细胞活性基本无关,而其它细胞(如单核吞噬细胞,NK 细胞等)赋 IFN-7 的合成贡 ll献更大.(4)GM-CSF 是 Th1 和 Th2 细胞均可合成的细胞因子,其水平在初次免疫和二次免疫后均显着升高,与 IL-4 呈显着正相关(初次/再次免疫 r 一0.688/0.716),而与 IL-2 呈显着负相关 (初次/再次免疫 r=一 0.711/一 0.699),提示在针对包虫囊液抗原的免疫应答中,GM-CSF 来源主要是 Th2 细胞,而非Thl 细胞.且 GM-CSF 可促进血液中嗜酸性粒细胞的成熟.增强其对血流中免疫复合物的
13、清除,与有关报道吻合:.综上所述,健康昆明小鼠在腹腔注射包虫囊植后.并未出现严重的过敏症,但体内总的免疫趋势是 Th2优势激活,而 Thl 激活受到抑制,虽然 IFN-7 在二次接种后水平升高,但其产生可能有独立于 Th 细胞之外的其它机制.本文从细胞因子角度阐述了小鼠针对包虫囊液的免疫应答机制.第 l6 卷2001第 4 期11 月地方病通报ENDEMICDISEASESBULLETINV0I.16.No.4NOV.2001文章编号:10003711(2001)03 003101关键词:鼠疫苗;培养基中围分类号:R378.61两种鼠疫菌培养基现场应用效果评价唐玉珍,尹家祥,罗大史,唐永朝.,
14、首建芬,江明(1.云南省流行病防洽研究所,云南大理 671b002.临沧地区卫生防疫站,云南临沧 677000;9.临沧县卫生防疫站 )在前文中 0.我们报道丁六种鼠疫苗培养基筛选试验的研究结果.以胰酶消化液兔溶血培基为对照基.市售营养琼脂培基和胰蛋白脐为主要成分自I 的五种培基,鼠疫苗在这些培基上生长均良好.并具鼠疫茁特点的典型菌落.其中营养琼脂培基和胰蛋白且示两种培基操作简便,经济,便于基层使用和质控.为验证所筛选出的进两种培基在鼠疫现疫区分离鼠疫苗的效果.于 2000 年 9 月在临沧县风翔镇及蚂蚁堆乡有动物鼠疫流行并波及到人间的现场作丁以上两种培养基和对照培养基应用效果的比较,结果如下
15、.1 材料和方法1.1 试刑:KHPO.1龙胆紫液.1.2 培基村作三种培基均按前文所述方法制作 0,不同的是在原敏感培基中加入 1尤胆紫溶液,按 10OmL 加 0.5mL.制成 1/20 万选择敏感培基.1.3 培养接种方法:按纪树立介绍常规进行刚.1.3.1 检验标本:共收集到鼠尸 42 份.其中 6 份严重腐败标本取股骨髓进行培养 t 另 36 份取脏器肝脾,直接涂印划线培养观察.每份被检标本包括脏器或骨髓同时接种三种培养基平板.1.3.2 鼠疫噬菌体裂解试验:将培养获得的可疑菌落挑取划线接种在三种敏感培基上,用白金耳沾取一环鼠疫噬菌体轻轻滴于接种线上,同时接种两个平板,分别置 37和
16、室温(182O)培养 1824h 观察结果 .作该试验必须无菌操作,噬菌体必须是有效期,无混浊,无污染,确保试验的正确性.文献标识码:D2 结果42 份鼠尸,骨髓培养 6 份,获鼠疫苗 9 株,检出率为 sO,脏器培养 36 份,获鼠疫苗 1 株,检出率为 2.7,4 株菌 24h 培养后同时在三种培养基上获得,并通过噬菌体裂解试验证实.总的检出率为 9.25.菌落生长的速度一致,菌落特点典型,菌落大小无明显差异,其中胰蛋白且示培基的透明度优于其它两种.更易观察及纯分3 讨论(1)在三种培基上接种同一份标本材料,可同时分离到鼠疫苗,并且在时间上一致 t 菌落大小基本相等.证明了现场与实验室的结
17、果是吻合的.0)现场应用结果仍显示胰蛋白席培基优于对照基和市誊营养琼脂,踪透明度好,易观察外,菌落特点典型,还具操作简便,省时,省力经济,便于基层使用和质控 t 达到了替代和推广使用的目的.奉文承董兴齐剐主任医师仕改,谨致谢意 l参考文献:1唐玉珍,尹家祥 .吴明寿,等.几种鼠疫苗培养基筛选试验J.地方病通报.2000.15(4):57.妇纪树立.鼠疫 EM.北京:A 民卫生出版社,1988.6.收稿日期;z000-1229作者茼卉;唐玉骖(1947 一),女,主管技师.(本文璃#:张岢硅)参考文献:cavtarylesion:aclinicaleaseFJ?AnnItalMedlnt?r1D
18、osDK,BhambhanS,PantCS.Ultrasoundguided1999,14(9);192195.fineneedleaspirationcytology:diagnosisofhydaridEs栾梅香,许斌 t 地力木拉提.细粒幛球蚴囊内容物致肺桂diseaseoftheabdomenandthoraxJ.Diagn 塞动物实验的初步探讨口.新疆医科大学,1999,22Cytopathol,1995.12(27:173176.(27:131-2王校智,李永寿 ,冯胜利.经皮穿刺 5【流与吸刮洽疗肝及6SchantzPM-Echinococcusgranulosus:acutes
19、ystemic腹腔包虫囊肿的临床应用J.中国寄生虫学与寄生虫病allergicreactionstohydat.dcystfluidininfectedsheep杂志.1994,12(4):285287.J.ExpParasito1.1977,43(1):268285.33Perez-BancoFJ,UrbanoJmenezFJ,MoralesCamacho7郑宏.张文胜.赵建梅,等.细粒幛球蛐感染长爪抄鼠过L.Immunoallergicreactionsandhepatichydatidosis 敏反应模型的建立与嗜酸粒细胞测定口.新疆医科大J.AnMedlnterna,1993,10(12):618619.学.1999.22(1):46.4SantoriP.ErcoliL,RossiM,et 口.Thepulmonary( 本文璃 #卓采江)?31?
